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大黄素通过减少DNMTs的表达对胰腺癌细胞抑癌基因ppENK发挥去甲基化作用研究

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中国现代医生 2023年第30期61卷 7-10页

作者：陈亮唐坚褚永权叶剑宏沈超钱晓宇嘉兴市第一医院头颈外科浙江嘉兴314000

目的研究大黄素对胰腺癌细胞Panc1 DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)的影响,及其对抑癌基因前脑啡肽原(pre-proenkephalin,ppENK)启动子区CpG岛的去甲基化作用,探讨大黄素是否可通过降低DNMTs的表达逆转ppENK的甲基化状态... 详细信息

目的研究大黄素对胰腺癌细胞Panc1 DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)的影响,及其对抑癌基因前脑啡肽原(pre-proenkephalin,ppENK)启动子区CpG岛的去甲基化作用,探讨大黄素是否可通过降低DNMTs的表达逆转ppENK的甲基化状态。方法CCK-8检测不同浓度大黄素对Panc1细胞生长的影响,探索最佳用药浓度,重亚硫酸盐测序pcr(bisulfite genomic sequencing pcr,BSP)检测不同浓度大黄素对ppENK基因甲基化状态的影响,pcr和Western Blot检测ppENK及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a的mRNA和蛋白表达情况。结果大黄素以时间梯度和浓度梯度依赖性抑制Panc1细胞生长,其半数最大抑制浓渡(half maximal inhibitory concentration,IC50)约为40μmol/L,大黄素可使ppENK甲基化状态减弱,非甲基化状态增强;可减弱DNMTs的mRNA和蛋白表达,增强ppENK mRNA和蛋白表达。结论大黄素可不同程度地使Panc1 ppENK抑癌基因去甲基化,使抑癌基因重新表达。大黄素抑制胰腺癌细胞生长和其去甲基化作用有关,推测大黄素发挥去甲基化作用和其抑制甲基转移酶表达相关。

关键词：大黄素胰腺癌去甲基化 DNA甲基转移酶重亚硫酸盐测序pcr

西藏小型猪IGFBP-3基因甲基化与表达差异分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2013年第1期34卷 7-11页

作者：许无恨马强王佳官员房希碧田来明郝林琳于浩张英刘松财吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 长春市农业科学院吉林长春130111

为研究西藏小型猪类胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)基因甲基化及表达差异,对IGFBP-3基因的CpG岛甲基化程度、mRNA及蛋白表达水平进行分析,并以军牧一号猪为对照。结果表明:西藏小型猪肝脏组织中IGFBP-3基因CpG岛甲基化水平显著高于... 详细信息

为研究西藏小型猪类胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)基因甲基化及表达差异,对IGFBP-3基因的CpG岛甲基化程度、mRNA及蛋白表达水平进行分析,并以军牧一号猪为对照。结果表明:西藏小型猪肝脏组织中IGFBP-3基因CpG岛甲基化水平显著高于军牧一号猪(P<0.05);西藏小型猪不同组织中IGFBP-3mRNA表达量均显著高于军牧一号猪(P<0.05);同时肾脏中IGFBP-3蛋白含量显著高于军牧一号猪(P<0.05)。这为猪生长发育调控及促生长机制提供了分子依据。

关键词：西藏小型猪 IGFBP-3基因甲基化重亚硫酸盐测序pcr

应用BSP联合TA克隆测序检测胰腺癌中RASSF1A基因启动子区异常甲基化

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南京医科大学学报（自然科学版） 2012年第1期32卷 72-76页

作者：彭泉张立洁蔡辉华高文涛赵成功钱祝银苗毅南京医科大学第一附属医院普外科江苏南京210029 解放军第105医院普外科安徽合肥230032 解放军第105医院肿瘤科安徽合肥230032

目的:检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用。方法:采用重亚硫酸盐测序pcr(bisulfite genomic sequencing pcr,BSP)联... 详细信息

目的:检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株中的甲基化和表达状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病过程中的作用。方法:采用重亚硫酸盐测序pcr(bisulfite genomic sequencing pcr,BSP)联合TA克隆测序检测胰腺癌细胞株PANC-1及胰腺癌组织、癌旁组织及正常胰腺组织中RASSF1A启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)处理PANC-1,观察处理前后甲基化率变化情况,逆转录pcr观察RASSF1A的mRNA表达情况。结果:在PANC-1细胞中RASSF1A启动子的甲基化率平均为100.00%,在正常胰腺、癌旁及癌组织中平均分别为1.79%、93.75%和100.00%,与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P0.05)。在PANC-1细胞、胰腺癌组织及癌旁组织中RASSF1A基因无表达,在正常胰腺组织中RASSF1A基因呈阳性表达;PANC-1细胞经5-aza-dC处理后,RASSF1A的甲基化率下降(88.89%,P<0.05),mRNA表达无变化。结论:胰腺癌细胞株PANC-1及癌组织、癌旁组织RASSF1A基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中RASSF1A基因的表达沉默。该基因异常甲基化有望成为胰腺癌的早期诊断指标和治疗靶点。

关键词：胰腺癌甲基化 Ras相关区域家族1A 重亚硫酸盐测序pcr TA克隆

ABCA1甲基化与基因型和动脉粥样硬化性血栓性脑梗死的关系

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ABCA1甲基化与基因型和动脉粥样硬化性血栓性脑梗死的关系

作者：马雅玲中南大学

学位级别：硕士

目的：本研究旨在首次探讨胆固醇代谢相关基因ABCA1基因启动子区甲基化状态与基因型和动脉粥样硬化性血栓性脑梗死的关系,为脑梗死的防治开辟一条新的道路。方法：采用病例-对照研究方法随机抽取湖南汉族人群共30例,其中16名动脉粥... 详细信息

目的：本研究旨在首次探讨胆固醇代谢相关基因ABCA1基因启动子区甲基化状态与基因型和动脉粥样硬化性血栓性脑梗死的关系,为脑梗死的防治开辟一条新的道路。方法：采用病例-对照研究方法随机抽取湖南汉族人群共30例,其中16名动脉粥样硬化性血栓性脑梗死患者以及14名健康对照者。应用重亚硫酸盐测序pcr（BSP）技术检测ABCA1基因启动子区甲基化状态;应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法（pcr-RFLP）测定ABCA1R219K的基因型。结果：1.病例组舒张压高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,两组间高血压病史在比例上有显著差异（P＜0.05）。与对照组相比,病例组高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平显著降低,有统计学意义（P＜0.05）。 2.ABCA1基因启动子区有18个CpGs位点呈甲基化,病例组的CpG3至CpG9位点的平均甲基化水平显著高于对照组（P＜0.05）。病例组ABCA1基因启动区平均甲基化水平（CpGZ）和有明显差异的7个CpGs位点（CpG3-9）的平均甲基化水平均较对照组显著增高,差异有统计学意义（P=0.001,P=0.000）。 3.外周血白细胞（n=30）ABCA1基因启动子区平均甲基化水平（CpGZ）和有明显差异的7个CpGs位点的平均甲基化水平分别与血浆中HDL-C水平呈显著负的直线相关关系（R=-0.480P=0.005;R=-0.551P=0.001）。CpG3至CpG9位点与位点之间呈直线相关性。 4.ABCA1R219K的RR型、RK型、KK型的三种基因型之间的CpG3-9每个位点、CpGZ、7个CpGs的平均甲基化水平差异无统计学意义（P＞0.05）;RR型、RK型、KK型两两比较显示RR型的CpG9位点甲基化水平高于RK型（P＜0.05）。 5.外周血白细胞（n=30）ABCA1基因启动子区平均甲基化水平（CpGZ）和有明显差异的7个CpGs位点的平均甲基化水平与年龄呈显著正的直线相关关系（R=0.392P=0.032;R=0.459P=0.011）。分别比较病例组、对照组和合并组的男性与女性ABCA1基因启动子区平均甲基化水平（CpGZ）,无统计学差异（P＞0.05）。分别比较男性与女性的病例组和对照组的ABCA1基因启动子区平均甲基化水平（CpGZ）,男性病例组较男性对照组ABCA1基因启动子区甲基化水平（CpGZ）显著增高（P＜0.05）,女性病例组较女性对照组无显著差异（P＞0.05）。结论：1.ABCA1基因启动子区高甲基化与低HDL-C浓度和动脉粥样硬化性血栓性脑梗死有关;2.ABCA1的基因型可能影响部分CpG位点甲基化;3.年龄与ABCA1启动子区高甲基化相关,ABCA1基因启动子区高甲基化与脑梗死之间的关系存在性别差异,在男性中显著。图8幅,表10个,参考文献47篇。

关键词：动脉粥样硬化性血栓性脑梗死 ABCA1 甲基化基因型重亚硫酸盐测序pcr 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性

5-Aza对肝纤维化进程及miR-29b基因异常甲基化的影响

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中国卫生检验杂志 2014年第9期24卷 1229-1231,1235页

作者：林德照郑建建林镯董培红俞富军温州市中医院普外科浙江温州325000 温州医科大学附属第一医院浙江温州325000

目的观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza)对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞株活化状态及miR-29b基因甲基化的影响。方法采用MTT、qRT-pcr及Western blot技术检测5-Aza治疗组细胞活化状态及miR-29b含量;BSP及TA克隆检测miR-29b启动子区CpG岛甲基化... 详细信息

目的观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza)对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞株活化状态及miR-29b基因甲基化的影响。方法采用MTT、qRT-pcr及Western blot技术检测5-Aza治疗组细胞活化状态及miR-29b含量;BSP及TA克隆检测miR-29b启动子区CpG岛甲基化的改变。结果相较TGF-β1组,5-Aza组细胞增殖率下调为58.62%(P<0.05)且Ⅰ型胶原及α-SMA的mRNA及蛋白均显著下降(P<0.05)。miR-29b在5-Aza治疗后呈时间依赖性上升(P<0.05)。BSP及TA克隆显示5-Aza组miR-29b甲基化率为7.27%,呈现下调(P<0.05)。结论5-Aza可负性调控肝纤维化进程,这与miR-29b启动子区去甲基化进程密切相关。

关键词：肝纤维化 miR-29b 重亚硫酸盐测序pcr TA克隆

EEN-B1及其启动子甲基化在外阴鳞状细胞癌中的表达及意义

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现代肿瘤医学 2014年第7期22卷 1488-1491页

作者：何英慧欧阳玲中国医科大学附属盛京医院妇产科辽宁沈阳110004 锦州市妇婴医院妇科辽宁锦州121000

目的:检测EEN-B1在外阴鳞癌组织及外阴鳞癌细胞株中的启动子甲基化及蛋白表达情况,探讨其启动子异常甲基化在外阴鳞癌发病过程中的作用。方法:采用重亚硫酸盐测序pcr(bisulfite genomic sequencing pcr,BSP)联合TA克隆测序法,以正常外... 详细信息

目的:检测EEN-B1在外阴鳞癌组织及外阴鳞癌细胞株中的启动子甲基化及蛋白表达情况,探讨其启动子异常甲基化在外阴鳞癌发病过程中的作用。方法:采用重亚硫酸盐测序pcr(bisulfite genomic sequencing pcr,BSP)联合TA克隆测序法,以正常外阴组织作对照,检测外阴鳞癌组织中EEN-B1启动子区CpG岛的甲基化状态,以甲基化酶抑制剂5-aza-2-deoxycitydine(5-aza-dC)作用于外阴鳞癌细胞A-431,检测作用前后甲基化率变化情况;Western blot方法检测外阴鳞癌及对照组织中EEN-B1蛋白表达情况,检测5-aza-dC处理前后A-431中该蛋白表达情况。结果:在癌组织中EEN-B1启动子的甲基化率为54.66%,与对照组织的12.16%相比,差异具有统计学意义;而在外阴鳞癌组织中EEN-B1蛋白明显下调;经1×10-7mol/L 5-aza-dC处理72小时后,A-431细胞系中EEN-B1启动子的甲基化率由67.05%下降至26.82%(P<0.05),而该蛋白表达明显上调。结论:外阴鳞癌细胞株A-431及癌组织中EEN-B1基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化可能导致了外阴鳞癌组织及细胞系中EEN-B1基因的表达沉默。

关键词：外阴鳞癌甲基化 EEN—B1 重亚硫酸盐测序pcr TA克隆