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锌α_2糖蛋白真核表达载体的构建和体外表达鉴定

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中国医学科学院学报 2010年第3期32卷 283-288页

作者：张韶君龚凤英邓洁英朱惠娟潘慧张殿喜李乃适中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院内分泌科卫生部内分泌重点实验室北京100730

目的构建小鼠锌α2糖蛋白(mZAG)真核表达载体,在体外培养细胞中鉴定其mRNA和蛋白水平表达。方法提取小鼠肝组织总RNA,采用RT-PCR法扩增mZAG全基因表达序列,酶切法将mZAGcDNA全序列插入表达质粒载体pcDNA3.1(-)中构建pcDNA3.1(-)-mZAG真... 详细信息

目的构建小鼠锌α2糖蛋白(mZAG)真核表达载体,在体外培养细胞中鉴定其mRNA和蛋白水平表达。方法提取小鼠肝组织总RNA,采用RT-PCR法扩增mZAG全基因表达序列,酶切法将mZAGcDNA全序列插入表达质粒载体pcDNA3.1(-)中构建pcDNA3.1(-)-mZAG真核表达质粒。采用阳离子脂质体转染法将不同浓度mZAG表达质粒(0、0.4、0.8、1.6μg)pcDNA3.1(-)-mZAG和4对mZAG小干扰RNA(siRNA)序列转染到3T3-L1前脂肪细胞中,实时荧光定量RT-PCR测定mZAGmRNA表达水平,Western blot检测mZAG蛋白表达情况。结果测序鉴定证实成功构建mZAG真核表达质粒pcDNA3.1(-)-mZAG。实时荧光定量RT-PCR检测结果显示,0.4、0.8、1.6μg mZAG转染组3T3-L1细胞中的mZAGmRNA表达水平分别是0μg mZAG转染组的2.58(P=0.002)、3.67(P=0.000)、5.19倍(P=0.001);mZAG-siRNA1组和mZAG-siRNA4组小鼠3T3-L1细胞中的mZAGmRNA表达水平显著减少,分别是不转染mZAGsiRNA干扰序列对照组的49%(P=0.002)和41%(P=0.000)。Western blot检测结果显示,0.8μg mZAG质粒转染组的体外mZAG蛋白表达水平是不转染mZAG质粒对照组的2.75倍(P=0.017);mZAG-siRNA1和mZAG-siR-NA4干扰序列转染组的体外mZAG蛋白表达水平仅为对照组的55%(P=0.004)和62%(P=0.025)。结论成功构建mZAG真核表达载体,该载体能够在体外细胞中良好表达。筛选出能够显著抑制mZAG表达的siRNA1和siRNA4,为今后进一步深入研究ZAG提供了有用工具。

关键词：锌α2糖蛋白 3T3-L1细胞小干扰RNA 质粒构建

锌α2糖蛋白抑制肝星状细胞活化和增殖的体外研究

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中华肝脏病杂志 2020年第2期28卷 135-140页

作者：罗声政吴俊成林仁坤刘婷罗昕徐铭益郭传勇南京医科大学附属上海十院临床医学院消化内科上海200080 上海交通大学附属第一人民医院消化内科 200080

目的探讨锌α2糖蛋白(AZGP1)在肝星状细胞活化和肝纤维化发生和发展中的作用机制。方法采用转化生长因子-β1刺激诱导人肝星状细胞株LX2活化和构建四氯化碳小鼠肝纤维化模型,观察细胞和肝组织中AZGP1的表达情况。应用质粒转染法过表达... 详细信息

目的探讨锌α2糖蛋白(AZGP1)在肝星状细胞活化和肝纤维化发生和发展中的作用机制。方法采用转化生长因子-β1刺激诱导人肝星状细胞株LX2活化和构建四氯化碳小鼠肝纤维化模型,观察细胞和肝组织中AZGP1的表达情况。应用质粒转染法过表达和抑制表达AZGP1后,分别检测LX2细胞的活化、增殖和凋亡功能及相关因子的改变。多组间比较采用单因素方差分析。结果免疫荧光染色结果显示在活化的LX2细胞中,AZGP1蛋白减少而α-平滑肌肌动蛋白增多,二者呈负相关。AZGP1基因和蛋白在活化的LX2细胞和四氯化碳肝纤维化小鼠的肝组织内显著低表达。过表达AZGP1后,LX2细胞中Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶-2和α-平滑肌肌动蛋白基因和蛋白明显下调;细胞荧光显示过表达AZGP1的细胞活化和α-平滑肌肌动蛋白减少。此外,过表达AZGP1后,LX2细胞的增殖活性和G1/S-特异性周期蛋白D1蛋白显著降低;细胞周期实验显示过表达AZGP1的细胞停滞在G0/G1期比例显著增多、而S期比例显著减少。AZGP1对LX2细胞凋亡无明显影响。结论AZGP1可通过抑制肝星状细胞活化和增殖而逆转肝纤维化;过表达AZGP1有望成为肝纤维化治疗的新靶点。

关键词：肝硬化肝星状细胞锌α2糖蛋白

锌α2糖蛋白与胰岛素抵抗相关疾病关系的研究进展

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重庆医科大学学报 2015年第7期40卷 914-917页

作者：尹经霞廖涌李伶杨刚毅重庆医科大学检验医学院临床生化教研室教育部临床检验诊断学重点实验室重庆400016 武警重庆总队医院内分泌科重庆400061 重庆医科大学附属第二医院内分泌科重庆400010

随着现代生活方式及饮食习惯的改变,疾病谱的重心逐渐转变为慢性非感染性疾病。心血管疾病、糖脂代谢紊乱、肥胖、代谢综合征、多囊卵巢综合征等疾病均与胰岛素抵抗有关。胰岛素抵抗是慢性非感染性疾病的重要组成部分,患病人群众多,严... 详细信息

随着现代生活方式及饮食习惯的改变,疾病谱的重心逐渐转变为慢性非感染性疾病。心血管疾病、糖脂代谢紊乱、肥胖、代谢综合征、多囊卵巢综合征等疾病均与胰岛素抵抗有关。胰岛素抵抗是慢性非感染性疾病的重要组成部分,患病人群众多,严重影响其生活质量。锌α2糖蛋白(Zinc-α2-Glycoprotein,ZAG)是新近发现的一种具有调节体质量和改善胰岛素敏感性的脂肪因子,因其与胰岛素抵抗相关疾病关系密切逐渐受到人们的重视。近年来大量临床实验研究ZAG与胰岛素抵抗的关系,本文拟这些研究进展做一综述。

关键词：锌α2糖蛋白胰岛素抵抗高血压糖尿病肥胖

锌α2糖蛋白与脂联素在不同糖耐量人群的关联性研究

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中华内分泌代谢杂志 2013年第4期29卷 278-281页

作者：刘瑞杨刚毅李姝李伶李荣重庆医科大学附属第二医院内分泌科重庆医科大学检验系临床生化教研室和教育部实验诊断重点实验室400010

目的观察不同糖耐量人群血清锌α2糖蛋白（ZAG）与脂联素、肥胖和胰岛素抵抗的关系。方法纳入初诊2型糖尿病患者、糖耐量受损患者及正常对照者共285例，通过酶联免疫法测定血清ZAG和脂联素水平，并分析了血清ZAG水平与脂联素、体重指... 详细信息

目的观察不同糖耐量人群血清锌α2糖蛋白（ZAG）与脂联素、肥胖和胰岛素抵抗的关系。方法纳入初诊2型糖尿病患者、糖耐量受损患者及正常对照者共285例，通过酶联免疫法测定血清ZAG和脂联素水平，并分析了血清ZAG水平与脂联素、体重指数、腰臀比、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、血脂、血糖、血浆胰岛素和游离脂肪酸等的关系。结果 2型糖尿病组和糖耐量受损组血清ZAG和脂联素水平均明显低于正常对照组［ZAG：（37.14 ± 13.25和48.84 ± 18.74对59.36 ± 16.20）mg/L,P〈0.05或P〈0.01；脂联素：（27.79 ± 11.23和33.00 ± 9.42对41.81 ± 13.68）μg/L,P〈0.01］。血清ZAG水平与高密度脂蛋白胆固醇、脂联素呈正相关（均P〈0.01），与体重指数、腰臀比、体脂百分比、舒张压、甘油三酯、空腹血糖、空腹胰岛素、HbA1C、HOMA-IR呈负相关（P〈0.05或P〈0.01）；多元逐步回归分析表明,体重指数、HOMA-IR、舒张压和脂联素是影响空腹血清ZAG水平的独立相关因素（P〈0.05或P〈0.01）。结论血清ZAG水平的改变与肥胖、胰岛素敏感性及循环脂联素水平密切相关，因此可能参与了胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生和发展。

关键词：锌α2糖蛋白脂联素胰岛素抵抗糖尿病 2型

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锌α2糖蛋白与2型糖尿病关系的研究进展

中国糖尿病杂志 2016年第8期24卷 757-759页

作者：李白洁范志宏山西医科大学第二医院内分泌科太原030001

锌α2糖蛋白(ZAG)是一种新型脂肪细胞因子,存在于人体血浆及多种体液中。最初认为,ZAG参与肥胖、脂代谢调节,近年发现,ZAG与T2DM关系密切。ZAG可通过增加IS、提高组织葡萄糖代谢率、结合β3肾上腺素受体等机制发挥抗糖尿病作用。探讨ZAG... 详细信息

锌α2糖蛋白(ZAG)是一种新型脂肪细胞因子,存在于人体血浆及多种体液中。最初认为,ZAG参与肥胖、脂代谢调节,近年发现,ZAG与T2DM关系密切。ZAG可通过增加IS、提高组织葡萄糖代谢率、结合β3肾上腺素受体等机制发挥抗糖尿病作用。探讨ZAG与T2DM的相关性,有助于为T2DM的早期干预和治疗提供新思路。

关键词：锌α2糖蛋白糖尿病,2型

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锌α2糖蛋白生物学功能

中国生物化学与分子生物学报 2014年第12期30卷 1197-1201页

作者：饶志坚袁海平史仍飞上海体育学院运动科学学院上海200438

锌α2糖蛋白(zinc alpha-2 glycoprotein,ZAG)是一种42 kD可溶性蛋白,广泛存在于人体液中.自从ZAG被发现以来,有许多关于其结构及功能的报道.最初ZAG被认为与生殖及脂代谢有关,后又发现ZAG具有载体蛋白、核糖核酸酶的活性等功能.ZAG也... 详细信息

锌α2糖蛋白(zinc alpha-2 glycoprotein,ZAG)是一种42 kD可溶性蛋白,广泛存在于人体液中.自从ZAG被发现以来,有许多关于其结构及功能的报道.最初ZAG被认为与生殖及脂代谢有关,后又发现ZAG具有载体蛋白、核糖核酸酶的活性等功能.ZAG也参与免疫控制、细胞黏着、调节黑色素生成等.近年来,多项研究表明,ZAG与促进骨骼肌合成、抑制肿瘤细胞增殖、诊断早期癌症、抗糖尿病有关.本文从ZAG分子结构出发,对ZAG生物学功能的研究进展进行综述.

关键词：锌α2糖蛋白脂代谢生物学功能

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锌α2糖蛋白与胰岛素抵抗关系的研究进展

中国糖尿病杂志 2020年第10期28卷 788-790页

作者：郭亚莉张韶君山西医科大学附属人民医院内分泌科太原030012

锌α2糖蛋白(ZAG)是由多种上皮细胞分泌的新型脂肪因子,在减轻IR中发挥重要作用,可增强Ins信号转导,影响脂肪因子及炎症因子表达。ZAG改善IR的具体机制尚未明确,本文对ZAG与IR关系的研究进展进行综述,旨在为临床治疗IR相关疾病提供依据。

关键词：锌α2糖蛋白胰岛素抵抗糖尿病

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锌α2糖蛋白与高尿酸血症的相关性研究

医学研究生学报 2017年第2期30卷 173-176页

作者：杨洁刘李文韬陈秉朴李海右江民族医学院基础学院百色533000

目的目前锌α2糖蛋白(ZAG)与高尿酸血症(HUA)的相关性研究较少。文中旨在通过检测ZAG的mRNA、蛋白表达量在桂西地区HUA人群和尿酸(SUA)正常的健康人群之间的表达差异,初步探讨ZAG与HUA的相关性。方法收集2016年3月至2016年5月右江民族... 详细信息

目的目前锌α2糖蛋白(ZAG)与高尿酸血症(HUA)的相关性研究较少。文中旨在通过检测ZAG的mRNA、蛋白表达量在桂西地区HUA人群和尿酸(SUA)正常的健康人群之间的表达差异,初步探讨ZAG与HUA的相关性。方法收集2016年3月至2016年5月右江民族医学院附属医院HUA患者74例为HUA组,选取同期74例体检中心健康体检者作为对照组。将受试者的血液标本进行血清制备及生化指标检测、总RNA提取,采用实时荧光定量PCR检测ZAG mRNA表达量,酶联免疫吸附测定检测血清ZAG蛋白表达量,进而分析2组ZAG的mRNA和蛋白表达差异。结果 HUA组血清ZAG mRNA、ZAG蛋白表达量明显高于对照组[(13.201±3.433)vs(11.731±4.033);(6.163±1.779)vs(5.540±0.573),P蛋白表达量(r=0.176)、BMI(r=0.161)、SBP(r=0.144)、DBP(r=0.250)、BUN(r=0.461)、CREA(r=0.649)、TG(r=0.212)呈正相关,与HDL(r=-0.333)呈负相关,均有统计学意义(P<0.05)。结论 ZAG可能成为预防及治疗HUA及其相关代谢性疾病的新靶点。

关键词：高尿酸血症锌α2糖蛋白相关性

锌α2糖蛋白在输尿管癌患者血清中的差异性表达及意义

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中华实验外科杂志 2015年第6期32卷 1273-1275页

作者：闫泽晨张俊杰郭飞赵伟余捷凯郑树顾朝辉杨锦建曾甫清王家祥郑州大学第一附属医院外科河南省泌尿外科研究所 450052 浙江大学第二医院肿瘤研究所华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科

目的采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF MS）技术筛选并鉴定输尿管癌的差异性表达蛋白.方法选取输尿管癌患者血清标本20例（输尿管癌组）,正常对照血清标本（对照组）20例,采用SELDI-TOF MS技术检测并收集相关数据,并... 详细信息

目的采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF MS）技术筛选并鉴定输尿管癌的差异性表达蛋白.方法选取输尿管癌患者血清标本20例（输尿管癌组）,正常对照血清标本（对照组）20例,采用SELDI-TOF MS技术检测并收集相关数据,并应用基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF MS）对筛选出的差异性表达蛋白进行鉴定.结果应用生物信息学方法对所得数据进行分析,得到差异性峰14个（P＜0.01）.对比各组差异性表达蛋白质峰值数据,筛选出质子数/电荷数（m/z）为4 222 Da的差异性表达蛋白1个,其在对照组及输尿管癌组中表达强度分别为12 003.33±3 234.93、18 144.66±2 047.05,两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.应用MALDI-TOF/TOF MS技术鉴定此差异性表达蛋白为锌α2糖蛋白（ZAG）.结论应用蛋白质组学技术成功筛选出输尿管癌的血清差异性表达蛋白ZAG,该蛋白对输尿管癌的诊断和判断预后方面具有良好的价值.

关键词：锌α2糖蛋白生物学标记输尿管癌蛋白质组学