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作者：芦琳辽宁医学院

学位级别：硕士

目的金属合金作为口腔的修复材料应具有良好的生物相容性，近年来研究发现，金属离子的腐蚀性可以导致细胞毒性，甚至造成牙周组织的损伤。本实验通过分析四种金属浸提液对人牙龈成纤维细胞（Human gingival fibroblasts, HGFs）尿纤... 详细信息

目的金属合金作为口腔的修复材料应具有良好的生物相容性，近年来研究发现，金属离子的腐蚀性可以导致细胞毒性，甚至造成牙周组织的损伤。本实验通过分析四种金属浸提液对人牙龈成纤维细胞（Human gingival fibroblasts, HGFs）尿纤溶酶原激活剂（umkinase-type plasminogen activator，uPA）和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(type-1plasminogen nactivato inhibitor，PAI-Ⅰ）的表达差异，探索烤瓷冠基底合金对人牙龈成纤维细胞生理活性影响的机制,同时为评价口腔修复材料生物相容性提供新方法。方法（1）选用健康人牙颈部的健康牙龈组织（患者知情同意），采用改良组织块法进行原代培养并传代，取第4代细胞进行波形丝蛋白和角蛋白免疫荧光实验，并绘制生长曲线，进行细胞鉴定。（2）HGFs经过镍铬、钴铬、纯钛及金钯合金四种金属浸提液的作用，采用免疫荧光和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测在金属浸提液作用下HGFs中PAI-Ⅰ和uPA的含量变化，分析PAI-Ⅰ和uPA的含量变化与不同金属离子之间的关系。统计学分析采用SPSS13.0软件，进行重复测量资料的方差分析，P＜0.05证明数据有统计学意义。结果（1）细胞经免疫荧光实验分析波形丝蛋白染色为阳性，角蛋白染色为阴性，证明细胞来源于中胚层;绘制细胞生长曲线，同样证实细胞来源于中胚层。（2）PAI-Ⅰ免疫荧光图片在电镜下观察，镍铬组和钴铬组，染色深，分泌均匀，分布于整个细胞;阴性对照组、纯钛组和金钯合金组，细胞染色浅，分泌不均匀，只存在于细胞核附近。（3）ELISA结果表明：uPA在各个时间点的表达在阴性对照组、纯钛组和金钯合金组之间差别无显著意义（P﹥0.05）。在12h和24h镍铬组、钴铬组与阴性对照组之间差异具有显著性意义（P﹤0.05）。各时间点镍铬组和钴铬组，纯钛组和金钯合金组之间差异也无显著性意义。结论某些金属离子可以诱导人牙龈成纤维细胞PAI-Ⅰ和uPA的升高，影响细胞的正常代谢，促进细胞外基质的溶解，造成牙周组织的损伤。其中镍铬合金和钴铬合金浸提液对人牙龈成纤维细胞uPA和PAI-Ⅰ表达影响较明显，纯钛和金钯合金浸提液对其无明显影响。本实验探讨合金腐蚀性对人牙龈成纤维细胞及牙龈组织影响机制之一，uPA和PAI-Ⅰ的表达分析可以作为评价口腔修复材生物相容性的新方法。

关键词：人牙龈成纤维细胞金属浸提液 uPA PAI-Ⅰ

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四种烤瓷冠基底金属浸提液干预人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达

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中国组织工程研究 2012年第21期16卷 3915-3918页

作者：芦琳黄克强胡静杜雅辽宁医学院附属第二医院正畸科辽宁省锦州市121004

背景:修复材料的生物相容性是决定临床修复效果的重要因素之一。目的:通过比较4种金属浸提液对人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达的差异探索其生物相容性。方法:选用活体牙龈,原代培养人牙龈成纤维细胞,... 详细信息

背景:修复材料的生物相容性是决定临床修复效果的重要因素之一。目的:通过比较4种金属浸提液对人牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达的差异探索其生物相容性。方法:选用活体牙龈,原代培养人牙龈成纤维细胞,采用镍铬、钴铬、纯钛及金钯合金4种金属浸提液进行干预,以未进行干预的细胞作为对照。结果与结论:ELISA检测结果显示镍铬和钴铬合金浸提液干预后细胞尿纤溶酶原激活剂表达增加;免疫荧光实验结合电镜观察发现镍铬和钴铬合金浸提液干预的细胞胞质荧光染色深,分布均匀,遍布整个细胞,提示细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂表达增加。而纯钛和金钯合金浸提液对细胞尿纤溶酶原激活剂和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达无影响。说明纯钛和金钯合金的生物相容性优于镍铬和钴铬合金。

关键词：金属浸提液牙龈成纤维细胞尿纤溶酶原激活剂 Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂镍铬合金钴铬合金纯钛金钯合金

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烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达的实验研究

烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达的实验研究

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作者：胡静辽宁医学院

学位级别：硕士

目的金属烤瓷冠既具有金属冠的强度又具有全瓷冠的美观效果，在临床应用中受到了医生和患者的普遍欢迎。但是近年随着金属烤瓷冠修复体的广泛应用，也逐渐暴露出了一些问题，患者戴用修复体一段时间后会出现牙龈萎缩、牙龈出血、龈缘... 详细信息

目的金属烤瓷冠既具有金属冠的强度又具有全瓷冠的美观效果，在临床应用中受到了医生和患者的普遍欢迎。但是近年随着金属烤瓷冠修复体的广泛应用，也逐渐暴露出了一些问题，患者戴用修复体一段时间后会出现牙龈萎缩、牙龈出血、龈缘灰染等问题。本实验的目的在于探讨镍铬合金、钴铬合金，纯钛，金钯合金浸提液对体外培养的人牙龈成纤维细胞分泌MMP-2、MMP-13的影响。从而，探索基质金属蛋白酶对人牙龈成纤维细胞的作用机制，为临床烤瓷冠基底合金的选择提供实验依据。方法 1.用改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞，用第三代人牙龈成纤维细胞进行免疫荧光法鉴定细胞的来源。 2.制备直径为5.5mm，高2.4mm的圆柱体合金，经过处理后浸泡于DMEM培养液中，十四天之后收集合金的浸提液。 3.用第五代细胞制成3×104/ml的单细胞悬液，每孔300ul均匀接种于48孔板待细胞贴壁后弃原培养液，实验组加入合金浸提液，对照组加入含10%胎牛血清的DMEM培养液处理。分别在1h、6h、12h、24h收集细胞上清液，用ELISA试剂盒进行人牙龈成纤维细胞分泌MMP-2、MMP-13的检测。 4.同样取第五代细胞制成3×104/ml的细胞悬液接种于24孔板内盖玻片上，待细胞贴壁后弃原培养液。实验组加入合金浸提液，对照组加入含10%胎牛血清的DMEM培养液。12小时后收集人牙龈成纤维细胞爬片，福尔马林固定，用免疫荧光法检测MMP-2、MMP-13在人牙龈成纤维细胞中的表达。结果 1．采用改良组织块法体外成功培养了人牙龈成纤维细胞，免疫荧光法及绘制生长曲线证实了细胞符合来源于中胚层的成纤维细胞特点。 2.经酶联免疫吸附试验检测结果显示：镍铬合金和钴铬合金组与对照组比较差异有统计学意义;纯钛和金钯合金组与对照组比较差异无统计学意义;镍铬合金、钴铬合金组分别与纯钛和金钯合金组比较差异有统计学意义;镍铬合金组与钴铬合金组比较差异无统计学意义。 3．细胞免疫荧光法观察人牙龈成纤维细胞在金属浸提液的刺激下镍铬合金、钴铬合金组MMP-2、MMP-13表达染色深，与对照组比较染色明显加深;纯钛、金钯合金组与对照组比较染色程度没有明显的区别。结论 1.体外成功的培养了人牙龈成纤维细胞，采用改良组织块法较单纯的组织块法更具有优势。 2.镍铬合金、钴铬合金浸提液可以显著的提高人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13的表达水平。 3.纯钛、金钯合金浸提液对人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13的表达影响不明显。 4．金属浸提液影响人牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶表达作用机制的探索为临床烤瓷冠基底合金的选择提供了一定的实验依据。

关键词：人牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶金属浸提液酶联免疫吸附试验

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烤瓷牙基底冠合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-13表达的实验研究

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中国医学工程 2012年第4期20卷 16-18页

作者：胡静黄克强杜雅卢琳辽宁医学院附属口腔医院辽宁锦州121001

目的观察不同种类烤瓷牙金属基底冠浸提液对人牙龈成纤维细胞中MMP-2、MMP-13表达水平的影响。方法制备镍铬、钴铬、纯钛和金合金浸提液,改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞,1、6、12、24h分别收集四种浸提液处理后的细胞上清液,ELISA法... 详细信息

目的观察不同种类烤瓷牙金属基底冠浸提液对人牙龈成纤维细胞中MMP-2、MMP-13表达水平的影响。方法制备镍铬、钴铬、纯钛和金合金浸提液,改良组织块法培养人牙龈成纤维细胞,1、6、12、24h分别收集四种浸提液处理后的细胞上清液,ELISA法测定MMP-13表达水平。结果镍铬合金、钴铬合金组MMP-13表达水平高于其他实验组和阴性对照组(P0.05)差异无统计学意义。结论镍铬合金、钴铬合金上调MMP-13表达水平,对人牙龈成纤维细胞损伤大;纯钛、金合金具有良好的生物相容性。

关键词：人牙龈成纤维细胞细胞培养金属浸提液金属蛋白酶

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烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达实验探讨

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中国继续医学教育 2016年第27期8卷 11-12页

作者：刘丽梅吉林医药学院附属医院口腔科吉林吉林132013

目的观察不同种类烤瓷牙金属基底冠浸提液对人牙龈成纤维细胞中MMP-2、MMP-13表达水平的影响。方法制备纯钛、钴铬、镍铬和金合金提取液,通过组织块改良的方法来对牙龈周围的纤维细胞进行培养,经过浸提液浸泡之后,分别收集样本上的细胞... 详细信息

目的观察不同种类烤瓷牙金属基底冠浸提液对人牙龈成纤维细胞中MMP-2、MMP-13表达水平的影响。方法制备纯钛、钴铬、镍铬和金合金提取液,通过组织块改良的方法来对牙龈周围的纤维细胞进行培养,经过浸提液浸泡之后,分别收集样本上的细胞清液,作为MMP-13表达水平的测定样本,测定方法为ILISA测定法。结果钴铬合金和镍铬合金MKMP-13表达水平高于阴性对照组和其他实验组,各项指标对比,差异有统计学意义(P0.05)。结论钴铬合金和镍铬合金MKMP-13表达水平较高,一定程度上会损伤牙龈成纤维细胞;金、纯钛合金生物相容性比较好。

关键词：金属蛋白本酶金属浸提液细胞培养牙龈成纤维细胞

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