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骨髓间质干细胞人工骨构建的实验研究

现代口腔医学杂志 2005年第5期19卷 498-500页

作者：孙铭王景云孙宏晨欧阳喈吉林大学口腔医学院长春130041

目的本实验分析体外构建细胞性组织工程化人工骨的可能性。方法采用兔骨髓间质干细胞,经体外扩增培养并诱导分化为具有成骨能力的种子细胞,再与生物可降解材料ε-己内酯与环氧乙烷共聚物复合培养,在体外构建人工骨。通过电镜观察和组织... 详细信息

目的本实验分析体外构建细胞性组织工程化人工骨的可能性。方法采用兔骨髓间质干细胞,经体外扩增培养并诱导分化为具有成骨能力的种子细胞,再与生物可降解材料ε-己内酯与环氧乙烷共聚物复合培养,在体外构建人工骨。通过电镜观察和组织学切片观察来评价可降解材料与种子细胞的复合培养的效果。结果骨髓间质干细胞可在体外扩增培养;骨髓间质干细胞在条件培养液的诱导下,可以定向分化为具有成骨能力的细胞类型。诱导分化后的骨髓间质干细胞可在生物可降解材料ε-己内酯与环氧乙烷共聚物上黏附和铺展。结论骨髓间质干细胞可在体外传代扩增培养,并可在一定条件下向成骨类型细胞转化,可作为骨组织工程种子细胞。己内酯与环氧乙烷的共聚物与种子细胞相容性好,可作为组织工程用的细胞支架材料。在体外,生物可降解材料ε-己内酯与环氧乙烷共聚物与种子细胞复合培养后可以构建出具有活细胞成分的组织工程骨。

关键词：骨髓间质干细胞种子细胞细胞支架人工骨

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骨髓间质干细胞的体内成骨特性

北京大学学报（医学版） 2002年第2期34卷 117-121页

作者：舒胜文李盛琳马绪臣章魁华北京大学口腔医院颌面外科北京100081

目的 :观察大白鼠骨髓间质干细胞 (bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSCs)的体内成骨方式 ,研究新生骨组织的生物学特点、形态及骨基蛋白的表达。方法 :取 2月龄SD大鼠的胫骨及股骨骨髓进行培养 ,体外培养的BMMSCs经成骨诱导剂诱导后... 详细信息

目的 :观察大白鼠骨髓间质干细胞 (bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSCs)的体内成骨方式 ,研究新生骨组织的生物学特点、形态及骨基蛋白的表达。方法 :取 2月龄SD大鼠的胫骨及股骨骨髓进行培养 ,体外培养的BMMSCs经成骨诱导剂诱导后分别与羟基磷灰石磷酸三钙陶瓷 (hydroxyapatite tricalciumphosphateceram ics,HA TCP)、羟基磷灰石磷酸三钙陶瓷加藻酸钠 (alginatesodium ,AS)移植入BALB C裸鼠皮下。 2个月后取出种植物 ,组织切片观察成骨方式及成骨类型。用免疫组化法对新生骨骨基质蛋白的表达进行检测。结果 :BMMSCs+HA TCP与BMMSCs +HA TCP +AS均为膜性骨发生 ,2个月内所成的骨为层板骨。此方法所成骨的骨涎蛋白、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原均有表达。结论 :BMMSCs通过HA TCP以膜性骨发生方式成骨 ,2个月内成的骨为层板骨。所成的骨与胚胎发育的骨在骨涎蛋白、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原的表达无区别。

关键词：骨髓间质干细胞体内成骨特性新生骨组织生物学特点

骨髓间质干细胞在高脂饲料诱导肥胖大鼠体内的迁移分化

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骨髓间质干细胞在高脂饲料诱导肥胖大鼠体内的迁移分化

作者：蒋茂莹重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分大鼠前脂肪细胞的体外培养【目的】改进大鼠前脂肪细胞的原代培养方法【材料与方法】体外培养大鼠前脂肪细胞,对Ng的胶原酶消化法进行如下方面的改良:胶原酶消化的时间、离心的次数和转数、过滤细胞的次数,分化培养后采用油红O... 详细信息

第一部分大鼠前脂肪细胞的体外培养【目的】改进大鼠前脂肪细胞的原代培养方法【材料与方法】体外培养大鼠前脂肪细胞,对Ng的胶原酶消化法进行如下方面的改良:胶原酶消化的时间、离心的次数和转数、过滤细胞的次数,分化培养后采用油红O染色对细胞进行鉴定,通过形态学观察、生长曲线的绘制确定原代培养大鼠前脂肪细胞的细胞学特征。【结果】用改良后的方法获得大量成份均一、生长旺盛的前脂肪细胞,细胞活力测定90%为活细胞;前脂肪细胞5 d左右进入指数增长期,8 d左右达到平台期;在分化培养基的诱导下可以向脂肪细胞分化【结论】实验成功地建立了前脂肪细胞培养体系,较原方法更加有效。1经费来源:国家自然科学基金资助项目(编号:30571565)第二部分骨髓间质干细胞在肥胖大鼠体内的迁移分化【目的】证实在高脂饲料的诱导下,骨髓间质干细胞能向脂肪组织迁移定植并分化成脂肪细胞。【材料与方法】将绿色荧光蛋白标记的间质干细胞按照2×106细胞/100g体重的剂量经尾静脉输入刚断乳(28 d)的33只雄性SD大鼠体内,随机分为对照组(8只)和实验组(25只),分别给予普通饲料和高脂饲料。实验组高脂饲料的给予方法如下:先给予普通饲料喂养3 d,然后按照含25%高脂饲料+75%普通饲料喂养2 d,50%高脂饲料+50%普通饲料喂养2 d的顺序逐步过渡到75%高脂饲料+25%普通饲料喂养,以后全部给予含有75%高脂饲料+25%普通饲料的混合饲料进行喂养。分别于喂养后的第7、11周处死大鼠,取各部位脂肪组织,制成冰冻切片,进行DAPI染色,采用免疫荧光的方法,在激光共聚焦下进行观察,测定eGFP+细胞的特异性标记:PPAR-γ,C/EBP-α,Perilipin,c-fms,CD11b,F4/80。【结果】高脂饲料喂养7周后30～40%的SD大鼠成为肥胖SD大鼠。在肥胖大鼠体内脂肪组织中发现一定数量的eGFP+细胞,肾周脂肪组织和肠系膜脂肪组织最多。eGFP+细胞在显微镜下呈网状结构,单个细胞呈圆形,形态上为脂肪细胞。将eGFP+细胞分别进行脂肪细胞特异性标记(PPAR-γ,C/EBP-α, perilipin)和巨噬细胞特异性标记(c-fms,CD11b,F4/80)的免疫荧光检测,检测结果显示:eGFP+细胞的脂肪细胞特异性标记检测为阳性,PPAR-γ和C/EBP-α在eGFP+细胞核上显示为红色的特异性荧光,perilipin在eGFP+细胞骨架上表现为红色的特异性荧光;而eGFP+细胞的巨噬细胞特异性标记c-fms,CD11b,F4/80的检测结果为阴性。c-fms,CD11b,F4/80均为巨噬细胞特异性膜表面蛋白,对eGFP+细胞进行免疫荧光的特异性染色后,并没有在eGFP+细胞上看到特异性巨噬细胞标志的红色荧光。【结论】骨髓间质干细胞在高脂饲料的诱导下,在体内可以迁移定植在脂肪组织并分化为成熟的脂肪细胞而非巨噬细胞。

关键词：前脂肪细胞培养方法改良骨髓间质干细胞脂肪迁移分化体内

胎儿骨髓间质干细胞体外诱导为神经细胞的初步实验研究

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中国生物医学工程学报 2004年第1期23卷 40-43,36页

作者：孙晓春许文荣姚堃胡嘉波钱晖张锡然南京医科大学基础医学院南京210029 江苏大学医学技术学院镇江212001 南京师范大学生命科学院南京210029

目的 :体外定向诱导胎儿骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经细胞。方法 :采用Ficoll淋巴细胞分离液分离MSC ,体外扩增、传代 ,采用 β 巯基乙醇等诱导剂诱导MSC分化为神经细胞 ,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NF2 0 0 )、神经元烯醇化酶 (NSE)、... 详细信息

目的 :体外定向诱导胎儿骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经细胞。方法 :采用Ficoll淋巴细胞分离液分离MSC ,体外扩增、传代 ,采用 β 巯基乙醇等诱导剂诱导MSC分化为神经细胞 ,免疫组化鉴定神经丝蛋白(NF2 0 0 )、神经元烯醇化酶 (NSE)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) ,并且用RT PCR鉴定NF2 0 0、NSE和GFAP的mR NA表达情况。结果 :胎儿骨髓MSC在体外扩增第 5代以后 ,经诱导后 ,形态学上可呈现神经细胞形态特征 ;免疫组化显示诱导出的神经细胞NF2 0 0、NSE和GFAP均有阳性表达 ;RT PCR也显示诱导后表达量明显增加。结论 :胎儿骨髓MSC在体外可以分化为神经细胞。

关键词：骨髓间质干细胞神经细胞 RT-PCR 免疫组化

骨髓间质干细胞联合脑源性神经营养因子用于大鼠脑出血的实验研究

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中风与神经疾病杂志 2011年第10期28卷 879-882页

作者：施迎兵黄良国蒋国红遵义医学院附院神经内科贵州遵义563003

目的观察骨髓间质干细胞(MSCs)联合脑源性神经营养因子(BDNF)治疗大鼠脑出血(ICH)的疗效。方法建立大鼠ICH模型,体外培养标记纯化的MSCs,经侧脑室植入脑部,同时局部注入BDNF。记录对照组、BDNF组、MSCs组和MSCs+BDNF组7d、14d、21d大鼠... 详细信息

目的观察骨髓间质干细胞(MSCs)联合脑源性神经营养因子(BDNF)治疗大鼠脑出血(ICH)的疗效。方法建立大鼠ICH模型,体外培养标记纯化的MSCs,经侧脑室植入脑部,同时局部注入BDNF。记录对照组、BDNF组、MSCs组和MSCs+BDNF组7d、14d、21d大鼠神经功能改善程度;免疫组化法检测MSCs脑内迁移及分化;电子显微镜观察神经凋亡细胞。结果 MSCs组大鼠运动功能有明显改善,MSCs+BDNF组对ICH损伤的修复作用最明显。MSCs+BDNF组各时间点MSCs阳性细胞数及NEUN、GFAP、CNP免疫阳性细胞数均高于MSCs组(P细胞凋亡程度最轻。结论 MSCs脑部移植可促进大鼠ICH损伤部位结构和功能修复,BDNF对其修复具有协同作用。

关键词：脑出血骨髓间质干细胞移植脑源性神经营养因子

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骨髓间质干细胞(MSCs)的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2007年第2期 31-33页

作者：陈晓慧刘明春焦阳沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

干细胞研究在近几年来已经成为全球生命科学研究领域的一大热点和前沿,其中的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells MSCs)研究最多.近年来的研究表明,MSCs本身还具有增殖和多向分化潜能,其增殖能力介于胚胎干细胞和成体组织细胞之间.

关键词：骨髓间质干细胞多向分化潜能 MSCs 组织细胞增殖能力临床应用胚胎干细胞退行性疾病

骨髓间质干细胞促进急性心肌梗死大鼠的血管新生及其抗纤维化作用

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广东医学 2008年第10期29卷 1639-1641页

作者：陈嘉榆张祥忠钟雪云何敏朱小玉丁倩陈运贤黄颖强广东省广州市第十二人民医院内科 510620 中山大学附属第一医院血液内科广州510080 暨南大学医学院病理教研室广州510630 暨南大学信息科学技术学院数学系统计教研室广州510630

目的探讨骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)促进急性心肌梗死(acute myocardial infraction,AMI)大鼠的血管新生及抑制大鼠心肌间质纤维化形成的作用。方法制做大鼠AMI模型,并于术后24 h从尾静脉移植同种异体BMSCs。在... 详细信息

目的探讨骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSCs)促进急性心肌梗死(acute myocardial infraction,AMI)大鼠的血管新生及抑制大鼠心肌间质纤维化形成的作用。方法制做大鼠AMI模型,并于术后24 h从尾静脉移植同种异体BMSCs。在移植后21天用超声心动图检测BMSCs移植大鼠的左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室收缩末期内径(LVDs)和射血分数(EF)。收取BMSCs移植大鼠的心脏标本,用新生血管标志物第Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学染色法检测心肌毛细血管密度;用免疫组化检测其心肌间质Ⅰ,Ⅲ型胶原沉积情况。结果与对照组相比,BMSCs移植组心脏功能改善,毛细血管密度增加,心肌间质Ⅰ,Ⅲ型胶原沉积减少。结论BMSCs移植能改善AMI大鼠心脏功能,促进血管新生,减轻其心肌间质纤维化。

关键词：骨髓间质干细胞急性心肌梗死血管新生纤雏化

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骨髓间质干细胞与心肌重建研究进展

浙江大学学报（医学版） 2004年第6期33卷 556-560页

作者：夏思良王建安浙江大学医学院附属邵逸夫医院心内科浙江杭州310016

心肌细胞的死亡是不可逆的 ,坏死心肌的修复是科研工作者和临床医生面临的严峻挑战。骨髓间质干细胞移植替代受损心肌用于心肌重建 ,具有来源充足、细胞培养成活率高、骨髓穿刺操作简单安全、自体无免疫排斥等优点。作者介绍了骨髓间质... 详细信息

心肌细胞的死亡是不可逆的 ,坏死心肌的修复是科研工作者和临床医生面临的严峻挑战。骨髓间质干细胞移植替代受损心肌用于心肌重建 ,具有来源充足、细胞培养成活率高、骨髓穿刺操作简单安全、自体无免疫排斥等优点。作者介绍了骨髓间质干细胞的来源以及体、内外向心肌细胞定向诱导分化的实验研究。讨论了骨髓间质干细胞向心肌细胞分化的可能机制 ,还简要分析了骨髓间质干细胞用于心肌重建的临床可行性 ,并提出了许多目前亟待研究和解决的问题。

关键词：骨髓细胞干细胞/细胞学骨髓间质干细胞移植心肌细胞

骨髓间质干细胞和新鲜骨髓细胞静脉移植治疗脑梗死的实验观察

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骨髓间质干细胞和新鲜骨髓细胞静脉移植治疗脑梗死的实验观察

作者：王伟福建医科大学

学位级别：硕士

目的观察比较大鼠骨髓间质干细胞(rat mesenchymal stem cells, rMSCs)和新鲜骨髓细胞静脉移植入大脑中动脉栓塞的大鼠后在脑内存活、迁移及分化情况,以及对病灶组织结构和神经功能恢复的影响。方法提取新鲜骨髓,体外分离培养rMSCs,流... 详细信息

目的观察比较大鼠骨髓间质干细胞(rat mesenchymal stem cells, rMSCs)和新鲜骨髓细胞静脉移植入大脑中动脉栓塞的大鼠后在脑内存活、迁移及分化情况,以及对病灶组织结构和神经功能恢复的影响。方法提取新鲜骨髓,体外分离培养rMSCs,流式细胞术检测两月龄鼠原代、第2 代及第4 代rMSCs 表面标志及其动态变化。运用改良Zea Longa 的线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,随机分为对照组、rMSCs 静脉移植组及新鲜骨髓细胞静脉移植组。模型成功后分别于术后24h 经尾静脉,对照组注射磷酸盐缓冲液(PBS)1ml,rMSCs 和新鲜骨髓细胞移植组分别注射CTO(cell tracker orange)标记的rMSCs 细胞悬液和新鲜骨髓细胞悬液1ml。各组大鼠分别于术后24h、移植后1W、2W 应用modified Neurological Severity Scores(mNSS)评分评价治疗前后的神经功能状况,应用荧光激发及免疫组化技术检测rMSCs 和新鲜骨髓细胞在脑内存活、迁移及分化情况。结果rMSCs 体外培养表现出贴壁生长和多态性的特性,培养扩增至第5 代,细胞数可达1-2×10个。流式细胞术检测rMSCs 原代中CD34、CD45 等有阳性表达,传代后表达率接近于零;CD29、CD90 等表达呈阳性,CD29 的表达率随着细胞传代而逐渐升高,CD90 的表达率则逐渐下降。与对照组对比,rMSCs 及新鲜骨髓细胞移植组大鼠神经功能改善明显,mNSS 评分差异有统计学意义(P0.05)。移植后2W组织学观察,与对照组相比移植组梗塞区脑组织结构恢复较好。移植rMSCs 和新鲜骨髓细胞组在荧光激发下均可见CTO 标记的细胞在梗塞区及其周边区聚集并存活,且有部分细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF-200)及星型胶质细胞标志物神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)

关键词：骨髓间质干细胞新鲜骨髓细胞大鼠大脑中动脉栓塞静脉移植