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真鲷转铁蛋白基因的克隆与表达特征分析

高技术通讯 2005年第5期15卷 105-110页

作者：蔡忠华宋林生高春萍吴龙涛清华大学深圳研究生院深圳518055天津农学院水产科学系天津300384 中国科学院海洋研究所实验海洋生物重点实验室青岛266071 清华大学深圳研究生院深圳518055

采用同源克隆的方法,根据相近物种转铁蛋白(Transferrin, TF)基因的序列设计简并引物,在经感染真鲷的cDNA上进行PCR扩增,获得了真鲷TF的全基因编码序列(GeneBank Accession ***335444).该序列由2444bp核苷酸组成,含31 bp 5′非编码区和3... 详细信息

采用同源克隆的方法,根据相近物种转铁蛋白(Transferrin, TF)基因的序列设计简并引物,在经感染真鲷的cDNA上进行PCR扩增,获得了真鲷TF的全基因编码序列(GeneBank Accession ***335444).该序列由2444bp核苷酸组成,含31 bp 5′非编码区和340 bp 3′非编码区以及2073 bp的开放阅读框,可编码691个氨基酸,预测分子量约为74.3kD,等电点为5.63.同源性分析表明,真鲷TF与鱼类TF的相似性很高,约为65%～75%;与哺乳类转铁蛋白和乳铁蛋白的相似性约40%～50%;与脊索动物海鞘和无脊椎动物昆虫也有一定的相似性.进化分析表明,该基因是转铁蛋白而不是乳铁蛋白.真鲷TF与其它动物TF结构相似,是由两叶相似的结构域构成的单一肽链;该基因有一信号肽序列,缺乏糖基化位点,在它的两个结构域上,分别有三个TF家族的标签序列及一个MHC分子标签序列;与哺乳类相比,参与蛋白二硫键形成的半胱氨酸以及铁离子结合位点高度保守.RT-PCR结果显示,真鲷TF在肝脏成组成型表达,但在其它组织中的表达可受病原调控,表现为经病原刺激后转铁蛋白基因的组织分布显著增多.

关键词：蛋白基因真鲷特征分析转铁蛋白 RT-PCR 非编码区乳铁蛋白 PCR扩增核苷酸组成开放阅读框无脊椎动物二硫键形成组成型表达相似性同源克隆简并引物序列设计 cDNA 编码序列脊索动物结合位点半胱氨酸组织分布

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温度对铽(Ⅲ)-转铁蛋白溶液构象的影响

化学学报 2002年第4期60卷 737-743页

作者：杨斌盛白海静刘文丰九英山西大学分子科学研究所太原030006

在pH 7.4,0 .0 1mol/LN 2 羟乙基哌嗪 N′ 2 乙磺酸 (Hepes)条件下 ,铽 (Ⅲ )与N ,N′ 二 (2 羟苄基 )乙二胺 N ,N′ 二乙酸 (HBED)结合并发生交换相互作用使铽 (Ⅲ )荧光增强 10 4 倍 ,通过监测铽 (Ⅲ ) 5 45nm荧光强度的变化测定... 详细信息

在pH 7.4,0 .0 1mol/LN 2 羟乙基哌嗪 N′ 2 乙磺酸 (Hepes)条件下 ,铽 (Ⅲ )与N ,N′ 二 (2 羟苄基 )乙二胺 N ,N′ 二乙酸 (HBED)结合并发生交换相互作用使铽 (Ⅲ )荧光增强 10 4 倍 ,通过监测铽 (Ⅲ ) 5 45nm荧光强度的变化测定了Tb HBED配合物的条件稳定常数是lgK =14.30± 0 .49;Tb HBED配合物中配体、铽 (Ⅲ )荧光强度均随着温度的升高而降低 .在pH 7.4,0 .0 1mol/LHepes条件下 ,TbN apoTf TbC 配合物中蛋白质的荧光强度随着温度的升高而降低 ,而能量受体铽 (Ⅲ )的荧光强度随着温度的升高而增强 ,主要源于铽 (Ⅲ )与螺旋 5色氨酸残基间的无辐射能量转移 ;当温度由 0℃上升到 5 5℃时 ,平均能量转移效率AE值增加了 2 9%,给体、受体间距离R有约 4.2 %的减小 ,温度变化引起TbN apoTf TbC 配合物大的构象变化 ;铽 (Ⅲ )与人血清脱铁转铁蛋白的结合使蛋白质的变性温度降低 .同样条件下 ,TbN apoOTf TbC 配合物与TbN apoTf TbC 配合物有所不同 ,虽然能量给体的荧光强度随着温度的增加而减小 ,但铽 (Ⅲ )荧光强度没有明显的增强 ;铽 (Ⅲ )对蛋白质的变性温度几乎没有影响 .

关键词：温度铽(Ⅲ)离子转铁蛋白溶液构象荧光光谱荧光强度

转铁蛋白-转铁蛋白受体系统在药物运输和定向给药中的应用

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科学通报 2003年第3期48卷 213-218页

作者：常彦忠袁其朋钱忠明香港理工大学应用生物及化学科技学系铁代谢实验室

近年来,药物的定向运输和定点给药系统的研究已取得了可喜的进展.转铁蛋白-转铁蛋白受体系统在抗癌药物和蛋白质的定向运输以及作为基因载体在扩散的恶性肿瘤细胞基因治疗中的应用研究已接近临床使用阶段.药物经转铁蛋白-转铁蛋白受体... 详细信息

近年来,药物的定向运输和定点给药系统的研究已取得了可喜的进展.转铁蛋白-转铁蛋白受体系统在抗癌药物和蛋白质的定向运输以及作为基因载体在扩散的恶性肿瘤细胞基因治疗中的应用研究已接近临床使用阶段.药物经转铁蛋白-转铁蛋白受体介导通过血脑屏障进入脑内发挥药效的给药途径的研究也给脑疾病的治疗带来了巨大希望.

关键词：定向给药转铁蛋白转铁蛋白受体药物定向运输基因治疗内吞作用

转铁蛋白基因多态性对毛细管电泳法检测血清糖缺失性转铁蛋白的影响

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四川大学学报（医学版） 2018年第1期49卷 98-101,123页

作者：陆杨李静何英黄志刚晏青姚傲郭琴贾成瑶干伟四川大学华西医院实验医学科成都610041 四川大学华西医院感染性疾病中心成都610041 四川大学华西医院心理卫生中心成都610041

目的研究转铁蛋白(Tf)基因多态性对毛细管电泳检测血清糖缺失性转铁蛋白(CDT)的影响,探讨其临床应用价值。方法选择51例健康体检者,17例非酒精性肝病者,65例酗酒者作为研究对象,均为汉族成年男性。首先采用毛细管电泳(CE)获取样本的CDT... 详细信息

目的研究转铁蛋白(Tf)基因多态性对毛细管电泳检测血清糖缺失性转铁蛋白(CDT)的影响,探讨其临床应用价值。方法选择51例健康体检者,17例非酒精性肝病者,65例酗酒者作为研究对象,均为汉族成年男性。首先采用毛细管电泳(CE)获取样本的CDT电泳图,选取会影响毛细管电泳对血清中CDT含量检测并且在中国人群中较为常见的Tf基因变异体:Tf-Dchi(A>G)、Tf-D1(A>G)与Tf-B2(G>A),应用高分辨熔解曲线(HRM)初步检测所有标本的基因型,对HRM筛选出的样本进行测序验证。结果 133例标本经毛细管电泳后显示:127例峰分离良好,6例未能完全分离(健康组2例,非酒精性肝病3例,酗酒组1例),导致所得CDT结果不可信。133例样本经HRM分析,可疑突变样本经测序确认后,分别检出3例Tf-Dchi(A>G)杂合突变型,0例TfD1(A>G)突变型,0例Tf-B2(G>A)突变型,其余3例均为C型。Tf-Dchi、Tf-D1、Tf-B2突变型在被检测人群中出现概率分别为2.3%(3/133),0,0。结论 Tf基因多态性中Tf-Dchi型变异体会导致毛细管电泳中Tf异构体分离不佳,影响检测准确性。

关键词：酗酒糖缺失性转铁蛋白基因多态性毛细管电泳

干扰素与转铁蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定

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生物化学与生物物理进展 2005年第7期32卷 625-629页

作者：李晓静张豪薛冲李彦英陈璟苗林方宏清陈惠鹏军事医学科学院生物工程研究所北京100071

利用重叠PCR技术将干扰素(interferon,IFN)基因与转铁蛋白N端半分子(transferrinN-terminalhalf-molecule,TFN)基因在体外融合,融合基因和单独的TFN基因分别克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115,得到的转化子经诱导表达后在发... 详细信息

利用重叠PCR技术将干扰素(interferon,IFN)基因与转铁蛋白N端半分子(transferrinN-terminalhalf-molecule,TFN)基因在体外融合,融合基因和单独的TFN基因分别克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115,得到的转化子经诱导表达后在发酵上清中均获得了表达.经SPSepharoseFastFlow阳离子交换层析、PhenylSepharoseFastFlow疏水层析纯化,获得了纯度大于93%的重组融合蛋白IFN-TFN和纯度大于95%的重组TFN样品.生物活性实验证明融合蛋白IFN-TFN具有抗病毒活性.铁饱和实验证明融合蛋白IFN-TFN和单独的TFN具有相同的铁结合能力.因而TFN可望作为IFN的天然运输载体.

关键词：转铁蛋白干扰素-α 毕赤酵母

猪血清转铁蛋白含单一铁结合部位的半分子的制备、鉴定和受体结合能力

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第2期34卷 215-218页

作者：张新堂唐月华冯佑民中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室

用胰蛋白酶水解铁饱和的猪血清转铁蛋白 ,可同时获得含单一铁结合部位的N端和C端半分子。比较了猪血清转铁蛋白及其N端和C端半分子与人胎盘细胞膜转铁蛋白受体的结合能力 ,其受体结合能力依次为 :猪血清转铁蛋白 >C端半分子 >N端半分子

关键词：转铁蛋白半分子受体结合

转铁蛋白-PEG-睫状神经营养因子的制备及其生物活性评价

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中国生物工程杂志 2016年第4期36卷 43-49页

作者：殷爽冯翠张纯王祺王健余蓉刘永东苏志国四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室成都610041 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100190 北京生物制品研究所北京100024

为了实现在体内更持久的药效作用,根据睫状神经营养因子CNTF第17位为游离半胱氨酸残基,而转铁蛋白Tf无游离半胱氨酸的特点,采用N-羟基琥珀酰亚胺-聚乙二醇5K-马来酰亚胺(NHS-PEG5k-MAL)作为偶联剂,实现了两者定点偶联,然后结合蛋白自身... 详细信息

为了实现在体内更持久的药效作用,根据睫状神经营养因子CNTF第17位为游离半胱氨酸残基,而转铁蛋白Tf无游离半胱氨酸的特点,采用N-羟基琥珀酰亚胺-聚乙二醇5K-马来酰亚胺(NHS-PEG5k-MAL)作为偶联剂,实现了两者定点偶联,然后结合蛋白自身特性制定纯化方法,制备获得纯度高于90%的转铁蛋白-聚乙二醇5k-睫状神经营养因子(Tf-PEG5k-CNTF)耦合物。高效凝胶色谱和动态光散射分析显示耦合物的表观分子体积大于两蛋白之和。细胞试验结果显示耦合物的活性下降至原蛋白的65.8%。大鼠药代动力学试验显示Tf-PEG5k-CNTF耦合物在体内的代谢半衰期延长至8.2小时,与CNTF原蛋白相比提高了约17倍。小鼠动物试验显示在每周2次的给药频率,每次1.0 mg/kg的剂量下,Tf-PEG5k-CNTF能更为显著地影响小鼠对食物摄入量和减轻体重。因此,转铁蛋白偶联技术可用于脑部靶向蛋白药物的长效递送。

关键词：蛋白偶联长效转铁蛋白睫状神经营养因子减肥

转铁蛋白表面修饰对载紫杉醇PLGA纳米粒的细胞毒作用及细胞内转运的影响

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中华医学杂志 2012年第44期92卷 3151-3154页

作者：金石华李宁忱张志宏那彦群北京大学首钢医院北京大学吴阶平泌尿外科医学中心北京100144

目的研究转铁蛋白（Tf）表面修饰后，载紫杉醇的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒的细胞毒作用及细胞内转运的变化。方法制备2组PLGA纳米粒，1组以聚乙烯醇（PVA）为表面稳定剂（PVA纳米粒）；1组以PVA为表面稳定剂，并以Tf表面修... 详细信息

目的研究转铁蛋白（Tf）表面修饰后，载紫杉醇的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒的细胞毒作用及细胞内转运的变化。方法制备2组PLGA纳米粒，1组以聚乙烯醇（PVA）为表面稳定剂（PVA纳米粒）；1组以PVA为表面稳定剂，并以Tf表面修饰纳米粒（Tf纳米粒），分析2组载紫杉醇的纳米粒对膀胱癌细胞系J-82的细胞毒作用，并研究纳米粒在膀胱癌细胞内的转运。结果紫杉醇溶液、载药PVA纳米粒和载药Tf纳米粒对J－82细胞的50％抑制浓度（IC50）分别为（81±18）、（44±7）和（49±11）ng／ml，后二者明显低于前者（均P〈0．05）。J-82细胞对PVA纳米粒和Tf纳米粒的2h摄入水平分别为（89±19）和（76±16）μg／mg细胞蛋白，二者差异无统计学意义（P〉0．05）。撤除细胞培养液中纳米粒后，细胞内的纳米粒水平迅速下降，2h后分别有11．3％的PVA纳米粒和18．0％的Tf纳米粒仍滞留于细胞内，此后尽管随着时间的延长，纳米粒的水平维持不变，但是在各个时间点，PVA纳米粒与Tf纳米粒水平的差异均无统计学意义（均P〉0．05）。激光共聚焦荧光显微镜发现2种纳米粒均分布于细胞质中。结论PLGA纳米粒可以显著增强紫杉醇对膀胱癌的抗癌作用，Tf修饰后并未改变纳米粒的细胞毒作用及细胞动力学特点。

关键词：膀胱肿瘤纳米粒转铁蛋白

基于表面等离子体共振技术用鸡蛋黄抗体IgY测定人血清中转铁蛋白

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高等学校化学学报 2012年第6期33卷 1177-1181页

作者：王春宇冯锋白云峰陈泽忠田茂忠邱建丁倪永年南昌大学化学系南昌330031 山西大同大学有机化学研究所大同037009

采用表面等离子体共振(SPR)方法,用鸡蛋黄抗体(IgY)取代传统免疫检测中哺乳动物抗体IgG作为识别分子偶联于CM5传感芯片上,对人血清中的转铁蛋白进行了检测.考察了IgY在传感芯片上的偶联条件及芯片的再生条件.结果表明,在pH=4.0,IgY浓度... 详细信息

采用表面等离子体共振(SPR)方法,用鸡蛋黄抗体(IgY)取代传统免疫检测中哺乳动物抗体IgG作为识别分子偶联于CM5传感芯片上,对人血清中的转铁蛋白进行了检测.考察了IgY在传感芯片上的偶联条件及芯片的再生条件.结果表明,在pH=4.0,IgY浓度为100μg/mL,流速为5μL/min的最佳偶联条件下,SPR响应信号和转铁蛋白浓度在50～500 ng/mL范围内具有良好的线性关系,检出限为39.56 ng/mL,对人血清样品检测的日间变异系数<8%,日内变异系数<5%,平均回收率为86.22%～94.51%.

关键词：表面等离子体共振鸡蛋黄抗体人血清转铁蛋白