检索结果-南通市图书馆

pDsRed-C1-CDNF真核表达载体在大鼠骨髓间质干细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织工程研究与临床康复 2010年第14期14卷 2518-2522页

作者：张俊牛朝诗高歌汤深凤李静安徽医科大学附属省立医院神经外科安徽省合肥市230001 安徽医科大学附属省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室安徽省合肥市230001

背景:骨髓间质干细胞是一类具有多向分化能力的成体干细胞,目前,已有将其作为细胞载体对帕金森病进行治疗的相关报道。目的:构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并诱导其在大鼠骨髓间质干细胞中表达。方法:通过RT-PCR的方法从小鼠组织中扩... 详细信息

背景:骨髓间质干细胞是一类具有多向分化能力的成体干细胞,目前,已有将其作为细胞载体对帕金森病进行治疗的相关报道。目的:构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并诱导其在大鼠骨髓间质干细胞中表达。方法:通过RT-PCR的方法从小鼠组织中扩增出CDNF基因片段,并在其两端引入XhoI、BamHI限制性内切酶酶切位点,然后将其克隆至pDsRed-C1真核载体,构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并通过Lipofectin2000将其转染至大鼠骨髓间质干细胞中。结果与结论:pDsRed-C1-CDNF真核表达载体经双酶切、单酶切、PCR及测序验证正确,提示已成功构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体并已转染至大鼠骨髓间质干细胞中。

关键词：保守性多巴胺能神经营养因子帕金森病真核表达载体荧光蛋白骨髓间质干细胞

大鼠骨髓间质干细胞定向分化为神经元的实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中山大学学报（医学科学版） 2008年第4期29卷 383-387,392页

作者：王亚柱邓宇斌甘丹卉叶伟标叶美红陈永乐中山大学中山医学院病理生理学教研室

【目的】研究体外培养骨髓来源的表达nestin的成年大鼠骨髓间质干细胞(MSC)并诱导分化神经元样细胞的潜能,为中枢神经系统疾病的细胞移植治疗提供理想的供体。【方法】采用全骨髓法分离培养成年SD大鼠MSC,传至第6代的MSC接种在前一天涂... 详细信息

【目的】研究体外培养骨髓来源的表达nestin的成年大鼠骨髓间质干细胞(MSC)并诱导分化神经元样细胞的潜能,为中枢神经系统疾病的细胞移植治疗提供理想的供体。【方法】采用全骨髓法分离培养成年SD大鼠MSC,传至第6代的MSC接种在前一天涂有100μg/L多聚赖氨酸的塑料培养瓶或培养皿中,用含100mL/LFBS的DMEM/F12培养液添加10ng/mL bFGF的培养液培养并以DMSO、BHA与Forskolin等诱导剂联合诱导MSC分化为神经元。流式细胞仪鉴定诱导前MSC的细胞表面抗原,免疫荧光检测诱导前及诱导后6h、12h、24h神经元特异性抗原nestin、NF-200和GFAP表达率。【结果】流式细胞仪检测传至第6代MSC表面抗原CD29和CD44阳性率分为98.8%,96.6%,CD34和CD45阴性。免疫荧光鉴定传至第6代的MSC表达nestin阳性率为57.1%±6.9%,不表达NF-200和GFAP。诱导后30min可见神经元样细胞出现,诱导后6h、12h、24h经nestin和NF-200免疫荧光鉴定,诱导后6h、12h、24 h nestin阳性率分别为96.5%±1.9%,88.1%±5.4%,33.5%±5.4%,NF-200阳性率分别为90.1%±2.9%,97.5%±1.3%,98.1%±1.6%。【结论】骨髓来源的nestin阳性的MSC具有神经祖细胞特性并且可诱导分化为神经元样细胞,可作为种子细胞用于神经系统疾病的治疗。

关键词：骨髓间质干细胞分化神经元样细胞神经祖细胞

大鼠骨髓间质干细胞可以成为PEX基因稳定转染的载体细胞吗?

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国组织工程研究与临床康复 2010年第1期14卷 91-94页

作者：高歌牛朝诗董永飞张俊丁宛海安徽医科大学附属省立医院神经外科安徽省合肥市230001 安徽省立体定向神经外科研究所安徽省合肥市230001

背景:PEX基因能够干预恶性胶质瘤的侵袭行为,而骨髓间质干细胞是一种靶向肿瘤治疗的新型细胞载体。目的:建立稳定表达PEX基因的大鼠骨髓间质干细胞。方法:采用分子克隆技术构建PEX基因真核表达载体,酶切测序鉴定重组质粒pcDNA3.1(+)-PEX... 详细信息

背景:PEX基因能够干预恶性胶质瘤的侵袭行为,而骨髓间质干细胞是一种靶向肿瘤治疗的新型细胞载体。目的:建立稳定表达PEX基因的大鼠骨髓间质干细胞。方法:采用分子克隆技术构建PEX基因真核表达载体,酶切测序鉴定重组质粒pcDNA3.1(+)-PEX,并转染大鼠骨髓间质干细胞,免疫细胞化学法验证真核表达载体在骨髓间质干细胞中的表达。通过G418筛选建立稳定表达PEX基因的骨髓间质干细胞,并用RT-PCR法检测PEX基因的表达。结果与结论:实验成功构建稳定表达PEX基因的大鼠骨髓间质干细胞,基因水平和蛋白水平检测结果表明,PEX在转染的骨髓间质干细胞中呈高表达。

关键词： PEX 胶质瘤真核表达载体骨髓间质干细胞干细胞

血红素加氧酶-1基因修饰的骨髓间质干细胞抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西安交通大学学报（医学版） 2010年第6期31卷 677-680,719页

作者：刘昀李家芝张德信李维方萍徐晶卢家美张永红谢新铭孙秀珍李满祥西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科陕西西安710004

目的探讨骨髓间质干细胞携带的血红素加氧酶-1(HO-1)基因于体外共培养体系中抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的效果及机制。方法采用核转染技术将HO-1质粒转染至骨髓间质干细胞,共培养肺动脉平滑肌细胞和骨髓间质干细胞,评估5-羟色胺刺激后的... 详细信息

目的探讨骨髓间质干细胞携带的血红素加氧酶-1(HO-1)基因于体外共培养体系中抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的效果及机制。方法采用核转染技术将HO-1质粒转染至骨髓间质干细胞,共培养肺动脉平滑肌细胞和骨髓间质干细胞,评估5-羟色胺刺激后的平滑肌细胞增殖情况,检测5-羟色胺刺激后平滑肌细胞中RhoA的活性。结果 5-羟色胺可刺激肺动脉平滑肌细胞增殖,使单纯培养的平滑肌细胞总数较对照组增加2.40倍(P骨髓间质干细胞与肺动脉平滑肌细胞共培养并不能抑制平滑肌细胞的增殖,而携带HO-1基因的干细胞则可明显抑制5-羟色胺刺激的平滑肌细胞增殖,使平滑肌细胞总数降至对照组的1.56倍(P细胞中RhoA活性增加2.90倍,野生型干细胞与肺动脉平滑肌细胞共培养并未能改变5-羟色胺刺激的RhoA激活,但在携带HO-1基因的干细胞共培养体系中5-羟色胺诱发的RhoA活性明显降低。结论骨髓间质干细胞携带的HO-1基因可以旁分泌的形式抑制平滑肌细胞的增殖,其作用的机制可能与其产生的CO通过激活cGMP信号通路进而抑制RhoA的激活有关。HO-1可作为外源基因导入体内治疗肺动脉高压。

关键词：骨髓间质干细胞血红素氧合酶-1 肺动脉平滑肌细胞细胞增殖 RhoA 肺动脉高压

静脉注射骨髓间质干细胞对血管性痴呆模型大鼠认知障碍的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华老年医学杂志 2004年第11期23卷 808-812页

作者：高唱王景周范文辉陈曼娥第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科重庆市400042

目的　观察静脉注射骨髓间质干细胞 (MSC)对血管性痴呆 (VaD)模型大鼠认知功能的影响。　方法　体外分离培养、扩增成年大鼠MSC。利用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型 ,造模后 6h采用静脉注射Hoechst33342荧光标记的MSC(6... 详细信息

目的　观察静脉注射骨髓间质干细胞 (MSC)对血管性痴呆 (VaD)模型大鼠认知功能的影响。　方法　体外分离培养、扩增成年大鼠MSC。利用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型 ,造模后 6h采用静脉注射Hoechst33342荧光标记的MSC(6× 1 0 6/ 0 5ml) ,观察注射后 30、6 0d大鼠脑内荧光标记细胞数及分化的功能细胞和认知功能变化。　结果　与正常对照组相比 ,VaD大鼠主动回避反应正确率 (90 2± 4 8、37 6± 9 3、4 3 5± 1 0 5 )min、游泳时间 (0 39± 0 1 8、2 47± 1 2 2、1 89± 0 90 )min、错误次数 (1 5 5± 0 40 ,4 5 6± 1 6 3、3 48± 0 6 6 )和盲端时间 (0 1 4± 0 0 7、1 40± 1 1 4、0 87± 0 76 )min ,在造模后 30d和 6 0d差异有显著性 (P 细胞 (2 6 34 2 6± 2 81 73)以及免疫荧光双标细胞数较 30d组 (375 9 45± 2 6 8 82 )明显减少 (P <0 0 1 )。　结论　静脉注射MSC可显著改善VaD大鼠认知功能。

关键词：静脉注射骨髓间质干细胞血管性痴呆大鼠认知障碍 MSC VaD

黄连素诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病理生理杂志 2004年第1期20卷 51-53页

作者：项平李海标中山大学中山医学院组织胚胎学教研室广东广州510089

目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4... 详细信息

目的 :黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法 :用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第 5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化 ,用含 10 μg/L碱性细胞生长因子 (bFGF)的完全培养液预诱导 2 4h ,后更换含黄连素的无血清DMEM诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元烯醇酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果 :大鼠骨髓间质干细胞体外扩增第 5代后细胞形态达到均一 ,成梭形。加黄连素诱导 1h -8h ,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起 ,形似神经细胞。免疫组化显示诱导的神经元样细胞NSE、NF表达阳性 ,GFAP阴性。结论

关键词：黄连素大鼠骨髓间质干细胞神经元样细胞细胞分化

人脑源性神经营养因子重组腺病毒载体转染大鼠骨髓间质干细胞的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华实验外科杂志 2011年第9期28卷 1544-1546页

作者：王长昇林建华吴朝阳福建医科大学附属第一医院骨科福州350005

目的探讨增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因、人脑源性神经营养因子（hBDNF）为目的基因的重组腺病毒载体Ad5一hBDNF—EGFP体外转染大鼠骨髓间质干细胞（rMSCs）的特点，从基因转录及蛋白表达水平检测hBDNF基因在体外rMSCs中的表达... 详细信息

目的探讨增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因、人脑源性神经营养因子（hBDNF）为目的基因的重组腺病毒载体Ad5一hBDNF—EGFP体外转染大鼠骨髓间质干细胞（rMSCs）的特点，从基因转录及蛋白表达水平检测hBDNF基因在体外rMSCs中的表达。方法分离、培养rMSCs，流式细胞仪检测CD34、C1M5、CD29、CD90的表达，腺病毒体外转染第3代rMSCs，荧光显微镜下观察绿色荧光信号，流式细胞仪检测转染率，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Westernblot法检测hBDNFmRNA和hBDNF蛋白的表达。结果CD34、CD45、CD29、CD90阳性细胞比率分别为0．8％、6．8％、98．9％、99．9％。腺病毒转染rMSCs后可见绿色荧光信号，强度随腺病毒感染复数（MOI）的增加而增强；MOI为10、20、50、100、200时，转染3d后，转染率分别为20．2％、43．2％、67．2％、103．0％、103．0％；hBONFmRNA及hBDNF蛋白的表达水平亦随腺病毒MoI的增加而增加，当MOI=100时，表达到高峰，3～10d为表达高峰期。结论重组腺病毒体外有效转染rMSCs，成功获取基因工程干细胞hBDNF-rMSCs，该细胞可大量表达hBDNFmRNA及hBDNF蛋白。表达水平与MOI及转染时间明显相关。

关键词：腺病毒载体脑源性神经营养因子骨髓间质干细胞基因修饰

隐丹参酮诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国中西医结合杂志 2002年第12期22卷 921-924页

作者：夏文杰张秀明李艳李树浓陈振光张丽蓉项鹏中山医科大学病理生理教研室广州510080 中山医科大学附属第一医院心胸外科广东药学院病理生理教研室美国芝加哥大学人类遗传研究所

目的:观察隐丹参酮体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液分离成人MSC,体外扩增,FACScan流式细胞仪检测表面抗原表达,采用含隐丹参酮的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定... 详细信息

目的:观察隐丹参酮体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液分离成人MSC,体外扩增,FACScan流式细胞仪检测表面抗原表达,采用含隐丹参酮的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF—M,NF—H)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×106个细胞,15代可获得(2～3)×1012个细胞,流式细胞仪检测显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。加入隐丹参酮诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M,NF-H、Nestin表达阳性.GFAP阴性。结论:隐丹参酮在体外可诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。

关键词：骨髓间质干细胞神经元隐丹参酮细胞分化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中老年人骨髓间质干细胞的生物学特性研究

中国生物工程杂志 2005年第4期25卷 33-37页

作者：张延洁蔡芳杨一峰梁德生潘乾龙志高邬玲仟戴和平夏昆夏家辉中南大学医学遗传学国家重点实验室长沙410078 中南大学湘雅二医院胸心外科长沙410011

目的:研究中老年人骨髓间质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法:用Ficoll-Paque分离不同年龄段供者MSCs体外培养,进行诱导分化,用流式细胞术检测表面标志,核型分析观察细胞染色体的稳定性,裸鼠实验、软琼脂实验观察致瘤性。结果:中老年... 详细信息

目的:研究中老年人骨髓间质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法:用Ficoll-Paque分离不同年龄段供者MSCs体外培养,进行诱导分化,用流式细胞术检测表面标志,核型分析观察细胞染色体的稳定性,裸鼠实验、软琼脂实验观察致瘤性。结果:中老年人每毫升骨髓分离的单个核细胞量和MSCs增殖速度与青年人无显著差异;中老年人不同代次的MSCs诱导后具有向成骨细胞和成脂细胞分化的能力;分离培养的MSCs表达CD44,不表达CD34;传至第10代核型未见异常, 未见致瘤性。结论:中老年人MSCs有较强的体外增殖能力和多向分化潜能,遗传背景稳定。

关键词：中老年人骨髓间质干细胞特性研究流式细胞术检测 MSCs 多向分化潜能生物学特性细胞染色体单个核细胞体外培养诱导分化核型分析实验观察增殖速度细胞分化成骨细胞 CD44 分离培养 CD34 增殖能力遗传背景致瘤性