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芒柄花素调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路影响卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

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沈阳药科大学学报 2021年第10期38卷 1068-1075页

作者：牛永莉贾晓波王艳酒泉市人民医院甘肃酒泉735000

目的研究芒柄花素对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-19b-3p/转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)/Smad2信号通路相关。方法采用噻唑蓝法、transwell实验、流式细胞术分析不同浓... 详细信息

目的研究芒柄花素对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-19b-3p/转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)/Smad2信号通路相关。方法采用噻唑蓝法、transwell实验、流式细胞术分析不同浓度(35、70、140μmol·L^(-1))的芒柄花素对卵巢癌细胞SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。实时定量PCR分析miR-19b-3p表达。采用上述方法检测过表达或抑制miR-19b-3p对SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。免疫印迹法检测TGF-β和Smad2蛋白表达量。结果35、70、140μmol·L^(-1)的芒柄花素处理显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调miR-19b-3p表达。过表达miR-19b-3p显著增加SKOV3细胞活力、迁移和侵袭数量,降低细胞凋亡率,上调TGF-β和Smad2蛋白表达量。抑制miR-19b-3p表达显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调TGF-β和Smad2蛋白表达量。140μmol·L^(-1)的芒柄花素显著抑制TGF-β和Smad2蛋白表达量。过表达miR-19b-3p可显著减弱芒柄花素处理对SKOV3细胞增殖、迁移侵袭、凋亡以及TGF-β和Smad2蛋白表达的影响。结论芒柄花素可抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用可能与调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路有关。

关键词：芒柄花素卵巢癌细胞增殖迁移侵袭凋亡 miR-19b-3p TGF-β/Smad2

氧化应激介导的自噬在镉诱导A549细胞增殖、迁移和侵袭中作用机制的研究

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氧化应激介导的自噬在镉诱导A549细胞增殖、迁移和侵袭中作用机制...

作者：谢华颖大连医科大学

学位级别：硕士

镉(Cadmium)是一种广泛应用于工农业生产的有毒重金属,随着近年来越来越多有关镉污染的报道,人们也越来越关注镉对环境和人类的健康造成的影响。镉能对多个器官系统造成巨大的危害,包括肾、肝、脑、肺、睾丸及血液等。流行病学研究和动... 详细信息

镉(Cadmium)是一种广泛应用于工农业生产的有毒重金属,随着近年来越来越多有关镉污染的报道,人们也越来越关注镉对环境和人类的健康造成的影响。镉能对多个器官系统造成巨大的危害,包括肾、肝、脑、肺、睾丸及血液等。流行病学研究和动物实验研究中明确了镉暴露与多种肿瘤有相关性,尤其是镉与肺癌有明显的关联性,1993年IARC(国际肿瘤研究中心)将镉列为Ⅰ类致癌物。研究表明,许多癌症和肿瘤晚期的转移和恶化可能与肿瘤细胞自噬水平改变有关。自噬通过包裹细胞质内的蛋白质和衰老细胞器形成具有双层膜结构的自噬小体进行降解物质实现循环利用,这一过程受自噬相关蛋白(Atg)的逐级调节,随后自噬体与溶酶体融合后消化膜内容物产生合成大分子和代谢物的物质,为细胞提供能量来源。因此,本研究拟探讨低浓度镉诱导的自噬在镉诱导肿瘤发生中的可能分子机制。本研究拟以人肺腺癌A549细胞为体外实验模型,观察氯化镉对A549细胞的细胞增殖、细胞迁移和侵袭能力的影响;再通过观察细胞周期改变及Cyclin-D1表达、细胞内活性氧水平,自噬形成及相关蛋白的表达、细胞迁移侵袭能力变化及相关蛋白MMP-9蛋白表达,探讨可能的分子机制;并采用活性氧(ROS)的清除剂N-乙酰半胱氨酸NAC和Atg4 siRNA干预处理,进一步明确ROS上调Atg4引起的自噬在氯化镉诱导A549细胞的细胞增殖、细胞迁移和侵袭中的分子机制,为镉诱导肿瘤提供预防和治疗的理论依据。目的:研究低浓度氯化镉对人肺腺癌A549细胞的增殖、细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨依赖细胞内ROS的自噬途径在细胞增殖、细胞迁移和侵袭变化过程中的作用机制。方法:以人肺腺癌细胞(A549细胞)作为实验对象。按实验设计,将不同浓度氯化镉作用于A549细胞,应用MTT法测定A549细胞增殖率和不同实验干预剂NAC、3-MA和Atg4 siRNA预处理后氯化镉作用于A549细胞增殖率的变化。分别采用透射电镜和荧光显微镜测定A549细胞的自噬水平和自噬溶酶体膜电位的变化。用荧光显微镜观察经Cyto-ID?Green染色的自噬小体绿色荧光强度的改变。用2’,7’-二氯荧光素二乙酸盐(DCFH—DA)染色法,在荧光显微镜下观察氯化镉处理后A549细胞内活性氧(ROS)含量的变化,并用NAC预处理2小时,以明确细胞内ROS在氯化镉诱导细胞自噬和增殖中的作用。应用Transwell实验检测氯化镉作用后A549细胞的迁移和侵袭的能力改变。用流式细胞仪检测实验设计中不同实验处理组A549细胞生长周期的变化。运用RNA干扰(RNAi)技术,敲除A549细胞自噬相关基因4(ATG4),检测氯化镉所诱导的细胞自噬对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。用蛋白印迹法(Western Blot)检测本实验中自噬标志蛋白LC3蛋白、自噬相关蛋白Beclin-1和Atg4蛋白、细胞周期蛋白Cyclin D1以及MMP-9蛋白的表达量。用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行统计分析。结果:低浓度氯化镉作用A549细胞48小时后,诱导A549细胞的细胞增殖(P迁移和侵袭细胞数量增加,并且具有统计学意义。低浓度(2μM)氯化镉作用于A549细胞后,细胞内ROS含量增加,NAC预处理降低了氯化镉诱导的细胞内ROS水平的升高,表明氯化镉引起了A549细胞氧化应激反应,同时,NAC可以有效的抑制氯化镉的促增殖作用和下调由氯化镉诱导表达增加的自噬相关蛋白LC3和Atg4的表达量,表明氯化镉通过氧化应激诱导了细胞自噬和细胞增殖;自噬抑制剂3-MA和Atg4 siRNA不仅能够拮抗氯化镉作用诱导的自噬增加效应,还抑制了氯化镉对A549细胞的促增殖、迁移和侵袭能力,表明Atg4介导的自噬在氯化镉诱导的A549细胞的细胞增殖、迁移和侵袭中发挥了重要作用。结论:低浓度氯化镉通过诱导A549细胞内ROS水平升高、上调了Atg4蛋白表达而诱导了自噬,自噬在氯化镉引起的A549细胞的细胞增殖、细胞迁移和侵袭中发挥了重要作用。

关键词：氯化镉 Atg4 自噬增殖迁移侵袭

ADNP介导WNT/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移与侵袭

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ADNP介导WNT/β-catenin信号通路促进卵巢癌细胞迁移与侵袭

作者：胡媛媛湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:卵巢癌被视为女性生殖系统中最具挑战性的恶性肿瘤之一,由于其高度的侵袭性和早期阶段缺乏明显的症状和分子标志物而导致5年生存率极低,预后差,迫切需要开发有效的靶向治疗策略。活性依赖性神经保护蛋白(ADNP)是一种转录因子,定位... 详细信息

背景:卵巢癌被视为女性生殖系统中最具挑战性的恶性肿瘤之一,由于其高度的侵袭性和早期阶段缺乏明显的症状和分子标志物而导致5年生存率极低,预后差,迫切需要开发有效的靶向治疗策略。活性依赖性神经保护蛋白(ADNP)是一种转录因子,定位于人类染色体20q12-13.2上,其与多种恶性肿瘤的发展有关,包括卵巢癌。该基因区域的扩增与肿瘤的侵袭性生长相关。研究发现ADNP与高级别浆液性卵巢癌的不良预后密切相关,并与多种肿瘤细胞转移过程中的上皮间充质转化(EMT)有关。前期研究发现ADNP的共表达基因主要富集在Wnt通路,而多项研究表明Wnt/β-catenin通路在卵巢癌中被过度激活,是调控EMT的主要信号通路,基于此,我们假设ADNP通过调节Wnt/β-catenin信号途径来影响人卵巢癌细胞的上皮-间质转化(EMT),进而改变卵巢癌的侵袭性和迁移能力。目的:此次研究主要是为了探讨ADNP对人卵巢癌细胞上皮间充质转化的影响及参与侵袭转移的可能调控机制。方法:使用生物信息学方法分析ADNP与卵巢癌预后、病理分期的关系,对A DNP共表达基因的进行KEGG富集。在本研究中,使用实时荧光定量PCR(qRT-P CR)和Western blot对正常人卵巢上皮细胞系IOSE80与人卵巢癌细胞系A2780和S KOV3中ADNP的m RNA和蛋白表达水平进行了检测。选定A2780和SKOV3细胞系进行深入实验,通过ADNP特异性小干扰RNA(si RNA)对细胞进行瞬时转染,设置空白及阴性对照组,再次用qRT-PCR和Western blot分析各组细胞中ADNPm RNA和蛋白的表达水平,以筛选出最合适的两种RNA序列用于进一步实验。采用划痕实验和Transwell侵袭实验评估各组细胞的迁移和侵袭能力。qRT-PCR法和W estern blot法检测EMT标志蛋白E-cadherin、Vimentin和N-cadherin转录水平和蛋白水平的变化。通过qRT-PCR和Western blot法,我们检测了转录水平和蛋白水平上Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白p-GSK-3β、Wnt3a、GSK-3β以及β-catenin的表达变化,同时使用ELISA法检测各组细胞上清液中Wnt3a的含量。结果:1、生信分析表明ADNP与卵巢癌不良预后、病理分期有关,ADNP共表达基因主要富集在Wnt通路。2、相较于正常人卵巢上皮细胞,ADNP的m RNA和蛋白在A2780和SKOV3卵巢癌细胞系中的表达显著提高(P迁移率明显低于对照组(P侵袭实验显示,在A2780和SKOV3两种细胞中,24h、48h、72h干扰组si-ADNP1和si-ADNP3的细胞侵袭数量明显低于对照组(P迁移和侵袭。

关键词：活性依赖性神经保护蛋白卵巢癌上皮间充质转化 Wnt/β-catenin通路迁移侵袭

ABL2基因表达沉默对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响

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中华神经医学杂志 2015年第3期14卷 221-226页

作者：陈磊朱蒙于圣平张辰赵鹏飞周华海龙刘波李帅周星辰林雨杨学军天津医科大学总医院神经外科天津300052

目的研究非受体酪氨酸激酶ABL2基因表达沉默对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响及机制. 方法免疫组化染色检测正常脑组织和经病理证实的胶质母细胞瘤组织标本（分别来自天津医科大学总医院神经外科自2012年9月至2014年8月期间的癫痫、... 详细信息

目的研究非受体酪氨酸激酶ABL2基因表达沉默对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响及机制. 方法免疫组化染色检测正常脑组织和经病理证实的胶质母细胞瘤组织标本（分别来自天津医科大学总医院神经外科自2012年9月至2014年8月期间的癫痫、胶质瘤手术患者）中ABL2的表达.将携带ABL2抑制物核苷酸序列（shRNA-ABL2）、阴性对照核苷酸序列（shRNA-NC）的重组慢病毒转染体外培养的SNB19胶质瘤细胞,分别作为shRNA-ABL2组、shRNA-NC组,同时设不做任何处理的空白对照组,转染后48 h实时荧光定量PCR检测3组细胞ABL2 mRNA的表达;Western blotting检测3组细胞ABL2、皮层肌动蛋白、Y-421位点酪氨酸磷酸化的皮层肌动蛋白（pY-421 cortactin）的表达;划痕实验和Transwell实验评价各组细胞的迁移和侵袭能力;免疫荧光染色检测ABL2、皮层肌动蛋白在SNB19细胞中的定位情况. 结果免疫组化染色显示ABL2在正常脑组织中表达较低,在胶质母细胞瘤中表达则较高.与shRNA-NC组、空白对照组比较,转染后shRNA-ABL2组细胞ABL2 mRNA和蛋白、pY421 cortactin蛋白的表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;划痕实验显示shRNA-ABL2组细胞迁移数（72.33 ±7.64）少于shRNA-NC组、空白对照组（187.67±5.03、190.33±7.23）,Transwell实验显示shRNA-ABL2组穿膜细胞数低于shRNA-NC组、空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光染色结果显示ABL2与皮层肌动蛋白在细胞前端伪足处共定位. 结论 ABL2在胶质母细胞瘤组织中表达较正常脑组织高.沉默ABL2表达可能通过调节pY-421 cortactin的水平来抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭.

关键词：神经胶质瘤 ABL2 皮层肌动蛋白迁移侵袭

敲低皮层肌动蛋白的表达下降胶质瘤细胞迁移和侵袭能力

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中华神经医学杂志 2014年第4期13卷 325-329页

作者：王垒垒赵恺朱蒙任炳成刘志峰于圣平赵鹏飞周华张辰陈磊明浩朗杨学军天津医科大学总医院神经外科天津300052

目的探讨运用特异性干扰RNA抑制皮层肌动蛋白表达后对人胶质瘤细胞迁移、侵袭能力的影响。方法免疫组化染色检测天津医科大学总医院神经外科癫痫及胶质瘤手术治疗患者的正常脑组织及胶质母细胞瘤标本中皮层肌动蛋白的表达：体外常规培... 详细信息

目的探讨运用特异性干扰RNA抑制皮层肌动蛋白表达后对人胶质瘤细胞迁移、侵袭能力的影响。方法免疫组化染色检测天津医科大学总医院神经外科癫痫及胶质瘤手术治疗患者的正常脑组织及胶质母细胞瘤标本中皮层肌动蛋白的表达：体外常规培养人恶性胶质瘤细胞系U251并分为RNA干扰组、阴性对照组、空白对照组，分别转染干扰RNA序列、阴性对照序列及等量Lipofetmiane2000。48h后Westernblotting、免疫荧光染色检测3组细胞皮层肌动蛋白的表达：细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验评价细胞迁移、侵袭能力的高低。结果免疫组化染色检测显示皮层肌动蛋白在正常脑组织呈弱阳性表达。在胶质母细胞瘤为强阳性表达：Westernblotting检测显示RNA干扰组细胞皮层肌动蛋白表达低于空白对照组与阴性对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）；免疫荧光染色显示皮层肌动蛋白表达于细胞质特别是与细胞伪足密切相关的细胞膜周围。划痕实验结果显示RNA干扰组、空白对照组、阴性对照组迁移细胞数分别为18．17±4．07、94．00±4．33、92．67±5．24；Transwell细胞侵袭实验显示侵袭细胞数分别为31．25±2．98、125．00±4．57、127．00±3．56；与空白对照组与阴性对照组比较，RNA干扰组迁移、侵袭细胞数均减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论皮层肌动蛋白在胶质母细胞瘤组织中的表达高于正常脑组织。敲低U251细胞皮层肌动蛋白的表达后细胞的迁移、侵袭能力下降，提示皮层肌动蛋白可作为脑胶质瘤治疗的一个靶点。

关键词：神经胶质瘤皮层肌动蛋白 RNA干扰迁移侵袭

miR-132靶向Rab26调节MEK/ERK通路抑制神经胶质瘤U87MG细胞迁移和侵袭

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miR-132靶向Rab26调节MEK/ERK通路抑制神经胶质瘤U87MG细胞迁移和...

作者：王丹大连医科大学

学位级别：硕士

背景:神经胶质瘤又称为胶质瘤,是脑肿瘤中最常见的恶性肿瘤,约占颅内原发性肿瘤的50%,病死率较高。胶质瘤细胞的转移和侵袭是其致死的重要原因之一,因此恶性胶质瘤转移侵袭的机制是当前研究的热点,也是临床上非常棘手的问题。微小RNA(Mi... 详细信息

背景:神经胶质瘤又称为胶质瘤,是脑肿瘤中最常见的恶性肿瘤,约占颅内原发性肿瘤的50%,病死率较高。胶质瘤细胞的转移和侵袭是其致死的重要原因之一,因此恶性胶质瘤转移侵袭的机制是当前研究的热点,也是临床上非常棘手的问题。微小RNA(Micro RNA,mi RNA)是长度约为22nt的内源性非编码单链RNA分子,能够参与调控蛋白质的生物合成。mi RNA的作用方式主要是与靶序列完全或不完全互补,或是通过抑制下游靶基因的表达,进而调节对m RNA的降解作用以及蛋白质的翻译,从而达到对靶基因表达的负向调控作用。近年来,通过对mi RNA功能研究的不断深入,发现其与肿瘤的发生、发展密切相关。Rab蛋白是一类小分子GTP结合蛋白,属于Ras家族中最大的亚家族。研究表明,Rab蛋白在囊泡运输和细胞间信息传递中发挥着重要的作用。目前已经发现MEK/ERK信号通路的激活是多数肿瘤侵袭和转移的重要因素之一,此信号通路包括Ras小GTP结合蛋白和下游的丝氨酸/苏氨酸激酶Raf-1、MEK1/2丝裂原活化调节激酶和ERK1/2细胞外调节激酶。该通路可以激活转录因子AP-1家族(成员包括c-Jun和c-Fos),而c-Jun和c-Fos可以激活MMP-9的转录。MMP-9属于基质金属蛋白酶家族,主要功能是降解和重塑细胞外基质,在肿瘤转移和侵袭过程中发挥重要作用。目的:本实验室前期mi RNA芯片分析结果显示:经氯毒素(Chlorotoxin,CTX)处理神经胶质瘤细胞U87 MG后,mi R-132的表达量明显增高。在本研究中我们探讨高表达mi R-132对神经胶质瘤细胞迁移、侵袭的影响及其靶基因调控的相关信号通路,进而为神经胶质瘤的治疗提供新的分子靶点。方法:1.传代培养人神经胶质瘤细胞U87 MG,通过脂质体Lipofectamine 2000转染mi R-132 mimics上调mi R-132的表达,并用Real-time PCR方法检测mi R-132的转染效率。2.采用Transwell小室法检测高表达mi R-132对U87 MG细胞迁移、侵袭能力的变化。3.利用Target Scan预测mi R-132的靶基因并用双荧光素酶报告系统验证mi R-132的靶基因。4.利用Real-time PCR及细胞免疫荧光技术检测mi R-132靶基因m RNA和蛋白的表达量。*** blotting检测mi R-132过表达后靶基因Rab26的蛋白表达水平及MEK/ERK信号通路相关蛋白的变化。结果:*** R-132 mimics通过脂质体成功转染进入U87 MG细胞中,Real-time PCR显示mi R-132的含量明显上升。2.U87 MG细胞转染mi R-132 mimics后迁移和侵袭能力呈明显的下降趋势。*** Scan预测出Rab26是mi R-132的潜在靶点,成功构建野生型和突变型的Rab26基因的双荧光素酶报告质粒。4.运用双荧光素酶报告系统验证了Rab 26基因是mi R-132的直接靶点。5.U87 MG细胞中转染mi R-132 mimics后Rab 26的m RNA和蛋白表达都下降。*** blotting结果显示转染mi R-132mimics后,迁移侵袭相关蛋白MMP-9表达下降,c-jun(AP-1),p-MEK、p-ERK、p-Raf表达下调。结论:1.高表达mi R-132能够抑制神经胶质瘤细胞U87MG的迁移和侵袭能力。*** R-132能够直接靶向Rab26,并抑制其表达。3.过表达mi R-132后神经胶质瘤细胞U87 MG中的MMP-9表达降低,mi R-132可以抑制细胞迁移信号通路MEK/ERK相关蛋白的表达。

关键词： U87MG miR-132 迁移侵袭 Rab26 MEK/ERK通路

Circ＿0001809对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力和凋亡的影响

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Circ＿0001809对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力和凋亡的影响

作者：邹勇成南华大学

学位级别：硕士

目的:通过研究circ＿0001809对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力和凋亡的影响,阐明circ＿0001809在骨肉瘤进展中的作用。方法:以骨肉瘤患者临床标本(肿瘤组织及癌旁组织)及体外培养骨肉瘤细胞MG-63、Saos-2和人正常成骨细胞h FOB1.19作... 详细信息

目的:通过研究circ＿0001809对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力和凋亡的影响,阐明circ＿0001809在骨肉瘤进展中的作用。方法:以骨肉瘤患者临床标本(肿瘤组织及癌旁组织)及体外培养骨肉瘤细胞MG-63、Saos-2和人正常成骨细胞h FOB1.19作为研究对象,通过q RT-PCR技术检测临床标本中circ＿0001809的表达水平;应用PCR检测细胞中circ＿0001809的表达水平。分别将si-circ＿0001809和p CMV-circ＿0001809转染至MG-63和Saos-2细胞,通过CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞技术检测MG-63和Saos-2细胞增殖、迁移、侵袭能力及凋亡。结果:1.骨肉瘤组织临床样本中circ＿0001809的表达水平明显高于癌旁组织(P迁移(P迁移(P迁移(P侵袭(P迁移(P侵袭(P迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。

关键词： Circ_0001809 骨肉瘤增殖迁移侵袭凋亡

铌酸钾钠压电材料在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制

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铌酸钾钠压电材料在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及机制

作者：郝玲华南理工大学

学位级别：硕士

乳腺癌是全球发病率最高的癌症,也是女性癌症患者死亡最常见的原因。对于乳腺癌患者而言,转移才是其发生发展中最难以控制的阶段,也是造成90%以上乳腺癌患者死于实体瘤的主要原因。对乳腺癌运动能力的抑制以及有效的抗乳腺癌方法将大大... 详细信息

乳腺癌是全球发病率最高的癌症,也是女性癌症患者死亡最常见的原因。对于乳腺癌患者而言,转移才是其发生发展中最难以控制的阶段,也是造成90%以上乳腺癌患者死于实体瘤的主要原因。对乳腺癌运动能力的抑制以及有效的抗乳腺癌方法将大大缓解乳腺癌带来的经济与社会负担。因此,基于材料表面带电特性对细胞行为调控的重要作用及现阶段电刺激用于肿瘤治疗的局限性,本文利用具有稳定可调表面带电特性的铌酸钾钠(KNN)块体压电陶瓷研究材料表面电势对乳腺癌细胞迁移侵袭行为的影响及机制;并利用超声促进极化KNN压电纳米颗粒产生无源、可控的电刺激,研究对乳腺癌细胞活性抑制作用及机制。主要研究内容如下:***表面电势会影响乳腺癌细胞的运动行为并对骨架系统产生影响。利用KNN块体陶瓷良好的铁电性能,通过可控的极化手段获取具有不同表面电势,但表面形貌、成分及化学结构未发生改变的KNN样品,并以此为模型探究材料表面带电差异对细胞运动行为的影响。实验发现与未极化的KNN样品相比,极化使材料具有更高的表面电势时对正常细胞的运动潜能具有轻微的促进趋势,但对癌细胞具有抑制作用,尤其是极化后压电常数为80 p C/N的高表面电势80KNN样品能够极其显著的抑制2种乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力;进一步通过免疫荧光染色及实时定量聚合酶链式反应(PCR)发现可能的原因是材料表面高电势抑制乳腺癌细胞极化,改变微管聚集状态,促进细胞扁平状形态结构的形成和强黏附的形成。2.超声辅助极化KNN压电纳米颗粒共同作用于乳腺癌细胞可以达到良好的抑制癌细胞活性的作用。实验使用具有良好压电性能的极化KNN纳米颗粒,配置不同浓度后与BMSC共培养,选用对BMSC具有良好生物相容性且浓度较高的400μg/m L的极化KNN进一步实验。将超声和极化KNN颗粒共同作用于乳腺癌细胞后,对其进行存活率检测、死活染色和形态观察。结果表明当两者共同作用24 h时,高转移性的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231存活率低至30%左右,低转移性的非三阴性乳腺癌细胞MCF-7存活率低至35%左右,并且2种癌细胞的骨架结构遭到完全破坏,运动能力完全丧失。实验进一步表明可能的机制是其作用于乳腺癌细胞时,会造成氧化还原失衡,过量活性氧(ROS)产生并促进癌细胞的凋亡与坏死。

关键词：铌酸钾钠电信号乳腺癌迁移侵袭细胞活性

TRIP13通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

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TRIP13通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

作者：赵字担蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:分析甲状腺激素受体因子13(Thyroid hormone receptor interactor,TRIP13)在胃癌组织中的表达及其临床意义,探讨其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:从TCGA和GEO数据库下载相关数据集,探索TRIP13在胃癌组... 详细信息

目的:分析甲状腺激素受体因子13(Thyroid hormone receptor interactor,TRIP13)在胃癌组织中的表达及其临床意义,探讨其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:从TCGA和GEO数据库下载相关数据集,探索TRIP13在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达;收集临床手术切除的胃癌及对应的癌旁组织,Western blot、IHC和q RT-PCR检测TRIP13在人胃癌及邻近的癌旁组织中的表达差异,并进一步分析其m RNA表达水平与胃癌患者临床相关性特征之间的相关性;Western blot和q RT-PCR检测TRIP13在人胃癌细胞系与正常胃粘膜细胞系中的表达差异;TRIP13小干扰RNA(si RNA)瞬时转染胃癌细胞MGC803和BGC823,通过CCK-8、克隆形成、Ed U和Transwell等实验探索沉默TRIP13后对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;通过慢病毒序列载体构建稳定转录的沉默TRIP13胃癌细胞系,建立动物实验模型(裸鼠皮下成瘤、尾静脉注射成瘤),继续探索TRIP13对胃癌细胞增殖、转移的影响;最后通过GSEA分析TRIP13可能影响PI3K/AKT/m TOR信号通路,Western blot实验探索TRIP13下游信号通路及其作用机制。结果:分析TCGA和GEO数据库中胃癌组织和胃黏膜组织中m RNA表达谱数据显示,TRIP13在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。q RT-PCR分析52对胃癌及其对应的癌旁组织中TRIP13 m RNA的表达水平,结果表明,TRIP13在胃癌组织中高于对应的癌旁组织。Western印迹检测8对人胃癌及对应的癌旁组织标本中TRIP13蛋白的表达显示,与癌旁胃黏膜组织相比,胃癌组织中TRIP13表达升高。IHC结果显示TRIP13在胃癌组织中高于相应的癌旁组织;TRIP13的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期显著正相关;Western印迹和q RT-PCR分析胃癌细胞系中TRIP13的表达水平,相比于正常胃黏膜上皮细胞(GSE-1),胃癌细胞中TRIP13表达水平升高。CCK-8、克隆形成、Ed U实验和裸鼠胃癌细胞种植皮下成瘤实验结果表明:与对照组细胞相比,沉默TRIP13后胃癌细胞的增殖能力显著降低.。Transwell实验和裸鼠尾静脉胃癌细胞注射转移模型表明,沉默TRIP13后胃癌细胞的迁移和侵袭能力显著降低。我们进一步通过Western印迹结果发现,沉默TRIP13后胃癌细胞中PI3K/AKT/m TOR通路相关蛋白显著降低,PI3K/AKT/m TOR信号通路显著抑制。结论:TRIP13在胃癌组织和细胞系中高表达,TRIP13高表达与胃癌患者的恶性进展相关;TRIP13可通过正向调控PI3K/AKT/m TOR信号通路促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词：胃癌 TRIP13 增殖迁移侵袭 PI3K/AKT/mTOR