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Ⅲ型胶原蛋白对大鼠阴道萎缩的作用及机制研究

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Ⅲ型胶原蛋白对大鼠阴道萎缩的作用及机制研究

作者：游爽重庆医科大学

学位级别：硕士

随着全球老龄化,联合国提出将健康老龄化作为全球解决老龄化问题的奋斗目标,绝经后女性的健康管理将会是今后的关注问题之一。阴道萎缩(VA)是一种常见于绝经后女性的疾病,由于全身雌激素水平降低,阴道组织的退化的一种常见疾病。主要表... 详细信息

随着全球老龄化,联合国提出将健康老龄化作为全球解决老龄化问题的奋斗目标,绝经后女性的健康管理将会是今后的关注问题之一。阴道萎缩(VA)是一种常见于绝经后女性的疾病,由于全身雌激素水平降低,阴道组织的退化的一种常见疾病。主要表现为阴道干涩、瘙痒及性交疼痛,严重影响绝经后女性的生活质量。随着绝经后女性的人数不断增加,到2030年全球绝经后女性数量将增长到大约12亿,我国将达2.8亿,大约有超过40%的绝经后女性会出现阴道萎缩相关症状,其中约只有20%的绝经后女性愿意寻求帮助。目前的主要治疗方式为局部雌激素的补充或非激素类制剂应用以缓解症状,但许多女性因为担心使用雌激素所带来的副反应而不愿意接受雌激素治疗。目前,NAMS将非激素润滑剂推选为一线治疗药物,起到阴道保湿润滑的作用。非激素类药物种类较多,主要有水溶剂型、油基剂型、硅脂剂型、透明质酸等。阴道萎缩与阴道组织中细胞外基质(ECM)含量大量减少密切相关,胶原蛋白作为ECM的主要成分之一,在组织和器官的形成中起着重要的作用,并参与细胞功能的表达、信号传递等。胶原蛋白在生物医学应用中广泛应用的原因是其可以通过其自身聚集和交联形成具有一定强度和稳定性的纤维,同时具有出色的生物相容性和安全性。目前,已经发现28种类型的胶原蛋白,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型蛋白在人体内含量最丰富,约占总胶原蛋白的80%0%。其中,阴道组织含有大量Ⅲ型胶原蛋白。随着雌激素水平下降,阴道组织中胶原蛋白含量降解增加,生成增加。本课题旨在讨论Ⅲ型胶原蛋白治疗大鼠的阴道萎缩的疗效及可能涉及的相关机制,为阴道萎缩的临床治疗提供理论依据。第一部分建立大鼠阴道萎缩模型目的:通过建立大鼠阴道萎缩模型,为后续治疗提供模型基础。方法:(1)通过去势法建立大鼠阴道萎缩模型,选择6-8周正常雌性SD大鼠10只,将10只大鼠随机分为2组:(1)假手术组(n=5):麻醉消毒后,开腹暴露30min,关腹;(2)模型组(n=5):麻醉消毒后,开腹以无齿镊暴露双侧卵巢,分别结扎双侧子宫动脉后,切除双侧卵巢,还纳双侧子宫,缝合切口。(2)去势前后称重,H&E、Masson染色观察阴道上皮和阴道组织中胶原蛋白的变化。结果:经去势法构建的阴道萎缩大鼠模型,体重增加,阴道上皮变薄,结缔组织排列紊乱。结论:阴道萎缩大鼠模型建立。第二部分Ⅲ型胶原蛋白对大鼠阴道萎缩的作用及机制目的:探讨Ⅲ型胶原蛋白治疗阴道萎缩大鼠的疗效,为临床治疗提供理论基础。方法:(1)选择6-8周雌性SD大鼠45只,随机分为5组:(1)假手术组(n=10);(2)模型组(n=10):只造模,不做任何治疗处理;(3)胶原蛋白组(n=10):造模28天后,每日阴道给予Ⅲ型胶原蛋白0.5ml,连续给予14天;(4)雌激素组(n=10):造模28天后,每日阴道给予雌激素0.5ml,连续给予14天;(5)卡波姆组(n=5):造模28天后,每日阴道给予卡波姆0.5ml,连续给予14天;(2)生物素标记胶原蛋白在阴道组织中的示踪定位;(3)H&E染色观察阴道上皮厚度;Masson染色观察阴道组织中胶原蛋白排列情况;测定阴道p H值和微生态变化;(4)免疫组化、q PCR测定COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TIMP-1、MMP-1、VEGF、Ki-67、IL-6因子的表达水平;Western blot测定阴道组织中AQP-2因子的表达水平;(5)电镜观察阴道组织微结构的改变;(6)H&E染色观察子宫内膜厚度变化;(7)诱导细胞衰老,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果:(1)免疫荧光结果表明:经生物素标记的胶原蛋白在阴道上皮及肌层可见。(2)H&E染色结果表明经雌激素和胶原蛋白治疗后的阴道上皮厚度增厚,厚于模型组,接近假手术组。Masson染色结果表明模型组和卡波姆组结缔组织排列稀疏,经雌激素和胶原蛋白治疗后的阴道组织胶原排列较紧密,接近假手术组。(3)免疫组化和q PCR结果表明,经胶原蛋白和雌激素治疗后的阴道组织中COL-I、COL-Ⅲ、TIMP-1、VEGF、Ki-67表达高于模型组,接近假手术组;模型组阴道组织中MMP-1、IL-6表达高于胶原蛋白组和雌激素组及假手术组。Western blot结果表明,经胶原蛋白和雌激素治疗后的阴道组织中AQP-2蛋白表达水平高于模型组和卡波姆组,接近假手术组。(4)电镜结果表明:去势后,阴道上皮皱壁消失,微绒毛消失,细胞间间距变大;经Ⅲ型胶原蛋白治疗后,阴道上皮出现微绒毛,细胞之间的间距缩小,与假手术组相似。(5)H&E染色观察大鼠子宫内膜结果表明:经胶原蛋白治疗后的子宫内膜厚度与模型组接近,经雌激素治疗后的子宫内膜厚度增厚,与假手术组接近。(6)流式和CCK-8结果显示:Ⅲ型胶原蛋白能够促进D-gal诱导的衰老细胞的增殖,抑制凋亡。结论:胶原蛋白能够定植于阴道上皮及肌层中;能

关键词：去势法阴道萎缩动物模型细胞外基质 Ⅲ型胶原蛋白 VK2/e6e7细胞

阴道萎缩大鼠模型的建立及在药效评价中的应用

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实验动物与比较医学 2022年第6期42卷 531-540页

作者：杨丽雅宋涛何佳璘郭一鸣亓明康王含必王慧萍国家卫生健康委科学技术研究所北京100081 潍坊市妇幼保健院潍坊261021 北京协和医院妇产科国家妇产疾病临床研究中心疑难重症及罕见病国家重点实验室中国医学科学院北京协和医学院北京100730

目的建立适宜筛选阴道用制剂药效学的动物模型,给予相应药物并评价监测药物治疗效果的生物学指标。方法采用大鼠双侧卵巢摘除术(ovariectomy,OVX)建模,观察OVX后15~21 d大鼠动情周期、子宫湿重和阴道组织形态学,判断术后阴道萎缩模型建... 详细信息

目的建立适宜筛选阴道用制剂药效学的动物模型,给予相应药物并评价监测药物治疗效果的生物学指标。方法采用大鼠双侧卵巢摘除术(ovariectomy,OVX)建模,观察OVX后15~21 d大鼠动情周期、子宫湿重和阴道组织形态学,判断术后阴道萎缩模型建立成功的最佳时间。SD雌性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、药物1组、药物2组和溶剂对照组,每组10只。药物1组、药物2组和溶剂对照组每日分别阴道给予普罗雌烯软膏、更宝芬和等质量溶剂,连续14 d。末次给药后3 d测定大鼠体质量和子宫湿重,HE染色法分析阴道组织形态学,免疫组织化学法检测雌激素受体蛋白α(estrogen receptors-α,ERα)表达。结果OVX后21 d已造成明显阴道萎缩,适宜进行后续实验。OVX后17~21 d无动情周期变化,术后21 d阴道上皮厚度显著降低(P阴道褶皱变少,无鳞状上皮细胞覆盖;体质量上升(P阴道萎缩症状明显改善,给药组大鼠体质量较模型组下降(P阴道组织形态学受损情况得到改善,组织ERα蛋白表达增加(P0.05)。结论大鼠OVX模型适宜用作筛选阴道用制剂,阴道组织形学态、子宫内膜厚度、子宫/体质量比可作为监测药物疗效的指标。

关键词：阴道制剂阴道萎缩去卵巢大鼠模型药效评价

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阴道萎缩的诊断及治疗进展

职业与健康 2007年第17期23卷 1557-1558页

作者：牛治欣天津市河西医院妇产科 300202

外阴、阴道萎缩是衰老的一种结局,特别是绝经后,体内雌性激素低落,加速了生殖泌尿道组织的老化[1].外阴、阴道萎缩症状包括阴道干涩、刺痛、性交痛及反复泌尿系感染.

关键词：阴道萎缩诊断治疗

局部雌激素在绝经后阴道萎缩中的应用及研究进展

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中国妇幼健康研究 2020年第11期31卷 1562-1567页

作者：楼春华兰义兵马麟娟周坚红浙江大学附属妇产科医院妇科浙江杭州310006 绍兴市妇幼保健院妇保科浙江绍兴312000

由于内源性雌激素减少,部分绝经后妇女出现阴道萎缩症状,严重影响了生活质量。局部雌激素对中重度阴道萎缩症状较其他治疗方法有明显的优势,但由于医患双方对其认识不足,目前治疗率低下。本文就雌激素作用于阴道局部改善萎缩症状的机制... 详细信息

由于内源性雌激素减少,部分绝经后妇女出现阴道萎缩症状,严重影响了生活质量。局部雌激素对中重度阴道萎缩症状较其他治疗方法有明显的优势,但由于医患双方对其认识不足,目前治疗率低下。本文就雌激素作用于阴道局部改善萎缩症状的机制、目前国内外应用局部雌激素治疗阴道萎缩的现状及研究进展进行综述。

关键词：局部雌激素绝经阴道萎缩综述

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增阴养户汤为主治疗放疗后阴道萎缩42例

河北中医 2002年第12期24卷 904-905页

作者：成慧贞杨林江苏省盐城市第一人民医院放疗科盐城224001

宫颈癌、阴道残端癌、阴道癌等妇科恶性肿瘤Ⅱ期以上,一般仍以放疗为主要治疗手段,效果也较好.1992～2001年,我们用自拟增阴养户汤治疗放疗后阴道萎缩所出现的阴道干涩、疼痛,性交困难,甚至阴道闭锁等42例,效果满意,现报道如下.

关键词：增阴养护汤妇科恶性肿瘤放射疗法阴道萎缩

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阴道松弛与阴道萎缩自体有核细胞的干预治疗

中国计划生育和妇产科 2020年第12期12卷 3-6页

作者：魏冬梅牛晓宇四川大学华西第二医院妇产科四川成都610041 出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室(四川大学)

阴道松弛综合征(vaginal relaxation syndrome,VRS)以阴道壁松弛为特征,尤其在分娩后、多胎妊娠和自然衰老等女性群体中尤为突出^[1]。目前,对VRS还没有统一明确的定义,一般是指由于各种原因引起的阴道直径增大和/或阴道收缩力下降,可... 详细信息

阴道松弛综合征(vaginal relaxation syndrome,VRS)以阴道壁松弛为特征,尤其在分娩后、多胎妊娠和自然衰老等女性群体中尤为突出^[1]。目前,对VRS还没有统一明确的定义,一般是指由于各种原因引起的阴道直径增大和/或阴道收缩力下降,可能继发于压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)等盆底疾病,也会影响部分女性的性功能和生活质量^[2]。随着我国社会经济的发展和进步,人们对生活质量的要求不断提高,观念也逐步发生改变,女性对美的追求从体表、形体,逐渐转向功能和心理的需求,尤其是性生活质量。VRS直接影响女性的性生活质量和满意度,但目前在妇产科领域重视不足。

关键词：有核细胞阴道松弛阴道萎缩治疗

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欧维婷阴道软膏治疗绝经后阴道萎缩的疗效

中国实用医刊 2015年第22期42卷 80-81页

作者：朱爱珍李婷山西省运城市中心医院妇产科 044000

目的：探讨欧维婷软膏治疗绝经后妇女阴道萎缩的效果。方法选择2012年8月至2013年8月绝经后妇女阴道萎缩患者58例，阴道应用欧维婷软膏0.5 g／次，连续2周，之后改为2次／周，共3个月。用药前及用药后4、8及12周作阴道健康评分，并结合... 详细信息

目的：探讨欧维婷软膏治疗绝经后妇女阴道萎缩的效果。方法选择2012年8月至2013年8月绝经后妇女阴道萎缩患者58例，阴道应用欧维婷软膏0.5 g／次，连续2周，之后改为2次／周，共3个月。用药前及用药后4、8及12周作阴道健康评分，并结合用药前后阴道萎缩症状，血清激素水平和血脂等生化指标，子宫内膜厚度等进行综合评价。结果用药12周后雌激素缺乏所致症状明显改善。血雌二醇、肝肾功能、血脂等指标无明显变化，阴道彩超检查子宫内膜无明显增厚。结论阴道使用欧维婷软膏治疗绝经后妇女阴道萎缩效果好，不良反应轻，安全性高，使用方便。

关键词：欧维婷软膏阴道萎缩临床观察

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硫酸普拉睾酮钠治疗阴道萎缩的临床研究进展

药学实践杂志 2017年第3期35卷 205-207,274页

作者：覃金玲孙德友丁明和刘蔚范彦博夏军马应龙药业集团股份有限公司湖北武汉430064

硫酸普拉睾酮钠(dehydroepiandrosterone sulfate,sodium prasterone sulfate,DHEAS)和普拉睾酮(dehydroepiandrosterone,prasterone,DHEA)是人体肾上腺合成分泌的内源性物质,亦是转化为甾体激素包括性激素的前体。按照胞内分泌学说,绝经后女性大多数会产生由于缺乏DHEAS或DHEA引起的内源性性激素缺乏而导致的阴道萎缩性疾病,因此适度补充DHEAS能缓解阴道萎缩的相关症状。多项临床研究表明,DHEAS能有效缓解阴道萎缩的相关症状,长期使用后患者体内的雄激素和雌激素水平仍可维持在正常的生理浓度范围内,因此DHEAS可能会成为未来治疗阴道萎缩症的临床首选药物。

关键词：普拉睾酮硫酸普拉睾酮钠阴道萎缩

欧维婷软膏治疗绝经后阴道萎缩患者的临床效果

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医疗装备 2016年第3期29卷 139-140页

作者：王爱华天津市北辰区瑞景街社区卫生服务中心天津300134

目的观察欧维婷软膏治疗绝经后阴道萎缩患者的临床效果。方法 76例绝经后妇女阴道萎缩患者随机分为治疗组与对照组各38例,对照组使用甲硝唑片剂治疗,治疗组选择欧维婷软膏治疗。结果治疗后治疗组治愈34例,有效3例,无效1例,总有效率为97.... 详细信息

目的观察欧维婷软膏治疗绝经后阴道萎缩患者的临床效果。方法 76例绝经后妇女阴道萎缩患者随机分为治疗组与对照组各38例,对照组使用甲硝唑片剂治疗,治疗组选择欧维婷软膏治疗。结果治疗后治疗组治愈34例,有效3例,无效1例,总有效率为97.4%;而对照组治愈24例,有效7例,无效7例,总有效率为81.6%,治疗组明显高于对照组(P阴道萎缩能增加子宫内膜厚度,提高治疗疗效,值得临床推广应用。

关键词：欧维婷软膏绝经阴道萎缩子宫内膜厚度