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丹皮酚对牙龈卟啉单胞菌诱导骨髓来源巨噬细胞功能的影响

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华西口腔医学杂志 2017年第2期35卷 139-144页

作者：陈筑宿凌恺贵阳市口腔医院牙体牙髓病科遵义医学院附属贵阳口腔医院贵阳550002 浙江大学医学院附属口腔医院牙体牙髓病科杭州310000

目的观察丹皮酚对牙龈卟啉单胞菌作用下对体外培养的小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)炎性因子分泌及向破骨细胞分化能力的影响,并探讨其作用机制。方法体外分离获得小鼠生长良好的BMM,加入不同浓度丹皮酚溶液处理1 h,再加入牙龈卟啉单胞菌进... 详细信息

目的观察丹皮酚对牙龈卟啉单胞菌作用下对体外培养的小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)炎性因子分泌及向破骨细胞分化能力的影响,并探讨其作用机制。方法体外分离获得小鼠生长良好的BMM,加入不同浓度丹皮酚溶液处理1 h,再加入牙龈卟啉单胞菌进行24 h诱导刺激。采用流式细胞术检测炎症相关蛋白程序性死亡分子配体1(PD-L1)的表达量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)水平;在核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激后的BMM中加入不同浓度的丹皮酚溶液处理1 h后,加入牙龈卟啉单胞菌刺激,采用抗酒石酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞形成情况,Western blot检测破骨细胞形成相关蛋白TRAP和核因子κB受体活化因子(RANK)的表达。结果丹皮酚在10~50μmol·L-1的范围内,对BMM无毒性作用。流式细胞术结果提示丹皮酚可以抑制牙龈卟啉单胞菌诱导PD-L1的表达,并存在剂量依赖效应。ELISA实验证明丹皮酚能以剂量依赖性方式抑制BMM释放TNF-α、IL-1β及IL-6(P细胞;TRAP染色显示丹皮酚各浓度组能抑制BMM向破骨细胞分化;Western blot结果显示丹皮酚抑制TRAP和RANK表达且存在剂量依赖效应。结论丹皮酚可以剂量依赖方式抑制牙龈卟啉单胞菌诱导的BMM炎性因子TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌及其向破骨细胞分化的能力。

关键词：丹皮酚牙龈卟啉单胞菌骨髓来源巨噬细胞破骨细胞炎症分化

弱激光照射对小鼠骨髓来源巨噬细胞极化的调控作用

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第8期32卷 1045-1050页

作者：戴晨宋基伟梁卓文张倩张坤王哲胡学昱第四军医大学西京骨科医院陕西西安710032 第四军医大学神经科学研究所陕西西安710032

目的研究不同能量参数的810 nm弱激光照射对于巨噬细胞极化状态的影响。方法体外分离、培养BALB/c小鼠来源的骨髓巨噬细胞,应用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)条件性培养基培养的骨髓细胞,流式细胞术检测F4/80表达鉴定培养结果。脂多糖-... 详细信息

目的研究不同能量参数的810 nm弱激光照射对于巨噬细胞极化状态的影响。方法体外分离、培养BALB/c小鼠来源的骨髓巨噬细胞,应用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)条件性培养基培养的骨髓细胞,流式细胞术检测F4/80表达鉴定培养结果。脂多糖-γ干扰素(LPS-IFN-γ)刺激进行M1细胞极化诱导,反转录PCR检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、精氨酸酶1(Arg1)、CD86 mRNA水平,Western blot法检测i NOS和Arg1蛋白水平。应用(1、2、3、4)J/cm2的810 nm弱激光对体外培养的M1细胞进行照射,MTT法检测细胞增殖,免疫荧光细胞化学染色检测i NOS、Arg1的表达,反转录PCR检测M1细胞i NOS、Arg1 mRNA水平,Western blot法检测M1细胞i NOS、Arg1蛋白水平。结果流式细胞术结果证明分离细胞的F4/80阳性率达99.9%。骨髓源性巨噬细胞在LPS-IFN-γ刺激下,高表达i NOS和CD86 mRNA。Western blot法检测发现,给予极化刺激后,骨髓源性巨噬细胞高表达i NOS和CD86蛋白。不同能量的弱激光照射M1型巨噬细胞,MTT法检测发现,(1、2、3)J/cm2弱激光刺激时,M1细胞活力与对照组比较无显著性差异;4 J/cm2刺激时,M1细胞活力降低。免疫荧光细胞化学染色显示,与对照组比较,(1、2)J/cm2照射时,M2型巨噬细胞标志物Arg1阳性细胞数无明显差异,照射剂量为(3、4)J/cm2时,Arg1阳性细胞数显著增多,M1型巨噬细胞标志物i NOS阳性细胞数显著减少。与对照组比较,照射剂量为(1、2)J/cm2时,i NOS及Arg1 mRNA和蛋白表达水平无明显变化,在照射剂量为(3、4)J/cm2时,i NOS mRNA和蛋白水平表达下降,Arg1 mRNA和蛋白水平表达升高。结论 (1、2)J/cm2的810 nm弱激光对于M1型巨噬细胞活力及极化无影响。照射剂量为3 J/cm2时,M1型巨噬细胞可向M2型巨噬细胞极化,且细胞活性无明显变化。但照射能量为4 J/cm2时,M1型细胞虽然可向M2型细胞极化但同时伴有细胞活性降低。

关键词： 810 nm弱激光脊髓损伤 M1/M2细胞极化骨髓来源巨噬细胞

马鹿角粉浸提液对骨髓来源巨噬细胞生物学行为的影响

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中国组织工程研究 2022年第24期26卷 3840-3845页

作者：单帅董艺刘佳林韩祥祯何惠宇新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔修复与种植科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆维吾尔自治区口腔医学研究所新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054

背景:异物反应会导致材料植入失败,近些年来对于免疫学的研究逐渐成为热点,选择具有良好免疫性能的支架材料,对于骨缺损修复具有重要意义。目的:探讨去抗原处理的煅烧马鹿角松质骨及未去抗原处理的马鹿角对骨髓来源M1型巨噬细胞生物行... 详细信息

背景:异物反应会导致材料植入失败,近些年来对于免疫学的研究逐渐成为热点,选择具有良好免疫性能的支架材料,对于骨缺损修复具有重要意义。目的:探讨去抗原处理的煅烧马鹿角松质骨及未去抗原处理的马鹿角对骨髓来源M1型巨噬细胞生物行为的影响。方法:经过物理及化学方法制备煅烧马鹿角松质骨,通过X射线光电子能谱、傅里叶变换红外光谱检测材料理化性质,制备2种材料浸提液并检测浸提液中Ca、P、Mg的元素水平。体外诱导培养骨髓来源巨噬细胞并在脂多糖和干扰素γ刺激下极化为M1型巨噬细胞,然后与各组浸提液共培养,对照组用单纯IMDM完全培养基共培养,CCK-8检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞M1型标志物表达率、qPCR检测巨噬细胞相关基因表达水平。结果与结论:①去抗原马鹿角组Ca、P、Mg元素水平高于马鹿角组;②去抗原马鹿角组和马鹿角组主要官能团为OH^(-)、PO_(4)^(3-)、CO_(3)^(2-);③共培养1,3,7 d各组M1型巨噬细胞存活率差异无显著性意义;④共培养1 d时,去抗原马鹿角组细胞表面标志物CD16/32表达率低于对照组;⑤共培养1,3 d时,去抗原马鹿角组促炎因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达明显低于对照组;共培养3 d时,去抗原马鹿角组M2型巨噬细胞主要标记物CD206的表达量明显高于对照组;而在共培养1,3 d时马鹿角组的肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达或与对照组无差异或明显高于对照组,在CD206因子表达方面均与对照组无差异;⑥结果表明,去抗原马鹿角松质骨粉末浸提液可降低M1型巨噬细胞相关促炎因子的表达并促进其向M2型巨噬细胞极化。

关键词：鹿角锻烧骨浸提液骨髓来源巨噬细胞异物反应巨噬细胞极化

模拟失重后骨髓来源巨噬细胞转录组高通量测序及分析

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免疫学杂志 2023年第3期39卷 208-215页

作者：杨柳陈旭涛侯永利李娟唐康陈丽华西北大学生命科学学院西安710069 空军军医大学基础医学院免疫学教研室西安710032

目的探索模拟失重对小鼠骨髓来源巨噬细胞基因表达的影响。方法采用尾悬吊法构建模拟失重小鼠模型,对照组不做尾吊处理。模拟失重28 d后提取小鼠骨髓来源巨噬细胞并将其分别诱导为M0型和M1型巨噬细胞。随后,提取细胞总RNA进行转录组测... 详细信息

目的探索模拟失重对小鼠骨髓来源巨噬细胞基因表达的影响。方法采用尾悬吊法构建模拟失重小鼠模型,对照组不做尾吊处理。模拟失重28 d后提取小鼠骨髓来源巨噬细胞并将其分别诱导为M0型和M1型巨噬细胞。随后,提取细胞总RNA进行转录组测序及分析,并通过实时定量RT-PCR验证重要基因的差异表达。结果转录组测序结果显示,模拟失重组与对照组之间的M0型巨噬细胞共有807个基因差异表达;模拟失重组与对照组之间的M1型巨噬细胞共有898个基因差异表达。GO分析表明,M0型巨噬细胞差异表达基因主要集中于免疫应答、趋化等生物学过程中;M1型巨噬细胞差异基因主要富集于炎症反应、细胞迁移的正调控和单核细胞趋化等生物学过程中。KEGG通路分析发现M0型巨噬细胞的差异基因主要涉及趋化因子、细胞因子-细胞因子受体相互作用等信号通路;M1型巨噬细胞的差异基因主要涉及造血细胞谱系、流体剪切应力等信号通路。进一步分析发现,尾吊组与对照组在M0或M1型巨噬细胞中的差异基因均在细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路中富集,其中尾吊组的M0与M1型巨噬细胞中调节单核细胞/巨噬细胞迁移和浸润的关键趋化因子Ccl2均显著高表达,并进一步通过RT-PCR实验得到验证。结论模拟失重可显著影响小鼠巨噬细胞中以Ccl2为代表的与炎症发生和加重密切相关的基因表达水平,这些改变的基因富集于多个生物学过程,可能对巨噬细胞的黏附、迁移等功能产生影响。

关键词：模拟失重骨髓来源巨噬细胞转录组测序免疫功能

TLR4信号通路在高糖诱导骨髓来源巨噬细胞激活中的作用

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安徽医科大学学报 2016年第10期51卷 1396-1402页

作者：张婷敏邵云侠徐兴欣王坤吴永贵安徽医科大学第一附属医院肾脏内科合肥230022

目的通过研究高糖对骨髓来源巨噬细胞(BMDM)Toll受体4(TLR4)表达及其下游信号通路的影响,初步探讨高糖通过TLR4信号通路促进巨噬细胞分泌炎症因子的机制。方法分离获取C57BL/6J及B10Sc NNju(TLR4基因敲除小鼠)BMDM,流式细胞仪检测其纯度... 详细信息

目的通过研究高糖对骨髓来源巨噬细胞(BMDM)Toll受体4(TLR4)表达及其下游信号通路的影响,初步探讨高糖通过TLR4信号通路促进巨噬细胞分泌炎症因子的机制。方法分离获取C57BL/6J及B10Sc NNju(TLR4基因敲除小鼠)BMDM,流式细胞仪检测其纯度;选取不同浓度的高糖及甘露醇,在不同时间点刺激BMDM;后将BMDM分为4组:正常糖浓度(LG)组、高糖刺激(HG)组、TLR4基因敲除(TLR4-/-)组、TLR4基因敲除BMDM高糖刺激(TLR4-/-+HG)组。采用流式细胞术观察BMDM M1表型,细胞免疫荧光法观察BMDM TLR4与诱生型一氧化氮合酶(i NOS)共表达,实时定量PCR法检测各组细胞中促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)及iNOS的mRNA表达,Western blot法检测各组总蛋白中TLR4、髓样分化因子88(My D88)、TIR结构域衔接蛋白(Trif)、磷酸化白介素受体相关激酶-1(p-IRAK-1)、干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化(p)-IRF3、核因子κB(NF-κB)p65、NF-κB p-p65、i NOS蛋白的表达,ELISA法测定细胞上清液中促炎因子TNF-α、MCP-1、IL-1β的表达。结果与LG组比较,高糖可使M1型巨噬细胞百分比增加;TNF-α、MCP-1、IL-1β及i NOS的mRNA水平上调;TLR4、My D88、Trif、p-IRAK-1、p-IRF3、IRF3、NF-κB p65、NF-κB p-p65、iNOS蛋白表达水平升高;细胞培养基中分泌的TNF-α、MCP-1、IL-1β水平升高。TLR4基因敲除可消除高糖导致的巨噬细胞激活效应。结论高糖可诱导BMDM向M1型极化;TLR4基因敲除可抑制高糖诱导的巨噬细胞向M1活化及炎症因子的产生。

关键词：骨髓来源巨噬细胞 Toll受体4 高糖炎症

基于差异接种细胞数的高效骨髓来源巨噬细胞分离方法的建立与评价

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第4期39卷 345-350页

作者：尚恋张瑞延安大学基础医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的探索不同铺板细胞数接种骨髓细胞对分离小鼠骨髓来源巨噬细胞得率的影响.方法依据文献中给定的常用细胞铺板范围,将分离的小鼠骨髓细胞按六种不同细胞数接种在细胞培养皿中,使用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓细胞分化为巨噬... 详细信息

目的探索不同铺板细胞数接种骨髓细胞对分离小鼠骨髓来源巨噬细胞得率的影响.方法依据文献中给定的常用细胞铺板范围,将分离的小鼠骨髓细胞按六种不同细胞数接种在细胞培养皿中,使用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓细胞分化为巨噬细胞后,利用细胞计数法比较各组间贴壁细胞的比例差异,采用流式细胞术、间接免疫荧光法检测巨噬细胞的标志物F4/80,根据F4/80来判断巨噬细胞分化的阳性率,并最终比较各组之间骨髓来源巨噬细胞的得率.结果在6.7×10^(5)个/cm^(2)~14.7×10^(5)个/cm^(2)细胞数范围内,按照6.7×10^(5)个/cm^(2)细胞数进行铺板,能够获得最高的贴壁细胞比例且贴壁细胞中F4/80^(+)巨噬细胞得率最高,在获得相同数量巨噬细胞的前提下,该细胞数能够节省40%~53%制备巨噬细胞所需要的模型小鼠.结论按照6.7×10^(5)个/cm^(2)的铺板细胞数进行骨髓细胞铺板,骨髓来源巨噬细胞的得率最高.

关键词：骨髓来源巨噬细胞得率 F4/80阳性率

miR-34b-5p在骨髓来源巨噬细胞极化中作用的研究

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国际免疫学杂志 2018年第2期41卷 178-183页

作者：王亮卢羿同李国旭毕梓凯白健叶雨辰高春辰秦鸿雁空军军医大学基础医学院遗传学与发育生物学教研室西安710032 空军军医大学西京医院肝胆外科西安710032

目的研究miR-34b-5p在骨髓来源巨噬细胞（bone marrow derived macrophages ，BMDM）极化中的作用。方法分离小鼠的骨髓细胞，在体外用巨噬细胞集落刺激因子诱导其分化为BMDM，进行PBS（对照）、M1[脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）... 详细信息

目的研究miR-34b-5p在骨髓来源巨噬细胞（bone marrow derived macrophages ，BMDM）极化中的作用。方法分离小鼠的骨髓细胞，在体外用巨噬细胞集落刺激因子诱导其分化为BMDM，进行PBS（对照）、M1[脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、干扰素（interferon，IFN）-γ]或M2 [白细胞介素4（interleukin-4，IL-4）]极化处理24 h，实时定量PCR检测BMDM的miR-34b-5p表达；BMDM分别转染miR-34b-5p模拟物、阴性对照模拟物、miR-34b-5p抑制物以及阴性对照抑制物，培养24 h后再进行对照、M1或M2极化处理24 h，实时定量PCR、流式细胞术和酶联免疫吸附试验检测诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和IL-6的表达变化。结果与对照组相比，M1极化的BMDMmiR-34b-5p表达水平升高（P〈0.05），M2极化的BMDM miR-34b-5p表达水平无明显变化（P〉0.05）；mRNA相对定量结果显示，在对照、M1和M2极化的BMDM中，与对照模拟物组相比，过表达miR-34b-5p组的iNOS、TNF-α和IL-6表达升高（均P〈0.05），与对照抑制物组相比，miR-34b-5p表达抑制组的iNOS、TNF-α和IL-6表达下降（均P〈0.05）；蛋白定量结果显示，与对照模拟物组相比，在PBS对照和M2极化的BMDM中，过表达miR-34b-5p组的iNOS、TNF-α和IL-6表达没有变化（均P〉0.05），PBS在M1极化的BMDM中，过表达miR-34b-5p组的iNOS、TNF-α和IL-6表达升高（均P〈0.05）。结论M1极化的BMDM高表达miR-34b-5p，且miR-34b-5p促进BMDM的M1型极化。

关键词： miR-34b-5p 骨髓来源巨噬细胞固有免疫应答诱导型一氧化氮合酶肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6

头花蓼对幽门螺杆菌刺激骨髓来源巨噬细胞炎症反应的作用及机制

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贵州医科大学学报 2022年第1期47卷 13-19页

作者：袁蕴馨简单张姝何芸孙朝琴黄健莫非贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004

目的探讨头花蓼(PC)对幽门螺杆菌(***)刺激骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)炎症反应的作用及机制。方法室温复苏*** SS2000菌株,培养48 h并鉴定,将***与BMDMs共孵育,按照不同感染复数(MOI,细菌数∶细胞数)分为空白、25∶1、50∶1、100∶1、200... 详细信息

目的探讨头花蓼(PC)对幽门螺杆菌(***)刺激骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)炎症反应的作用及机制。方法室温复苏*** SS2000菌株,培养48 h并鉴定,将***与BMDMs共孵育,按照不同感染复数(MOI,细菌数∶细胞数)分为空白、25∶1、50∶1、100∶1、200∶1及400∶1组,并培养48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组BMDMs细胞活力;并于3、6、12及24 h收集细胞及上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同MOI及刺激时间下白细胞介素-1β(IL-1β)IL-18的含量;取BMDMs分为空白组[不加***,加改良依格尔(DMEM)培养液]、模型组(加***,DMEM培养液)及PC治疗组(加***,DMEM培养液,0.08μg/L PC),采用Western blot检测各组BMDMs细胞质与细胞核中核因子κB单体p65(NF-κB/p65)的表达及细胞裂解液中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、IL-1β前体(Pro-IL-1β)及细胞上清液中IL-1β蛋白的表达。结果MOI高于100∶1时,细胞抑制率增高,BMDMs的数量减少(P细胞质内NF-κB/p65蛋白表达较空白组减少、细胞核内NF-κB/p65蛋白表达较空白组升高(P0.05)。结论PC可改善***引起的BMDMs细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路的激活有关。

关键词：螺杆菌,幽门核因子κB受体活化因子白细胞介素-1β 头花蓼骨髓来源巨噬细胞 NOD样受体蛋白3 核因子-κB单体p65

PLEKHQ1基因敲除小鼠的永生化骨髓来源巨噬细胞系的建立

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中国医学装备 2017年第9期14卷 167-170页

作者：陆琤周晨辰张鹏飞张硌查玉华军事医学科学院附属医院医学工程科北京100071

目的:建立PLEKHQ1基因敲除小鼠的永生化骨髓来源巨噬细胞系,为PLEKHQ1基因功能的研究奠定基础。方法:用慢病毒感染的方法将包装质粒pCDH-SV40/GFP导入野生型和PLEKHQ1基因敲除小鼠的骨髓来源巨噬细胞,建立永生化细胞系;观察永生化细胞... 详细信息

目的:建立PLEKHQ1基因敲除小鼠的永生化骨髓来源巨噬细胞系,为PLEKHQ1基因功能的研究奠定基础。方法:用慢病毒感染的方法将包装质粒pCDH-SV40/GFP导入野生型和PLEKHQ1基因敲除小鼠的骨髓来源巨噬细胞,建立永生化细胞系;观察永生化细胞的生物学性状,用聚合酶链反应(PCR)检测目的基因的整合,用RT-PCR鉴定目的基因的表达,并对永生化和非永生化骨髓来源巨噬细胞的生长状况进行比较。结果:构建的骨髓来源巨噬细胞系已扩大培养并稳定传代,经鉴定,SV40LT抗原已整合入细胞并稳定表达。结论:通过慢病毒感染细胞的方法成功构建了PLEKHQ1基因敲除小鼠的永生化骨髓来源巨噬细胞系。

关键词： PLEKHQ1基因敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞永生化 SV40LT抗原