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骨形成蛋白2在大鼠角膜损伤愈合的定位表达及其作用

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眼外伤职业眼病杂志 2006年第10期28卷 724-727页

作者：任婉娜李丽马薇詹玉蕊张月梅兰州大学第一医院眼科甘肃兰州730000

目的通过观察大鼠角膜损伤愈合过程中骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP_2)的表达规律来探讨其在大鼠角膜损伤愈合过程中可能发挥的作用。方法雄性Wistar大鼠35只,随机分为7组,每组5只,动物模型组均取右眼制造角膜针刺损伤... 详细信息

目的通过观察大鼠角膜损伤愈合过程中骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP_2)的表达规律来探讨其在大鼠角膜损伤愈合过程中可能发挥的作用。方法雄性Wistar大鼠35只,随机分为7组,每组5只,动物模型组均取右眼制造角膜针刺损伤模型。于损伤后各时间点(6h、1d、3d、5d、7d、14d)取角膜标本,HE染色行组织病理学检查,免疫组织化学染色观察BMP_2的表达与分布,计算机图像分析系统对结果进行分析。结果大鼠角膜上皮BMP_2的表达于损伤后1d显著增高(P2在大鼠角膜各部位均有表达,可能参与大鼠角膜损伤愈合过程。

关键词：骨形成蛋白2 角膜针刺损伤大鼠愈合

腺病毒介导的人骨形成蛋白2基因转染促进下颌牵张成骨的实验研究

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中华口腔医学杂志 2007年第1期42卷 15-17页

作者：陈安威魏奉才王克涛孙善珍刘少华山东大学齐鲁医院口腔颌面外科济南250012 山东大学口腔医学院病理科

目的探讨局部应用腺病毒介导的人骨形成蛋白2(adenovirus vectors containinghuman bone morphogenetic proteins 2,Ad-hBMP-2)对兔下颌骨牵张成骨的影响。方法 24只新西兰大白兔随机分为实验组(12只)和对照组(12只),并建立下颌骨双侧... 详细信息

目的探讨局部应用腺病毒介导的人骨形成蛋白2(adenovirus vectors containinghuman bone morphogenetic proteins 2,Ad-hBMP-2)对兔下颌骨牵张成骨的影响。方法 24只新西兰大白兔随机分为实验组(12只)和对照组(12只),并建立下颌骨双侧牵张成骨模型。经过5 d 潜伏期后,以0.5 mm/12 h 的速度牵张7 d。固定期第1天,在实验组骨牵张区注射0.2 ml 滴度为10^(12)pfu/L的 Ad-hBMP2,对照组骨牵张区注射0.2 ml 滴度为10^(12)pfu/L 的腺病毒介导的增强型绿色荧光蛋白。在固定期第7、14、28天对下颌骨牵张区进行骨密度及新生骨量比较。结果 Ad-hBMP-2治疗组牵张区骨密度及新生骨量明显高于对照组。结论腺病毒介导的人骨形成蛋白2具有促进兔下颌牵张成骨的作用。

关键词：骨形成蛋白2 基因疗法牵张成骨

人骨形成蛋白2腺病毒表达载体转染体外培养兔腰椎间盘细胞的研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第8期20卷 820-824页

作者：顾海伦吕刚刘莉李建军黄涛王佳中国医科大学附属第一医院骨科沈阳110001 中国医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室中国医科大学附属第二医院骨科

目的研究人骨形成蛋白2腺病毒表达载体(adenovirus-mediatedhumanbonemorphogeneticprotein2gene,Ad-hBMP-2)转染体外培养兔腰椎间盘细胞,分析其对腰椎间盘细胞的影响。方法成年健康新西兰大白兔4只,体重4～5kg,取L2、L3到L6、L7节段椎... 详细信息

目的研究人骨形成蛋白2腺病毒表达载体(adenovirus-mediatedhumanbonemorphogeneticprotein2gene,Ad-hBMP-2)转染体外培养兔腰椎间盘细胞,分析其对腰椎间盘细胞的影响。方法成年健康新西兰大白兔4只,体重4～5kg,取L2、L3到L6、L7节段椎间盘细胞体外培养。利用免疫荧光和蛋白印迹法(Westernblot)检测空白对照组(未转染)、Ad-LacZ组[感染复数(multiplicityofinfection,MOI)150MOI]和不同剂量Ad-hBMP-2(50、100、150MOI)组转染后细胞hBMP-2的表达水平。采用RT-PCR检测转染后细胞型胶原和aggrecanmRNA表达水平。结果转染Ad-hBMP-2后通过免疫荧光和蛋白印迹法可见随转染剂量增加hBMP-2表达量逐渐增加,与50MOI组比较100MOI组升高102%,150MOI组升高183%。在转染后第6天RT-PCR结果显示转染组aggrecan和型胶原mRNA的表达高于对照组,并且随转染剂量增高mRNA的表达量均逐渐增加。aggrecanmRNA从50MOI组的61.7%增加到150MOI组的167.3%。型胶原mRNA从50MOI组的77.3%增加到150MOI组的169.0%。结论Ad-hBMP-2可高效转染体外培养兔腰椎间盘细胞,随转染剂量增加hBMP-2表达量逐渐增加,同时上调aggrecan和型胶原mRNA的表达,并存在剂量依赖关系。

关键词：腺病毒骨形成蛋白2 椎间盘细胞基因转染

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克隆并构建人骨形成蛋白2真核表达载体

中国修复重建外科杂志 2006年第2期20卷 112-115页

作者：田晓滨孙立杨述华贵州省人民医院骨科贵阳550002 华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科

目的探讨构建人骨形成蛋白2(humanbonemorphgeneticprotein2,hBMP-2)真核表达载体的方法。方法由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得hBMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T-hBMP-2重组质粒载体,转... 详细信息

目的探讨构建人骨形成蛋白2(humanbonemorphgeneticprotein2,hBMP-2)真核表达载体的方法。方法由人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用RT-PCR方法扩增获得hBMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T-hBMP-2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒。分别用EcoR和Not双酶切pGEM-T-hBMP-2质粒和pcDNA3.1(+)真核表达载体,将克隆载体中hBMP基因重组到pcDNA3.1(+)真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、PCR鉴定及DNA测序。结果人骨肉瘤细胞中经RT-PCR得到1.2kbp的hBMP-2扩增条带,重组质粒pGEM-T-hBMP-2经酶切电泳可见1.2kbp的hBMP-2条带和4.0kbp的载体片断;pcDNA3.1-hBMP-2质粒经酶切电泳可见1.2kbp的hBMP-2条带和5.0kbp的载体片断,重组质粒酶谱分析与预期一致;DNA序列分析测序结果校对后经BLAST分析,表明核酸序列与GeneBank中和hBMP-2的mRNA序列完全吻合。结论通过此方法能成功克隆获得hBMP-2基因,并构建其真核表达载体。

关键词：骨形成蛋白2 真核表达载体基因克隆

转化生长因子β_1和骨形成蛋白2体外诱导成牙本质细胞分化

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中华口腔医学杂志 2002年第2期37卷 106-108,T002-T004页

作者：樊明文朱奇边专张旗武汉大学口腔医学院牙体牙髓科 430079

目的　观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF β1)和骨形成蛋白 2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP2 )对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法　取 17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚 ,胰蛋白酶消化分离牙乳... 详细信息

目的　观察转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF β1)和骨形成蛋白 2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP2 )对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法　取 17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚 ,胰蛋白酶消化分离牙乳头 ,置半固态培养基培养 6d ,半固态培养基中加入重组TGF β1或BMP2与肝素 ,组织学观察。结果　TGF β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化 ,并分泌胞外基质。TGF β1或BMP2单独加入时未见细胞极化 ,但基质分泌增加。结论　TGF β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能。

关键词：转化生长因子β1 细胞分化牙乳头牙本质骨形成蛋白2

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骨形成蛋白2在神经干细胞诱导分化中的作用

中国神经科学杂志 2004年第5期20卷 403-406页

作者：张治元杨辉第三军医大学新桥医院神经外科重庆400037

神经干细胞的多向分化潜能 ,使其成为替代治疗的内源性和外源性潜在细胞源 ,为治疗神经系统退行性疾病和中枢神经系统损伤带来了希望。神经干细胞的定向诱导分化 ,是当前神经干细胞研究领域的难点和热点。生长因子TGF beta超家族成员BMP... 详细信息

神经干细胞的多向分化潜能 ,使其成为替代治疗的内源性和外源性潜在细胞源 ,为治疗神经系统退行性疾病和中枢神经系统损伤带来了希望。神经干细胞的定向诱导分化 ,是当前神经干细胞研究领域的难点和热点。生长因子TGF beta超家族成员BMP2在骨发育形成中的重要作用已为许多研究所证实。近年来国内外对BMP2在神经系统发育中的作用进行了广泛研究 ,证实BMP2在诱导神经干细胞分化中发挥重要的作用 ,表现为一种多效性神经诱导因子。

关键词：骨形成蛋白2 神经干细胞诱导分化神经干细胞

骨形成蛋白2在高血压来源血管平滑肌细胞老化及其钙化过程中的作用研究

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骨形成蛋白2在高血压来源血管平滑肌细胞老化及其钙化过程中的作...

作者：张思多福建医科大学

学位级别：硕士

目的:研究骨形成蛋白2(BMP2)对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)老化和钙化影响,探讨高血压动脉硬化及血管老化的机制。方法:对12周龄的SHR和京都种正常血压大鼠(WKY)主动脉平滑肌细胞进行体外培养。从第三代... 详细信息

目的:研究骨形成蛋白2(BMP2)对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)老化和钙化影响,探讨高血压动脉硬化及血管老化的机制。方法:对12周龄的SHR和京都种正常血压大鼠(WKY)主动脉平滑肌细胞进行体外培养。从第三代细胞开始,根据培养液中是否加入重组人骨形成蛋白-2(rhBMP2)或重组鼠头蛋白(rmNoggin),分为SHR组、WKY组、SHR-rhBMP2组(BMP2组)和SHR-rhBMP2-rm Noggin组(BMP2+Noggin组)。其中BMP2组和BMP2+Noggin组为实验组,SHR组和WKY组为对照组。分别培养至第七代,应用细胞衰老β半乳糖苷酶染色、von kossa染色比较各组VSMCs衰老、钙化情况,运用免疫细胞化学染色及Western blot研究BMP2、Runx2、MGP的变化。结果:(1)随着传代次数的增加,平滑肌细胞衰老程度逐渐加重。第5代细胞开始至第七代,WKY组较同期SHR组明显降低,差异有统计学意义(第五代P=0.031,第七代P=0.000)。说明SHR来源的平滑肌细胞较WKY来源的更易于老化。(2)随着传代次数的增加,平滑肌细胞钙化程度逐渐加重。在每代细胞WKY组均明显低于SHR组,差异有统计学意义(第三代细胞P=0.006,第五代细胞P=0.033,第七代细胞P=0.000)。说明SHR来源的平滑肌细胞较WKY来源的更易于钙化。(3)随着细胞传代次数的增加,平滑肌细胞中BMP2的表达逐渐增加。在同一传代时期内,免疫细胞化学染色结果显示SHR组表达均较WKY组多,差异有统计学意义(第三代细胞P=0.007,第五代细胞P=0.000,第七代细胞P=0.000)。说明来源于SHR的平滑肌细胞BMP2表达较WKY来源多。(4)BMP2组的老化程度从第5代就开始明显高于同时期的SHR组,差异有统计学意义(第五代P=0.002,第七代P=0.001)。BMP2+Noggin组老化程度在第5代时较同期SHR组明显降低,差异有统计学意义(第五代P=0.017,第七代P=0.001)。说明外源性BMP2对SHR来源的平滑肌细胞的衰老、钙化有促进作用,BMP2抑制剂Noggin可减轻其衰老。(5)BMP2组的钙化程度从第3代就开始明显高于同时期的SHR组,差异有统计学意义(第三代细胞P=0.002,第五代细胞P=0.000,第七代细胞P=0.000)。BMP2+Noggin组钙化程度在第7代时较同期SHR组明显降低,差异有统计学意义(P=0.000)。说明外源性BMP2对SHR来源的平滑肌细胞的钙化有促进作用,BMP2抑制剂Noggin可减轻其钙化。(6)随着传代次数的增加,平滑肌细胞中MGP的表达逐渐减少。免疫细胞化学染色显示第七代时SHR组MGP表达较WKY组表达少,差异有统计学意义(P=0.000);BMP2组较SHR组少,差异有统计学意义(P=0.001);BMP2+Noggin组较同期SHR组多,差异有统计学意义(P=0.000)。说明随着传代的进行,MGP的表达逐渐减少,SHR来源的VSMCsMGP表达较少,外源性BMP2可减少MGP表达,BMP2抑制剂Noggin可增加MGP表达。(7)随着传代次数的增加,平滑肌细胞中Runx2的表达逐渐增加。免疫细胞化学染色显示在第七代细胞时,SHR组Runx2表达均高于WKY组,差异有统计学意义(P=0.001);BMP2组高于同时期SHR组,差异有统计学意义(P=0.000);BMP2+Noggin组低于SHR组,差异有统计学意义(P=0.004)。说明SHR来源的平滑肌细胞中Runx2表达多,外源性BMP2可增加其表达,BMP2抑制剂Noggin可减少其表达。结论:SHR来源的主动脉平滑肌细胞较WKY来源的更易于老化、钙化,BMP2可促进SHR来源的主动脉平滑肌细胞老化和钙化,其机制可能与BMP2/Smads/Runx2信号通路以及抑制MGP表达有关。

关键词：高血压血管平滑肌细胞老化钙化骨形成蛋白2

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脑外伤对骨折愈合中骨形成蛋白2表达的影响

中国修复重建外科杂志 2007年第10期21卷 1040-1044页

作者：郭启张柳华北煤炭医学院附属医院骨外科河北唐山063000

目的通过研究大鼠股骨干骨折合并脑外伤时骨痂组织内骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)表达水平的变化,探讨脑外伤对骨折愈合的影响及作用机制。方法取12周雄性SD大鼠32只,体重368±25g。随机分成4组,每组8只:A组为骨折... 详细信息

目的通过研究大鼠股骨干骨折合并脑外伤时骨痂组织内骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)表达水平的变化,探讨脑外伤对骨折愈合的影响及作用机制。方法取12周雄性SD大鼠32只,体重368±25g。随机分成4组,每组8只:A组为骨折合并脑外伤1周组,B组为单纯骨折1周组,C组为骨折合并脑外伤2周组,D组为单纯骨折2周组。A、C组制作脑外伤和股骨干骨折模型,B、D组制作单纯股骨干骨折模型作对照。各组摄X线片后截取骨痂,行HE染色观察骨痂生长情况及其组织形态,免疫组织化学染色测定BMP-2表达,RT-PCR检测BMP-2mRNA水平。结果X线片示A组骨折端有较少量骨痂形成,骨折线较清晰;B组骨折线清晰;C组骨折端有较多骨痂形成,骨折线已模糊;D组仅有少量骨痂形成,骨折线较清晰。HE染色A组可见较多早期软骨细胞、成纤维细胞;B组骨折间隙可见成纤维细胞,仅夹杂有少量的早期软骨细胞;C组骨折端有新生骨小梁长入;D组未见有骨小梁形成。免疫组织化学染色可见成纤维细胞、间充质细胞、血管内皮细胞、早期软骨细胞、成骨细胞胞浆均出现广泛的强阳性反应,A组阳性细胞数量多于B组,并且显色强;C组阳性细胞数量多于D组,并且显色强。分析显示A、C组平均阳性细胞百分数为0.762%±0.052%、0.756%±0.079%,分别高于同一时间点B、D组的0.702%±0.052%、0.672%±0.044%,差异有统计学意义(P2mRNA含量依次递减,A、C组骨痂BMP-2mRNA含量为1.07±0.13、0.78±0.11,均显著高于同一时间点B、D组的0.91±0.12、0.61±0.08,差异有统计学意义(P2表达水平升高有关。

关键词：骨折愈合脑外伤骨形成蛋白2 基因表达大鼠

辛伐他汀对大鼠牙移动后牙周组织中骨形成蛋白2表达的影响

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中华口腔医学杂志 2008年第1期43卷 21-25页

作者：陈远萍韩光红晋长伟史瑞新侯建华吉林大学口腔医学院正畸科长春130041 北京大学口腔医学院·口腔医院正畸科

目的明确全身给予辛伐他汀对大鼠牙齿移动后复发的影响，探讨辛伐他汀促进牙齿稳定的作用机制。方法选用32只雄性Wistar大鼠，随机分成4组：对照组（0．9％NaCl）、低剂量组（2．5mg·kg^-1辛伐他汀）、中剂量组（5．0mg·kg^-1辛伐他... 详细信息

目的明确全身给予辛伐他汀对大鼠牙齿移动后复发的影响，探讨辛伐他汀促进牙齿稳定的作用机制。方法选用32只雄性Wistar大鼠，随机分成4组：对照组（0．9％NaCl）、低剂量组（2．5mg·kg^-1辛伐他汀）、中剂量组（5．0mg·kg^-1辛伐他汀）、高剂量组（10．0mg·kg^-1辛伐他汀），牵引其上颌第一磨牙向近中移动，持续21d。实验组在加力装置去除前1d开始，腹膜下注射辛伐他汀，阴性对照组注射生理盐水，每天1次，连续4周。分别在加力装置去除时及其后1、4周，测量上颌第一、第二磨牙间距离。取上颌第一磨牙及其牙周组织行组织学切片，HE染色及骨形成蛋白2（BMP-2）免疫组织化学染色，并进行图像分析和统计。结果①低、中、高剂量组大鼠牙齿移动复发距离均小于对照组（P〈0．05）、复发率明显低于对照组（P〈0．01），且剂量越小复发程度越小，低剂量组复发率最低（1、4周的复发率分别为26．81％、53．38％）；②牙周组织中BMP-2表达量，低、中、高剂量组均高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．001），低剂量组灰度积分增高最明显（P〈0．001）；牙周组织中BMP-2表达，张力区略高于压力区，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在正畸牙齿移动后复发的过程中，辛伐他汀能有效抑制实验性牙移动后牙齿复发的程度，低剂量的辛伐他汀效果最明显。其作用可能是通过促进牙周组织中BMP-2蛋白的表达，加速成骨细胞活动，促进骨形成，促进移动后的牙齿稳定。

关键词：斯伐他汀正畸学矫正牙移动骨形成蛋白2