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香附醋制前后对肝细胞膜通透性的影响

时珍国医国药 2012年第6期23卷 1395-1396页

作者：李淑雯胡志方江西中医药高等专科学校江西抚州334000

目的通过研究香附醋制对肝细胞膜通透性的影响,初步阐明"醋制入肝"理论的机制。方法采用MTT法检测生品与醋制品含药血清对肝细胞活性的影响;并采用流式细胞仪分别检测正常组、生品组,低、中、高浓度醋制品组含药血清对肝细胞通透性的影... 详细信息

目的通过研究香附醋制对肝细胞膜通透性的影响,初步阐明"醋制入肝"理论的机制。方法采用MTT法检测生品与醋制品含药血清对肝细胞活性的影响;并采用流式细胞仪分别检测正常组、生品组,低、中、高浓度醋制品组含药血清对肝细胞通透性的影响。结果与正常组比较,香附生品及醋制品含药血清均可增加肝细胞膜通透性,且醋制品作用更加明显。结论香附醋制后可增强肝细胞膜的通透性,表明"醋制入肝"的作用机制可能与影响肝细胞膜通透性有关。

关键词：香附醋制肝细胞膜通透性

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五味子醋制前后指纹图谱的分析比较

中国实验方剂学杂志 2013年第21期19卷 100-104页

作者：朱明贵李丽肖永庆于定荣麻印莲顾雪竹首都医科大学中医药学院北京100069 中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:建立五味子指纹图谱测定方法,分析比较五味子醋制前后物质基础的变化。方法:采用HPLC,以乙腈-15 mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH 2.0)为流动相,梯度洗脱,检测波长210,254 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,分别测定生、醋五味子指纹图... 详细信息

目的:建立五味子指纹图谱测定方法,分析比较五味子醋制前后物质基础的变化。方法:采用HPLC,以乙腈-15 mmol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH 2.0)为流动相,梯度洗脱,检测波长210,254 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,分别测定生、醋五味子指纹图谱。结果:五味子醋制前后指纹图谱有明显的差异,其中以5-羟甲基糠醛含量变化最显著。结论:建立的方法可以较好体现出五味子醋制前后物质基础的差异,为五味子饮片的质量评价标准提供了科学依据,也为进一步揭示五味子炮制原理的科学内涵奠定了基础。

关键词：五味子指纹图谱醋制

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浅谈乳香没药的酒制和醋制

山东中医杂志 1989年第5期8卷 40-41页

作者：万树臻战争尧山东中医学院附院

乳香、没药的炮制,自唐至清应用较广泛的是酒制法,而目前常用的醋制法记载较少。通过文献考证和对炮制作用的分析,认为两种炮制方法各有侧重,不能相互取代,建议保留酒炒法。

关键词：乳香没药酒制醋制

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中药醋制入肝减毒、增效现代研究

中华中医药学刊 2020年第9期38卷 190-194页

作者：彭新陈晓辉周浩李凯张振凌河南中医药大学河南郑州450046

醋制是以醋为辅料炮制中药的方法统称,是体现中药炮制"增效减毒"的典型代表,其理论基础"醋制入肝"是指导中药炮制的基本理论之一。近些年来,学者围绕中药在醋制前后成分变化、药效学机制、药代动力学方面进行了大量研究,有力地推动了对... 详细信息

醋制是以醋为辅料炮制中药的方法统称,是体现中药炮制"增效减毒"的典型代表,其理论基础"醋制入肝"是指导中药炮制的基本理论之一。近些年来,学者围绕中药在醋制前后成分变化、药效学机制、药代动力学方面进行了大量研究,有力地推动了对"醋制入肝"理论的科学阐释。从醋制减毒、增效角度就近些年来醋制中药研究进展进行综述,并对目前研究中存在问题进行分析,提出了"醋制入肝"机理研究的思路,以期为深入开展"醋制入肝"理论研究提供参考。

关键词：醋制醋制入肝增效减毒饮片药性理论

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大戟科大戟属有毒中药醋制解毒研究

大戟科大戟属有毒中药醋制解毒研究

作者：邱韵萦南京中医药大学

学位级别：硕士

京大戟、甘遂、狼毒为大戟科大戟属的同科同属植物,京大戟为大戟科植物大戟Euphorbia pekinensis Rupr.的干燥根、甘遂为大戟科植物甘遂Euphorbia kansui T.N Wang的干燥根、狼毒为大戟科植物月腺大戟Euphorbia ebracteolata Hayata或... 详细信息

京大戟、甘遂、狼毒为大戟科大戟属的同科同属植物,京大戟为大戟科植物大戟Euphorbia pekinensis Rupr.的干燥根、甘遂为大戟科植物甘遂Euphorbia kansui T.N Wang的干燥根、狼毒为大戟科植物月腺大戟Euphorbia ebracteolata Hayata或狼毒大戟Euphorbia fischeriana Steud的干燥根。临床上这三种中药均被归为峻下逐水药,治疗各种水肿。其生品药性峻猛,均有毒,具刺激性,使用不当可产生强烈的腹痛、腹泻、便血等消化道毒性反应。临床应用均需炮制。自宋代开始,京大戟、甘遂、狼毒均用醋炮制以缓和其毒性,且醋制法一直沿用至今。此三种有毒中药同科同属,毒性表现、炮制方法及临床应用均相似,但其明确的毒性成分及醋制后毒性成分的变化未见有报道。近年来,萜类成分作为毒效成分一直是大戟科植物的研究热点。有研究报告认为,二萜酯类成分可能与大戟科大戟属植物的毒性相关。文献研究显示,京大戟、甘遂、狼毒中也均含有二萜酯类成分。京大戟中含Casbane烷型和松香烷内酯型二萜;甘遂中主要存在巨大戟醇型和假白榄酮型二萜：狼毒中存在松香烷内酯型和巨大戟醇型二萜。这类成分的共性之处在于均具有成酯基团。文献研究也曾报道某些大戟科植物中的二萜酯类成分的成酯基团与毒性相关。早在十九世纪就有学者提出“植物化学分类”和“比较植物化学”概念。20世纪以来,国内外越来越多的学者致力于植物系统发育与其化学成分关系的研究,但同科同属植物的化学成分与炮制解毒是否具有相关性一直未见有报告。本课题组前期研究天南星科有毒中药炮制解毒机理时发现,同科同属中药的毒性成分与炮制解毒具有相似规律,而本课题中京大戟、甘遂、狼毒同属于大戟科大戟属,且毒性相似,因此,认为大戟科大戟属中药的毒性化学成分之间必然存在某种相似性。本论文根据课题组提出的假说,针对“醋制可缓解大戟科大戟属有毒中药毒性”的传统炮制方法,从醋制减毒出发,分别对京大戟、甘遂、狼毒(月腺大戟)醋制前后的胃肠道刺激性毒性和化学成分进行比较,找寻共性毒性成分。研究发现,京大戟、甘遂、狼毒(月腺大戟)胃肠道刺激性毒性表现相似,且醋制后可明显缓和刺激性毒性作用;初步研究发现三种有毒中药的共性成分与萜类成分极性极为相似,醋制前后也发生明显变化;采用胃肠道刺激性毒性评价模型,初步确定京大戟、甘遂、狼毒的最强刺激性泻下部位;质谱分析结果显示最强刺激性泻下部位中存在大量二萜类成分。此研究结果为共性毒性成分的分离并解析醋制前后共性毒性成分的构效变化奠定基础。主要的工作内容包括以下几个方面：1、大戟科大戟属有毒中药的胃肠道刺激性毒性研究依据临床中毒症状,分别采用两种整体模型(小鼠小肠推进运动实验、单次大剂量给药后小鼠消化系统脏器病理切片检查实验)和两种细胞模型(刺激巨噬细胞释放NO含量测定实验、对肠粘膜上皮细胞(IEC-6)毒性实验)评价大戟科大戟属三种有毒中药醋制前后的胃肠道刺激性毒性。实验结果显示,京大戟、甘遂、狼毒(月腺大戟)生品可明显促进小鼠小肠运动并增强巨噬细胞释放NO的能力;病理切片结果显示对消化道系统未见明显器质性病变,且对肠粘膜上皮细胞无明显的增殖抑制作用。因此,将促进小鼠小肠推进运动和刺激巨噬细胞释放NO的能力作为大戟科大戟属三种有毒中药胃肠道刺激性毒性的评价指标。另对京大戟、甘遂、狼毒(月腺大戟)70%醇提取物进行醋制前后的胃肠道刺激性毒性比较,结果显示,与生品组相比,醋品组对小鼠小肠推进率均明显降低且刺激巨噬细胞释放NO的能力均减弱,即醋制可缓和京大戟、甘遂、狼毒的胃肠道刺激性毒性。2、大戟科大戟属有毒中药共性毒性成分的初步研究采用薄层色谱分析,以萜类成分(大戟二烯醇)作为对照,在环己烷：乙酸乙酯(8.5：1.5)展开条件下,10%硫酸乙醇显色条件下,发现Rf=0.5处,京大戟、甘遂、狼毒生品及醋品与对照品均清晰显示相同的紫红色斑点,表明大戟科大戟属三种有毒中药中存在与萜类成分极性相似的成分,即含有共性萜类成分。利用制备薄层将可能的共性萜类成分分离,结合高效液相色谱法进行醋制前后共性萜类成分的比对分析,发现三种有毒中药中的共性萜类成分经醋制后色谱峰峰面积发生明显变化,出现峰面积明显增加或减少的现象,亦有新的色谱峰出现,或色谱峰完全消失,即醋制对大戟科大戟属三种有毒中药中的共性萜类成分产生显著影响。3、大戟科大戟属有毒中药不同极性部位的胃肠道刺激性毒性及化学成分的研究将大戟科大戟属三种有毒中药70%醇提取物根据极性的不同依次分为石油醚部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位和水部位。采用小鼠小肠推进运动实验和刺激巨噬细胞释放NO含量测定实验对各部位醋制前后的胃肠道刺激性毒性进行比较,结果显示,京大戟

关键词：京大戟甘遂狼毒醋制毒性萜类成分

老瓜头效毒成分7-脱甲氧基娃儿藤碱富集及醋制降毒机制初步研究

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老瓜头效毒成分7-脱甲氧基娃儿藤碱富集及醋制降毒机制初步研究

作者：万清玉宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的从老瓜头干燥全草70%乙醇提取物中富集镇痛效-毒成分7-脱甲氧基娃儿藤碱(7-Demethoxylophorine,DEM),并优化提取工艺;通过比较醋制前后主要毒性成分挥发油及DEM的变化,为进一步深入阐述老瓜头醋制降毒机理奠定基础;以DEM为指标,优... 详细信息

目的从老瓜头干燥全草70%乙醇提取物中富集镇痛效-毒成分7-脱甲氧基娃儿藤碱(7-Demethoxylophorine,DEM),并优化提取工艺;通过比较醋制前后主要毒性成分挥发油及DEM的变化,为进一步深入阐述老瓜头醋制降毒机理奠定基础;以DEM为指标,优化老瓜头醋制降毒工艺条件,保证临床用药安全。方法70%乙醇微波萃取老瓜头全草16.8 Kg,回收溶剂后,浸膏上001×7型阳离子交换树脂,富集总生物碱,再经由硅胶、Sephadex LH-20等各种色谱技术分离纯化生物碱,利用1H-NMR、13C-NMR和2D-NMR对其进行结构解析,寻找目标化合物。建立DEM的HPLC-UV含量测定方法,以其含量为考察指标,采用四因素三水平L9(34)正交设计优化其提取工艺。以建立的HPLC-UV方法,测定并比较生品与醋制品(陈醋、白醋)甲醇提取物中DEM的含量差异,采用GC-MS对石油醚及二氯甲烷萃取物进行成分分析。以DEM含量为考察指标,采用正交设计L16(45)优化其醋制工艺。结果1.共富集得到总生物碱236.5 g,得率为1.41%,并从总生物碱中分离得到1个生物碱单体(200 mg),经鉴定为目标化合物,得率约为0.25%;2.建立了DEM的HPLC-UV含量测定方法,专属性强,标准曲线线性回归Y=93649X-20052(r=0.9999),在0.11～70.4μg/m L浓度范围内线性关系良好,LLOQ为110 ng/m L,LLOD为33.3 ng/m L。日内、日间精密度及重复性符合测定要求。3.采用正交设计优选的最佳提取工艺为:选用1:10的料液比,80%甲醇超声提取30 min,验证实验测得DEM含量为(348.27±2.8)μg/g(RSD=0.8%,n=3),高于原有试验值。4.陈醋、白醋制品DEM的含量分别较生品显著降低了0.23倍、0.18倍(P醋制品比白醋制品下降得更多(P制品挥发性成分(石油醚提取物)组成基本一致,但醋制后相同组份的峰面积大多明显减小,白醋制品散失最多。陈醋制品二氯甲烷萃取物较生品变化较大,有生品中不含或极微量的成分产生或增加。5.醋制工艺优化结果表明,炮制用醋的浓度对DEM含量影响显著(P制工艺为A1B4C1D1,即采用稀释为30%醋液,浸泡药材24 h,60℃烘制40 min。结论1.总生物碱在老瓜头全草中的含量较低,DEM的含量仅为0.034%左右,得率低于0.3%,富集难度大。2.醋制老瓜头与生品相比,效-毒成分DEM含量显著下降,同时挥发性成分由于加热大量散失,是醋制减毒的重要机制。3.正交设计优选得到的提取工艺和醋制工艺,方法简便可靠,可为老瓜头的药用和临床用药安全提供参考。

关键词：老瓜头 7-脱甲氧基娃儿藤碱减毒机制醋制正交设计

基于皂苷类成分转化的商陆醋制减毒存效机制研究

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基于皂苷类成分转化的商陆醋制减毒存效机制研究

作者：王彩霞南京中医药大学

学位级别：硕士

商陆是商陆科植物商陆Phytolaccaacinosa Roxb.或垂序商陆Phytolacca americana L.的干燥根,具有逐水消肿,通利二便的功效,用于水肿胀满、二便不通等症,临床上常用于肾性、心源性、肝硬化等多种腹水疾病的治疗。商陆生品有毒,能产生严... 详细信息

商陆是商陆科植物商陆Phytolaccaacinosa Roxb.或垂序商陆Phytolacca americana L.的干燥根,具有逐水消肿,通利二便的功效,用于水肿胀满、二便不通等症,临床上常用于肾性、心源性、肝硬化等多种腹水疾病的治疗。商陆生品有毒,能产生严重的胃肠道刺激反应,主要表现为腹痛、腹泻等症状。临床多使用其炮制品。商陆以醋制法炮制减毒,但其炮制减毒机制不明。课题组前期研究发现商陆具有利尿作用和肠道致炎毒性作用,醋制后毒性降低,利尿作用保留,进一步研究发现商陆正丁醇部位既是毒性部位又是药效部位,该部位中主要含三萜皂苷类成分,炮制后商陆皂苷类成分的组成发生变化,某些成分含量降低,某些成分含量无显著变化,故推测醋制后毒性降低而药效保留可能与皂苷类成分炮制后结构发生转化相关,但具体转化机制及其与毒性和药效的相关性尚不明确。本论文从商陆肠道致炎毒性及祛腹水药效出发,建立毒性及药效评价模型,研究商陆醋制前后70%乙醇提取物及总皂苷部位毒效变化,并进一步分离纯化商陆皂苷类成分,解析商陆皂苷类成分模拟醋制前后结构转化规律,研究模拟醋制前后毒效变化,分析炮制过程中成分结构变化与毒效变化的相关性,探究商陆醋制过程毒-效转化机制,明确生醋商陆效应相关的质量标志物。主要研究工作如下:1.商陆醋制前后70%乙醇提取物祛腹水药效作用和肠道致炎毒性作用研究建立H22癌性腹水小鼠模型,以商陆醋制前后70%乙醇提取物对模型小鼠腹水量、给药后5h内尿量和粪便含水量影响,对肾脏组织中水通道蛋白AQP1-4,结肠组织水通道蛋白AQP1、3的影响为指标,评价商陆祛腹水药效作用;同时以正常小鼠给药后空肠炎症因子TNF-α和IL-1β释放水平为指标,评价商陆肠道致炎毒性作用。药效实验结果表明,与模型组相比,商陆醋制前后70%乙醇提取物均能显著增加腹水小鼠尿量和粪便含水量,减少腹水量,表明商陆祛腹水作用与其利尿及泻下作用相关;均能显著降低肾脏水通道蛋白AQP1-4和结肠水通道蛋白AQP1、3的表达。毒性实验结果表明,与空白组相比,商陆70%乙醇提取物能显著增加正常小鼠空肠炎症因子释放水平,引发肠道炎症,醋制后,炎症因子水平显著降低。上述结果表明商陆醋制后祛腹水药效作用保留而肠道致炎毒性降低。2.商陆总皂苷部位醋制前后祛腹水药效作用和肠道致炎毒性作用研究将商陆70%乙醇提取物经系统溶剂萃取后,把能够富集皂苷类成分的正丁醇部位通过大孔树脂柱层析进一步纯化,得到商陆总皂苷部位。根据商陆70%乙醇提取物毒性和药效评价动物模型中筛选出的药效和毒性指标,评价商陆总皂苷部位醋制前后祛腹水药效作用和肠道致炎毒性作用。药效实验结果表明,与模型组相比,商陆70%乙醇提取物组和商陆总皂苷组均能显著增加腹水模型小鼠尿量和粪便含水量,降低腹水量;均能显著降低腹水小鼠肾脏AQP1-4和结肠AQP1、3的表达,且商陆总皂苷组与70%乙醇提取物组相比祛腹水药效无显著性差异。毒性实验结果表明,与空白组相比,生商陆总皂苷组能显著增加正常小鼠空肠炎症因子释放水平,引发肠道炎症,醋制后,炎症因子水平显著降低。上述结果表明商陆总皂苷部位既是商陆祛腹水作用的药效部位,也是肠道致炎作用的毒性部位,且醋制后药效仍然保留而毒性降低。3.商陆总皂苷部位化学成分分析及分离纯化为进一步研究商陆醋制减毒存效机制,对商陆总皂苷部位进行成分分析和分离纯化。采用LC-MS/MS对商陆总皂苷部位进行成分分析,共推测鉴定出20种化学成分,其中皂苷类成分18种。采用正向硅胶柱层析、中压C18反向硅胶柱层析、LH-20凝胶柱层析及高压制备液相等多种技术从商陆总皂苷部位分离鉴定出4种商陆的主要三萜皂苷成分,分别为商陆皂苷甲（EsA）、商陆皂苷乙（EsB）、商陆皂苷丙（EsC）和商陆皂苷辛（EsH）,这4种成分含量占商陆总皂苷部位的83.3%。4.商陆皂苷类成分模拟醋制前后结构转化与毒效相关性研究将分离获得的EsA、EsB、EsC、EsH分别加醋酸加热和加水加热进行模拟炮制,采用LC-MS/MS分析模拟醋制前后各成分结构转化规律。并收集不同产地的商陆饮片,以HPLC法测定商陆醋制前后4种皂苷类成分含量变化,验证模拟炮制规律。选取模拟醋制后发生结构变化的成分EsH、EsC,考察其结构转化与毒效变化的相关性。药效评价采用Western blot法测定肾小管上皮细胞（HK-2）和肾集合管上皮细胞（mIMCD3）中AQPs蛋白表达水平;毒性评价采用ELISA法测定巨噬细胞（RAW264.7）TNF-α和IL-1β释放水平。实验结果表明,模拟醋制前后EsA、B较稳定,未发生明显的结构转化;EsH在醋酸加热下发生C-28位酯苷键的水解,脱去一分子葡萄糖转化生成EsA;EsC发生C-3位糖苷键的水解,脱去一分子葡萄糖和一分子木糖,转化得到EsC

关键词：商陆减毒存效皂苷类成分醋制结构转化腹水致炎

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广西莪术初加工工艺及醋制机理初步研究

广西莪术初加工工艺及醋制机理初步研究

作者：黄盼广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:广西莪术Curcuma kwangsiensis *** et ***是2020版《中国药典》收载的莪术的三大基源之一,同时也是广西的道地药材之一。课题组前期调查过程中发现农户加工的广西莪术饮片,其挥发油含量多数达不到药典标准,无法满足临床使用要求... 详细信息

目的:广西莪术Curcuma kwangsiensis *** et ***是2020版《中国药典》收载的莪术的三大基源之一,同时也是广西的道地药材之一。课题组前期调查过程中发现农户加工的广西莪术饮片,其挥发油含量多数达不到药典标准,无法满足临床使用要求。为探究加工过程中影响广西莪术饮片挥发油含量以及整体质量的因素,并初步了解其醋制机理,本文以广西莪术为研究对象,对其初加工工艺进行初步研究,再采用高效液相色谱法（HPLC）分析其醋制前后共有成分的变化,同时以挥发性成分的种类及含量变化探究醋制前后其挥发油稳定性的差异,并结合药效学研究结果,初步阐释广西莪术醋制的机理。方法:1.广西莪术初加工工艺研究以挥发油、水分、吉马酮、总姜黄素含量以及外观颜色作为综合评价指标,对广西莪术从原药材到饮片加工过程中可能影响其挥发油含量及整体质量的各生产环节进行研究,包括不同制法及时间、药材干燥方式及时间、切制方式及厚度、饮片干燥方式及温度,从而确定较佳的初加工工艺参数;2.广西莪术醋制前后共有成分的变化研究采用HPLC对市售广西莪术生饮片、醋饮片以及自制醋饮片的化学成分进行分析,应用化学模式识别法对其共有色谱峰进行分析,得到广西莪术醋制前后的潜在质量标志化合物;3.广西莪术醋制前后挥发油的稳定性研究采用水蒸气蒸馏法提取广西莪术生饮片和醋饮片的挥发油,运用气质联用色谱仪（GC-MS）技术对其挥发性成分进行分析,应用不同加热温度和不同加热时间处理挥发油样品,探索温度及时间对生饮片和醋饮片挥发油成分种类以及含量的影响,在此基础上加入抗氧化剂,优选改良效果较好的抗氧化剂,研究广西莪术醋制前后挥发油稳定性的差异;4.广西莪术醋制后抗肝纤维化研究采用40%CCl结合橄榄油的方式对大鼠进行皮下注射,建立肝纤维化模型大鼠,考察广西莪术醋饮片其醇提物的高剂量组和低剂量组对模型大鼠行为学以及血清中谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、层粘连蛋白（Laminin,LN）、Ⅲ型前胶原（Procollagen type III,PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Collage typeⅣ,CⅣ）、白蛋白（Albumin,ALB）水平影响的差异,结合HE染色,解析广西莪术醋饮片抗肝纤维化的初步机理。结果:1.本实验得到较佳的广西莪术初加工工艺参数为:取广西莪术新鲜药材,大小分档,洗去泥沙,剪掉须根和鳞叶,采用蒸法至透心状态,以冒蒸气开始计时,蒸制80 min后取出,烘制药材36 h,切3 mm厚片,45℃烘干,晾凉即得;2.经HPLC图谱对比分析发现共有8个共有峰,醋制后4号共有峰的峰面积均很大程度地增加,第5和第6号峰均表现出较大程度的下降,其中鉴定出6号峰为吉马酮;通过聚类（CA）、偏最小二乘（PLS-DA）分析均可将市售广西莪术生、醋品及自制醋品完好区分,其中4、5、和6号峰为广西莪术生品和醋制品的重要差异性特征峰;***-MS结果发现广西莪术醋制后挥发性成分种类减少,挥发性成分总含量降低;生饮片和醋饮片的挥发油在100℃均显著不稳定,100℃时醋饮片挥发油的稳定性优于生饮片;生饮片的挥发油加热7 h时稳定性最差,醋饮片的挥发油加热8 h时稳定性最差,醋饮片挥发油加热2 h后的稳定性优于生饮片;加入抗氧化剂后发现,香芹酚可使广西莪术生饮片挥发油氧化组中表莪术呋喃烯酮的含量降低到未氧化挥发油的水平,没食子酸辛酯可使醋饮片挥发油氧化组中表莪术呋喃烯酮和吉马酮的含量均提升到未氧化挥发油的水平;4.广西莪术醋饮片醇提物对肝纤维化大鼠行为学结果显示,造模结束后,空白组大鼠毛色密满洁白,精神状态良好,行动活跃,食量较大饮水正常,大便正常,尿液正常;模型组精神萎靡,毛色发黄且掉毛,行动迟缓,便溏体重下降,饮水减少,尿液粘稠;其他组症状均有所缓解。各项指标结果表明,与空白组相比,模型组大鼠血清中的ALT、AST、ALB、LN、PCⅢ、CⅣ的含量均有显著性变化,与模型组相比,阳性组大鼠血清中的ALB含量升高,其余各项指标含量均降低,与低剂量相比,高剂量组大鼠血清中ALB含量升高,其余各项指标含量均降低。结论:1.采用多指标测定结合外观颜色优化了广西莪术初加工工艺,结果表明加工过程中的蒸煮、干燥、切制等生产环节对广西莪术饮片的挥发油含量以及整体质量有很大的影响,该研究可填补广西莪术初加工工艺的空白,同时可为企业以及农户的加工提供一定的数据支撑;2.广西莪术醋制前后共有成分的含量存在差异,这表明市售广西莪术生、醋品及自制醋品的质量具有一定的差异性,其中4、5、和6号共有峰为广西莪术生品和醋制品的重要差异性特征峰,可为广西莪术生饮片和醋饮片的鉴别提供一定的依据;3.广西莪术醋

关键词：广西莪术初加工醋制挥发油稳定性抗肝纤维化

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川产道地药材蓬莪术醋制增效机理研究

川产道地药材蓬莪术醋制增效机理研究

作者：甘彦雄成都中医药大学

学位级别：硕士

蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Val.)为姜科植物的干燥根茎,是中药莪术的主要来源之一,收载于《中国药典》2015年版,具有行气破血、消积止痛之功效,为"破血消癥"要药。中医临床常用其醋制品,醋制后既增强"破积消坚,去积聚癖块"之效,又缓... 详细信息

蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Val.)为姜科植物的干燥根茎,是中药莪术的主要来源之一,收载于《中国药典》2015年版,具有行气破血、消积止痛之功效,为"破血消癥"要药。中医临床常用其醋制品,醋制后既增强"破积消坚,去积聚癖块"之效,又缓其峻猛药性。目前对川产道地药材蓬莪术醋制的研究较少,对其炮制原理有待于深入阐明。目的本文以醋制为切入点探寻蓬莪术醋制过程有效成分含量变化规律及其影响因素,基于蛋白质相互作用网络探明醋莪术其作用机制,从而结合物质基础变化和药理效应机制两方面丰富蓬莪术醋制增效的科学内涵。方法与结果1.取蓬莪术生品,分别以9°米醋、纯化水、9%醋酸水溶液炮制,得到其醋制品、空白品、参照品,同时测定炮制过程中不同时间点的pH值,结果发现醋制组和参照组pH值由3.8左右缓慢升至4.8左右,空白组由7.1左右降至6.3左右,醋制组和参照组pH值远低于空白组。醋制组和参照组的情况极为接近,两者无显著差异;然后煎煮蓬莪术生品、醋制品、空白品和参照品,得各样品的煎液,同样测定煎煮过程中各煎液不同时间点的pH值,结果发现醋制组和参照组依然低于空白组及生品组,并且均小于6,而醋制组则略低于参照组。2.建立HPLC同时测定蓬莪术3个姜黄素类成分姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素和4个挥发油类成分莪术二酮、莪术醇、吉马酮、β-榄香烯含量的方法;然后测定各组蓬莪术样品,发现挥发油类成分相对姜黄素类成分含量较高,但经过炮制后均降低较多;醋制品及参照品的姜黄素类成分含量比生品略低,且醋制品比参照品略高,但空白品的姜黄素含量降低较多。3.建立以刀豆蛋白A诱导的肝炎模型小鼠,以联苯双酯(200mg/kg)为阳性对照,各给药组分别灌胃相应药物,即蓬莪术生品(1.3g/kg)、蓬莪术醋制品(1.3g/kg)、姜黄素(200mg/kg)、双去甲氧基姜黄素(200mg/kg),测定其肝脏指数、脾脏指数、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)等反映肝炎的指标,结果各给药组均较模型组有不同程度的改善,其中蓬莪术醋制品药效接近阳性对照药联苯双酯,且优于生品,其利肝之效增强。4.基于蛋白质相互作用网络(PPI)阐释蓬莪术醋制作用机制。从STITCH4.0数据库和ChEMBL数据库对蓬莪术所含化合物进行检索,分别获得了姜黄素95个作用靶点、去甲氧基姜黄素27个作用靶点、双去甲氧基姜黄素7个作用靶点、环庚三烯酚酮11个作用靶点以及莪术二酮、β-榄香烯、异莪术醇各1个作用靶点,利用Cytoscape软件构建蓬莪术蛋白质相互作用网络,包含723个节点和2726条边,拓扑性质分析表明所建网络稳定可靠,模块分析得到25个功能模块,包含免疫调节过程、TGF-β信号通路过程等;多成分协同作用机制分析发现,姜黄素和双去甲氧基姜黄素共同作用与TGF-β信号通路生物过程,调节TGFβ1、TGFβR1、TGFβR2、SMAD3、SMAD4、ZFYVE9等蛋白质发挥抗肝炎的作用。5.基于Western Blot和qPCR技术,检测空白组、模型组及各给药组小鼠肝脏中TGFβ1、Smad7、Smad2/3基因的RNA表达量及其蛋白质表达量,结果发现蓬莪术生品及其醋制品均能调控TGF-β信号通路,其中姜黄素和双去甲氧基姜黄素是主要有效成分。结论本论文发现炮制过程中挥发油类成分含量降低较多,但炮制辅料米醋能针对性地保护蓬莪术中的有效成分姜黄素,避免炮制过程中的损失,初步证实了蓬莪术醋制使有效成分"存其不足,去其有余"的炮制内涵,而姜黄素类成分正是蓬莪术利肝抗炎的有效成分,通过调控TGF-β信号通路达到作。本论文丰富了蓬莪术醋制增效的科学内涵,为中药炮制机制研究提供了新思路。

关键词：蓬莪术醋制 pH值肝炎蛋白质互作网络 TGF-β信号通路 Smads