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环氧氯丙烷活化甲基丙烯酸羟乙酯-苯乙烯共聚球状珠体及其在固定青霉素酰化酶中的应用

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化工冶金 2000年第3期21卷 278-282页

作者：刘建国丛威欧阳藩徐冠珠韩辉中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室北京100080 中国科学院微生物研究所北京1000080

合成了甲基丙烯酸羟乙酯－苯乙烯共聚球状珠体，并对环氧氯丙烷活化该球状珠体的条件进行了研究．结果表明，在反应温度为37．5℃、NaOH浓度为1．2mol／L、反应时间24h的条件下，珠体的活化度可以达到2000μmol／g．将该珠体用作固定化... 详细信息

合成了甲基丙烯酸羟乙酯－苯乙烯共聚球状珠体，并对环氧氯丙烷活化该球状珠体的条件进行了研究．结果表明，在反应温度为37．5℃、NaOH浓度为1．2mol／L、反应时间24h的条件下，珠体的活化度可以达到2000μmol／g．将该珠体用作固定化酶载体的初步研究表明，固定青霉素酰化酶的活力可达360U／g（干重）。

关键词：甲基丙烯酸羟乙酯环氧氯丙烷青霉素酰化酶

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青霉素酰化酶表达调控的研究进展

生物技术通报 2009年第9期25卷 34-37页

作者：蒋咏梅章文贤魏东芝福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心福建师范大学生命科学学院福建省现代发酵技术工程研究中心福州350108 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室鲁华生物技术研究所上海200237

青霉素酰化酶(penicillin acylase,PAC)是抗生素工业的重要酶。它在大肠杆菌中需经过复杂的转录、翻译和后翻译才能成熟,且后翻译过程对活性酶的最终形成影响很大。在阐述PAC的苯乙酸诱导机制的基础上,详细论述了PAC的后翻译过程,并对... 详细信息

青霉素酰化酶(penicillin acylase,PAC)是抗生素工业的重要酶。它在大肠杆菌中需经过复杂的转录、翻译和后翻译才能成熟,且后翻译过程对活性酶的最终形成影响很大。在阐述PAC的苯乙酸诱导机制的基础上,详细论述了PAC的后翻译过程,并对几种主要的影响因素进行了分析。

关键词：青霉素酰化酶大肠杆菌诱导机制后翻译过程影响因素

溶解氧浓度和补加苯乙酸对大肠杆菌工程菌青霉素酰化酶合成的影响

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中国抗生素杂志 1991年第4期16卷 251-255页

作者：杨秀琴张贺迎吴经才河北大学生物工程研究所保定071002

用2升全自动发酵罐观察大肠杆菌工程菌Ec108(pPAHD1)青霉素酰化酶(Penicillin-G-acylase)基因的表达,发现溶解氧浓度对生物量的扩增和基因产物的积累有显著的影响。对数前期扩增生物量时需要相对高的溶解氧,以不低于相对饱和度80％为宜... 详细信息

用2升全自动发酵罐观察大肠杆菌工程菌Ec108(pPAHD1)青霉素酰化酶(Penicillin-G-acylase)基因的表达,发现溶解氧浓度对生物量的扩增和基因产物的积累有显著的影响。对数前期扩增生物量时需要相对高的溶解氧,以不低于相对饱和度80％为宜;而产酶阶段则要求相对低的溶解氧环境,可保持相对饱和度5％。按溶解氧峰形变化特征,指导补加苯乙酸的时机;以尖峰出现的间距,决定补加剂量,采用每次补加0.03～0.05％为佳。在罐压0.3kg/cm2,通气比1:0.5及恒温条件下,借助上述手段,最高酶活水平已达342u/100ml(NIPAB法),比摇瓶发酵酶活提高1.8倍。

关键词：青霉素酰化酶溶解氧诱导剂

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胞外青霉素酰化酶产生菌的选育

微生物学报 1992年第2期32卷 99-104页

作者：王祯祥韩文珍门大鹏王青中国科学院微生物研究所

利用纸片显色方法,从土壤中快速筛选出98株产胞外青霉素酰化酶的菌种,经复筛其中10株酶活力较高,经鉴定均属于巨大芽孢杆菌。经单株分离得46号菌,用这株菌进行了产酶条件的研究,在最适产酶条件下,酶活力比开始提高了3.6倍。在此基础上... 详细信息

利用纸片显色方法,从土壤中快速筛选出98株产胞外青霉素酰化酶的菌种,经复筛其中10株酶活力较高,经鉴定均属于巨大芽孢杆菌。经单株分离得46号菌,用这株菌进行了产酶条件的研究,在最适产酶条件下,酶活力比开始提高了3.6倍。在此基础上又进行了物理化学因素处理,得突变株 UL-81,酶活力达720u/100ml 发酵液。对原株和突变株进行比较,发现UL-81菌落、细胞形态、诱导剂苯乙酸用量及添加时间等明显不同于原株。在500L 罐发酵酶活达820u/100ml 发酵液,为开始酶活的16倍。

关键词：巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶

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修饰固定化青霉素酰化酶在非水相中的催化

化学工程 2009年第12期37卷 28-31页

作者：周成王安明王华杜志强祝社民杨明张俊沈树宝南京工业大学制药与生命科学学院材料化学工程国家重点实验室南京工业大学材料科学与工程学院材料化学工程国家重点实验室江苏南京210009

为提高酶的催化水解活力和稳定性,将青霉素酰化酶组装于介孔泡沫二氧化硅(MCFs)中,并应用于水/有机混合体系催化水解。分别考察了有机介质种类和体积分数、葡聚糖(Dex10k)修饰对固定化酶活力的影响,研究了不同条件下固定化酶的稳定性。... 详细信息

为提高酶的催化水解活力和稳定性,将青霉素酰化酶组装于介孔泡沫二氧化硅(MCFs)中,并应用于水/有机混合体系催化水解。分别考察了有机介质种类和体积分数、葡聚糖(Dex10k)修饰对固定化酶活力的影响,研究了不同条件下固定化酶的稳定性。实验结果显示:体积分数20%石油醚中,添加Dex10k的介孔泡沫硅固定化酶比活力达209.5U/mg,是缓冲液中MCFs固定化酶活力的196.2%。20%石油醚中,经25次连续操作,固定化酶保持初始活力的71.5%。结果表明:石油醚等烷烃形成的水/有机体系是适合青霉素酰化酶催化的二相体系,且添加Dex10k能提高固定化酶在二相体系中的催化活力及稳定性。

关键词：固定化酶青霉素酰化酶葡聚糖石油醚热稳定性操作稳定性

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用CHITOSAN固定化青霉素酰化酶

中国抗生素杂志 1990年第5期15卷 338-341页

作者：徐进杨根敏顾璆华东化工学院上海200237

本文报道以Chitosan为载体制备固定化青霉素酰化酶的研究结果。1.4％ Chitosan醋酸溶液先用12.5％戊二醛交联,洗涤,研磨,得颗粒。再用1.5％pH5.5和1.5％pH8.5多聚磷酸处理,得机械强度良好的载体。此载体先后经0.5％戊二醛和对甲苯磺酰... 详细信息

本文报道以Chitosan为载体制备固定化青霉素酰化酶的研究结果。1.4％ Chitosan醋酸溶液先用12.5％戊二醛交联,洗涤,研磨,得颗粒。再用1.5％pH5.5和1.5％pH8.5多聚磷酸处理,得机械强度良好的载体。此载体先后经0.5％戊二醛和对甲苯磺酰氯双活化后,再与青霉素酰化酶偶联。所得固定化酶的活力达20.8u/g。固定化青霉素酰化酶的反应最适温度略高于游离酶,最适pH略低于游离酶;其Km值基本接近游离酶。固定化酶经反复使用,活力基本不变。

关键词：青霉素酰化酶固定化作用 Chitosan

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层状材料水滑石固定青霉素酰化酶的研究

北京化工大学学报（自然科学版） 2002年第3期29卷 9-11,16页

作者：刘红霞马润宇段雪北京化工大学化学工程学院北京100029 北京化工大学可控化学反应科学与技术基础教育部重点实验室北京100029

以层状材料水滑石（LDH）为载体,采用不同酸性氨基酸插层,通过直接吸附和戊二醛交联的方法进行青霉素酰化酶（PGA）的固定。考察了各个因素对固定化酶酶活性的影响,优化了反应条件。制得的固定化酶的表观酶活性达9.67×10-6mol/s,酶活... 详细信息

以层状材料水滑石（LDH）为载体,采用不同酸性氨基酸插层,通过直接吸附和戊二醛交联的方法进行青霉素酰化酶（PGA）的固定。考察了各个因素对固定化酶酶活性的影响,优化了反应条件。制得的固定化酶的表观酶活性达9.67×10-6mol/s,酶活性回收率56.6％。对固定化酶的操作稳定性作了初步探讨。

关键词：青霉素酰化酶水滑石固定化酶谷氨酸插层

介孔纳米孔道中单维交联酶策略固定青霉素酰化酶

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化学工程 2010年第12期38卷 68-71,75页

作者：姜波周成绳则翠祝社民沈树宝南京工业大学生物与制药工程学院江苏南京210009 南京工业大学材料科学与工程学院江苏南京210009

为解决酶固定化过程中稳定性较差的问题,将单维交联酶策略引入青霉素酰化酶的固定化中,通过在介孔泡沫硅载体(MCFs)表面初步吸附作用将酶固定,再用对本醌对酶分子进行交联,从而制得单维交联酶聚体。实验结果显示:单维交联酶聚体(CLEA)... 详细信息

为解决酶固定化过程中稳定性较差的问题,将单维交联酶策略引入青霉素酰化酶的固定化中,通过在介孔泡沫硅载体(MCFs)表面初步吸附作用将酶固定,再用对本醌对酶分子进行交联,从而制得单维交联酶聚体。实验结果显示:单维交联酶聚体(CLEA)的稳定性有明显提高,最适温度从游离酶的45℃上升到55℃,催化温度的适用范围更宽,在50℃下热处理25 h仍保持74.4%活力,在测试操作稳定性方面,连续操作15次,其酶活保持在61.9%。

关键词：青霉素酰化酶 MCFs CLEA 对苯醌

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新的分离纯化青霉素酰化酶方法的研究

生物工程学报 1994年第2期10卷 178-184页

作者：孙万儒中国科学院微生物研究所北京100080

按0.6％(w/w)的比例将皂土加到青霉素酰化酶发酵上清液中,可将酶100％吸附,而吸附的蛋白质仅占发酵上清液中的10％左右。吸附时的pH和无机盐对酶的吸附影响不大。使用不同pH和种类的缓冲液洗涤皂土-酶复合物,不能将酶洗脱,但可洗脱15％... 详细信息

按0.6％(w/w)的比例将皂土加到青霉素酰化酶发酵上清液中,可将酶100％吸附,而吸附的蛋白质仅占发酵上清液中的10％左右。吸附时的pH和无机盐对酶的吸附影响不大。使用不同pH和种类的缓冲液洗涤皂土-酶复合物,不能将酶洗脱,但可洗脱15％左右吸附的杂蛋白。使用含10％以上的PEG和NaCl的磷酸缓冲液可将酶全部洗脱,酶纯化25倍,浓缩6倍左右。此法特点是简便,酶活力收率高,可在常温下操作,也可直接从未除菌体的发酵液中提取酶,具有工业应用价值。

关键词：青霉素酰化酶皂土吸附分离