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玄丹散结汤对腺肌症在位内膜间质细胞迁移侵袭能力的影响及机制初探

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玄丹散结汤对腺肌症在位内膜间质细胞迁移侵袭能力的影响及机制初...

作者：秦榕霞南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:采用血清药理学方法,研究玄丹散结汤对子宫腺肌症在位内膜间质细胞迁移、侵袭能力及间质上皮转化(Mesenchymal-epithelial transition,MET)样表型变化的影响,并初步探讨玄丹散结汤治疗子宫腺肌症的具体分子机制,为临床治疗子宫腺... 详细信息

目的:采用血清药理学方法,研究玄丹散结汤对子宫腺肌症在位内膜间质细胞迁移、侵袭能力及间质上皮转化(Mesenchymal-epithelial transition,MET)样表型变化的影响,并初步探讨玄丹散结汤治疗子宫腺肌症的具体分子机制,为临床治疗子宫腺肌症提供实验论证和理论基础。方法:1.给SD雌性大鼠灌胃,采血制备玄丹散结汤含药血清、孕三烯酮含药血清及空白对照血清,分装保存备用。2.收集子宫腺肌症患者的在位子宫内膜,体外分离培养腺肌症在位内膜间质细胞。***细胞迁移和侵袭实验检测玄丹散结汤含药血清对腺肌症在位内膜间质细胞迁移、侵袭能力的影响,筛选出玄丹散结汤含药血清优效抑制浓度,并以此浓度进行后续实验。4.显微镜下观察玄丹散结汤含药血清作用于腺肌症在位内膜间质细胞后,细胞MET样表型变化情况。***-PCR法检测玄丹散结汤含药血清作用于腺肌症在位内膜间质细胞后,迁移侵袭基因 AQP5、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9 等 mRNA 的表达情况。*** Blot法检测玄丹散结汤含药血清作用于腺肌症在位内膜间质细胞后,AQP5、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达情况。结果:1.本实验成功制备出玄丹散结汤含药血清、孕三烯酮含药血清和空白对照血清,保存于-80℃冰箱待用。2.本实验成功体外分离培养出腺肌症在位内膜间质细胞(Eutopic endometrial stromal cells,EuESCs)并传代成功,可进行后续相关实验。3.与空白对照血清相比,孕三烯酮含药血清和2.5%、5%、10%浓度玄丹散结汤含药血清均可以抑制腺肌症在位内膜间质细胞的迁移侵袭能力,差异有统计学意义(P迁移、侵袭的细胞数最少(P=0.0002)。10%浓度玄丹散结汤含药血清抑制能力强于孕三烯酮含药血清,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.玄丹散结汤可抑制腺肌症在位内膜间质细胞的迁移侵袭能力,且抑制能力在一定范围内呈浓度依赖性。2.玄丹散结汤可改变腺肌症在位内膜间质细胞形态,使其向上皮细胞转化,发生MET样表型变化,可能逆转了上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程。3.玄丹散结汤可能靶向下调AQP5,通过抑制PI3K/AKT和ERK通路活化,发生MET 样表型变化,降低 N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9mRNA 和蛋白的表达,上调E-cadherinmRNA和蛋白的表达,抑制腺肌症在位内膜间质细胞迁移侵袭能力从而发挥治疗作用。

关键词：子宫腺肌症玄丹散结汤 AQP5 上皮间质转化迁移侵袭

组蛋白去甲基化酶KDM6A对胶质母细胞瘤迁移侵袭的影响及机制研究

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组蛋白去甲基化酶KDM6A对胶质母细胞瘤迁移侵袭的影响及机制研究

作者：彭诚西南大学

学位级别：硕士

胶质瘤(glioma)是最常见的原发性颅内肿瘤,按恶性程度分为I-IV四个级别,其中胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是恶性程度最高的IV级胶质瘤。GBM患者的预后差,生存率低。术后GBM患者的标准治疗方法是放疗联合化疗,然而,GBM患者的平均生存... 详细信息

胶质瘤(glioma)是最常见的原发性颅内肿瘤,按恶性程度分为I-IV四个级别,其中胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是恶性程度最高的IV级胶质瘤。GBM患者的预后差,生存率低。术后GBM患者的标准治疗方法是放疗联合化疗,然而,GBM患者的平均生存率仍低于20个月。因此,探索GBM的发病机制,寻找新的治疗靶点对GBM的防治具有重要的临床意义。KDM6A(也称UTX),是一种组蛋白去甲基化酶,其包含一个Jmj C结构域,该结构域具有组蛋白H3第27位赖氨酸(H3K27)去甲基化酶活性。KDM6A在膀胱癌,乳腺癌等多种疾病中起着重要作用。高侵袭性是GBM的重要特征之一,缺氧环境与GBM的侵袭性密切相关。缺氧环境会稳定Hif1α的表达,激活Snai2/CDH1轴促进迁移侵袭,还能增加肿瘤耐药性。虽然KDM6A在多种肿瘤发现抑制细胞迁移侵袭,并抑制癌症的发生,但是在GBM中研究的很少。本论文着重于探索KDM6A在GBM发展中扮演的角色,通过预后数据库分析KDM6A的表达对GBM患者的预后影响,多种实验方法探究KDM6A对GBM细胞增殖和体内外成瘤能力的影响,并对KDM6A调控GBM迁移侵袭的分子机制进行探究。最终阐释了KDM6A通过Hif1α-Snai2信号影响GBM迁移侵袭。丰富了KDM6A在GBM中的研究,为GBM治疗提供了新的思路。***6A过表达抑制胶质母细胞瘤生长和增殖为了探究KDM6A在GBM中扮演的角色,我们分析了KDM6A在GBM患者中的预后情况,发现KDM6A的低表达预示着GBM患者的预后差,这暗示KDM6A可以作为一个潜在的预后指标。为了探索KDM6A对胶质母细胞细胞增殖的影响。首先,我们首先检测sh KDM6A干涉效率和过表达KDM6A(OE-KDM6A)的效果。随后利用MTT实验,Edu实验检测KDM6A对GBM增殖的影响,发现KDM6A过表达会显著抑制GBM的增殖。利用平板克隆,Soft agar实验和原位成瘤H&E染色检测KDM6A后对GBM体内体外成瘤的影响,发现KDM6A显著抑制了体内体外成瘤能力。随后我们检测了KDM6A对GBM细胞周期进展的影响,发现KDM6A过表达会导致细胞周期阻滞在G1期,G1期周期蛋白的表达下调。GSEA富集与KDM6A表达相关的信号通路,发现KDM6A低表达与GBM细胞周期蛋白CCND1表达有关。AKT信号通路的过度激活会导致肿瘤异常增殖。为了探索KDM6A对AKT信号通路的调控。GSEA富集分析检测了KDM6A在AKT信号通路中的富集情况,发现KDM6A低表达与AKT信号通路正向富集。通过检测AKT信号通路蛋白,发现KDM6A过表达抑制了AKT信号通路,干涉KDM6A促进了AKT信号通路的激活。荧光定量PCR检测AKT上游抑制因子,发现KDM6A促进了AKT上游抑制因子的激活。综上所述,KDM6A高表达抑制胶质母细胞瘤增殖,造成细胞周期G1期阻滞和抑制AKT信号通路。***6A过表达抑制胶质母细胞瘤迁移侵袭能力GBM是一种侵袭性的原发肿瘤,为了探究KDM6A对GBM迁移侵袭的影响,利用Transwell和细胞划痕实验检测GBM迁移侵袭的变化,发现KDM6A高表达显著抑制GBM迁移侵袭。在过表达KDM6A后下调KDM6A的表达,发现下调KDM6A能部分恢复了GBM的迁移侵袭能力。随后免疫印迹实验检测KDM6A对GBM细胞迁移侵袭相关蛋白的影响,发现KDM6A显著抑制了GBM迁移侵袭相关蛋白的表达,干涉KDM6A可以激活迁移侵袭基因的表达。GSKJ-4能够抑制KDM6A的酶活性,为了进一步明确KDM6A是否通过其H3K27去甲基化酶活性调控迁移侵袭基因的转录,我们检测了GSKJ-4对GBM迁移侵袭相关蛋白的影响,发现GSKJ-4能够增强胶质母细胞瘤的迁移侵袭能力。以上结果表明KDM6A抑制GBM迁移侵袭能力,KDM6A的酶活性对GBM的迁移侵袭有一定程度的影响。***6A通过Hif1α-Snai2轴调控GBM迁移侵袭缺氧微环境是肿瘤中常见的现象,缺氧环境的产生会使肿瘤的侵袭性增加,促进肿瘤增殖和恶化。为了探究KDM6A受缺氧环境的影响,Co Cl处理GBM细胞模拟缺氧环境,利用免疫印迹实验检测缺氧环境对KDM6A的影响,发现在缺氧环境下,KDM6A的表达降低,而Hif1α的表达增加。据文献报道KDM6A可能参与Hif1α的转录,假设KDM6A转录抑制Hif1α的表达。随后免疫印迹实验检测KDM6A对Hif1α的作用,在缺氧环境下,KDM6A过表达阻碍了Hif1α的积累,RT-q PCR实验发现干涉KDM6A在一定程度上激活了Hif1α及其下游基因的转录。为了进一步探索KDM6A对Hif1α的调控,CHIP实验发现KDM6A转录结合Hif1α启动子。以上

关键词：胶质母细胞瘤 KDM6A 迁移侵袭 Snai2 Hif1α 转录调控

PARK2调控食管癌细胞迁移侵袭的机制研究

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PARK2调控食管癌细胞迁移侵袭的机制研究

作者：李亚杰新乡医学院

学位级别：硕士

背景:食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,全世界每年新发生的50余万食管患者中,一半以上发生在中国,且发生在中国的食管癌95%以上为食管鳞癌;河南林州市及其毗邻地区是中国也是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区。由于食管癌的发... 详细信息

背景:食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,全世界每年新发生的50余万食管患者中,一半以上发生在中国,且发生在中国的食管癌95%以上为食管鳞癌;河南林州市及其毗邻地区是中国也是世界上食管癌发病率和死亡率最高的地区。由于食管癌的发病机制不清,尽管食管癌的诊断和治疗取得了较大进展,但其五年总体生存率仍徘徊在15%左右。大约5,000个肿瘤基因组的分析显示,PARK2在人类多种肿瘤中发生表达缺失或下调。有研究表明PARK2控制细胞骨架细胞生长的动力学,并且PARK2缺失涉及肿瘤发生,但PARK2影响食管鳞癌细胞迁移侵袭的具体机制尚缺乏深入研究。目的:阐明PARK2对食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,为食管鳞癌的诊断和治疗靶点提供新的思路方法。方法:1.收集食管鳞癌患者临床资料及组织标本,通过免疫组化检测PARK2在食管鳞癌患者中的表达,明确PARK2表达与患者肿瘤TNM分期、淋巴结转移等病理指标的关系。2.通过CRISPR/Cas9基因编辑技术获得PARK2基因缺失的单克隆食管癌细胞株,通过q RT-PCR、Western Blot分别在m RNA及蛋白水平检测PARK2是否敲除成功。3.运用Transwell实验和划痕实验观察PARK2对食管癌细胞系迁移、侵袭能力的影响。4.运用慢病毒在食管癌细胞中过表达PARK2,通过裸鼠成瘤实验明确PARK2在体内对肿瘤增殖的影响。5.通过全基因组RNA测序明确PARK2调控食管癌具体作用机制的信号通路。6.通过核浆分离、免疫荧光共定位实验明确PARK2与YAP在食管癌细胞内的定位情况,及q RT-PCR检测PARK2缺失后YAP靶基因的表达。7.通过MG132、CHX及泛素化实验实验明确PARK2对YAP蛋白稳定性的影响。结果:1.食管鳞癌患者临床标本免疫组化结果提示PARK2在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织,PARK2的表达水平与患者肿瘤TNM分期及有无淋巴结转移呈负相关。2.通过CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得PARK2基因缺失的单克隆食管癌细胞系,PARK2缺失后其m RNA及蛋白水平显著降低。***和划痕实验证明PARK2缺失组与对照组相比细胞迁移、侵袭能力明显增强。4.裸鼠成瘤实验结果显示过表达组与对照组相比瘤块体积明显增大,PARK2过表达可抑制食管癌细胞增殖。5.全基因组RNA测序结果提示PARK2缺失后差异表达基因在Hippo通路显著富集,YAP靶基因显著上调。6.核浆分离、免疫荧光共定位实验证实PARK2与YAP在食管癌细胞内存在共定位,PARK2缺失后YAP靶基因m RNA水平明显上调,YAP蛋白水平显著升高。***132、CHX实验及泛素化实验证实PARK2可通过泛素化影响YAP蛋白的稳定性。结论:PARK2可泛素化降解Hippo通路核心效应蛋白YAP从而促进食管癌细胞增殖、迁移侵袭,从而为以后食管癌药物的靶向治疗提供新的思路与方法。

关键词： PARK2 YAP 食管癌迁移侵袭 E3泛素连接酶

RASSF1A基因对人胃癌SGC-7901细胞迁移侵袭影响

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RASSF1A基因对人胃癌SGC-7901细胞迁移侵袭影响

作者：徐艳清南华大学

学位级别：硕士

目的：探讨RASSF1A基因对人胃癌SGC-7901细胞迁移侵袭的影响及其分子机制。方法：采用瞬时转染法转染RASSF1A基因后，利用RT-PCR及Western Blot分别检测RASSF1A基因在人胃癌SGC-7901细胞中的mRNA及蛋白表达，验证转染效果;细胞划痕实验... 详细信息

目的：探讨RASSF1A基因对人胃癌SGC-7901细胞迁移侵袭的影响及其分子机制。方法：采用瞬时转染法转染RASSF1A基因后，利用RT-PCR及Western Blot分别检测RASSF1A基因在人胃癌SGC-7901细胞中的mRNA及蛋白表达，验证转染效果;细胞划痕实验、Transwell侵袭小室实验分别观察转染RASSF1A基因前后人胃癌SGC-7901细胞迁移与侵袭能力的变化，Western Blot检测转染RASSF1A基因前后人胃癌SGC-7901细胞E-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达的变化。结果：人胃癌SGC-7901细胞通过瞬时转染RASSF1A基因后，RT-PCR及WesternBlot结果发现，与未转染质粒组及pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比，转染pcDNA3.1(+)-RASSF1A质粒组RASSF1A基因mRNA及蛋白呈高表达，差异有统计学意义（P 迁移率明显降低，差异有统计学意义（P0.05），表明RASSF1A基因可抑制人胃癌SGC7-901细胞迁移能力;Transwell侵袭小室实验表明，转染pcDNA3.1(+)-RASSF1A质粒组穿膜细胞数量较对照组明显减少（P 侵袭能力减弱，而未转染质粒组及pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比，差异无明显变化（P>0.05）。Western Blot结果显示，与未转染质粒组及pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比，转染pcDNA3.1(+)-RASSF1A质粒组中上皮标志物E-cadherin蛋白表达呈上升趋势，间质标志物Vimentin及转录因子Snail蛋白的表达呈下降趋势（P0.05），提示RASSF1A基因可抑制人胃癌SGC-7901细胞EMT的发生。结论：RASSF1A基因可抑制人胃癌SGC-7901细胞迁移侵袭，其机制可能与RASSF1A基因下调转录因子Snail的表达，从而抑制人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化的发生相关。

关键词： RASSF1A基因 SGC-7901 Snail 上皮间质转化迁移侵袭

MTDH在脂多糖促进乳腺癌迁移侵袭中作用的研究

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MTDH在脂多糖促进乳腺癌迁移侵袭中作用的研究

作者：赵逾涵山东大学

学位级别：硕士

研究目的：乳腺癌是全世界范围内女性最常见的恶性肿瘤之一,而其发生浸润转移是预后较差的主要原因。炎症刺激在乳腺癌的浸润转移过程中起到重要的作用,临床研究发现乳腺实体肿瘤中存在炎症细胞的浸润,但目前对该现象及机制尚未明确。... 详细信息

研究目的：乳腺癌是全世界范围内女性最常见的恶性肿瘤之一,而其发生浸润转移是预后较差的主要原因。炎症刺激在乳腺癌的浸润转移过程中起到重要的作用,临床研究发现乳腺实体肿瘤中存在炎症细胞的浸润,但目前对该现象及机制尚未明确。我们前期研究发现Metadherin (MTDH)(?)乳腺癌的浸润转移中发挥着极其重要的作用,本实验拟通过脂多糖模拟炎症微环境,诱导乳腺癌细胞发生相应反应,研究MTDH在炎症反应过程中对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响,并初步探讨其具体的分子生物学机制。研究方法：通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time PCR)及免疫蛋白印迹法(Western blot)检测乳腺癌细胞系中LPS刺激后MTDH和Toll样受体4(TLR4)等mRNA及蛋白表达水平的变化。通过用shRNA的方法选取干扰序列,构建干扰载体,用脂质体2000的方法转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,沉默MTDH基因的表达,稳定筛选MTDH低表达的MDA-MB-231细胞系。通过细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验等方法检测MTDH基因沉默后,在脂多糖诱导的炎症反应中细胞迁移侵袭能力的改变。通过文献检索和Real time PCR和Western blot等方法筛选迁移侵袭的相关分子通路,初步阐明MTDH在炎症介导乳腺癌迁移侵袭过程中的分子生物学机制。结果：在TLR4阳性的乳腺癌细胞系MDA-MB-231, MDA-MB-468, MCF-7中, LPS的刺激后,MTDH的mRNA及蛋白表达水平均明显上调。通过研究MTDH沉默的乳腺癌细胞系MDA-MB-231,细胞划痕实验和Transwell实验结果显示：在无LPS刺激时,MTDH沉默的MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力较对照组明显下降;在加入LPS刺激时,MTDH沉默的MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力无明显改变,但对照组细胞迁移侵袭能力明显增强。以上结果说明MTDH在LPS介导的乳腺癌迁移侵袭中发挥着重要的作用。然而在TLR4阴性的细胞系T47D中,LPS的刺激后MTDH的表达量和细胞的迁移侵袭能力均无变化。以上结果显示MTDH在脂多糖介导乳腺癌迁移侵袭能力的改变是通过TLR4信号传导通路的作用。通过对信号传导通路筛选进一步的分析,我们发现MTDH基因的沉默可以抑制LPS诱导的NF-kappaB通路的激活,并可以抑制LPS诱导的IL-8、MMP-9的分泌。这提示在炎症促进乳腺癌的迁移侵袭中,MTDH可通过炎症诱导的NF-kappaB通路影响乳腺癌的迁移侵袭能力的改变。结论及意义：MTDH在LPS诱导乳腺癌细胞迁移侵袭的过程中都起到重要的调节作用,沉默MTDH可通过TLR4信号传导通路抑制NF-kappaB通路的激活和IL-8、MMP-9的产生,进而抑制乳腺癌细胞的迁移侵袭能力。综上所述,我们的研究结果显示MTDH在炎症促进肿瘤进展的过程发挥着重要的作用,这为MTDH作为乳腺癌治疗的靶点提供了新的理论依据。

关键词： MTDH 脂多糖 TLR4受体乳腺癌迁移侵袭

LMP1-CTAR3在鼻咽癌干细胞迁移侵袭中的作用及机制

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LMP1-CTAR3在鼻咽癌干细胞迁移侵袭中的作用及机制

作者：唐微南华大学

学位级别：硕士

目的：本研究选用鼻咽癌干细胞SP18细胞为对象，观察LMP1羧基末端第三个功能活性区（CTAR3）对SP18细胞侵袭与转移的影响，探讨LMP1-CTAR3影响SP18细胞迁移与侵袭的分子机制。方法：通过脂质体转染建立稳定表达LMP1及其突变体LMP1△252... 详细信息

目的：本研究选用鼻咽癌干细胞SP18细胞为对象，观察LMP1羧基末端第三个功能活性区（CTAR3）对SP18细胞侵袭与转移的影响，探讨LMP1-CTAR3影响SP18细胞迁移与侵袭的分子机制。方法：通过脂质体转染建立稳定表达LMP1及其突变体LMP1△252-351的SP18细胞系SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351;采用MTT法、平皿克隆形成实验检测细胞增殖情况;选用划痕实验、transwell实验检测细胞迁移与侵袭情况;利用基因芯片检测SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351间的差异表达基因，使用生物信息学初步分析相关差异表达基因的功能。结果： ***1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18增殖、迁移与侵袭的影响 MTT生长曲线、平皿克隆结果显示，SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△252-351细胞生长速度及克隆形成力明显高于SP18细胞(空白对照)和SP18-LNSX细胞（载体对照）（P迁移侵袭能力较SP18细胞和SP18-PLNSX细胞增强（P迁移侵袭的能力，其中CTAR3可能发挥重要的作用。 ***1-CTAR3影响细胞迁移与侵袭的差异基因筛选采用Agilent4×44K人类全基因组表达谱芯片检测，筛选出差异表达基因314个，其中上调基因180个，下调基因134个。将314个差异表达基因涉及的生物学功能进行“FunctionalAnnotationClustering”分析，结果显示差异表达基因涉及的生物学功能分类聚成24个集合，选取EnrichmentScore分数最高的3个功能集合，主要参与细胞凋亡、迁移运动相关的生物学过程。提示LMP1-CTAR3极大可能与SP18细胞的迁移密切相关。采用DAVID在线分析软件，对差异表达基因进行GeneOntology分类后，共筛选出18个与迁移及侵袭相关的差异表达基因，其中13个上调基因，5个下调基因。综合信号通路、基因生物学分类、基因间相互作用分析，本研究筛选出EFNB2、THBS1、FN1、MMP14等LMP1-CTAR3促进鼻咽癌迁移侵袭的相关差异表达基因，它们可能通过促进细胞黏附、细胞运动，降解细胞外基质及基底膜，促进肿瘤血管生成，从而在鼻咽癌的迁移侵袭中发挥作用。结论： 1、CTAR3是LMP1促进鼻咽癌干细胞SP18迁移侵袭的重要功能活性区。 2、LMP1可能通过调节EFNB2、THBS1、FN1、MMP14等表达促进鼻咽癌的迁移侵袭。

关键词：鼻咽癌干细胞 LMP1 CTAR3 迁移侵袭基因芯片

第一部分：高表达ENO1细胞来源的外泌体通过直接增强糖酵解途径促进胃癌细胞转移的研究第二部分：高转移潜能细胞外泌体对肝癌细胞迁移侵袭影响及其机制研究

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第一部分：高表达ENO1细胞来源的外泌体通过直接增强糖酵解途径促...

作者：魏思佳北京协和医学院

学位级别：硕士

胃癌(Gastriccancer)是一个全球性的健康问题,是癌症相关死亡的第三大原因,同时也是全球第五大诊断量的恶性肿瘤。尽管近年来在治疗方面取得了一定的进步,晚期GC患者预后仍然很差,5年总生存率约为25%,主要是因为频繁复发,转移和耐药。... 详细信息

胃癌(Gastriccancer)是一个全球性的健康问题,是癌症相关死亡的第三大原因,同时也是全球第五大诊断量的恶性肿瘤。尽管近年来在治疗方面取得了一定的进步,晚期GC患者预后仍然很差,5年总生存率约为25%,主要是因为频繁复发,转移和耐药。外泌体是在正常细胞和肿瘤细胞的内体途径中合成的40-150nm的囊泡。由脂质双分子层组成,其内携带miRNA和mRNA、细胞因子、趋化因子、生长因子等。肿瘤微环境(Tumormicroenvironment,TME)内细胞之间的通信,无论是旁分泌、自分泌甚至内分泌,都离不开外泌体在其中的通讯作用。目前对外泌体囊泡内容物RNA的研究较多,而代谢酶研究较少,因此我们将从代谢酶角度展开研究。本研究中,我们首先通过迁移侵袭、增殖实验和EMT指标检测不同胃癌细胞株转移能力的差异。随后我们提取高转移胃癌细胞的外泌体去处理低胃癌细胞,发现其迁移侵袭、克隆形成、增殖能力、EMT均与未处理组相比较有所提高。通过查阅文献和外泌体数据库,我们选定了囊泡内容物ENO1作为我们研究的靶点。我们提取蛋白和RNA来验证ENO1在不同胃癌细胞中的表达含量,发现高转移胃癌细胞株中ENO1分子高表达,与我们上述观点相符合,因此我们展开进一步研究。我们建立了高转移细胞稳定过表达和敲降ENO1分子的细胞,提取过表达ENO1稳转细胞株的外泌体,通过透射电镜、纳米粒子追踪实验、蛋白印迹实验对其进行鉴定,同时将过表达ENO1胃癌细胞株的外泌体作为刺激因子去处理胃癌亲本细胞,与不加外泌体组和加入外泌体抑制剂GW4869组相比,加入过表达ENO1外泌体组迁移侵袭能力明显增强。同时可能激活PI3K/Akt信号通路来促进EMT。高水平的ENO1分子能够促进胃癌细胞的增殖能力、迁移侵袭能力、克隆形成能力,并且促进细胞上皮-间质转化;同理,敲降ENO1则抑制细胞的上述体外功能实验。ENO1是糖酵解途径的非限速酶,能够独立调控胃癌细胞的糖酵解水平。我们检测了过表达和敲降胃癌细胞系胞外的ATP生成量、葡萄糖消耗量和乳酸生成量,与上述体外功能实验结果相同。为了更进一步展开讨论,我们使用糖酵解抑制剂2-DG处理亲本细胞,发现其迁移侵袭能力减弱;糖酵解被抑制。2-DG处理ENO1稳转细胞系后,过表达ENO1组细胞和对照组细胞迁移侵袭能力均有所下降,但它们之间的差异相比未处理之前显著减小,提示2-DG能够回复ENO1引起的胃癌细胞迁移侵袭能力的变化。因此我们得出结论ENO1可能通过提高胃癌细胞的糖酵解激活PI3K/Akt信号通路促进其上皮-间质转化和迁移侵袭能力。通过上述实验我们证实了高表达ENO1来源的外泌体通过直接增强糖酵解途径促进胃癌细胞的转移。肝癌是全球癌症死亡原因之一,是全球医疗保健方面的重大挑战。肝癌的治疗取决于肿瘤的大小、肿瘤位置和肝功能。治疗措施包括手术切除、局部消融,经动脉化疗栓塞和肝移植,手术切除仍是早期肝癌治疗最有效的方法,但由于早期肝癌的隐匿性,许多患者一般在中晚期被诊断出来。同时肝癌患者5年生存率仍然很低。外泌体是多泡体(MVB)与质膜融合分泌的直径为40-150nm的细胞外囊泡,可由多种类型的细胞分泌,广泛存在于体液中。其内容物包括核酸、蛋白质和脂质,是串联细胞间相互作用的重要介质。越来越多证据表明,肿瘤细胞可以通过分泌EV来改变肿瘤微环境,在肿瘤发生发展中起到了重要作用。在本研究中我们展示了不同转移潜能的肝癌细胞之间通过外泌体通讯作用来传递其异质性。我们前期发现高转移肝癌细胞条件培养基促进低转移肝癌细胞迁移侵袭能力及自我更新能力,移除外泌体的条件培养基处理,该促进作用减弱,因此我们将外泌体作为靶向异质性的窗口展开研究。我们首先提取了高转移潜能肝癌细胞的外泌体,并通过粒径分析、电镜实验和蛋白印迹实验进行鉴定;同时免疫荧光实验证明高转移潜能肝癌细胞外泌体可以被低转移肝癌细胞内吞发挥作用。我们提取高转移潜能肝癌细胞外泌体处理低转移肝癌细胞,结果显示,外泌体促进了肝癌细胞的迁移侵袭、自我更新、增殖能力和上皮-间质转化表型;机制上,高转移潜能肝癌外泌体处理过后的低转移肝癌细胞PI3K/AKT通路被激活,因此我们推测高转移潜能肝癌细胞外泌体通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路来促进一系列恶性表型。

关键词：胃癌外泌体 ENO1 上皮-间质转化糖酵解肝癌细胞外泌体迁移侵袭干性特征上皮-间质转化

微小RNA-194对基底样乳腺癌细胞HCC1937增殖、迁移侵袭及上皮-间充质转化的影响

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微小RNA-194对基底样乳腺癌细胞HCC1937增殖、迁移侵袭及上皮-间...

作者：孔吉霖青岛大学

学位级别：硕士

【目的】观察微小RNA-194(mi R-194)对人基底样乳腺癌细胞(HCC1937)增殖、迁移侵袭能力及上皮-间充质转化(EMT)的影响。【方法】利用慢病毒作载体(MOI=50)携带miR-194序列感染基底样乳腺癌细胞HCC1937为实验组,携带CON157慢病毒感染乳... 详细信息

【目的】观察微小RNA-194(mi R-194)对人基底样乳腺癌细胞(HCC1937)增殖、迁移侵袭能力及上皮-间充质转化(EMT)的影响。【方法】利用慢病毒作载体(MOI=50)携带miR-194序列感染基底样乳腺癌细胞HCC1937为实验组,携带CON157慢病毒感染乳腺癌细胞HCC1937为阴性对照组,未做处理的HCC1937细胞为空白对照组。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞12,24,48,72h细胞增殖能力,Transwell小室实验检测各组细胞迁移侵袭能力;Western Blot方法检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达。【结果】实验组细胞增殖能力为(44.81±0.11)%,显著低于阴性对照组(104.29±0.13)%及空白对照组(100±0)%,P=0.000;Transwell小室迁移实验中,下室面细胞数分别为实验组:47±2.35;阴性对照组:94±4.53;空白对照组:89±5.67。侵袭实验中,下室面细胞数分别为实验组:31±1.64;阴性对照组:65±6.39;空白对照组:72±2.48,实验组细胞迁移及侵袭力显著低于阴性对照组及空白对照组(P迁移侵袭能力及EMT。

关键词：基底细胞样乳腺癌 mi R-194 细胞增殖迁移侵袭上皮间质转化

BTK通过Raf/ERK信号轴调节TAM活化促进肺癌细胞迁移侵袭

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BTK通过Raf/ERK信号轴调节TAM活化促进肺癌细胞迁移侵袭

作者：郭健强安徽理工大学

学位级别：硕士

目的:探讨巨噬细胞中表达的BTK对肺癌细胞迁移侵袭的作用,以及促进肺癌细胞迁移侵袭的具体作用机制,为以BTK为靶点的治疗肺癌提供新的思路和理论基础。方法:使用网络数据库,我们研究了BTK在多种癌症中的表达情况。并对与其他实体肿瘤表... 详细信息

目的:探讨巨噬细胞中表达的BTK对肺癌细胞迁移侵袭的作用,以及促进肺癌细胞迁移侵袭的具体作用机制,为以BTK为靶点的治疗肺癌提供新的思路和理论基础。方法:使用网络数据库,我们研究了BTK在多种癌症中的表达情况。并对与其他实体肿瘤表达不一致的肺腺癌(LUAD)和肺鳞癌(LUSC)进行生存预后分析。并通过肺组织免疫荧光染色观察到BTK的细胞定位。通过慢病毒转染的方法成功构建了sh BTK-THP-1细胞株。运用Western blot和RT-PCR方法检测BTK的蛋白与m RNA水平差异,并收集相对应的上清做条件培养基,我们使用划痕实验和Transwell实验来评估BTK基因对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用RT-q PCR检测趋化因子(CCL2、CCL5)的表达。通过Western blot检测p-Raf、p-ERK、pNF-κB表达量,同时ERK、NF-κB抑制剂验证Raf/ERK/NF-κB信号通路对肺癌细胞迁移侵袭的调控作用。通过设计动物实验来检测BTK抑制剂(Ibrutinib)对C57BL/6小鼠原位肺癌动物模型,通过肿瘤大小、肺呼吸功能检测来评价Ibrutinib对小鼠肿瘤的影响。结果:生物信息学分析显示LUAD患者中BTK基因表达水平较低,且与LUAD患者的预后呈正相关,使用组织免疫荧光染色结果显示BTK主要定位在癌巢与癌旁中的巨噬细胞上,且随着肿瘤周围的巨噬细胞增多,BTK的表达也随之增多。巨噬细胞的BTK表达显著增加肺癌细胞的迁移侵袭能力的同时也会增加CCL2、CCL5的表达。在接下来的机制研究中,我们发现BTK的沉默可以显著抑制MAPK信号通路中的Raf/ERK信号轴和下游的p-NF-κB转录因子,ERK抑制剂同样抑制肺癌细胞的迁移侵袭能力。在体内实验中,应用了BTK的抑制剂Ibrutinib后可以显著抑制小鼠肺癌生长以及改善肺功能。结论:本研究发现BTK在肺癌肿瘤相关巨噬细胞中高表达。BTK主要通过Raf/ERK/NF-κB通路调节CCL2、CCL5的表达,从而促进肺癌细胞的迁移侵袭。此外,Ibrutinib可以有效抑制小鼠肺癌的生长并改善肺功能,提示BTK有望成为治疗肺癌的一个新的靶点。图6表15参47

关键词：肺腺癌肿瘤相关巨噬细胞 BTK 迁移侵袭 NF-κB