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铁饱和度、转铁蛋白与消化性溃疡合并营养不良的相关性分析

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中华养生保健 2024年第11期 13-16页

作者：赵丽颖北京市昌平区中西医结合医院检验科

目的探讨铁饱和度、转铁蛋白与消化性溃疡合并营养不良的相关性。方法选取北京市昌平区中西医结合医院2020年8月—2023年7月收治的80例消化性溃疡合并营养不良患者作为研究对象，将其设定为观察组，另选取同期来北京市昌平区中西医结... 详细信息

目的探讨铁饱和度、转铁蛋白与消化性溃疡合并营养不良的相关性。方法选取北京市昌平区中西医结合医院2020年8月—2023年7月收治的80例消化性溃疡合并营养不良患者作为研究对象，将其设定为观察组，另选取同期来北京市昌平区中西医结合医院治疗的80例消化性溃疡未合并营养不良的患者为对照组，对比两组患者一般临床资料与铁饱和度、转铁蛋白表达水平，应用Logistic回归分析方法分析消化性溃疡合并营养不良的独立影响因素。随后将80例消化性溃疡合并营养不良患者依照身体质量指数（BMI）分为3个亚组，即BMI转铁蛋白表达水平，并应用Spearman相关分析方法分析铁饱和度、转铁蛋白与消化性溃疡合并营养不良严重程度的相关性。结果两组患者性别、消化性溃疡病程、幽门螺旋杆菌（Hp）检测结果、饮酒情况对比，差异无统计学意义（P>0.05）；两组患者年龄、溃疡最大直径、BMI、溃疡位置、铁饱和度、转铁蛋白水平比较，差异有统计学意义（P转铁蛋白降低（OR=0.242,95%CI=0.145～0.789）为消化性溃疡合并营养不良的独立危险因素。三组患者铁饱和度、转铁蛋白表达水平对比，差异有统计学意义（P转铁蛋白低于中度营养不良组和轻度营养不良组，差异有统计学意义（P转铁蛋白与消化性溃疡合并营养不良严重程度呈负相关（P转铁蛋白降低是消化性溃疡合并营养不良的独立影响因素，且与营养不良严重程度具有明显相关性。因此，临床对于铁饱和度升高、转铁蛋白降低的消化性溃疡患者要警惕营养不良发生，及时采取营养补充措施。

关键词：铁饱和度转铁蛋白消化性溃疡营养不良相关性

血清铁蛋白、转铁蛋白联合25-羟基维生素D指标检测对婴幼儿缺铁性贫血的预测价值

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中国初级卫生保健 2024年第7期38卷 40-43页

作者：王胜冯益侯思雨董丽夏敏郭黎黎王珏王金花李俊上海市浦东新区南汇新城镇社区卫生服务中心上海201308 上海市金山区朱泾社区卫生服务中心上海201599

目的:探究血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、转铁蛋白(transferrin,TF)联合25-羟基维生素D[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D]指标对婴幼儿缺铁性贫血的预测价值。方法:选取2020年10月—2023年9月在上海市浦东新区南汇新城镇社区卫生服务中... 详细信息

目的:探究血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、转铁蛋白(transferrin,TF)联合25-羟基维生素D[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D]指标对婴幼儿缺铁性贫血的预测价值。方法:选取2020年10月—2023年9月在上海市浦东新区南汇新城镇社区卫生服务中心就诊的缺铁性贫血婴幼儿60例,并按病例对照1∶4的比例选取具有可比性的240例非缺铁性贫血婴幼儿作为非缺铁性贫血组,另选取同期健康体检儿童100例作为健康对照组,收集3组受试儿童的临床资料,并检测其血清SF、TF、25(OH)D等水平。结果:3组受试儿童SF、25(OH)D、TF水平比较,差异均有统计学意义(Z/F值分别为296.290、408.959、1008.023,P<0.05),其中,非缺铁性贫血组与缺铁性贫血组SF、25(OH)D水平明显低于健康对照组,缺铁性贫血组TF水平高于非缺铁性贫血组和健康对照组。logistic回归分析结果显示,SF、25(OH)D、TF水平与婴幼儿缺铁性贫血发生风险因素呈正相关。以SF、25(OH)D、TF指标作为检验变量,将缺铁性贫血组和非缺铁性贫血组作为参考标准,制作ROC曲线,其中,SF、25(OH)D、TF的AUC分别为0.613,0.713,0.628,而3个指标联合预测概率AUC为0.848,相较于每个指标均显著提升。结论:SF、25(OH)D、TF联合检测对婴幼儿缺铁性贫血诊断有较高的价值,能够为婴幼儿缺铁性贫血的临床诊断及预后提供借鉴。

关键词：血清铁蛋白转铁蛋白 25-羟基维生素D 婴幼儿缺铁性贫血

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转铁蛋白修饰雷公藤甲素脂质体的制备与体外评价

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中草药 2022年第3期53卷 687-695页

作者：杨一帆梁艺瑶刘保保苏雪蓉乔萍狄留庆赵晓莉南京中医药大学药学院江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心江苏南京210023

目的制备转铁蛋白(transferrin,Tf)修饰的雷公藤甲素(triptolide,TP)脂质体(Tf-TP@Lip),并对其进行质量评价和体外靶向性研究。方法采用薄膜分散法制备Tf-TP@Lip,以包封率和载药量为考察指标,通过单因素考察和星点设计-效应面优化法筛... 详细信息

目的制备转铁蛋白(transferrin,Tf)修饰的雷公藤甲素(triptolide,TP)脂质体(Tf-TP@Lip),并对其进行质量评价和体外靶向性研究。方法采用薄膜分散法制备Tf-TP@Lip,以包封率和载药量为考察指标,通过单因素考察和星点设计-效应面优化法筛选处方和最佳制备工艺;采用超滤离心法测定药物包封率;透射电子显微镜(TEM)观察脂质体微观形态;激光粒度仪测定脂质体的粒径、多分散指数(polydispersity index,PDI)和Zeta电位;并对其体外释放情况进行考察;采用流式细胞仪和荧光显微镜探究细胞摄取情况。结果优化后Tf-TP@Lip的处方和工艺:脂药比为5.72∶1,脂胆比为8.11∶1,磷脂与DSPE-PEG2000的质量比为6∶1,成膜溶剂为无水乙醇,成膜温度60℃。制得的Tf-TP@Lip平均粒径为(130.33±1.89)nm,PDI为0.19±0.03,Zeta电位为(-23.20±0.64)m V,包封率和载药量分别为(85.33±0.41)%和(9.96±0.21)%,TEM下呈球形,大小均匀、圆整。体外释放研究表明,Tf-TP@Lip相比游离TP具有一定缓释效果。与非靶向雷公藤甲素脂质体(TP@Lip)相比,转铁蛋白的修饰明显增加了SMMC-7721对脂质体的摄取效率。结论制备Tf-TP@Lip稳定、可行,粒径小、外观圆整且具备较高的包封率和载药量,可用于进一步的实验研究。

关键词：雷公藤甲素转铁蛋白修饰脂质体星点设计-效应面法质量评价细胞摄取体外靶向性薄膜分散法超滤离心法

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转铁蛋白修饰的姜黄素脂质体的制备及体外抗肿瘤活性

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中草药 2022年第18期53卷 5649-5656页

作者：季珂韩华韩冰梁绿圆祝侠丽关延彬河南中医药大学药学院河南郑州450040 河南中医药大学儿科医学院河南郑州450040

目的制备转铁蛋白(transferrin,Tf)修饰的姜黄素(curcumin,Cur)脂质体(Tf-Cur-Lip),并研究其理化性质和体外抗肿瘤活性。方法采用薄膜分散法制备Tf-Cur-Lip,对其形态、粒径、多分散性指数、包封率、载药量、体外释放等进行表征;以人... 详细信息

目的制备转铁蛋白(transferrin,Tf)修饰的姜黄素(curcumin,Cur)脂质体(Tf-Cur-Lip),并研究其理化性质和体外抗肿瘤活性。方法采用薄膜分散法制备Tf-Cur-Lip,对其形态、粒径、多分散性指数、包封率、载药量、体外释放等进行表征;以人前列腺癌DU154细胞为模型进行细胞抑制率实验与细胞摄取实验。结果所制得的Tf-Cur-Lip呈类球形,大小分布均匀,平均粒径为(68.27±0.36)nm,多分散指数为0.194±0.050,平均包封率与载药量分别为(98.13±0.38)%与(2.94±0.38)%。体外释放研究表明,Tf-Cur-Lip相比游离姜黄素具有一定缓释效果。MTT实验结果表明Tf-Cur-Lip对DU145细胞的抑制作用显著高于游离姜黄素,与非靶向姜黄素脂质体(Cur-Lip)相比,转铁蛋白的修饰明显增加了DU145细胞对脂质体的摄取效率。结论成功制备了Tf-Cur-Lip,该脂质体能够提高肿瘤靶向性,具有一定的抗肿瘤活性。

关键词：姜黄素转铁蛋白脂质体抗肿瘤活性薄膜分散法靶向性

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转铁蛋白家族基因在褐飞虱生存及生殖中的作用研究

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转铁蛋白家族基因在褐飞虱生存及生殖中的作用研究

作者：吴建艮中国计量大学

学位级别：硕士

褐飞虱Nilaparvata lugens St(?)l是一种危害严重的半翅目水稻害虫。昆虫转铁蛋白是一种具有多种功能的蛋白质,不同的转铁蛋白家族成员可能在铁稳态、先天免疫等过程中发挥不同的作用。然而,不同转铁蛋白对褐飞虱存活和繁殖的作用未见报... 详细信息

褐飞虱Nilaparvata lugens St(?)l是一种危害严重的半翅目水稻害虫。昆虫转铁蛋白是一种具有多种功能的蛋白质,不同的转铁蛋白家族成员可能在铁稳态、先天免疫等过程中发挥不同的作用。然而,不同转铁蛋白对褐飞虱存活和繁殖的作用未见报道,其在防治褐飞虱方面的潜力仍不清楚。因此,研究转铁蛋白基因干扰对褐飞虱的影响,分析转铁蛋白基因作为褐飞虱防治靶标的潜力,对褐飞虱的防治具有重要意义。本研究根据课题组前期褐飞虱与不同水稻品种互作的转录组信息,筛选出3个转铁蛋白基因NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3。通过PCR扩增技术克隆得到了这3个基因的cDNA全长。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)研究了转铁蛋白家族成员在褐飞虱中的时空表达规律。应用RNA干扰(RNAi)技术敲减了这3个基因表达量,研究其对褐飞虱生长发育及繁殖力的影响。具体研究结果如下:一、褐飞虱转铁蛋白基因NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3的克隆及表达规律研究(一)全长cDNA的克隆及序列分析利用PCR技术克隆获得NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3基因的cDNA全长序列,3个基因cDNA的全长分别为2085 bp、2451 bp和2241 bp,分别编码含694、800和744个氨基酸的蛋白质。SMART在线工具分析表明NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3均具有一个信号肽和两个转铁蛋白结构域,但只有NlTsf2具有一个跨膜结构域。此外,NlTsf3还含有一个磷酸酯bd结构域(391-605)与第二个转铁蛋白结构域(378-708)重叠。(二)利用RT-qPCR技术进行表达规律研究RT-qPCR结果显示,3个转铁蛋白基因NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3在褐飞虱的不同发育阶段和不同组织中均有表达,且在所有组织中的表达模式相似,但在不同发育阶段表现出不同的表达模式。NlTsf1基因在若虫和雄虫的表达量较高,但在卵和雌虫中表达量相对较低。NlTsf2基因在雄虫和卵发育的中期表达量高,但在若虫和雌虫中很少表达。NlTsf3基因在产后第1天的卵中表达量低,其它所有发育阶段均呈高水平表达。NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3基因在成虫不同组织或身体部位具有相似的表达模式。在不同组织部位中,NlTsf2和NlTsf3基因在胸部、表皮和头部的表达量较高,而卵巢的表达量最低,除NlTsf2基因在头部表达量低外,在其它组织中的表达量与NlTsf2和NlTsf3相似。此外,RT-qPCR结果还显示3个转铁蛋白基因NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3在抗性水稻R1上饲养的褐飞虱中相对表达量均受到不同程度的抑制。其中,NlTsf3基因受到抗性水稻R1的抑制作用最为严重,相对表达量仅为0.1,而在感性水稻S9上饲养的褐飞虱中,相对表达量为0.9。NlTsf1基因的表达也受到抗性水稻R1的显著抑制,但NlTsf2基因的表达受到抗性水稻R1的抑制与对照组相比无显著性差异。二、褐飞虱转铁蛋白基因NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3的功能研究(一)RNA干扰效果的检测通过显微注射法分别对3龄若虫、雌虫和雄虫的NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3基因进行RNA干扰,RT-qPCR结果表明干扰效果较好:干扰若虫后3个转铁蛋白基因在5天内干扰组的基因表达量均显著低于对照组,第5天的干扰效果最好,表达量水平分别降低了99.4%、96.00%和97.3%。干扰雌虫后3个转铁蛋白基因的表达量在第4天显著降低,分别降低了93.8%、96.3%和55.1%。同样,与对照组相比,干扰雄虫后在第4天表达量显著降低,分别降低了80.1%、93.3%和65.1%。因此,对NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3基因进行RNA干扰可以有效地抑制靶基因的表达。(二)RNA干扰对褐飞虱存活率的影响干扰褐飞虱转铁蛋白基因NlTsf1、NlTsf2和NlTsf3后对其存活率产生了不同的影响。对若虫存活率的影响:与dsGFP处理的对照组相比,dsNlTsf3处理后若虫的存活率从第2天到第4天急剧下降,然后逐渐变缓,在第11天时大幅度下降至3.3%,而dsNlTsf1和dsNlTsf2处理后若虫的存活率分别下降至58.9%和56.7%。然而dsGFP对照组的存活率为78.9%。对雄虫存活率的影响:注射dsNlTsf1、dsNlTsf2和dsNlTsf3后雄虫的存活率变化趋势相似,雄虫在第11天的存活率分别为11.1%、0%和0%,而dsGFP对照组的存活率为73.3%。对雌虫的三个转铁蛋白基因进行RNA干扰后表现出不同的致死效应。dsNlTsf3的致死作用最强,dsNlTsf1的致死作用次之。dsNlTsf2与dsGFP对照相比,除在第11、12天略有下降外,未表现出显著的致死效应。dsN

关键词：褐飞虱转铁蛋白存活生殖 RNA干扰

转铁蛋白修饰的铁酸钴纳米粒子的制备及用于化学动力学-光热协同抗肿瘤研究

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转铁蛋白修饰的铁酸钴纳米粒子的制备及用于化学动力学-光热协同...

作者：陈霓平广东工业大学

学位级别：硕士

肿瘤是危害人体健康的一种重要疾病,传统的治疗手段(放疗、手术、化疗)创伤大、并发症多,同时药物对正常细胞的无差别攻击,会造成巨大的副作用,给患者带来极大的痛苦。基于肿瘤微环境(TEM)的纳米药物具有高的肿瘤组织穿透性和滞留效应,... 详细信息

肿瘤是危害人体健康的一种重要疾病,传统的治疗手段(放疗、手术、化疗)创伤大、并发症多,同时药物对正常细胞的无差别攻击,会造成巨大的副作用,给患者带来极大的痛苦。基于肿瘤微环境(TEM)的纳米药物具有高的肿瘤组织穿透性和滞留效应,大大提高其被肿瘤细胞特异性摄取,从而增加肿瘤治疗的有效性和安全性。新型抗肿瘤纳米药物治疗方法有化学动力学疗法、光热疗法、声动力疗法等,但是受到肿瘤部位富集较少、分布不均和单一疗法疗效差等问题限制。为了实现肿瘤安全高效的精准治疗,本论文提出了一种转铁蛋白靶向修饰的铁酸钴纳米粒子,实现了光热和化学动力学协同的精准抗肿瘤治疗。第一部分,转铁蛋白修饰的铁酸纳米粒子(Co FeO@Tf,CFOT)的构建及性质和性能表征。首先,以聚乙二醇衍生物m-PEG-P(AGE-MPA)为稳定剂,采用溶剂热法一步合成了铁酸钴(Co FeO,CFO)纳米粒子,然后通过转铁蛋白(transferrin,Tf)与金属离子螯合作用制备了Co FeO@Tf(CFOT)复合纳米粒子。通过XRD、FTIR、XPS、TEM、Zeta电位和DLS等对CFOT纳米粒子进行表征,证明了CFOT纳米粒子的结晶度高、粒径小(63.10±12.59 nm)、分散度好并带高的负电荷(-22.8 m V),具有很好的稳定性和水溶性。在808 nm激光的照射下该纳米粒子光热转换效率高达46.5%且光热稳定性优异。此外,亚甲基蓝(MB)降解实验和EPR实验证明了CFOT具有优异的化学动力学性能。第二部分,CFOT纳米粒子通过光热/化学动力学协同疗法用于肿瘤精准治疗。首先通过细胞实验对CFOT的体外抗肿瘤活性进行评价。MTT实验中在CFOT的作用下人肝细胞(L-O2)和人脐静脉上皮细胞(HUVEC)的存活率均高于80%,表明CFOT对正常细胞毒性小,具有优异的生物相容性和安全性。在细胞摄取实验以及H22移植瘤小鼠的体内离子分布实验中,CFOT纳米粒子在肝癌细胞(H22,Hep G2)以及H22肿瘤组织蓄积较多,体现CFOT纳米粒子优异的肿瘤特异靶向性。肝癌细胞的MTT实验、Annexin V-FITC-PI细胞凋亡流式实验、Calcein-AM/PI双染细胞实验中,在激光照射下CFOT纳米粒子导致了85%以上肝癌细胞死亡,其对肿瘤细胞的杀伤效果优于无Tf修饰的CFO。进一步开展的H22移植瘤Balb/c小鼠模型的治疗实验表明CFOT的光热/化学动力学协同的精准治疗策略具有很好的治疗效果,能有效的治愈移植型小鼠肝癌肿瘤。总之,本研究成功地合成了转铁蛋白修饰的CFOT纳米粒子,该纳米粒子具有良好的光热性能和化学动力学性能,生物安全性能优越,肿瘤靶向性明确,在光热-化学动力学疗法协同作用下能显著抑制体内移植H22肿瘤的生长。本课题可为肝癌的治疗提供一种新的治疗手段。

关键词：铁酸钴转铁蛋白肿瘤靶向化学动力学疗法光热疗法

转铁蛋白修饰氧化铁纳米颗粒的构建及磁热对其肿瘤靶向效能调控研究

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转铁蛋白修饰氧化铁纳米颗粒的构建及磁热对其肿瘤靶向效能调控研...

作者：卢俊杰西北大学

学位级别：硕士

氧化铁纳米颗粒因其良好的生物相容性、独特的物理化学性质、尺寸/组分/表面依赖的磁学性质,在药物递送、磁共振成像、磁热治疗等领域展现了巨大的应用潜能。肿瘤部位的有效富集是发挥其功能的基础,但是基于氧化铁纳米颗粒的磁性纳米药... 详细信息

氧化铁纳米颗粒因其良好的生物相容性、独特的物理化学性质、尺寸/组分/表面依赖的磁学性质,在药物递送、磁共振成像、磁热治疗等领域展现了巨大的应用潜能。肿瘤部位的有效富集是发挥其功能的基础,但是基于氧化铁纳米颗粒的磁性纳米药物的平均肿瘤递送效率不足1%,抵达肿瘤细胞的纳米药物则更少,这极大限制了其临床转化应用。利用靶向基团修饰氧化铁纳米颗粒被认为是改善其肿瘤递送效率的有效策略。尽管在体外细胞水平修饰靶向基团可显著改善纳米颗粒的靶向效能,然而,一旦应用于体内,该策略提升纳米颗粒的肿瘤靶向效能十分有限,效果难以令人满意。其根本原因是纳米药物在进入体内时会在其表面快速形成蛋白冠,该冠状物可屏蔽靶向基团使它难以发挥功能,导致体内递送效能低下。因此,迫切需要发展肿瘤靶向新策略,改善靶向修饰氧化铁纳米颗粒的肿瘤递送效能。本论文选用已在临床广泛应用的转铁蛋白(Tf)为靶向基团,将其修饰于超顺磁氧化铁纳米颗粒表面,系统研究氧化铁纳米颗粒的磁感应热效应对肿瘤靶向递送的影响规律和机制,建立了磁热提高靶向修饰磁性纳米药物肿瘤递送效能的新策略。首先,我们制备了16 nm超顺磁氧化铁纳米颗粒(SPIO),为使其在水相中分散,通过配体交换法将多巴胺-聚乙二醇(PEG)-羧基修饰于颗粒表面,获得PEG修饰SPIO,并进一步通过颗粒表面羧基与转铁蛋白氨基的酰胺反应制备转铁蛋白修饰的超顺磁氧化铁纳米颗粒(SPIO-Tf);通过控制转铁蛋白与SPIO的投料比,得到了三种不同转铁蛋白修饰量的颗粒,分别命名为SPIO-Tf 1、SPIO-Tf 2、SPIO-Tf 3。在交变磁场下(300 Oe,400 k Hz)三种SPIO-Tf颗粒的SAR值分别为324 watt/g(SPIO-Tf 1)、327 watt/g(SPIO-Tf 2)和331 watt/g(SPIO-Tf 3),与SPIO在相同条件下的SAR值(327 watt/g)相比没有明显变化,说明所制备的SPIO-Tf磁感应热性能良好,且转铁蛋白修饰对其磁热性能没有影响。综合三种SPIO-Tf的水合粒径、表面电位和蛋白修饰量(BCA法)表征结果,证明我们成功制备了三种不同转铁蛋白修饰量的SPIO-Tf。随后,我们研究了10%血清下磁热处理对SPIO-Tf靶细胞递送效能的影响。实验结果显示,在血清环境下SPIO-Tf的靶细胞(A549细胞,转铁蛋白受体高表达)递送效能显著下降(三组颗粒均低于50%),而磁热处理能够一定程度缓解血清的负面影响。通过优化转铁蛋白修饰量、磁场强度、加场时间等因素,得到SPIO-Tf 2在300Oe交变磁场下处理15 min为最优条件;较对照组,磁热处理后SPIO-Tf 2对A549细胞的递送效能提升58.4%。进一步,我们探究了磁热处理改善血清下SPIO-Tf靶细胞递送效能的机制,发现磁热处理增加了颗粒表面转铁蛋白的暴露,而使转铁蛋白与A549细胞表面对应受体识别,进而提高SPIO-Tf的细胞内吞。此外,我们在细胞水平进行该策略的普适性研究。首先探讨了磁热对不同PEG长度SPIO-Tf靶细胞递送效能影响,结果发现该策略能够整体提高不同PEG长度颗粒的靶细胞递送效能;PEG分子量越低,磁热对其靶细胞递送效能的改善更加显著,其中,PEG分子量为2000时,对应颗粒的靶细胞递送效能提升了55.6%。其次,我们探究了磁热对不同血清浓度下SPIO-Tf 2的靶细胞递送效能的影响。结果显示,该策略可改善颗粒在不同血清浓度下的靶细胞递送效能,即使在100%血清浓度下,仍能显著提升颗粒的靶细胞递送效能(68.8%)。最后我们研究了该策略对SPIO-Tf在体内的靶细胞递送效能的影响。选择Balb/C裸鼠(雄性,6周)皮下接种A549细胞来构建肿瘤模型,通过组织分布、DAB染色组织切片以及活体成像对颗粒的肿瘤靶细胞递送效能进行评价。组织分布结果显示,磁热处理可有效降低颗粒在肝、脾等网状内皮清除系统相关脏器的分布,大幅提升其在肿瘤的富集(提升2.68倍)。进一步通过DAB染色发现,磁热处理组在肿瘤的富集量更多,且多数颗粒分布于肿瘤细胞胞质中。活体成像数据显示,在注射SPIO-Tf2颗粒24 h后,磁热处理后的小鼠肿瘤部位T信号降低更为明显,且降低的面积也更大。此外,HE染色结果显示,小鼠接受5 mg Fe/kg的磁性颗粒和300 Oe交变磁场处理后,其心、肝、脾、肺、肾、脑等主要器官无病理变化。综上,本论文利用氧化铁纳米颗粒磁热效应,开发了一种远程无创可显著改善靶向修饰氧化铁纳米颗粒在血清下的肿瘤细胞递送效能的方法,并在体外和体内实验证实了策略的有效性,为提高磁性纳米药物肿瘤细胞递送效能提供了新思路。

关键词：氧化铁纳米颗粒肿瘤细胞靶向递送转铁蛋白蛋白冠磁热效应

转铁蛋白介导多发性骨髓瘤细胞铁死亡的机制研究

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转铁蛋白介导多发性骨髓瘤细胞铁死亡的机制研究

作者：张维敏苏州大学

学位级别：硕士

目的:探究多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)细胞对铁死亡(Ferroptosis)产生异质性的原因,并寻找诱导MM细胞铁死亡的方法,揭示新的转铁蛋白(Transferrin,TF)调控通路,为MM的临床治疗提供新的方向。方法:检测三株MM细胞中铁死亡诱导剂Er... 详细信息

目的:探究多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)细胞对铁死亡(Ferroptosis)产生异质性的原因,并寻找诱导MM细胞铁死亡的方法,揭示新的转铁蛋白(Transferrin,TF)调控通路,为MM的临床治疗提供新的方向。方法:检测三株MM细胞中铁死亡诱导剂Erastin的IC50(The half maximal inhibitory concentration,IC50),利用液相色谱-质谱联用技术(Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry,LC-MS)获得三株 MM 细胞的代谢数据。KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库用于对差异代谢物进行富集分析,从差异代谢物中筛选与铁死亡相关的代谢物,探究三株MM细胞氨基酸、多不饱和脂肪酸代谢物差异。收集MM患者铁代谢相关数据,明确铁代谢异常蛋白。结合体内及体外实验验证Erastin联合转铁蛋白治疗MM的效果。利用GEO(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,分析TF在MM疾病进展中的变化,生存分析评价TF在MM预后中的价值。MM上清培养单核细胞,qPCR、免疫荧光、ELISA明确单核细胞TF基因表达量及蛋白分泌水平的变化。通过UCSC(Universityof California Santa Cruz,UCSC)预测可能调控TF的转录因子,并通过染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)进行验证。分离纯化 MM 细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs),流式细胞术和激光共聚焦下示踪观察,检测单核细胞对MM细胞来源EVs的摄取,Western blot 验证 CCAAT 增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding protein beta,CEBPB)在MM细胞来源EVs中的表达。将下调CEBPB表达的EVs加入单核细胞中并检测单核细胞TF基因表达量及蛋白分泌水平的变化。使用DrugBank数据库寻找针对CEBPB的抑制剂,检测骨髓瘤细胞中槲皮素的IC50以及CEBPB蛋白表达水平。结果:U266较另两株MM细胞对Erastin更为敏感,其谷胱甘肽(Glutathione,GSH)含量高于其他两株MM细胞。MM病人TF显著降低,TF增强了 Erastin诱导MM细胞发生铁死亡的效果,体内实验中TF联合Erastin抑制了 MM小鼠肿瘤生长,同时小鼠的生存时间延长。随着MM的进展,TF表达量显著降低,TF低表达组MM患者预后较差。MM病人骨髓TF降低,骨髓单个核细胞中主要由CD14+单核细胞分泌转铁蛋白。MM细胞培养上清抑制单核细胞TF表达量与蛋白分泌含量。MM细胞来源的EVs可以被单核细胞所摄取,MM细胞来源的EVs直接抑制单核细胞TF表达量与蛋白分泌含量。在三套数据库中共有且仅有一个转录因子CEBPB与TF呈显著的负相关,ChIP-qPCR验证CEBPB可与TF的启动子区域结合。Western blot结果验证了 CEBPB存在于MM细胞分泌的EVs中,在MM细胞系中下调CEBPB的表达,MM分泌的EVs中CEBPB表达水平同样被下调。下调CEBPB表达的MM-EVs加入单核细胞中,单核细胞TF表达量与蛋白分泌含量未被抑制。CEBPB的表达量在健康人中较低,随着骨髓瘤疾病的进展其表达量逐渐升高,CEBPB高表达的患者预后较差。槲皮素为CEBPB的抑制剂,槲皮素抑制MM细胞增殖,同时CEBPB的基因表达量和蛋白水平降低。结论:MM病人TF显著降低,TF与Erastin联合使用有效引起MM细胞发生铁死亡,并且MM细胞分泌的EVs会被单核细胞所吞噬,其内含物CEBPB会与单核细胞TF启动子区域结合抑制其转录,从而抑制单核细胞分泌TF。同时提出槲皮素作为CEBPB的抑制剂,能有效抑制MM细胞增殖。

关键词：多发性骨髓瘤铁死亡转铁蛋白细胞外囊泡 CEBPB

转铁蛋白在中红侧沟茧蜂与寄主互作中的功能研究

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转铁蛋白在中红侧沟茧蜂与寄主互作中的功能研究

作者：蒋新怡西北农林科技大学

学位级别：硕士

寄生蜂是田间防控害虫的重要生物防治因子之一,其在产卵时随之注入的毒液等寄生因子会抑制寄主的免疫反应,并调控寄主的生理过程,以保证寄生蜂后代的生长发育。中红侧沟茧蜂(Microplitis mediator)转录组数据显示其毒腺中存在转铁蛋白(T... 详细信息

寄生蜂是田间防控害虫的重要生物防治因子之一,其在产卵时随之注入的毒液等寄生因子会抑制寄主的免疫反应,并调控寄主的生理过程,以保证寄生蜂后代的生长发育。中红侧沟茧蜂(Microplitis mediator)转录组数据显示其毒腺中存在转铁蛋白(Transferrin,Tsf)。转铁蛋白具有结合和运输铁离子等功能,是参与维持机体铁稳态的重要蛋白。铁是几乎所有生物体生存所必需的元素,并参与多项重要的代谢过程,对机体的正常生长发育不可或缺。为了探究MmTsf在中红侧沟茧蜂与寄主东方粘虫(Pseudaletia separata)互作过程中的功能,本研究利用原核表达系统表达并纯化了重组MmTsf蛋白;检测了MmTsf基因在寄生蜂组织中的表达情况以及在雌蜂中的RNA干扰效率;检测了不同处理下寄主血淋巴中铁离子浓度,以及干扰MmTsf后寄生,对子代蜂生长发育的影响。主要结果如下:1.利用生物信息学对MmTsf蛋白进行理化性质分析,其含有710个氨基酸,分子量为78.3 k Da,等电点为5.37,并具有一段19个氨基酸的信号肽。MmTsf含有两个保守的TR-FER结构域。在与多个物种的转铁蛋白进行序列比对后发现,位于MmTsf N端结构域的参与结合和稳定铁离子的氨基酸残基(一个天冬氨酸、两个酪氨酸及一个苏氨酸和一个精氨酸)高度保守。2.体外构建原核表达载体p ET-28a-MmTsf,并转化大肠杆菌,经诱导表达后,利用镍亲和柱纯化后获得重组MmTsf蛋白并制备抗体。经过脲素梯度透析,获得复性的重组MmTsf蛋白。活性检测表明其具有结合铁离子的能力。3.利用实时荧光定量检测MmTsf基因在雌蜂、卵巢、毒腺等组织和雄蜂中的表达情况,结果表明该基因在上述组织样品中均有表达。显微注射ds MmTsf,可降低中红侧沟茧蜂MmTsf的表达,24 h和48 h干扰效率达到70%左右。同时我们对注射ds MmTsf的雌蜂进行解剖,获得其卵巢以及毒液样品并经Western blot检测,结果显示成功干扰目的基因的雌蜂,其卵巢和毒液中MmTsf蛋白含量明显降低。4.检测不同处理下寄主血淋巴的铁离子浓度,发现相较于未被寄生的粘虫,寄生12 h和24 h后的粘虫血淋巴中铁离子浓度显著降低;用MmTsf-RNAi寄生蜂进行寄生,在寄生12 h后,寄主血淋巴铁离子浓度显著升高;向寄主体内直接注射复性后的重组蛋白,注射12 h后,寄主血淋巴的铁离子浓度显著降低;MmTsf-RNAi寄生蜂寄生粘虫后,通过显微注射将复性后的重组蛋白注入到寄主体内,处理组相较于对照组的铁离子浓度无明显差异。5.用干扰MmTsf后1 d的雌蜂寄生粘虫,并统计后代蜂在寄主体内的发育历期、出茧率、羽化率以及羽化时间。结果表明处理组与对照组的子代蜂在寄主体内的发育时期、出茧率和羽化时间均无明显差异,处理组的羽化率相较于对照组有显著下降,约20%的子代蜂不能正常羽化。综上所述,MmTsf是中红侧沟茧蜂的一种重要的毒液蛋白,具有结合寄主东方粘虫血淋巴中铁离子的功能,对子代蜂在寄主体内的正常生长发育以及羽化具有重要作用。

关键词：中红侧沟茧蜂东方粘虫毒液蛋白转铁蛋白铁