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第十二届全国免疫学学术大会

作者：刘春妍张晓慧邹凯王昕旭颜妍王玉珍内蒙古农业大学

研究目的:益生菌乳双歧杆菌经过多年系统的基础研究和试验证明该菌具有良好的耐酸、耐胆盐特性,无毒副作用,能调节肠道菌群平衡、拮抗体内致病菌和增强免疫的功能。本实验通过建立非酒精性肝损伤模型来探究益生菌乳双歧杆菌V9对高脂饮... 详细信息

研究目的:益生菌乳双歧杆菌经过多年系统的基础研究和试验证明该菌具有良好的耐酸、耐胆盐特性,无毒副作用,能调节肠道菌群平衡、拮抗体内致病菌和增强免疫的功能。本实验通过建立非酒精性肝损伤模型来探究益生菌乳双歧杆菌V9对高脂饮食诱导的非酒精性肝损伤的保护和预防作用及其机制。实验方法:将120g左右的雄性Wister大鼠随机分为五组,即正常组,模型组,阳性药物组,益生菌乳双歧杆菌V9治疗组,益生菌乳双歧杆菌V9预防组。当大鼠适应两周后除空白组和预防组外,剩余组小鼠均食用高脂饮食构建非酒精性肝损伤模型。六周以后除模型组外全换成普通饮食,共观察八周,阳性药物组用黄连素(300mg/kg)治疗,八周后,禁食不禁水12h,收集血液,肝脏及肠组织,检测血清中ALT、AST、MDA、SOD的情况,HE染色观察益生菌V9对肝损伤的影响,采用PT-PCR检测细胞炎性因子IL-1β、TNF-α及NLRP3的表达水平,用western blot技术检测TLR4及P-ERK蛋白的表达。实验结果:结果表明益生菌V9显著抑制非酒精性肝损伤诱导的血清中ALT和AST水平(P性小体NLRP3 mRNA的表达水平,显著提高了血清中SOD的活性。同时免疫印迹法显示了益生菌V9明显抑制了TLR4及其下游分子ERK的磷酸化。结论:证明了益生菌V9通过一定的抗氧化作用及抗炎作用进行对非酒精性肝损伤的保护和预防,为益生菌V9的临床推广提供理论基础。

关键词：益生菌V9 非酒精性肝损伤 TLR4

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葛根素对实验性肝损伤的治疗作用研究进展

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中国新药杂志 2017年第9期26卷 1005-1010页

作者：赵月蓉侯碧玉张莉杜冠华管淑玉广东药科大学中药学院广州510006 国家中医药管理局中药数字化质量评价技术重点研究室广州510006 中国医学科学院药物研究所靶点研究与新药筛选北京市重点实验室北京100050

葛根素是从豆科植物野葛或甘葛藤的块根中提取的异黄酮类化合物。研究显示,葛根素对化学性肝损伤、酒精/非酒精性肝损伤、缺血-再灌注性肝损伤等多种实验性肝损伤具有不同程度的治疗作用。本文综述了近年来葛根素对实验性肝损伤治疗的... 详细信息

葛根素是从豆科植物野葛或甘葛藤的块根中提取的异黄酮类化合物。研究显示,葛根素对化学性肝损伤、酒精/非酒精性肝损伤、缺血-再灌注性肝损伤等多种实验性肝损伤具有不同程度的治疗作用。本文综述了近年来葛根素对实验性肝损伤治疗的国内外文献,分析了葛根素改善实验性肝损伤的作用及机制,为葛根素在肝损伤保护方面的深入研究提供参考。

关键词：葛根素化学性肝损伤酒精性肝损伤非酒精性肝损伤肝脏保护

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TGF-β-Smad信号通路相关细胞因子在小鼠非酒精性脂肪肝干预中的...

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作者：朱彦湖南师范大学

学位级别：硕士

研究目的:探讨有氧运动训练和中药干预对高脂膳食诱导下小鼠非酒精性脂肪肝形成的抑制作用,初步揭示有氧运动训练和中药对改善小鼠非酒精性肝脏损伤的机制,并探讨相关细胞因子的关联作用。研究方法:实验对象及分组:KM种雄性小鼠80只,体... 详细信息

研究目的:探讨有氧运动训练和中药干预对高脂膳食诱导下小鼠非酒精性脂肪肝形成的抑制作用,初步揭示有氧运动训练和中药对改善小鼠非酒精性肝脏损伤的机制,并探讨相关细胞因子的关联作用。研究方法:实验对象及分组:KM种雄性小鼠80只,体重182g,室温23℃到25℃自然光照饲养。实验小鼠购入后,通过高糖高脂膳食灌胃建立小鼠非酒精性脂肪肝模型。每天固定时间进行灌胃,每日1次(下午13时),每周6次。通过5周灌胃构建小鼠非酒精性肝损伤模型。建模结束后随机选取模型小鼠5只,取新鲜肝组织进行HE染色,检验细胞中脂滴着色情况。从造模成功所有小鼠中,淘汰伤病小鼠,保留60只。随机分成5组,每组12只,各组分别为:阴性对照组(OJ)、阳性对照组(Y)、中药组(M)、有氧运动组(E)、中药联合有氧运动组(E+M)。实验方案:有氧运动干预采用水平动物跑台方式,前3天为适应性跑台训练,每次30min,速度8m/min。第4-6天运动时间逐渐递增至60min,速度12m/min(Pm15:00-17:00),维持此运动量持续训练7周,每周训练6次,运动训练时驱赶停止不动的小鼠已达到额定训练负荷。中药干预的最佳有效剂量通过按人和小鼠的体表面积折算得出等效剂量,并通过口灌胃进行干预,灌胃前配备成0.5ml灌胃(药剂浓度为0.2Λg/g)。中药联合运动组剂量:按200ml/kg体重在实验前配备成所需要浓度进行灌服给药(总体积0.5ml)。阴性对照组、跑台组采用相同时间灌服同体积生理盐水进行干预,阳性对照组主要使用水飞蓟宾悬浮液进行灌服,每次灌胃剂量按人与小鼠体表面积折算0.5ml/次(相当于人体用药的20倍)。所有需要进行灌胃干预的小鼠均灌服7周,每周6次。实验期间记录小鼠的行为学变化。7周干预实验结束后,小鼠禁食过夜,随后将肝组织从体内剥离进行取材,对各个干预组的小鼠肝脏组织情况采用显微结构形态学观察,评价各个干预小组的小鼠肝组织损伤情况;通过免疫组化检测法来评定小鼠肝组织tgf-β1生长因子的蛋白表达水平情况;rt-pcr法检测肝组织中smad3、smad4mrna表达程度;血生化检测分析血清谷草转氨酶(ast)、丙氨酸转氨酶(alt)、甘油三酯(tg)、以及总胆固醇(tc)、和超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)在血清中的含量水平。研究结果:(1)he染色显示:阴性对照组脂肪病变程度最为明显,小鼠肝细胞内出现大量纤维化增生,肝细胞发生变性情况严重,有大面积细胞病变坏死出现,细胞内部结构变形排列混乱;有氧运动组与阴性对照组肝脂肪病变程度进行比较评分有降低;任可见少量肝细胞纤维化,肝细胞变性情况;中药干预组和运动干预组与阴性对照组相比,肝组织细胞任然有较少病变细胞分布出现,肝小叶组织结构有所改变,但肝细胞排列结构欠整齐;阳性干预组和中药联合运动干预组较阴性组对比,肝组织无明显坏死情况,肝小叶组织结构基本正常,肝细胞排列较整齐。(2)血清学结果:通过单因素方差分析法,将有氧运动组、中药组、阳性对照组和有氧运动联合中药组与阴性对照组分别进行两两比较,可知在不同的干预方式下小鼠血清中ALT、AST和TG、TC、SOD、MDA水平较阴性组都有不同程度降低(P性组对比有氧运动联合中药组能明显降低高脂饮食小鼠肝脏中丙二醛(MDA)的含量的趋势,(p性组相比有氧运动训练联合中药组,有显著提高高脂膳食大鼠肝脏氧化物歧化酶(SOD)的活性作用(p性对照组相比ALT、AST和TG、TC检测指标有明显下降趋势(P性表达程度是进一步降低了。(3)免疫组化检测显示:各干预小组中TGF-β1生长因子蛋白表达水平均低于阴性对照组,其中以中药联合有氧运动组蛋白表达水平差异最大(P性对照组、有氧运动组、阳性组、中药组以及中药联合有氧运动组。其中中药联合有氧运动组表达水平最低(P非酒精性脂肪肝中TGF-β-Smad信号转导通道相关细胞因子的表达,增强非酒精性肝损伤小鼠的免疫功能,使小鼠非酒精性脂肪肝损伤得以改善,为临床治疗提供有力依据。

关键词：中药有氧运动非酒精性肝损伤 TGF-β smad3 smad4

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黄秋葵的肝保护作用与肠道菌群的调节效应

黄秋葵的肝保护作用与肠道菌群的调节效应

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作者：张锦陕西师范大学

学位级别：硕士

肝脏疾病是人类发病率和死亡率很高的一类疾病,已成为全球性健康问题。近年来随着人们生活方式的改变,高脂肪饮食(High-fat deit,HFD)、高胆固醇饮食等所导致的非酒精性肝损伤(Non-alcoholic liver injury,NALD)和长期大量饮酒所导致酒... 详细信息

肝脏疾病是人类发病率和死亡率很高的一类疾病,已成为全球性健康问题。近年来随着人们生活方式的改变,高脂肪饮食(High-fat deit,HFD)、高胆固醇饮食等所导致的非酒精性肝损伤(Non-alcoholic liver injury,NALD)和长期大量饮酒所导致酒精性肝损伤(Alcoholic liver disease,ALD),以及肝炎、肝硬化等肝脏疾病发病率呈递增趋势,严重威胁着人们的健康。研究表明,肝脏疾病和肠道微生物有着密切的联系,长期高脂肪、高胆固醇或大量酒精的摄入会引起肠道菌群结构发生改变,从而导致肝脏疾病的发生。大量研究表明,通过调节肠道微生物可以对肝脏疾病起到改善作用,例如,膳食脂肪酸的摄入能显著调节酒精诱导的肠道微生物的异常,从而减轻酒精诱导的肝脏损伤。黄秋葵[拉丁学名:Abelmoschus esculentus(Linn.)Moench],根据地域不同又叫咖啡黄葵、六角豆、羊豆角等,属锦葵科一年生草本植物。黄秋葵嫩果既作为营养丰富的鲜美蔬菜,又有药用和保健功效。此外,黄秋葵籽油(Okra seeds oil,OSO)是一种高品质植物油,富含多种不饱和脂肪酸。已有研究表明,黄秋葵提取物能有效抑制HFD引起的肥胖小鼠血脂和血糖的异常升高,能够明显改善肝脏细胞形态,同时还发现,这种效果可能是通过对肠道菌群的调节作用实现的。本研究以黄秋葵全果冻干粉或成熟优质的黄秋葵籽经冷压榨所得的黄秋葵籽油为材料,对其主要营养组成成分进行含量测定,并分别探究其对HFD诱导的NALD和酒精诱导的ALD的保护和改善作用,为黄秋葵保健食品和药品的开发提供参考依据。研究结果如下:(1)黄秋葵果荚中总黄酮、总酚和总多糖含量测定及OSO中脂肪酸组成和含量的分析:黄秋葵果荚经冷冻干燥并粉碎后,分别采用NaNO2-Al(N03)3法、Folin-Ciocalteu法和苯酚-硫酸比色法测定黄秋葵中总黄酮、总酚和总多糖的含量。结果表明,黄秋葵冻干果荚黄酮类化合物、总酚和总多糖分别为:43.1±4.7 mg/g、53.1±3.5 mg/g和499.1±20.4 mg/g。采用采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析OSO中脂肪酸的种类及含量,结果显示OSO含有十三种脂肪酸,其中亚油酸含量最高,所占百分比达49.4%,其次是棕榈酸(26.8%)和油酸(11.4%)。总不饱和脂肪酸(USFA)为65.8%,总饱和脂肪酸(SFA)为34.2%。(2)补充黄秋葵粉(Okra pods powder,OPP)能改善HFD诱导的小鼠肝损伤和肠道菌群失调:采用OPP对高脂喂养小鼠进行连续12周的饮食干预实验来探究其对HFD诱导的肥胖小鼠的肝脏保护作用和对肠道菌群的影响。结果显示,黄秋葵粉能有效地改善高脂模型组肥胖小鼠的葡萄糖耐受性和胰岛素抵抗。通过饮食补充黄秋葵粉有效地抑制了 HFD小鼠的体重异常增加及体内脂肪积累,黄秋葵粉(低、中、高剂量)组小鼠体重分别降低了 9.7%、11.7%、18.6%;体重增长量分别降低了 1 0.4%、8.1%、25.9%;同时,脂肪系数分别降低了 27.4%、28.9%、48.2%。生化分析结果表明,黄秋葵粉通过降低血清总甘油三酯(TG),总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)水平以及提升血清高密度脂蛋白(HDL)的水平来调节HFD诱导的脂质代谢紊乱。我们进一步发现,黄秋葵粉能有效的抑制高脂诱导的小鼠肝脏丙二醛(MDA)水平的升高,能够提高小鼠体内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,同时还能降低HFD诱导的肝损伤标志物丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。此外,我们发现模型组小鼠结肠中拟杆菌门(Bacteroidetes)的比率显著低于正常组,而黄秋葵粉的干预明显增加了高脂肪饮食小鼠结肠内容物中拟杆菌门的比例,同时能有效的抑制双歧杆菌属(Bifidobacterium)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、毛螺菌属(Lachnospiracea)在HFD小鼠结肠中的异常减少。据此,黄秋葵粉可通过抑制高脂诱导的肥胖小鼠血糖调节异常、脂质代谢紊乱而缓解肥胖症状,同时增强肝保护作用,同时,我们发现黄秋葵粉能有效调节肠道菌群结构的异常改变。(3)补充OSO可改善乙醇诱导的肝损伤,同时调节小鼠肠道菌群失调:采用OSO为实验材料探究其对酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用及肠道菌群的调节作用。通过对血清和肝脏生化指标的检测分析、血清脂肪酸分析以及肠道菌群组成结构的变化分析,从而研究OSO对乙醇诱导小鼠酒精性肝损伤的保护作用。结果表明,连续60天的干预喂养对单独的酒精灌胃组小鼠的体重异常减轻和肝脂肪积累有较强的抑制作用并且能有效拮抗AST、ALT和MDA的升高,而且,OSO提高了

关键词：黄秋葵粉黄秋葵籽油非酒精性肝损伤酒精性肝损伤肠道菌群

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小檗碱对葡萄糖诱导的HEPG2细胞功能的调节机制

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医学研究杂志 2020年第2期49卷 99-105页

作者：李威张旭赵芳园匡洪影刘婷婷黑龙江中医药大学附属第一医院中药药理实验室哈尔滨150040 黑龙江中医药大学附属第一医院病案科哈尔滨150040 黑龙江中医药大学附属第一医院超声医学科哈尔滨150040 黑龙江中医药大学附属第一医院妇二科哈尔滨50040 黑龙江中医药大学哈尔滨150040

目的研究小檗碱对高浓度葡萄糖诱导后体外培养的HEPG2细胞功能的调节机制。方法高浓度葡萄糖诱导后体外培养的HEPG2细胞使用不同浓度小檗碱对细胞进行处理。采用荧光显微镜镜检及流式细胞仪检测的方法研究小檗碱作用后细胞脂代谢能力、... 详细信息

目的研究小檗碱对高浓度葡萄糖诱导后体外培养的HEPG2细胞功能的调节机制。方法高浓度葡萄糖诱导后体外培养的HEPG2细胞使用不同浓度小檗碱对细胞进行处理。采用荧光显微镜镜检及流式细胞仪检测的方法研究小檗碱作用后细胞脂代谢能力、活性氧簇水平的变化。采用ELISA方法检测细胞内炎性因子表达水平的变化。采用实时定量PCR及蛋白印迹的方法研究相关信号通路关键因子mRNA及蛋白水平表达的变化。结果高浓度葡萄糖能够提高体外培养HEPG2细胞内的脂肪蓄积、细胞内活性氧簇及炎性因子的表达水平。小檗碱以剂量依赖的方式激活AMPK信号通路缓解高浓度葡萄糖造成的HEPG2细胞内异常的脂代谢水平及炎性因子表达水平。并通过提高抗氧化酶SOD、GSR、CAT mRNA的表达水平来提高细胞的抗氧化性。结论小檗碱通过激活AMPK信号通路对高浓度葡萄糖诱导的体外培养HEPG2细胞功能异常起到调节作用。

关键词：非酒精性肝损伤脂代谢氧化应激 AMPK 小檗碱

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血清中铁蛋白、胆红素、Hcy水平与T2DM伴NAFLD患者病情程度的关系

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标记免疫分析与临床 2020年第8期27卷 1317-1319,1353页

作者：孙宇焱丁三珍青海红十字医院内分泌科青海西宁810000

目的分析血清中铁蛋白、胆红素、Hcy水平与T2DM伴NAFLD患者病情程度的关系。方法选择我院2017年1月至2019年3月间收治的135例T2DM伴NAFLD患者作为观察组,100例T2DM患者作为对照组;采用B超评估患者肝脏是否出现纤维化;入组后检测患者血清... 详细信息

目的分析血清中铁蛋白、胆红素、Hcy水平与T2DM伴NAFLD患者病情程度的关系。方法选择我院2017年1月至2019年3月间收治的135例T2DM伴NAFLD患者作为观察组,100例T2DM患者作为对照组;采用B超评估患者肝脏是否出现纤维化;入组后检测患者血清中Hcy、胆红素及转铁蛋白水平;采用Logistics回归模型分析各指标与T2DM伴NAFLD患者病情程度的关系。结果观察组患者血中Hcy及转铁蛋白水平明显高于对照组,胆红素水平明显低于对照组,且差异具有统计学意义(P性危险因素,高胆红素是独立性保护因素。

关键词：铁蛋白胆红素 Hcy 2型糖尿病非酒精性肝损伤

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