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骨髓间充质干细胞微泡生物学特性及其促进造血干细胞体外扩增作用的研究

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中国实验血液学杂志 2017年第4期25卷 1187-1193页

作者：梁雨蒙王晓娜邓磊王路王一黄雅静刘铁强左红莉孙琪云乔建辉余长林胡锴勋艾辉胜郭梅军事医学科学院附属医院血液科北京100071

目的:探讨骨髓间充质干细胞微泡的生物学特性及其对造血干细胞体外扩增的作用。方法:用多步差速离心法分离提纯骨髓间充质干细胞(MSC)培养上清中的微泡(MV),采用样本负染的方法在电子显微镜下观察微泡的形态特征;用Micro-BCA法测定其蛋... 详细信息

目的:探讨骨髓间充质干细胞微泡的生物学特性及其对造血干细胞体外扩增的作用。方法:用多步差速离心法分离提纯骨髓间充质干细胞(MSC)培养上清中的微泡(MV),采用样本负染的方法在电子显微镜下观察微泡的形态特征;用Micro-BCA法测定其蛋白含量;用流式细胞术分析微泡表面标志;液体培养动员后外周血造血干细胞实验分为两组,在相同培养体系下,给微泡组加入50μl微泡,对照组加入等体积PBS;采用细胞计数观察细胞数目的变化,应用流式细胞术动态监测造血干细胞表面标志的变化,细胞集落培养法观测与微泡共培养后造血干细胞在体外的功能变化。结果:间充质干细胞来源的微泡是直径在20-100 nm之间的类圆形囊泡,提取后的微泡浓度约为200μg/ml;在间充质干细胞微泡中CD63表达率为96.0%,CD44表达率为50.2%,而HLA-DR,CD34,CD29,CD73等表达均为阴性;微泡与GPBM NC共培养2 d后,微泡组细胞数是对照组的1.49±0.15倍(P>0.05),CD34^+细胞数(3.93±0.60)×10~4是对照组(2.30±0.64)×10~4的1.76±0.30倍;4 d时微泡组细胞数(10.19±0.65)×10~6是实验组细胞数(4.67±0.70)×10~6的2.20±0.24倍(P细胞数(7.82±0.41)×10~4是对照组(4.03±0.35)×10~4的1.95±0.20倍。结论:通过多步差速离心法能够成功从MSC上清中提取微泡,微泡在体外对造血干细胞具有促进增殖的作用。

关键词：间充质干细胞微泡造血干细胞

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当归多糖抑制氧化损伤延缓造血干细胞衰老

中国中药杂志 2013年第3期38卷 407-412页

作者：张先平王乾兴陈斌魏强徐春燕姜蓉王建伟王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆400016 遵义医学院细胞生物学教研室贵州遵义563003 山东省枣庄市台儿庄区中医院急诊科山东枣庄277400

目的:观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSCs)活性氧(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)及p16 mRNA表达的影响,探讨ASP延缓HSCs衰老的可能机制。方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组、衰老组,并分别予ASP干预;衰老组采用X线3.0 Gy/8 F全身均匀照... 详细信息

目的:观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSCs)活性氧(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)及p16 mRNA表达的影响,探讨ASP延缓HSCs衰老的可能机制。方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组、衰老组,并分别予ASP干预;衰老组采用X线3.0 Gy/8 F全身均匀照射,建立小鼠HSCs衰老模型;正常、衰老ASP干预组在建模期间均予ASP灌胃;而正常组、衰老组予等体积NS灌胃。免疫磁珠分离HSCs,通过β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期分析和混合集落培养观察HSCs生物学特性变化;流式细胞术与免疫荧光检测ROS产量;比色法检测T-AOC;荧光定量PCR检测p16 mRNA表达。结果:与正常组比较,3.0 Gy/8 F的X线能显著增加衰老组HSCs SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例;增加ROS产量,上调p16 mRNA表达;混合集落形成能力和T-AOC下降。与衰老组比较,ASP能显著降低衰老组HSCs的SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例,减少ROS产量,下调p16 mRNA;增加混合集落形成能力和T-AOC。结论:3.0 Gy/8 F的X线能诱导小鼠HSCs衰老;ASP则能通过抑制氧化损伤及下调p16 mRNA表达延缓小鼠HSCs衰老。

关键词：当归多糖造血干细胞细胞衰老氧化应激

当归多糖对衰老模型小鼠造血干细胞Wnt／β-catenin信号通路的影响

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中草药 2015年第14期46卷 2111-2116页

作者：张岩岩李静贾道勇张梦思夏婕妤景鹏伟宋小英王璐王亚平顾恒伟重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的探讨当归多糖（ASP）对衰老小鼠造血干细胞（HSCs）Wnt／β-catenin信号通路的影响。方法6～8周雄性C57BL／6J小鼠30只，随机分为对照组、模型组和ASP组，每组10只。小鼠scD-半乳糖（D-Gal，120mg／kg），每天1次，连续42d，复制衰... 详细信息

目的探讨当归多糖（ASP）对衰老小鼠造血干细胞（HSCs）Wnt／β-catenin信号通路的影响。方法6～8周雄性C57BL／6J小鼠30只，随机分为对照组、模型组和ASP组，每组10只。小鼠scD-半乳糖（D-Gal，120mg／kg），每天1次，连续42d，复制衰老小鼠模型；ASP（200mg／kg）组ip给药，连续35d。给药结束后第2天，免疫磁珠分离HSCs，衰老β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察衰老HSCs百分率：造血祖细胞混合集落（CFU—Mix）培养检测HSCs形成集落能力：流式细胞术和激光共聚焦检测HSCs中活性氧（ROS）水平；Westemblotting检测HSCs胞质β-catenin、胞核β-catenin、GSK-3B、***-3p和TCF-4蛋白表达。结果与对照组比较，模型组HSCs的SA-β-Gal染色阳性百分率和ROS水平显著增加；胞质β-catenin、胞核βcatenin、Phospho-GSK-3β和TCF-4蛋白表达上调；CFU—Mix形成能力降低；GSK-3β蛋白表达下调。与模型组比较，ASP能显著降低衰老HSCs的SA—β—Ga1染色阳性百分率和ROS水平；下调胞质13-catenin、胞核β-catenin、Phospho—GSK-36和TCF-4蛋白表达；提高CFU—Mix形成能力；上调GSK-3β蛋白表达。结论ASP能延缓或拮抗D-Gal致小鼠HSCs衰老，其机制可能与ASP抑制Wnt／β-catenin信号通路过度激活有关。

关键词：当归多糖造血干细胞衰老 Wnt/β-catenin信号通路 D-半乳糖

造血干细胞分化过程中HOXB6基因表达及干预研究

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实用儿科临床杂志 2010年第3期25卷 177-180页

作者：陈红英陈艾刘文君泸州医学院附属医院儿科四川泸州646000

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观... 详细信息

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观察HSC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)和植物血凝素(PHA)分别诱导后,在培养第3天、第7天和第12天的CFU-GM、CFU-E及CFU-TL集落生成情况。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血干细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。结果1.人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均有表达。2.随时间推移,CFU-GMHOXB6 mRNA在增殖分化的第3天开始表达,第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;CFU-E HOXB6 mRNA表达在第3天、第7天和第12天均持续增强;而在CFU-TL中,HOXB6 mRNA表达在第7天最强烈,第12天表达减弱。3.与对照组比较,ATRA可上调各组HOXB6基因的表达。结论1.在人脐血CFU-GM、CFU-E和CFU-TL的不同增殖分化阶段,HOXB6基因呈现持续稳定的表达,提示HOXB6基因与人类造血干细胞增殖分化过程密切相关。***6基因在人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL的正常增殖分化过程中呈现时间上的规律性。3.低浓度(60μmol.L-1)的ATRA能显著上调HOXB6基因的表达。

关键词： HOXB6基因造血干细胞实时荧光定量反转录聚合酶链反应

腺病毒转染的肝细胞生长因子对冠心病患者外周造血干细胞的动员作用

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中华心血管病杂志 2007年第6期35卷 504-508页

作者：张书兰杨志健张友荣戴健陈波贾恩志朱铁兵王晖王连生吴祖泽曹克将马文珠南京医科大学第一附属医院心脏科 210029 中国军事医学科学院

目的探讨经冠状动脉内注射腺病毒(adenovirus,Ad_5)转染人肝细胞生长因子(HGF)对严重冠状动脉狭窄患者外周造血干细胞的动员作用。方法本研究入选18例冠心病患者,分为两组:给药组9例,经冠状动脉注入Ad_5-HGF;对照组9例,经冠状动脉注入... 详细信息

目的探讨经冠状动脉内注射腺病毒(adenovirus,Ad_5)转染人肝细胞生长因子(HGF)对严重冠状动脉狭窄患者外周造血干细胞的动员作用。方法本研究入选18例冠心病患者,分为两组:给药组9例,经冠状动脉注入Ad_5-HGF;对照组9例,经冠状动脉注入同等量的生理盐水。所有患者均于冠状动脉造影术前、术后6 h、24 h 及6天抽取外周血,并应用流式细胞仪单克隆荧光抗体标记法检测其外周造血干细胞表面抗原 CD34^+、CD38^+及 CD117^+。结果给药组术后6 h 的 CD34^+明显高于对照组(0.104±0.082比0.022±0.012,P=0.021),0 h、24 h 及6天的 CD34^+两组之间差异无统计学意义;给药组术后6天的 CD117^+明显高于对照组(0.058±0.058比0.012±0.009,P=0.034),差异有统计学意义,其余时间点两组间差异均无统计学意义;CD38^+在各时间点两组间差异均无统计学意义。结论经冠状动脉内注射转染 Ad_5-HGF 可能在短时间内引起外周造血干细胞的动员。动员外周造血干细胞可能是 HGF 参与血管新生和器官组织损伤修复及抗凋亡、改善心功能的一个重要机制。

关键词：冠状动脉疾病肝细胞生长因子造血干细胞

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骨髓造血干细胞的起源——血管内皮生血化?

中国实验血液学杂志 2015年第3期23卷 866-870页

作者：王芬袁燕陈彤复旦大学附属华山医院血液科上海200040

与原始造血相比,胚胎期具有永久造血功能的造血干细胞起源于生血内皮细胞,胚胎的卵黄囊、AGM区、胎盘、胎颅、胚胎血管等,均以内皮生血化的形式进行永久造血,但是在胎肝和骨髓是否也以此方式永久造血尚不十分明确。近来的研究表明,骨髓... 详细信息

与原始造血相比,胚胎期具有永久造血功能的造血干细胞起源于生血内皮细胞,胚胎的卵黄囊、AGM区、胎盘、胎颅、胚胎血管等,均以内皮生血化的形式进行永久造血,但是在胎肝和骨髓是否也以此方式永久造血尚不十分明确。近来的研究表明,骨髓永久造血与血管内皮细胞的联系也非常密切。本文总结了胚胎内皮生血化的相关机制,并对骨髓是否也有内皮生血化进行了讨论和综述。

关键词：血管内皮细胞生血内皮细胞造血干细胞造血

小鼠骨髓CD117^+造血干细胞定向分化为未成熟树突状细胞及其鉴定

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南方医科大学学报 2007年第4期27卷 450-453页

作者：姜亚卓田普训丁小明李兆伦管智慧丁晨光薛武军西安交通大学医学院第一附属医院肾移植科陕西西安710061

目的建立可以在体外稳定地获得大量高纯度未成熟树突状细胞的方法,并对获得细胞进行形态、功能以及表面标志的鉴定。方法取健康C57小鼠骨髓,通过MACS系统分离、纯化CD117^+造血干细胞;使用SCF+IL-3进行体外扩增,在此基础上使用GM-CSF+IL... 详细信息

目的建立可以在体外稳定地获得大量高纯度未成熟树突状细胞的方法,并对获得细胞进行形态、功能以及表面标志的鉴定。方法取健康C57小鼠骨髓,通过MACS系统分离、纯化CD117^+造血干细胞;使用SCF+IL-3进行体外扩增,在此基础上使用GM-CSF+IL-4+IL-10诱导其定向分化为未成熟树突状细胞;进而在倒置显微镜、扫描电镜以及透射电镜下观察其形态、功能,并使用流式细胞计数法检测其表面标志的表达,对其鉴定。结果SCF+IL-3可以分别在3、5、7d时体外扩增造血干细胞达10.34±1.43、22.65±2.71、54.39±3.08倍;小鼠HSC可被成功诱导分化为未成熟树突状细胞,后者具有吞噬功能,表面树突较为短小,呈毛刺状,表面标志表达情况为CD11c^+、I-A/I-E^(low)、CD40-、CD80-、CD86-。结论使用该方法可以有效地获得大量高纯度的未成熟树突状细胞并对其进行鉴定。

关键词： CD117 造血干细胞树突状细胞定向分化

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小鼠造血干细胞增殖与分化性能的研究

生理学报 1997年第3期49卷 255-260页

作者：刘存仁贺福初吴祖泽山东大学生命科学学院发育生物学研究所济南250100 北京军事医学科学院放射医学研究所北京100850

本文选择Y染色体特异的性别决定基因（Sry）作为新的细胞遗传标志，采用PCR技术研究了小鼠造血干细胞的增殖与分化性能。将雄鼠骨髓细胞输注给经致死剂量射线照射的雌性受体小鼠，PCR测试结果表明，所有CFU-S均为供体起源。供体来源的CF... 详细信息

本文选择Y染色体特异的性别决定基因（Sry）作为新的细胞遗传标志，采用PCR技术研究了小鼠造血干细胞的增殖与分化性能。将雄鼠骨髓细胞输注给经致死剂量射线照射的雌性受体小鼠，PCR测试结果表明，所有CFU-S均为供体起源。供体来源的CFU-S在其输入体内后，可通过增殖、分化形成各系造血细胞；但CFU-S中的纤维母细胞和CFU-S重建造血后受体小鼠骨髓中的纤维母细胞均为受体起源。由此可见，小鼠骨髓中的CFC-S是一类造血于细胞，它不具有分化为纤维母细胞的性能。

关键词：造血干细胞增殖分化

造血干细胞标志分子CD34的结构与功能新认识

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中国医学前沿杂志（电子版） 2024年第9期16卷 16-19,I0002页

作者：罗军涛卢莹上海交通大学医学院皮肤病研究所上海200092

CD34是造血干/祖细胞最主要的膜表面标志物,是临床上造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplanta-tion,HSCT)中评估和选择供体移植物的核心指标。然而,令人惊讶的是,CD34的生物学功能至今仍然知之甚少。尽管已有研究揭示了CD3... 详细信息

CD34是造血干/祖细胞最主要的膜表面标志物,是临床上造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplanta-tion,HSCT)中评估和选择供体移植物的核心指标。然而,令人惊讶的是,CD34的生物学功能至今仍然知之甚少。尽管已有研究揭示了CD34在介导黏附中发挥重要作用,但其发挥促进还是抑制功能尚无定论。CD34作为一种高度糖基化的Ⅰ型跨膜蛋白,糖基化、磷酸化等翻译后修饰可能对于其构象及功能具有重要调控作用。本实验室前期工作发现了CD34共价活性位点、磷酸化修饰位点及其潜在功能。本综述结合基础研究实验结果,对CD34分子研究进展作一简要介绍和展望。

关键词：造血干细胞膜蛋白翻译后修饰