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铁棒锤中的二萜生物碱

有机化学研究 2024年第2期12卷 353-358页

作者：何少军许纪龙余祥浪兰州交通大学化学化工学院甘肃兰州

目的:研究铁棒锤Aconitum pendulum Busch的化学成分。方法:铁棒锤提取物采用大孔树脂,硅胶柱层析以及半制备高效液相色谱对其进行分离纯化,根据其波谱数据进行结构解析。结果:从其中分离得到10个化合物,分别鉴定为Songorine (1)、15-ac... 详细信息

目的:研究铁棒锤Aconitum pendulum Busch的化学成分。方法:铁棒锤提取物采用大孔树脂,硅胶柱层析以及半制备高效液相色谱对其进行分离纯化,根据其波谱数据进行结构解析。结果:从其中分离得到10个化合物,分别鉴定为Songorine (1)、15-acetylsongorine (2)、12-epi-lucidusculine (3)、14-O-acetylneoline (4)、benzoylaconitine (5)、aconitine (6)、3-deoxyaconitine (7)、mesaconitine (8)、10-aconifine (9)、flavaconitine (10)。

关键词：铁棒锤二萜生物碱化学成分乌头属

铁棒锤炮制方法及“减毒存效”炮制原理研究进展

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甘肃中医药大学学报 2024年第2期41卷 81-85页

作者：曹瑞牛江涛金辉陈红刚李越峰甘肃中医药大学药学院甘肃兰州730101 甘肃省中药质量与标准研究重点实验室甘肃兰州730000 青海大学医学部青海西宁810000

通过查阅和整理近年来的相关文献,主要从铁棒锤的炮制方法、炮制对其化学成分及药理作用的影响及“减毒存效”的炮制原理等3个方面对铁棒锤的炮制研究进展进行概述。发现铁棒锤较常用、规范的炮制方法为水煮法、蒸制法及砂炒法,为规范... 详细信息

通过查阅和整理近年来的相关文献,主要从铁棒锤的炮制方法、炮制对其化学成分及药理作用的影响及“减毒存效”的炮制原理等3个方面对铁棒锤的炮制研究进展进行概述。发现铁棒锤较常用、规范的炮制方法为水煮法、蒸制法及砂炒法,为规范铁棒锤的炮制工艺、阐明铁棒锤“减毒存效”的炮制原理、铁棒锤的深入研究开发及临床安全用药提供参考。

关键词：铁棒锤炮制方法化学成分药理活性减毒存效综述

诃子配伍铁棒锤对戊巴比妥钠诱导的H9c2心肌细胞毒效关系的影响及机制

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中国现代应用药学 2023年第8期40卷 1037-1049页

作者：蒙湘黄先菊董悦许馨怡刘师佺武宙阳李竣陈晓中南民族大学武汉430074 华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科武汉430022 湖北药昇中药科技有限公司湖北枣阳441200

目的综合评价诃子(Terminalia chebula Retz.,TCR)-铁棒锤(Aconitum pendulum Busch.,APB)不同配比对H9c2心肌细胞毒效关系的影响,寻找两者的配比规律,并探究TCR-APB药对心肌的保护机制。方法以APB为参照,按照1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比... 详细信息

目的综合评价诃子(Terminalia chebula Retz.,TCR)-铁棒锤(Aconitum pendulum Busch.,APB)不同配比对H9c2心肌细胞毒效关系的影响,寻找两者的配比规律,并探究TCR-APB药对心肌的保护机制。方法以APB为参照,按照1∶1,2∶1,3∶1及4∶1的比例配比TCR与APB药材并提取总提物,以戊巴比妥钠构建大鼠H9c2心肌细胞心力衰竭模型,计算4种配比总提物作用于H9c2心肌细胞的IC_(50)与EC_(50)值,比较其安全治疗指数(treatment indices,TI=IC_(50)/EC_(50));并进一步探究TCR-APB药对H9c2心肌细胞活力、心肌指标[乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)及肌酸激酶(creatine kinase,CK)]水平、线粒体膜电位(ΔΨ)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、钙离子(Ca2+)浓度及TRP基因、钙调节相关基因的mRNA水平。结果TI计算结果显示,TCR与APB以2∶1比例配比时安全范围最好;100 ng·mL^(–1)的APB可显著上调TRPV1、TRPV2及TRPM8mRNA水平,使TRPV4与TRPA1的mRNA水平显著下调,毒性浓度范围下的调节则相反;分子对接结果发现TRPM8对各成分的亲和力均比其他靶点强;最佳配比提取物及其活性单体均可显著提高细胞活力,改善戊巴比妥钠损伤导致的H9c2心肌细胞LDH渗漏、CK水平上升、ΔΨ降低、细胞内ROS水平上升、胞内Ca^(2+)浓度增加以及FKBP1B和TRPM8的mRNA水平下调、RyR2和NOX2的mRNA水平上调等。结论TCR与APB配伍均可缓解H9c2心肌细胞损伤,起到减毒增效的作用,其最佳配比为2∶1,二者配伍可以通过影响TRP基因,特别是TRPM8,调节肌质网中FKBP1B与RyR2基因以及线粒体中ROS水平,纠正Ca^(2+)紊乱,从而保护心肌免受损伤。

关键词：铁棒锤诃子安全治疗指数减毒增效 TRP靶点

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铁棒锤活性品质评价及减毒增效研究

铁棒锤活性品质评价及减毒增效研究

作者：董悦中南民族大学

学位级别：硕士

目的:本研究拟通过构建体外戊巴比妥钠诱导心力衰竭模型,研究乌头属植物的心肌保护作用及安全范围,并与同属品种进行活性品质比较,建立一种活性导向评价近源药材质量的综合分析方法,为临床选用乌头类药材提供理论依据;采用H9c2细胞模型... 详细信息

目的:本研究拟通过构建体外戊巴比妥钠诱导心力衰竭模型,研究乌头属植物的心肌保护作用及安全范围,并与同属品种进行活性品质比较,建立一种活性导向评价近源药材质量的综合分析方法,为临床选用乌头类药材提供理论依据;采用H9c2细胞模型,对不同配比诃子(TCR)与铁棒锤(APB)的减毒增效作用进行综合评价,寻找两者的最佳配比关系,同时探讨最佳配比对心肌细胞上TRP靶点(TRPV1～V4、TRPA1及TRPM8)的调控作用,并探究TRPM8作用于心肌保护的机制。方法:(1)采集并提取APB、准噶尔乌头(ASS)、苍山乌头(ACFG)、雪上一枝蒿(ABD)及白喉乌头(ALW)五种乌头属植物,以H9c2心肌细胞为对象,对五种药材总生物碱进行了毒效研究,MTT及实时细胞分析仪检测细胞活力,计算IC与EC的比值,比较其安全治疗指数(TI=IC/EC);然后,采用灰色关联分析法,评价各乌头类生物碱在毒效关系中的作用权重;最后,采用网络药理学技术,预测乌头属植物的毒效靶点,并加以验证。(2)以APB为参照,按照1:1、2:1、3:1及4:1的比例配比TCR与APB药材并提取总提物,以H9c2细胞为对象,对四种配比总提物进行了毒效研究;通过细胞活力检测,计算IC与EC的比值,比较TI值,对不同配比提取物的减毒增效作用进行了综合排序;通过q RT-PCR技术,探究毒效浓度下,APB及最佳配比总提物对TRP靶点m RNA的双重调节作用;通过分子对接技术,探讨提取物的主要活性成分与TRP靶点的作用强弱;以8 mg/m L的戊巴比妥钠诱导体外心力衰竭模型,测定细胞活力、心功能指标(LDH及CK)水平、线粒体膜电位(ΔΨ)、活性氧(ROS)水平、钙离子(Ca)浓度及钙调节相关基因的m RNA水平。结果:(1)根据五种药材的TI值,得到了以下活性质量等级:APB>ALW>ACFG>ABD>ASS,其中APB的TI值最大;在药效和毒性的灰色关联分析中,乌头碱的相关系数最高,成分-效应相关性最强;通过网络预测分析,选择AKT1、IL6与KCNH2三个核心靶点及PI3K/AKT通路进行机制验证,结果表明,在药效浓度(100 ng/m L)下,乌头碱和五种药材提取物均可下调AKT1、IL6与KCNH2m RNA水平,在毒性浓度(125μg/m L)下,乌头碱及五种药材提取物可上调H9c2细胞中AKT1与IL6 m RNA水平。(2)根据各配比药物的TI值,得到了以下安全范围等级:TCR与APB配比2:1>3:1>4:1>1:1>APB;100 ng/m L的APB会使TRPV1、TRPV2及TRPM8的m RNA水平显著上调,使TRPV4与TRPA1的m RNA水平显著下调,毒性浓度范围下的调节则相反;通过比较靶点对各成分的亲和力,发现TRPM8对各成分的亲和力均比其它靶点强;最佳配比提取物与其活性单体化合物可显著提高细胞活力,改善戊巴比妥钠损伤导致的大量LDH渗漏、CK水平上升、ΔΨ降低、细胞内ROS水平上升、胞内Ca浓度增加以及钙调节基因中TRPM8和FKBP1B的m RNA水平下调、Ry R2和NOX2的m RNA水平上调等病理现象。结论:乌头属药材在心脏上的双重作用可以通过TI值来评估和规范。灰色关联分析为药材的质量和物质基础提供了一种相对快速、准确的研究方法。乌头碱是乌头属药材的主要药效/毒性物质基础之一,其作用机制可能与AKT、IL6、KCNH2基因和PI3K/AKT通路的调控有关。TCR与APB减毒增效的最佳配伍比例为2:1,二者配伍可以通过影响TRP基因,特别是TRPM8,调节肌质网中FKBP1B与Ry R2基因以及线粒体中ROS水平,调节Ca紊乱,从而保护心肌损伤。

关键词：铁棒锤诃子安全治疗指数灰色关联分析配伍比例 TRP靶点

基于ITS的青海不同地区铁棒锤遗传变异分析

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分子植物育种 2023年

作者：刘瑞刘青青李雄杰马福林马玉花青海大学农牧学院

为了给铁棒锤(Aconitum pendulum Busch)种质资源的分类鉴定和乌头属(Aconitum L.)药材鉴定提供可靠依据，本研究对青海9个地区的铁棒锤ITS序列与GenBank发布的乌头属植物ITS区进行比对分析。结果表明青海不同地区铁棒锤及乌头属近缘种... 详细信息

为了给铁棒锤(Aconitum pendulum Busch)种质资源的分类鉴定和乌头属(Aconitum L.)药材鉴定提供可靠依据，本研究对青海9个地区的铁棒锤ITS序列与GenBank发布的乌头属植物ITS区进行比对分析。结果表明青海不同地区铁棒锤及乌头属近缘种的ITS序列为629～631 bp，存在2个碱基的长度变异，序列同源性分析表明9个不同地区铁棒锤与6个参考近缘种同源性在84.6%～100.0%间，共有155个变异位点，其中不同地区铁棒锤同源性在97.8%～100.0%间，共有19个变异位点，而6个近缘种的ITS区同源性在84.6%～97.6%，共有145个变异位点。基于ITS序列的NJ进化树聚类结果符合形态分类结果。上述结果表明ITS区在乌头属内不同种以及青海不同分布区铁棒锤间均存在丰富的遗传变异，说明基于ITS序列比较进行属内不同种以及不同地区铁棒锤的分类鉴定是可行的，同时也表明青海不同地区铁棒锤存在明显的种内分化。

关键词：铁棒锤 ITS 青海地区分类鉴定

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铁棒锤水提物对大鼠的毒性试验

兰州大学学报（医学版） 2022年第3期48卷 16-22页

作者：张蕊王爽王彩霞李瑞芬王晶宇苏莉李文兰州大学公共卫生学院甘肃兰州730000 兰州大学基础医学院病理生理学教研室甘肃兰州730000 兰州大学药学院甘肃兰州730000

目的研究铁棒锤水提物对大鼠的急性毒性作用,为临床用药安全和后续实验提供参考。方法清洁级Wistar雄性大鼠56只,随机分为7组:对照组(生理盐水)、铁棒锤水提物(15、30、60、120、240和480 mg/kg)剂量组,连续灌胃给药处理14 d,观察大鼠1... 详细信息

目的研究铁棒锤水提物对大鼠的急性毒性作用,为临床用药安全和后续实验提供参考。方法清洁级Wistar雄性大鼠56只,随机分为7组:对照组(生理盐水)、铁棒锤水提物(15、30、60、120、240和480 mg/kg)剂量组,连续灌胃给药处理14 d,观察大鼠14 d内所产生的毒性反应,并记录大鼠给药前后体质量和进食变化情况;第15天处死大鼠,通过测定血液常规指标以及血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肌酐(CRE),计算心脏、肝、肾和脑脏器系数,测定各组织中丙二醛(MDA)含量,苏木素—伊红染色观察各组织脏器病理学变化,评价其急性毒性作用。结果与对照组相比,铁棒锤水提物剂量组大鼠体质量、饲料消耗量、食物利用率及各组织脏器系数差异均无统计学意义(P>0.05),铁棒锤水提物480 mg/kg剂量组血清ALT、AST、CRE含量均高于对照组(P铁棒锤水提物剂量组大鼠血液常规指标、各组织MDA含量差异无统计学意义,组织病理切片亦未见异常现象。结论大鼠经口给予铁棒锤水提物的最大给药量为480 mg/kg,为成人推荐日用最大剂量的576倍,安全性良好,表明铁棒锤经水煮炮制的水提物具有一定的安全范围,为铁棒锤的临床应用提供一定的可能性和安全性。

关键词：铁棒锤水提物急性毒性作用大鼠

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铁棒锤中3-乙酰乌头碱和宋果灵抗肿瘤活性

精细化工 2018年第7期35卷 1163-1169页

作者：孙建瑞邱智军王大红张彬原江锋河南科技大学食品与生物工程学院洛阳市微生物发酵工程技术研究中心

从铁棒锤总生物碱中提取分离得到了3-乙酰乌头碱和宋果灵,采用四唑盐（MTT）比色法考察了药物的细胞毒性,电子显微镜及激光共聚焦显微镜观察了细胞形态,流式细胞术分析了细胞凋亡和细胞周期。抗肿瘤活性研究表明：随着3-乙酰乌头碱和宋... 详细信息

从铁棒锤总生物碱中提取分离得到了3-乙酰乌头碱和宋果灵,采用四唑盐（MTT）比色法考察了药物的细胞毒性,电子显微镜及激光共聚焦显微镜观察了细胞形态,流式细胞术分析了细胞凋亡和细胞周期。抗肿瘤活性研究表明：随着3-乙酰乌头碱和宋果灵浓度的增加,抗肿瘤效果逐步增强,当质量浓度均为64 mg/L时,对HepG2细胞的抑制率分别最高达到93.56%和98.48%。药物作用于人肝癌细胞后,能明显抑制HepG2细胞的生长,并且使细胞发生早期凋亡和晚期凋亡的比率增大,质量浓度为100 mg/L 3-乙酰乌头碱使早期细胞凋亡率上升至58.32%,晚期凋亡率增至13.81%;质量浓度为120 mg/L宋果灵使早期细胞凋亡率上升至41.02%,晚期凋亡率增至28.78%。随处理时间的延长G1期细胞逐渐增多,G2期和S期细胞逐渐减少。

关键词：铁棒锤 3-乙酰乌头碱宋果灵 HepG2 抗肿瘤活性中药现代化技术

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铁棒锤不定根的诱导与增殖培养

中国药学杂志 2016年第17期51卷 1455-1458页

作者：陈红刚张鑫杨晓霞杜弢甘肃省高校中(藏)药化学质量研究省级重点实验室兰州730000 甘肃中医药大学药用植物遗传育种研究所兰州730000

目的建立铁棒锤不定根的诱导及增殖培养体系。方法通过组织培养的方法,考察不同诱导方法对铁棒锤不定根诱导及增殖情况的影响。结果 MS+吲哚-3-丁酸(IBA)2.5 mg·L-1+6-苄基腺嘌呤(6-BA)0.5 mg·L-1+聚乙烯吡咯烷酮(PVP)1.0 g·L-1为最... 详细信息

目的建立铁棒锤不定根的诱导及增殖培养体系。方法通过组织培养的方法,考察不同诱导方法对铁棒锤不定根诱导及增殖情况的影响。结果 MS+吲哚-3-丁酸(IBA)2.5 mg·L-1+6-苄基腺嘌呤(6-BA)0.5 mg·L-1+聚乙烯吡咯烷酮(PVP)1.0 g·L-1为最适愈伤组织诱导培养基,MS+IBA 0.5 mg·L-1+PVP 1.0 g·L-1为最适不定根诱导培养基,MS+IBA0.5 mg·L-1+PVP 1.0 g·L-1为最适不定根增殖培养基。结论基本建立了铁棒锤不定根的诱导及增殖培养体系,为铁棒锤深层次的资源开发及利用提供了一种新途径。

关键词：铁棒锤不定根诱导增殖

铁棒锤转录组分析及乌头碱生物合成相关基因的挖掘

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药学学报 2021年第12期56卷 3353-3361页

作者：田梅陈灵丽靳保龙郭娟葛慧赵鑫崔光红中国中医科学院中药资源中心北京100700 甘肃中医药大学和政药用植物园甘肃和政731299

铁棒锤Aconitum pendulum为常用藏药,乌头碱类化合物是其主要活性成分,具有较高的药用价值。为研究铁棒锤乌头碱类生物合成途径,首次采用Illumina HiSeqTM2000高通量测序技术对铁棒锤转录组进行分析,分别构建其根、叶和花转录组数据库。... 详细信息

铁棒锤Aconitum pendulum为常用藏药,乌头碱类化合物是其主要活性成分,具有较高的药用价值。为研究铁棒锤乌头碱类生物合成途径,首次采用Illumina HiSeqTM2000高通量测序技术对铁棒锤转录组进行分析,分别构建其根、叶和花转录组数据库。Trinity de novo组装得到47264条unigenes,平均长度1140 bp,N50为1678 bp,30231条unigenes(63.96%)在7大公共数据库得到注释。KEGG分析发现542条unigenes参与17个次生代谢通路,56条unigenes编码乌头碱生物合成20种关键酶基因。其中44条unigenes编码乌头碱类二萜母核生物合成的20种酶类,12个BAHD酰基转移酶基因推测参与乌头碱酰基化修饰,且在不同部位表达存在差异,推测ApTPS8高表达场所(根)是二萜生物碱前体合成的主要部位。结合乌头碱类成分在植物体内的分布规律,推测ApBAHD1/2/8参与2-羟基乌头碱、dehydrated 14-benzoylaconitine、8-O-methyl-14-benzoylaconine、benzoyldeoxyaconitine和benzoylaconitine的生物合成,ApBAHD10参与乌头碱、lucidusculine、14-O-acetylneoline、14-O-acetylvirescenin的生物合成。通过铁棒锤、乌头比较转录组分析,发现铁棒锤中二萜合酶和酰基转移酶基因家族发生明显的收缩,这与乌头碱类化合物种类和数量明显偏少的结果一致,提示铁棒锤为乌头碱类化合物生物合成途径研究的理想材料。本工作可为后续乌头碱生物合成途径解析、毒性形成分子机制的探讨、道地药材形成机制提供基础科学资料。

关键词：铁棒锤二萜生物碱转录组萜类合酶酰基转移酶