检索结果-南通市图书馆

人类生精相关基因TSARG4的cDNA克隆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第3期35卷 283-288页

作者：邢晓为李麓芸傅俊江朱文兵刘刚刘上峰卢光琇中南大学湘雅医学院人类生殖工程研究室中南大学湘雅医学院人类生殖工程研究室长沙410078

为了探索精子生成的分子机制 ,从人精子外部致密纤维蛋白相关基因SPAG4(spermantigen 4)和小鼠精母细胞中表达的AK0 0 62 2 5基因出发 ,找到两个人类EST ,BG72 0 5 64和AI70 0 45 4,其中BG72 0 5 64在人睾丸中表达。运用“间隙填充法”... 详细信息

为了探索精子生成的分子机制 ,从人精子外部致密纤维蛋白相关基因SPAG4(spermantigen 4)和小鼠精母细胞中表达的AK0 0 62 2 5基因出发 ,找到两个人类EST ,BG72 0 5 64和AI70 0 45 4,其中BG72 0 5 64在人睾丸中表达。运用“间隙填充法”填平这两个EST之间的间隙 ,从人睾丸文库中快速克隆了同源于SPAG4和AK0 0 62 2 5基因的人类TSARG4基因 (testisandspermatogenesisrelatedgene 4) (GenBank登录号为AF40 13 5 0 ) ,并用RT PCR对该基因阅读框进行验证。TSARG4基因全长 12 5 2bp ,开放阅读框为 94～ 12 3 3bp ,定位于 2 0q11.2 ,推定编码 3 79个氨基酸 ,预计分子量为 43 0 81.45 ,等电点为 8.61,该基因与小鼠精母细胞基因AK0 0 62 2 5编码的氨基酸序列同源性 74% ,与人类SPAG4基因编码的氨基酸序列同源性 45 %。RT PCR表明人类TSARG4基因在多个组织中均有表达 ,而同源的小鼠AK0 0 62 2 5基因仅在睾丸中表达

关键词：基因克隆间隙填充法逆转录聚合酶反应睾丸组织表达谱

一个新的人类睾丸特异基因的cDNA克隆和表达分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

Acta Genetica Sinica 2004年第6期31卷 545-551页

作者：李丹卢光琇傅俊江莫亚勤邢晓为刘刚中南大学生殖与干细胞工程研究所

运用“数据库消减杂交”(DigitalDifferentialDisplay)方法筛选人类睾丸特异表达新基因 ,获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群 ,挑选其中一个克隆重叠群HS .12 9794进行多组织RT PCR ,初步证实该重叠群在人睾丸中有高表达。然后... 详细信息

运用“数据库消减杂交”(DigitalDifferentialDisplay)方法筛选人类睾丸特异表达新基因 ,获得了有差异显示的代表新基因的克隆重叠群 ,挑选其中一个克隆重叠群HS .12 9794进行多组织RT PCR ,初步证实该重叠群在人睾丸中有高表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发 ,采用生物信息学的方法快速克隆了一个人类新基因的全长cDNA序列 ,其全长 2 4 30bp ,开放阅读框为 6 76～ 12 4 8bp ,定位于 3p2 1 1,编码由 190个氨基酸组成 ,分子量为 2 0 4 17 8Da ,等电点为 5 2 3的一个偏酸性蛋白质 ,该蛋白与已知蛋白质无明显同源性。克隆实验验证该基因阅读框完全正确 ,半定量RT PCR进一步显示该基因在人不同发育时期的睾丸及精子细胞中有表达 ,推测其可能与精子生成相关 ,暂命名为SRG5 (TestisSpermatogenesisRelatedGene 5 ,SRG5 ) (GenBank登录号 :AY2 2 1117)。SRG5基因的成功克隆表明 ,“数据库消减杂交”与实验验证相结合的技术路线是一种快捷高效的发现更多人类功能新基因的新策略。

关键词：基因克隆数据库消减杂交逆转录聚合酶反应睾丸组织特异表达

利用电子差异展示方法克隆人类睾丸特异性新基因

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方医科大学学报 2009年第4期29卷 631-634页

作者：尹光明阳建福蒋先镇汤育新何乐业蒋志强钟狂飙曾青中南大学湘雅第三医院泌尿外科湖南长沙410013

目的克隆一个新的人睾丸特异性基因。方法运用电子差异展示方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群Hs.180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达。然后从包含该重... 详细信息

目的克隆一个新的人睾丸特异性基因。方法运用电子差异展示方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群Hs.180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发,采用生物信息学方法克隆一个人类新基因的全长cDNA序列。结果新基因全长1197bp,开放阅读框为504～806bp,定位于6p21.1-p21.2,编码由100个氨基酸组成,相对分子质量为10000,等电点为6.81的一个蛋白,该蛋白与已知蛋白无同源性。克隆实验验证该基因阅读框完全正确,推测其可能与精子生成相关,暂命名为TDRG1(testis development related gene1),GenBank登录号为DQ168992。结论电子差异展示方法与实验验证相结合用于发现人类功能新基因是行之有效的。

关键词：基因克隆电子差异展示逆转录聚合酶反应睾丸组织特异表达

人血小板反应素-1活性片段的克隆与序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

四川大学学报（医学版） 2003年第2期34卷 203-206页

作者：陈尧张义正四川大学基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041 四川大学生命科学院

目的　为研究抗肿瘤基因工程药物的表达奠定基础。方法　根据 Genbank中人血小板反应素 - 1(TSP- 1) m RNA序列 ,设计和合成了两对特异引物 ,利用逆转录聚合酶反应扩增出人 TSP- 1中的两个活性片段 ,大小分别为 72 8bp和 2 5 7bp,分别... 详细信息

目的　为研究抗肿瘤基因工程药物的表达奠定基础。方法　根据 Genbank中人血小板反应素 - 1(TSP- 1) m RNA序列 ,设计和合成了两对特异引物 ,利用逆转录聚合酶反应扩增出人 TSP- 1中的两个活性片段 ,大小分别为 72 8bp和 2 5 7bp,分别命名为 TSP- 1- 和 TSP- 1- 。将此片段纯化后插入 PMDT载体。结果　限制酶切分析表明 :这两个片段已插入载体中 ,其大小与预期值相符。序列分析显示 :TSP- 1- 长 72 8bp,编码的多肽长2 12个氨基酸残基 ,推测其相对分子质量为 2 3.6× 10 3;TSP- 1- 长 2 5 7bp,编码的多肽长 86个氨基酸残基 ,推测其相对分子质量为 9.5× 10 3。结论　同源性分析表明 :TSP- 1- 和 TSP- 1- 与 Genbank中的 TSP-

关键词：血小板反应素-1 逆转录聚合酶反应克隆序列分析

一个新的人类睾丸特异性基因-TDRG1的cDNA克隆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国男科学杂志 2006年第7期20卷 3-8页

作者：蒋先镇阳建福汤育新谭小军李辉张向阳吴畏中南大学湘雅三医院泌尿外科中南大学生殖与干细胞工程研究中心中南大学肿瘤研究所中南大学湘雅医院泌尿外科

目的克隆一个新的人睾丸特异性基因。方法运用“数据库消减杂交”(Digital Differential Display,DDD)方法筛选人类睾丸特异表达新基囚,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重替群Hs．180197进行多组织RT-PCR验证... 详细信息

目的克隆一个新的人睾丸特异性基因。方法运用“数据库消减杂交”(Digital Differential Display,DDD)方法筛选人类睾丸特异表达新基囚,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重替群Hs．180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发,采用生物信息学的方法克隆一个人类新基因的全长cDNA序列。结果新基因全长1197bp,开放阅读框为504～806bp,定位于6p21．1-p21．2,编码由100个氨基酸组成,分子量为10KD,等电点为6．81的一个蛋白,该蛋白与已知蛋白无同源性。克隆实验验证该基因阅读框完全正确,推测其可能与精子生成相关,暂命名为TDRGI(Testis Development Related Gene 1),GenBank登录号为DQ168992。结论“数据库消减杂交”与实验验证相结合用于发现更多人类功能新基因是行之有效的。

关键词：基因克隆数据库消减杂交逆转录聚合酶反应睾丸组织特异表达

IL-4变异体表达载体的构建及其在真核细胞BHK-21的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国妇幼保健 2007年第34期22卷 4920-4922页

作者：王桂兰鲁继荣广东省中山市博爱医院儿内科 528403 吉林大学第一医院儿内一科

目的:构建具有拮抗IL-4作用的IL-4变异体(IL-4RA)的真核表达载体,并通过真核细胞表达变异蛋白。方法:设计突变引物,从小鼠的PBMC细胞提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的片断,将该片断构建在真核表达载体上,并在真核细胞BHK-21中表达,通过Elis... 详细信息

目的:构建具有拮抗IL-4作用的IL-4变异体(IL-4RA)的真核表达载体,并通过真核细胞表达变异蛋白。方法:设计突变引物,从小鼠的PBMC细胞提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的片断,将该片断构建在真核表达载体上,并在真核细胞BHK-21中表达,通过Elisa方法检测IL-4变异体蛋白的表达。结果:通过测序分析及限制性酶切鉴定,采用RT-PCR成功的完成了IL-4RA的扩增和表达载体的构建,重组载体转染真核细胞后在上清中检测到IL-4RA的表达。结论:经构建含有目的基因(IL-4RA)的逆转录病毒载体,能够成功的在真核细胞BHK-21中表达出IL-4RA。

关键词： IL-4RA 逆转录病毒载体逆转录聚合酶反应基因重组真核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生长抑素受体2在结直肠癌中的表达

中国临床药理学与治疗学 2013年第10期18卷 1100-1105页

作者：程元光吴佩安徽医科大学第三附院胃肠外科合肥市第一人民医院皖南医学院附属弋矶山医院普外科

目的:检测生长抑素Ⅱ型受体(SSR2)mRNA在结直肠癌组织中的表达并研究其在结直肠癌发生、发展中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法检测37例结直肠癌患者癌远旁黏膜、癌近旁黏膜、肿瘤组织中SSR... 详细信息

目的:检测生长抑素Ⅱ型受体(SSR2)mRNA在结直肠癌组织中的表达并研究其在结直肠癌发生、发展中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)方法检测37例结直肠癌患者癌远旁黏膜、癌近旁黏膜、肿瘤组织中SSR2mRNA的表达情况,分析不同组织表达阳性率及表达强度的差别。结果:SSR2mRNA在癌远旁黏膜、癌近旁黏膜、癌组织表达阳性率分别为100%、91.9%、83.8%,表达阳性率差异有统计学意义(P=0.038),结直肠癌组织中SSR2mRNA表达强度明显低于正常黏膜(P=0.021)。在结直肠癌组织中SSR2mRNA的表达阳性率与肿瘤的分化程度、Dukes分期相关(P=0.021,P=0.005),其表达强度也与肿瘤的分化程度、Dukes分期相关(P=0.013,P=0.019),而其表达率及表达强度与病人年龄、性别、肿瘤大小、部位及血清CEA的水平无显著相关性。结论:SSR2mRNA在结直肠癌中表达明显降低,其表达率及表达强度与肿瘤的分化程度、Dukes分期相关,可能与肿瘤的发生、发展有一定的关联。

关键词：大肠癌生长抑素受体生长抑素受体2 逆转录聚合酶反应

乳腺癌前哨淋巴结术中与术后病理学评估方法的优化性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

乳腺癌前哨淋巴结术中与术后病理学评估方法的优化性研究

作者：陈嘉健复旦大学

学位级别：硕士

目的:第一部分将通过优化前哨淋巴结术中印片细胞学检测的方法,以提高前哨淋巴结活检术中病理学评估手段的灵敏度与准确性,减少术中检测假阴性的发生率,节约医疗资源与成本。第二部分将在术后同时利用免疫组化染色、逆转录聚合酶链反应... 详细信息

目的:第一部分将通过优化前哨淋巴结术中印片细胞学检测的方法,以提高前哨淋巴结活检术中病理学评估手段的灵敏度与准确性,减少术中检测假阴性的发生率,节约医疗资源与成本。第二部分将在术后同时利用免疫组化染色、逆转录聚合酶链反应以及流式细胞术检测前哨淋巴结内微转移情况,通过这三种方法分别与金标准的比较以及其三者间的比较,筛选出最佳的微转移检测技术,建立最佳的术后前哨淋巴结微转移评估的流程。方法:第一部分:前哨淋巴结术中印片细胞学检测的优化从2005年02月至2008年02月,有366例患者进入本研究,其术中所获取的前哨淋巴结采用传统的印片制片方式,即沿前哨淋巴结的长轴,间隔2.0～3.0毫米进行切割;从2008年03月至2009年01月,有122例患者参与本研究,其术中所获取的前哨淋巴结采用新的印片制片方法进行,即利用我们自行设计制造的前哨淋巴结切割器沿前哨淋巴结的短轴,间隔1.5毫米进行切割。连续切片H&E染色将作为术中病理学评估的金标准。第二部分:免疫组化染色、逆转录聚合酶反应以及流式细胞术在前哨淋巴结微转移检测中的应用自2008年03月至2009年03月,术中获取的前哨淋巴结应用前哨淋巴结切割器,间隔1.5mm进行切割,各切面进行印片后,将第3n-1片、第3n-2片以及第3n片分送不同的检测方法进行淋巴结病理学检测,其中第3n片送检连续切片H&E染色及免疫组化染色,第3n-1片送检逆转录-聚合酶链式反应检测,第3n-2片送检流式细胞术检测。结果第一部分:新的多切面印片细胞学检测的灵敏度、特异度以及准确性以病例数为计算单位分别为92.0%、99.0%以及97.5%,优于传统的印片制片方法。新的印片制片方法与传统的印片制片方法间对于宏转移的检出能力有显著差异(p=0.023)。导管内癌、导管内癌伴浸润以及浸润性导管癌以病例数为单位计算的淋巴结转移率分别为4.4%、12.5%以及31.3%。有97.7%的存在有前哨淋巴结转移的患者,其第一枚有转移的前哨淋巴结出现在术中所获取的前三枚前哨淋巴结中。第二部分:在所有的104枚前哨淋巴结中,连续切片H&E染色发现了11枚(10.6%)前哨淋巴结阳性,其中2枚(18.2%)前哨淋巴结为微转移。免疫组化染色证实这两枚前哨淋巴结为宏转移,并且进一步在H&E染色阴性的淋巴结中发现了11例微转移,1例宏转移。而RT-PCR以及流式细胞术分别在联合应用连续切片H&E染色和免疫组化染色均为阴性的淋巴结中检测出了5例(6.2%)与4例(4.9%)的淋巴结中存在有微小转移灶,其中有1例为RT-PCR与流式细胞术共同阳性。在所有的11例存在有微转移的前哨淋巴结中,有5枚前哨淋巴结,其患者同时存在有其他前哨淋巴结的转移。在免疫组化水平检测出的前哨淋巴结微转移,同一患者的其他淋巴结同时存在有转移的机会较前哨淋巴结阴性的患者高(p=0.007)。结论:第一部分:新的多切面印片细胞学检测方法优于传统的制片方法,尤其是在对于宏转移的检出能力上。只针对术中所获取的前三枚前哨淋巴结进行术中印片细胞学检测不会显著影响印片细胞学检测的准确性,还可降低病理科的工作负荷以及医疗成本。开放活检病理学诊断为单纯导管内癌的患者可以考虑省去术中前哨淋巴结病理学评估的步骤。第二部分:连续切片免疫组化染色的灵敏度高于H&E染色,RT-PCR与流式细胞术的灵敏度更高于免疫组化染色,但目前并不能证实由RT-PCR或流式细胞术所检出的转移灶是否为真阳性,故连续切片免疫组化染色仍建议为术后前哨淋巴结病理学检验的金标准,而由后两者所检出的患者需要进行密切的腋窝随访。免疫组化染色检验水平检出的前哨淋巴结中存在有微转移的患者,其他前哨淋巴结中同时存在有转移或微转移的可能性较高,所以建议术中前哨淋巴结活检术至少获取两枚前哨淋巴结,以提高准确性。

关键词：乳腺肿瘤前哨淋巴结印片细胞学检测连续切片免疫组化染色逆转录聚合酶反应流式细胞术微转移

参附联合白细胞介素10基因转染抑制机械通气肺损伤的实验研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

参附联合白细胞介素10基因转染抑制机械通气肺损伤的实验研究

作者：罗辉广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:机械通气(mechanical ventilation,MV)已广泛应用于手术麻醉、危重病医学、急诊医学、内科学等多个临床领域,但使用呼吸机本身所引起的机械通气肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI),亦成为影响危重病患者预后的重要因素... 详细信息

目的:机械通气(mechanical ventilation,MV)已广泛应用于手术麻醉、危重病医学、急诊医学、内科学等多个临床领域,但使用呼吸机本身所引起的机械通气肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI),亦成为影响危重病患者预后的重要因素之一。本研究观察参附注射液(shenfu injection,SFI)联合IL-10基因转染对VILI中炎性因子和抗炎因子释放的影响。并采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肺组织中IL-10、ICAM-1mRNA的表达,同时观察肺组织形态学变化,以对该治疗方法进行评价,为给临床防治机械通气肺损伤提供新的实验性理论依据。方法:将66只SD雄性健康大鼠随机分为11组,每组6只。A组为空白对照组;L组为低压力组(气道压力设为15cmHO),根据通气时间分为2小时组(L)和4小时组(L);H组为高压力组(气道压力设为25cmHO),根据通气时间分为2小时组(H)和4小时组(H);B组为空白病毒转染组(气道压力设为25cmHO),根据通气时间分为2小时组(B)和4小时组(B);T组为IL-10基因转染组(气道压力设为25cmHO),根据通气时间分为2小时组(T)和4小时组(T);C组为参附联合IL-10基因转染组(气道压力设为25cmHO),根据通气时间分为2小时组(C)和4小时组(C)。处理组大鼠以10%的水合氯醛0.3g/kg行腹腔注射麻醉,于颈部正中气管切开行气管插管,机械通气的条件下于胸骨左缘3、4肋间开胸,于右心室注射进行转染,其中L、H组为乳酸钠林格液,B组为空白病毒,T和C组都为含IL-10的腺病毒(剂量均为0.1ml)。关胸后每日肌肉注射青霉素10万单位预防感染。转染48小时后,重新切开气管插管进行持续机械通气,通气过程中根据体动酌情追加麻醉药。C组在机械通气前30分钟前腹腔注射参附注射液10ml/kg预处理。通气结束后,取三块肺组织,分别待做光镜、电镜和RT-PCR检测。RT-PCR技术检测得到IL-10mRNA和ICAM-1mRNA的表达含量。所有数据均以均数±标准差((?)±s)表示,各组间比较采用独立样本t检验,组内比较采用配对t检验,应用SPSS13.0统计分析软件对实验数据进行统计学处理,P＜0.05为有统计学意义。结果:(1)光镜检查结果显示:光镜下A组肺泡结构未见异常,L组肺泡腔内略有渗出、血管周围有少量炎症细胞,随通气时间延长病变加重,H、B上述病理变化较重,T、C组上述病理变化较轻;(2)电镜结果显示:A组肺组织中Ⅰ型细胞、Ⅱ型细胞及内皮细胞结构完整,无明显异常;L、H、B、T、C组均可见不同程度的线粒体肿胀、脱落、嵴消失,内质网扩张,细胞核变大,细胞核与细胞质间隙增宽,染色质分布不均匀,板层小体肿胀,微绒毛减少;L组变化较轻,H、B组较为严重,T、C较H、B组减轻。(3)RT-PCR检测结果显示:①A组肺组织中有少量的IL-10和ICAM-1mRNA表达;②肺组织中IL-10和ICAM-1mRNA表达的含量,L组、H组、B组、T、C组均高于A组(P＜0.01);③肺组织中ICAM-1mRNA表达的含量,相同通气压力下,随着通气时间延长,L、H、B、T组肺组织中ICAM-1mRNA表达的含量明显增加(P＜0.05),而C组相反,C明显低于C(P＜0.01);相同通气时间下,ICAM-1mRNA表达的含量H组较L组明显增多(P＜0.01),T、C组较B组明显减少(P＜0.05或P＜0.01);C组与T组比较,C和T没有明显差异,而C比T明显减少(P＜0.01)。④肺组织中IL-10mRNA表达的含量,相同通气压力下,随着通气时间延长,L、H、B、T组肺组织中IL-10mRNA表达的含量明显增加(P＜0.05),而C组相反,C比C明显减少(P＜0.01);相同通气时间下,肺组织中IL-10mRNA表达的含量H组较L组明显增多(P＜0.05或0.01),B、C组较T组明显较少(P＜0.01);而C组与B组比较,C明显高于B(P＜0.05),而C明显低于B(P＜0.01)。结论:①相同通气压力下,VILI大鼠肺组织中ICAM-1和IL-10的表达随通气时间延长而增加;②相同通气时间下,VILI大鼠肺组织中ICAM-1和IL-10的表达随通气压力升高而增加;③通过IL-10基因转染能够减轻VILI大鼠肺组织水肿及炎性细胞浸润,使VILI大鼠肺组织中ICAM-1表达下调,同时IL-10表达上调,从而可以提高肺组织抗炎能力,减轻肺组织损伤;④通过参附联合IL-10基因转染能够改善VILI大鼠肺组织水肿及炎性细胞浸润,使VILI大鼠肺组织中ICAM-1,抑制抗炎因子IL-10的过度产生,促使促炎和抗炎因子达到平衡,起到免疫调节作用。

关键词：机械通气肺损伤参附注射液基因转染白介素10 逆转录聚合酶反应细胞间粘附因子1