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现代畜牧兽医 2021年第2期 1-4页

作者：关静渊李璐于美玲韦英益胡庭俊广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

试验旨在观察不同剂量的辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)对人工致炎小鼠的抗炎作用。选用50只昆明系SPF级小鼠,随机分为5组,每组10只。第1组为空白对照组,每只小鼠给予0.9%生理盐水0.5 m L灌服,每天1次,连续5 d;第2组为阳性药物对照组,每只小... 详细信息

试验旨在观察不同剂量的辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)对人工致炎小鼠的抗炎作用。选用50只昆明系SPF级小鼠,随机分为5组,每组10只。第1组为空白对照组,每只小鼠给予0.9%生理盐水0.5 m L灌服,每天1次,连续5 d;第2组为阳性药物对照组,每只小鼠给予地塞米松注射液25 mg/kg体重腹腔注射,每天1次,连续5 d;第3、4、5组分别给予辣蓼黄酮150 (FNB高剂量组)、100 (FNB中剂量组)、50 mg/kg (FNB低剂量组)灌服,每天1次,连续5 d。于最后一次给药后1 h,分别给小鼠左耳两面涂抹0.05 mL二甲苯致炎,右耳作为对照。20 min后采样并测定各项指标。结果表明:与空白对照组相比,FNB高剂量组小鼠耳肿胀程度显著减轻(P辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)对小鼠具有一定的抗炎作用。

关键词：辣蓼黄酮抗炎作用炎性因子小鼠

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辣蓼黄酮分离提取及3种黄酮类组分定量分析

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辽宁中医药大学学报 2019年第4期21卷 50-53页

作者：朱瑜吴建华杨剑曾芸韦英益胡庭俊广西大学广西南宁530005

目的:优化辣蓼黄酮的分离提取工艺以及定量分析其中3种黄酮类组分。方法:采用水煎煮、醇提、醇提后有机溶剂萃取、醇提及有机溶剂萃取后大孔树脂吸附共4种提取方法分离提取辣蓼黄酮,以紫外分光光度法测定总黄酮含量,通过高效液相色谱法... 详细信息

目的:优化辣蓼黄酮的分离提取工艺以及定量分析其中3种黄酮类组分。方法:采用水煎煮、醇提、醇提后有机溶剂萃取、醇提及有机溶剂萃取后大孔树脂吸附共4种提取方法分离提取辣蓼黄酮,以紫外分光光度法测定总黄酮含量,通过高效液相色谱法测定辣蓼黄酮中3种黄酮类组分(芦丁、金丝桃苷和槲皮苷)的含量。结果:上述4种分离提取方法所得辣蓼总黄酮含量在1.33%～4.92%,所得总黄酮提取物中芦丁含量在0.1155～0.3648 mg/mL,金丝桃苷含量在0.0055～0.0140 mg/mL,槲皮苷含量在0.0141～0.6613 mg/mL。结论:不同提取工艺对总黄酮得率不同,对3种黄酮类组分的提取效果也有差异。比较试验中所用4种方法,醇提法对辣蓼总黄酮以及辣蓼黄酮中的芦丁、金丝桃苷分离提取效果最理想,而对槲皮苷分离提取效果最优的方法则为水煎煮法。

关键词：辣蓼黄酮分离提取高效液相色谱法

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辣蓼黄酮对PRV感染的RAW264.7细胞氧化应激的干预作用

辣蓼黄酮对PRV感染的RAW264.7细胞氧化应激的干预作用

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：赵怡张文陈奇谢小东于美玲胡庭俊广西大学动物科学技术学院

[目的]猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒（PRV）引起的猪的急性传染病,是目前危害全球养猪业的重大传染病之一。本研究通过体外试验观察辣蓼黄酮（FNB）对氧化应激相关因子水平及mRNA表达的影响,为辣蓼黄酮的开发应用及防治病毒性疾病提供理论... 详细信息

[目的]猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒（PRV）引起的猪的急性传染病,是目前危害全球养猪业的重大传染病之一。本研究通过体外试验观察辣蓼黄酮（FNB）对氧化应激相关因子水平及mRNA表达的影响,为辣蓼黄酮的开发应用及防治病毒性疾病提供理论依据。[方法]采用CCK-8法测定FNB对细胞增殖活性的影响;采用Reed-Muench法计算病毒TCID;采用FNB作用于PRV感染的RAW264.7细胞研究其体外抗氧化作用。设细胞对照组、DMSO对照组、PRV对照组和不同浓度的FNB药物组（12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL）,收集4h、8h和12 h样品,测定其SOD、iNOS、XOD、CAT、MPO、GSH-Px、HO-1和NQO1的活性以及NO和MDA的含量,以确定FNB体外调节的最适时间;选择终浓度为25μg/mL、50μg/mL和100μg/mL的FNB作用于PRV感染的RAW264.7细胞12 h,提取细胞总RNA,荧光定量PCR检测iNOS、Keap1、Nrf2、HO1和NQO1 mRNA的表达水平,探讨FNB对PRV感染RAW264.7细胞诱导的氧化应激反应的干预作用。[结果]PCR测定PK-15细胞和RAW264.7细胞病毒核酸,表明PK-15细胞和RAW264.7细胞成功感染PRV病毒;Reed-Muench法计算TCID为10/0.1 mL;CCK-8法测定FNB对RAW264.7细胞体外增殖活性,结果表明FNB （12.5μg/mL～100μg/mL）在4h、8h和12 h对细胞活力无明显影响;FNB作用于PRV感染的RAW264.7细胞后,降低细胞内iNOS的活性,升高GSH-Px、SOD、CAT、HO1和NQO1的活性,降低NO和MDA的含量。PRV感染后可以上调细胞内iNOS mRNA的表达水平,下调细胞内Nrf2、Keap1、HO1和NQO1 mRNA的表达水平。FNB作用于PRV感染的RAW264.7后,可以显著或极显著下调细胞内iNOS mRNA的表达水平（P<0.05或P<0.01）,显著或极显著上调细胞内Nrf2、Keap1和NQO1 mRNA的表达水平（P<0.05或P<0.01）,上调细胞内HO-1 mRNA的表达水平。[结论]本试验表明FNB对PRV感染的RAW264.7细胞的氧化应激有一定的调节作用,可以通过提高细胞内多种抗氧化酶的基因表达水平发挥抗氧化作用。明确25μg/mL～100μg/mL FNB作用于PRV感染的RAW264.7细胞4h～12 h后能有效减轻RAW264.7细胞的氧化应激反应,且12 h抗氧化效果较好。

关键词：辣蓼黄酮 PRV 氧化应激

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辣蓼黄酮的分离提取及抗炎作用的分子机制研究

辣蓼黄酮的分离提取及抗炎作用的分子机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：匡娜陶俊宇韦英益施君于美玲宋漫玲胡庭俊广西大学动物科学技术学院

[目的]采用大孔树脂法分离提取辣蓼黄酮乙酸乙酯部位(FEA)和正丁醇部位(FNB),并采用高效液相色谱法定量分析两种有效部位的黄酮成分;通过体内外试验探讨辣蓼总黄酮的抗炎作用的分子机制。[方法](1)用超声法与酶解法对辣蓼黄酮进行提取... 详细信息

[目的]采用大孔树脂法分离提取辣蓼黄酮乙酸乙酯部位(FEA)和正丁醇部位(FNB),并采用高效液相色谱法定量分析两种有效部位的黄酮成分;通过体内外试验探讨辣蓼总黄酮的抗炎作用的分子机制。[方法](1)用超声法与酶解法对辣蓼黄酮进行提取并与浸提法、水煎醇沉法、超声法比较总黄酮得率;(2)采用XDA-8大孔树脂法对辣蓼总黄酮的富集,并进行FEA与FNB的动态吸附试验;(3)采用高效液相色谱法对FEA与FNB中芦丁、槲皮素、槲皮苷的含量进行测定;(4)用80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL的FEA或FNB作用于脂多糖(LPS)刺激诱导的RAW264.7细胞炎症体外模型,研究其对该模型下ROS、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8以及IL-10水平的影响,研究辣蓼黄酮的体外抗炎效果;(5)对小鼠腹腔注射LPS建立内毒素血症模型,每日灌服200,100,50 mg/kg的FEA或FNB,连用3天后对内毒素损伤的保护作用,考察辣蓼黄酮的体内抗炎效果;(6)通过FEA与FNB预处理对LPS刺激RAW264.7细胞炎症体外模型中iNOS、COX-2、AMPKα、MAPK家族p44/42、SAPK/JNK、p38及其相应蛋白磷酸化的影响,探讨FEA与FNB抗炎作用的分子机制。[结果](1)超声法配合酶解法提取辣蓼总黄酮的得率最高;(2) FEA中芦丁、槲皮苷与槲皮素的平均含量分别为281.99 mg/g、170.00 mg/g、83.31 mg/g;FNB中芦丁、槲皮苷与槲皮素的平均含量分别为150.33 mg/g、146.73 mg/g、73.82 mg/g;(3) FEA或FNB预处理对LPS刺激下RAW246.7细胞产生ROS、NO和TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8有下调作用;(4) FEA与FNB预处理3天后能降低肠MPO与MDA水平、肺脏中TNF-α、IFN-α、IFN-γ和IL-2水平与血中ACP水平,显著提高肝脏T-SOD水平与GSH-PX水平;(5) FNB或FEA预处理能显著降低LPS诱导的iNOS与COX-2蛋白表达增高(P辣蓼黄酮经超声酶解法与XDA-8大孔树脂纯化后得到FEA与FNB,经HPLC检测后发现主要成分为芦丁、槲皮苷与槲皮素。FEA与FNB预处理3天能显著降低内毒素血症小鼠的死亡率及内毒素性脏器损伤;(2) FEA与FNB预处理能显著降低LPS诱导的RAW246.7细胞ROS、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8以及IL-10水平,该机制可能是由于FEA与FNB预处理抑制了MAPK信号通路中的ERK、JNK以及c-JUN磷酸化。

关键词：辣蓼黄酮抗炎作用分子机制

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辣蓼黄酮正丁醇部位对伪狂犬病毒感染的猪脾淋巴细胞氧化应激调控作用及转录组学分析

辣蓼黄酮正丁醇部位对伪狂犬病毒感染的猪脾淋巴细胞氧化应激调控...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：陈家骥赵怡胡庭俊广西大学动物科学技术学院

[目的]本研究旨在通过RNA-seq技术探究辣蓼黄酮正丁醇部位（N-butanol fraction of Polygonum hydropiper flavonoids,FNB）对伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）体外感染猪脾淋巴细胞氧化应激相关基因的调控作用。[方法] CCK-8法筛... 详细信息

[目的]本研究旨在通过RNA-seq技术探究辣蓼黄酮正丁醇部位（N-butanol fraction of Polygonum hydropiper flavonoids,FNB）对伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）体外感染猪脾淋巴细胞氧化应激相关基因的调控作用。[方法] CCK-8法筛选FNB（0,12.5,25,50,100,200,400μg/mL）安全浓度后,采用荧光探针法测定FNB对PRV感染猪脾淋巴细胞8 h、12 h、24 h、48 h时ROS水平以及ELISA、RT-qPCR法检测Nrf2、HO-1、iNOS转录和表达水平影响,获得药物最佳浓度及作用时间进行测序,对差异基因进行生物信息学功能分析。[结果]结果发现,各FNB处理组在8 h和12 h时与细胞对照组比较活性均无显著变化（P>0.05）,作用24 h时100μg/mL以下FNB处理对细胞活性无显著影响（P>0.05）,故选取25、50、100μg/mL FNB处理组进行后续试验;12-24 h时各FNB处理组与PRV组比较均能极显著降低ROS水平（P<0.01）;ELISA、RT-qPCR结果显示,12h时50μg/mL FNB处理组与PRV组比较能够显著下调iNOS、HO-1酶活性（P <0.05）,显著上调Nrf2酶活性（P <0.05）。选取50μg/mL FNB作用细胞12 h进行测序并进行生物信息学分析,结果表明,与细胞组相比,PRV感染后得到5482条差异基因,有3997个基因表达上调,1485个基因表达下调。GO富集分析显示差异基因（DEGs）主要富集于分子互作以及对病毒的防御反应、免疫应答等过程。KEGG富集分析显示DEGs主要富集于疾病和免疫通路以及程序性死亡通路;与PRV组相比,FNB处理后得到406条差异基因,有168个基因表达上调,238个基因表达下调。GO富集分析显示DEGs主要富集于细胞信号转导功能以及炎症反应、中性粒细胞趋化性等免疫功能。KEGG富集分析显示DEGs主要富集在IL-17信号通路、Toll样受体信号通路等免疫和炎症相关通路。[结论] FNB对病毒感染诱发的猪脾淋巴细胞的氧化应激具有调控作用。FNB处理后能够降低ROS水平,上调Nrf2同时下调iNOS和HO-1的转录和表达水平。FNB处理后引起免疫功能相关基因及信号通路（IL-17、Toll样受体信号通路）差异表达。FNB能干预PRV感染诱发的炎症反应。

关键词：辣蓼黄酮伪狂犬病毒氧化应激差异转录组

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响应面法优化辣蓼黄酮的提取工艺

响应面法优化辣蓼黄酮的提取工艺

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：易首利张文于美玲胡庭俊广西大学动物科学技术学院

[目的]辣蓼（Polygonum hydropiper L.）属蓼科蓼属植物,具有散结消肿、活血止痛、收敛止泻、通经利尿等功效,其主要有效成分为芦丁、金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素等黄酮类化合物。实验室常用的辣蓼黄酮提取方法包括单因素试验、正交试验和... 详细信息

[目的]辣蓼（Polygonum hydropiper L.）属蓼科蓼属植物,具有散结消肿、活血止痛、收敛止泻、通经利尿等功效,其主要有效成分为芦丁、金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素等黄酮类化合物。实验室常用的辣蓼黄酮提取方法包括单因素试验、正交试验和Box-Behnken响应面法,本试验选用单因素法和Box-Behnken响应面法,优化提取过程中的料液比、乙醇浓度、超声时间及超声温度,筛选出辣蓼黄酮的最佳提取工艺。[方法]以芦丁作为对照品,计算辣蓼中总黄酮的含量,首先建立芦丁的标准曲线,将芦丁标准品溶于60%乙醇配置成浓度为0.2 mg/mL的芦丁标准品溶液,取不同量的标准品溶液按照亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法显色后用60%乙醇定容至不同浓度,测定510 nm处的吸光度,绘制芦丁浓度-吸光度标准曲线。再通过单因素试验考察料液比（1:5、1:10、1:15、1:20、1:25）、乙醇浓度（40%、50%、60%、70%、80%）、超声时间（30 min、40 min、50 min、60 min、70 min）和超声温度（20℃、30℃、40℃、50℃、60℃）对辣蓼总黄酮提取率的影响,确定影响总黄酮提取率的主要因素和最佳范围,根据单因素试验结果,采用Design-Expert13程序软件,以料液比（A）、乙醇浓度（B）和超声时间（C）为试验因素,总黄酮提取率为考察指标,进行三因素三水平的响应面试验,以确定最佳工艺条件。[结果]在固定乙醇浓度、超声时间和超声温度的条件下,当料液比由1:5提高至1:20时,总黄酮提取率随之增加,因此选择1:15、1:20和1:25作为响应面的因素水平;在固定料液比、超声时间和超声温度的条件下,乙醇浓度在40%～60%之间与总黄酮提取率呈线性正相关,因此选择50%、60%和70%的乙醇作为响应面的因素水平;在固定料液比、乙醇浓度和超声温度的条件下,在30min～40 min区间,总黄酮提取率上升,40 min达到峰值,因此选择30 min、40 min和50 min作为响应面的因素水平;在固定料液比、乙醇浓度和超声时间的条件下,超声温度在40℃提取率最高,故把超声温度设定为40℃考察其他变量。利用Design-Expert13软件对提取工艺参数进行优化,得到最佳工艺参数为料液比1:21.430,乙醇浓度61.955%,超声时间38.592 min,预测总黄酮提取率为19.292%。[结论]通过单因素试验和Box-Benhnken响应面优化得出提取辣蓼黄酮的最佳工艺为料液比1:21,乙醇浓度62%,超声时间39 min,此条件下制备的黄酮平均提取率为19.108%,提取工艺稳定,重现性良好。

关键词：响应面法辣蓼黄酮提取工艺

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