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金黄葡萄球菌核酸探针检测方法的建立

中国生物制品学杂志 2010年第1期23卷 91-94页

作者：薛力刚刘金华王全凯王振国吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林出入境检验检疫局长春130062

目的建立快速检测食品中金黄葡萄球菌的核酸探针检测法。方法通过使用吖啶酯标记的特异DNA探针检测金黄葡萄球菌,确定最高和最低探针浓度,验证该方法的特异性及敏感性,并与传统国标法的检测结果进行比较。结果核酸探针法最高探针浓度为2... 详细信息

目的建立快速检测食品中金黄葡萄球菌的核酸探针检测法。方法通过使用吖啶酯标记的特异DNA探针检测金黄葡萄球菌,确定最高和最低探针浓度,验证该方法的特异性及敏感性,并与传统国标法的检测结果进行比较。结果核酸探针法最高探针浓度为2pmol∕50μl,最低探针浓度为0.25pmol∕50μl;该方法特异性良好,检出纯培养菌落最低限约为106cfu∕ml;与国标法检测结果一致性较高。结论核酸探针法可用于食品中金黄葡萄球菌的快速检测。

关键词：金黄葡萄球菌核酸探针检测

金黄葡萄球菌ClfA活性基因的克隆及原核表达

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中国生物制品学杂志 2009年第1期22卷 38-40页

作者：尹荣兰张乃生张艳晶杨正涛刘辉杨琦刘珊吉林大学畜牧兽医学院长春130062

目的克隆金黄葡萄球菌表面蛋白凝集因子A(ClfA)活性基因,并进行原核表达。方法以金黄葡萄球菌基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增ClfA(221-550)活性基因,克隆入载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a-ClfA(221-550),转化感受态大肠杆菌B... 详细信息

目的克隆金黄葡萄球菌表面蛋白凝集因子A(ClfA)活性基因,并进行原核表达。方法以金黄葡萄球菌基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增ClfA(221-550)活性基因,克隆入载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a-ClfA(221-550),转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果PCR扩增出987bp的目的基因片段,重组表达质粒经双酶切证明构建正确。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约36000处可见目的条带,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的36.76%,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆了金黄葡萄球菌ClfA活性基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了目的蛋白。

关键词：金黄葡萄球菌表面蛋白凝集因子A 活性基因克隆原核表达

金黄葡萄球菌野生株肠毒素B重组蛋白的表达及纯化

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中国生物制品学杂志 2008年第10期21卷 865-868页

作者：高世同张仁利刘会娟秦莉耿艺介黄达娜吴少庭深圳市疾病预防控制中心医学分子生物室深圳518020 中山大学医学院达安基因诊断中心广州510089

目的在大肠埃希菌中表达金黄葡萄球菌野生株肠毒素B(SEB)重组蛋白,并进行纯化。方法采用PCR方法从金黄葡萄球菌基因组中扩增出SEB基因片段,与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T/SEB,测序分析后,亚克隆入表达载体pGEX-4T-2,转化感受态... 详细信息

目的在大肠埃希菌中表达金黄葡萄球菌野生株肠毒素B(SEB)重组蛋白,并进行纯化。方法采用PCR方法从金黄葡萄球菌基因组中扩增出SEB基因片段,与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T/SEB,测序分析后,亚克隆入表达载体pGEX-4T-2,转化感受态***109,IPTG诱导表达。表达产物采用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit纯化后进行Western blot鉴定。结果SEB基因扩增片段大小为705bp,测序结果显示与金黄葡萄球菌S6株序列相比无碱基的插入或缺失,同源性为98.4%,存在11个碱基变异,其中7个为无义突变,4个为有义突变(突变位点位于第364、699、899和988位,编码氨基酸变化分别为:Ser→Ala、Gln→His、Asn→Ser和Met→Leu);表达的含GST的融合蛋白相对分子质量约53000,纯化后经SDS-PAGE分析,可见单一条带。Western blot显示表达产物可被兔抗SEB抗体所识别。结论已成功表达并纯化了金黄葡萄球菌野生株SEB重组蛋白,为开发SEB免疫诊断试剂提供了材料。

关键词：金黄葡萄球菌肠毒素B 表达纯化

金黄葡萄球菌肠毒素C3基因的克隆及原核表达

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中国生物制品学杂志 2010年第3期23卷 256-260页

作者：王敏曹虹李先平郑荣吴翔中南大学湘雅二医院检验科长沙410011 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室长沙410078

目的克隆并原核表达金黄葡萄球菌肠毒素C3(SEC3)基因。方法以金黄葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增SEC3基因中编码成熟蛋白的基因片段,克隆至pET-32a(+)表达载体,构建重组表达质粒SEC3-pET-32a,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经... 详细信息

目的克隆并原核表达金黄葡萄球菌肠毒素C3(SEC3)基因。方法以金黄葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增SEC3基因中编码成熟蛋白的基因片段,克隆至pET-32a(+)表达载体,构建重组表达质粒SEC3-pET-32a,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果经PCR扩增获得720bp的SEC3基因;重组表达质粒构建正确;表达产物的相对分子质量约为43000,为可溶性表达;纯化的重组蛋白具有良好的反应原性。结论已成功克隆并原核表达了SEC3基因,为单克隆抗体和诊断试剂的制备及SEC3抗毒素的研制提供了材料。

关键词：金黄葡萄球菌肠毒素C3 克隆原核表达

金黄葡萄球菌agrC结合小肽的筛选及初步鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第1期30卷 83-84页

作者：李学军杨和平戴晓天第三军医大学西南医院老年病科重庆400038 第三军医大学西南医院呼吸科重庆400038

金黄葡萄球菌（简称金葡菌）附属基因调节系统（accessory gene regulatory system，agr）是最重要的毒力因子调节系统和生物被膜形成调控系统。金葡菌几乎所有的胞外和表面毒力因子都在agr的控制之下，agrC是该系统中最重要的信号转导... 详细信息

金黄葡萄球菌（简称金葡菌）附属基因调节系统（accessory gene regulatory system，agr）是最重要的毒力因子调节系统和生物被膜形成调控系统。金葡菌几乎所有的胞外和表面毒力因子都在agr的控制之下，agrC是该系统中最重要的信号转导分子。本研究通过噬菌体展示技术，以agrC蛋白为靶分子，对噬菌体随机12肽库进行筛选，寻找能与agrC特异结合的多肽，将其作为靶向治疗金葡菌感染的载体，为临床研究金葡菌生物被膜形成的机制和研制新型靶向药物提供实验依据。

关键词：金黄葡萄球菌筛选噬菌体展示技术金葡菌感染生物被膜形成鉴定小肽调节系统

金黄葡萄球菌附属基因调节子与生物被膜及耐药的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第8期28卷 768-770页

作者：李学军杨和平戴晓天第三军医大学西南医院老年病特诊科重庆400038

近年来由于金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染率的增加、产生耐药速度的加快，以及其易于从急性感染向慢性、持久性、复发性感染转变等特点，金黄葡萄球菌（简称金葡菌）导致的感染已逐渐成为人们关注的焦点。其附属基因调节子... 详细信息

近年来由于金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染率的增加、产生耐药速度的加快，以及其易于从急性感染向慢性、持久性、复发性感染转变等特点，金黄葡萄球菌（简称金葡菌）导致的感染已逐渐成为人们关注的焦点。其附属基因调节子（accessory gene regulator，Agr）是一种重要的密度感应（quorumsensing，QS）信号系统和毒力因子调节系统，

关键词：金黄葡萄球菌基因调节子生物被膜耐药复发性感染急性感染 gene 密度感应

电针刺激足三里在金黄葡萄球菌小鼠骨髓炎模型中的作用研究

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中华创伤骨科杂志 2023年第5期25卷 440-445页

作者：闫宇驰刘子贤余斌南方医科大学南方医院骨科-创伤骨科广东省骨与软骨再生医学重点实验室广州510515

目的探究电针刺激(ES)足三里(ST36)在金黄葡萄球菌(SA)小鼠骨髓炎模型中能否抑制SA感染所致的骨量丢失并探究其机制。方法将12只10~12周龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为2组(n=6):SA+ES组和SA组。在进行骨髓炎造模并行ES 4周后于股骨及胫骨... 详细信息

目的探究电针刺激(ES)足三里(ST36)在金黄葡萄球菌(SA)小鼠骨髓炎模型中能否抑制SA感染所致的骨量丢失并探究其机制。方法将12只10~12周龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为2组(n=6):SA+ES组和SA组。在进行骨髓炎造模并行ES 4周后于股骨及胫骨取材。行Micro-CT重建以检测骨小梁体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(***)、骨小梁间距(***)、连接密度(***)等参数用于分析骨量变化;行瘦素受体(LEPR)免疫荧光染色以检测成骨细胞;行抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色用于检测破骨细胞变化;并通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血浆炎症因子变化情况。结果Micro-CT结果显示:SA+ES组较SA组目标区域松质骨的BV/TV、Tb.N、***、***均升高,LEPR免疫荧光结果提示:SA+ES组较SA组的成骨前体细胞增多,血清ELISA提示:SA+ES组血液中炎症因子较SA组减少,以上项目两组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论ES可通过抑制SA感染诱发的炎症反应及诱导间充质干细胞向骨小梁的聚集和分化来减缓感染性骨质破坏。

关键词：骨髓炎小鼠间质干细胞移植足三里金黄葡萄球菌电针刺激

NOD2在巨噬细胞对金黄葡萄球菌的炎性反应中的作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第3期31卷 193-200页

作者：谢旭华王丽丽龚风云夏超宋莹宋建新华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科武汉430030

目的通过观察对比巨噬细胞NOD2基因沉默前后对金黄葡萄球菌感染的免疫应答,了解NOD2基因在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞过程中所起的作用.方法采用real-time RT-PCR的方法检测巨噬细胞NOD2基因在金黄葡萄球菌感染时的表达情况,合成针对N... 详细信息

目的通过观察对比巨噬细胞NOD2基因沉默前后对金黄葡萄球菌感染的免疫应答,了解NOD2基因在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞过程中所起的作用.方法采用real-time RT-PCR的方法检测巨噬细胞NOD2基因在金黄葡萄球菌感染时的表达情况,合成针对NOD2的siRNA并干扰巨噬细胞.采用ELISA、流式细胞术等方法观察NOD2基因沉默对其在金黄葡萄球菌感染时的吞噬能力、细胞因子分泌水平、核转录因子（NF-κB）活化水平、细胞凋亡的影响.结果金黄葡萄球菌感染巨噬细胞可引起细胞内NOD2表达增高.巨噬细胞NOD2基因沉默可导致其吞噬金黄葡萄球菌的能力降低,分泌细胞因子水平降低,NF-κB激活不足.金黄葡萄球菌可以引起巨噬细胞发生凋亡,凋亡率随时间延长而升高.结论在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞的过程中,位于细胞内的模式识别受体NOD2在病原体识别、信号转导、NF-κB激活中发挥关键作用.

关键词：金黄葡萄球菌巨噬细胞 NOD2受体核转录因子

金黄葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞E钙黏蛋白表达的影响

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中国兽医学报 2016年第8期36卷 1307-1311页

作者：杨彬孙志鹏徐丹丹武瑞黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为研究金黄葡萄球菌(***)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)E-cadherin表达的影响,分别采用金黄葡萄球菌及热灭活的金黄葡萄球菌菌液作用于BMEC。金黄葡萄球菌以MOI 100∶1分别感染细胞0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0h,热灭活的金黄葡萄球菌... 详细信息

为研究金黄葡萄球菌(***)对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)E-cadherin表达的影响,分别采用金黄葡萄球菌及热灭活的金黄葡萄球菌菌液作用于BMEC。金黄葡萄球菌以MOI 100∶1分别感染细胞0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0h,热灭活的金黄葡萄球菌菌液以不同浓度(0,104,105,106,107,108 CFU/mL)刺激细胞,之后利用实时荧光定量PCR方法和Western blot方法检测E-cadherin mRNA及其蛋白的相对表达量。结果显示:金黄葡萄球菌在感染细胞2h之后,E-cadherin mRNA及其蛋白的表达量较未感染组显著降低(P金黄葡萄球菌菌液处理细胞的E-cadherin mRNA及其蛋白的表达量较对照组显著降低(P金黄葡萄球菌及热灭活的金黄葡萄球菌菌液均能够降低奶牛乳腺上皮细胞E-cadherin mRNA及其蛋白的表达。

关键词：金黄葡萄球菌奶牛乳腺上皮细胞 E-cadherin