检索结果-南通市图书馆

转基因细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型的实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

解剖学报 1997年第2期28卷 127-131页

作者：张进禄徐群渊田竟生杨慧郑少鹏刘玉军首都医科大学北京神经科学研究所

以６－羟多巴胺单侧损毁大鼠中脑多巴胺能系统，建立帕金森病动物模型，通过检测给予阿普吗啡后大鼠的旋转圈数，判断多巴胺的减少或恢复程度。向脑内植入能表达酪氨酸羟化酶的遗传工程改造细胞，以改善大鼠模型的运动失常和纹状体多巴... 详细信息

以６－羟多巴胺单侧损毁大鼠中脑多巴胺能系统，建立帕金森病动物模型，通过检测给予阿普吗啡后大鼠的旋转圈数，判断多巴胺的减少或恢复程度。向脑内植入能表达酪氨酸羟化酶的遗传工程改造细胞，以改善大鼠模型的运动失常和纹状体多巴胺水平。将带有酪氨酸羟化酶基因的重组载体ｐＣＭＶＴＨ在体外通过脂质体转染技术转入成肌细胞和肌管细胞内，再将这些经遗传改造、表达酪氨酸羟化酶的细胞植入纹状体。结果显示，这些表达酪氨酸羟化酶的肌细胞可在大鼠模型体内长期存活，并使模型大鼠的异常运动明显改善及使纹状体内多巴胺水平升高，显示此种方法有很重要的临床实用性。

关键词：震颤性麻痹基因治疗转基因细胞脑内移植

神经细胞及转基因细胞脑内移植的基础与临床研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2002年第7期82卷 440-444页

作者：吴承远刘玉光王建刚杨扬江玉泉山东大学齐鲁医院神经外科济南250012

目的　探讨移植的胚胎小脑组织在成年小鼠脑内 ,黑质细胞和TH转基因细胞移植在猴脑内 ,人胚脑细胞植入人脑内能否存活及观察植入的神经元能否纠正和改善中枢神经系统的功能缺陷和症状。方法　 (1)将胎龄 13d的C5 7BL/ 6小鼠胚胎小脑组... 详细信息

目的　探讨移植的胚胎小脑组织在成年小鼠脑内 ,黑质细胞和TH转基因细胞移植在猴脑内 ,人胚脑细胞植入人脑内能否存活及观察植入的神经元能否纠正和改善中枢神经系统的功能缺陷和症状。方法　 (1)将胎龄 13d的C5 7BL/ 6小鼠胚胎小脑组织悬液植入 3个月龄的BALB/c成年小鼠小脑内。 (2 )将构建的TH基因修饰细胞及胚脑黑质细胞植入猴帕金森病模型脑尾状核内。术后进行组织学观察。在此基础上 ,将胎龄为 9～ 12周的人胚胎小脑细胞悬液植入到 6例重度小脑萎缩病人的小脑内 ,并观察疗效。选用自动流产人胚黑质细胞及肾上腺髓质细胞悬液移植到 5例晚期帕金森病病人脑尾状核内。结果　小鼠及猴的动物实验组织学证实神经细胞移植后可在受体脑内存活和再生 ,并有浦氏细胞分化成熟和迁徙到颗粒细胞层。TH基因修饰细胞移植到猴的尾状核内 ,可以纠正帕金森病猴的症状和体征 ;移植 6个月后组织切片表明猴帕金森病模型脑微包囊内转基因细胞存活而且TH基因表达呈强阳性。 6例重度小脑萎缩病人及 5例晚期帕金森病病人移植后近期疗效良好 ,多数病例远期疗效退步 ,仅有 2例病人疗效稳定。结论　未成熟的神经细胞或转基因细胞在受体脑内可以存活 ,并具有神经细胞再生和改善神经功能的潜力。

关键词：脑组织移植细胞移植脑疾病帕金森病神经细胞转基因细胞实验研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

HCV 5'NCR转基因细胞模型的建立

病毒学报 1998年第4期14卷 296-301页

作者：王小红王升启李梦东朱宝珍第三军医大学西南医院全军传染病中心军事医学科学院放射医学研究所

缺乏合适的ＨＣＶ感染细胞及小动物模型，是抗ＨＣＶ药物研究和开发的主要障碍之一。建立一种ＨＣＶ５＇ＮＣＲ调控荧光素酶基因的转基因细胞模型，可为以ＨＣＶ５＇ＮＣＲ及Ｃ基因５＇端为靶的反义寡核苷酸及特异性核酶等抗ＨＣＶ药物... 详细信息

缺乏合适的ＨＣＶ感染细胞及小动物模型，是抗ＨＣＶ药物研究和开发的主要障碍之一。建立一种ＨＣＶ５＇ＮＣＲ调控荧光素酶基因的转基因细胞模型，可为以ＨＣＶ５＇ＮＣＲ及Ｃ基因５＇端为靶的反义寡核苷酸及特异性核酶等抗ＨＣＶ药物的评价及筛选创造条件。将ＨＣＶ５＇ＮＣＲ－Ｃ基因与荧光素酶基因的融合基因片段插入ｐＣＩ－ｎｅｏ表达载体，通过ＰＣＲ扩增、酶切反应、质粒大小检测及荧光素酶瞬间表达活性鉴定等试验，获得ＨＣＶ５＇ＮＣＲ调控荧光素酶的稳定表达质粒ｐＨＣＶ－ｎｅｏ４。将ｐＨＣＶ－ｎｅｏ４转染ＨｅｐＧ２细胞，经Ｇ４１８筛选，从１５０个克隆中获得一个荧光素酶活性表达为１４４３ＭＶ的细胞株（ＨｅｐＧ２．９７０６）。该株细胞内ＨＣＶ片段的ＤＮＡ及ｍＲＮＡ检测均呈阳性，接种培养板后，细胞荧光素酶活性表达持续１４４小时，无明显降低。该株细胞已传６０代。

关键词：丙型肝炎病毒 HCV HepG2肝癌细胞转基因细胞

逆转录病毒介导的PrVEa株gD基因转基因细胞系的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2005年第1期36卷 48-53页

作者：石德时兰盛银洪文洲吴美洲陈焕春华中农业大学生命科学技术学院分子细胞生物学研究室武汉430070 华中农业大学动物医学院动物病毒室武汉430070

采用逆转录病毒介导的方法,将PrVEa株gD基因整合进PK 15细胞染色体中,建立起表达gD蛋白的细胞系PKD。通过荧光观察,发现PKD表达的gD分布在细胞膜上,具备原有的免疫反应性;同时,还发现gD蛋白在PKD细胞膜上呈明显极性分布。PCR技术和间接... 详细信息

采用逆转录病毒介导的方法,将PrVEa株gD基因整合进PK 15细胞染色体中,建立起表达gD蛋白的细胞系PKD。通过荧光观察,发现PKD表达的gD分布在细胞膜上,具备原有的免疫反应性;同时,还发现gD蛋白在PKD细胞膜上呈明显极性分布。PCR技术和间接免疫荧光染色法对PKD进行检测的结果表明该细胞系具有良好的遗传稳定性。在相同培养条件下,PKD细胞的生长速度及形态与正常PK 15细胞无明显差异。用脂质体介导的方法,将PrVEa株基因组转染PKD细胞,在转染后30h细胞发生典型病变,表明PKD细胞对脂质体的毒害具有耐受性。TCID50测定结果显示:PKD对PrVEa株增殖尽管有明显的抑制作用,但PrVEa株仍能在其上正常增殖。上述研究结果提示:所构建的细胞系PKD可用于构建PrVEa株gD基因缺失毒株,为PrVEa株gD基因缺失毒株的构建提供了必备的工具。

关键词： PK D细胞逆转录病毒介导正常细胞系基因缺失转基因细胞 Ea株毒株生长速度

以不同类型的转基因细胞为核供体生产牛的转基因克隆胚胎

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学（C辑） 2003年第6期33卷 532-538页

作者：龚国春戴蕴平樊宝良朱化彬王海平王莉莉方昌阁万荣刘颖李荣李宁中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094 中国农业科学院畜牧研究所北京100094 北京基因达科技公司北京100084

利用所构建的含新霉素抗性(Neo^r)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞,经过800μg/mL的 G418筛选14 d后,均获得了阳性细胞株... 详细信息

利用所构建的含新霉素抗性(Neo^r)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞,经过800μg/mL的 G418筛选14 d后,均获得了阳性细胞株.分别以未转基因牛颗粒细胞和4种细胞系的转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.结果表明:(i)转基因与未转基因牛颗粒细胞的重组胚的囊胚发育率(44.6％vs 42.8％)、移植妊娠率(19％ vs 25％)差异不显著(P>0.05);(ii)比较4种类型转基因细胞的重组胚的囊胚发育率,发现胎儿输卵管上皮细胞(49.1％)和颗粒细胞(44.6％)最高,牛胎儿成纤维细胞(37.2％)次之,胎儿卵巢上皮细胞的重组胚囊胚发育率(22.5％)最低,三者之间差异显著(P细胞的转基因与否对牛克隆胚胎的体外和体内早期发育影响不明显;通过体细胞核移植技术,牛胎儿输卵管上皮细胞和颗粒细胞可以有效地生产牛转基因囊胚,并且绿色荧光蛋白作为一种无毒性作用的筛选标记,可用于转基因胚胎的筛选.

关键词：转基因细胞核供体牛体细胞核移植绿色荧光蛋白囊胚克隆胚胎

高效液相色谱法测定人肝细胞色素P4503A4转基因细胞中氨氯地平

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（医学版） 2003年第6期32卷 510-513页

作者：吴永江潘云雪曾苏浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室浙江杭州310031

目的 :研究氨氯地平经人肝细胞色素 P4 5 0 3A4 (CYP3A4 )的代谢 ,建立反相高效液相色谱的测定人肝转基因细胞 CYP3A4酶 S9孵育液中氨氯地平浓度的方法。方法 :与人肝转基因细胞提取的 S9上清液孵育之后的样品 ,用 3倍量的甲醇沉淀后离... 详细信息

目的 :研究氨氯地平经人肝细胞色素 P4 5 0 3A4 (CYP3A4 )的代谢 ,建立反相高效液相色谱的测定人肝转基因细胞 CYP3A4酶 S9孵育液中氨氯地平浓度的方法。方法 :与人肝转基因细胞提取的 S9上清液孵育之后的样品 ,用 3倍量的甲醇沉淀后离心 ,取上清液用 0 .4 5μm微孔滤膜滤过后进样。采用 Hypersil C18柱 ,以乙腈 -磷酸盐缓冲液 (4 5∶ 5 5 ,v/ v,p H4 .5 )为流动相 ,普萘洛尔为内标 ,在 2 5 0 nm波长处测定。结果 :氨氯地平浓度在 0 .2～ 30 .0μg/ ml范围内线性关系良好 ,r=0 .9993,方法平均回收率为 (98.2± 2 .4 ) % (n=5 ) ,日内和日间相对标准偏差(RSD)均小于 10 % ,检测限为 2 0 ng/ ml,定量限为 0 .2 μg/ ml(回收率为 10 4 .0 % ,RSD为 11.4 % ,n=5 )。结论 :建立的反相高效液相色谱方法简便、准确 ,可用于研究氨氯地平在人肝 CYP3A4转基因细胞中的代谢。

关键词：氨氯地平反相高效液相色谱细胞色素-P450 转基因细胞孵育

普萘洛尔在人肝细胞色素P450转基因细胞中的立体选择性测定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（医学版） 2003年第2期32卷 116-120页

作者：颜小锋周权姚彤炜曾苏余应年浙江大学药学院浙江杭州310031 浙江大学医学院浙江杭州310031

目的 :建立一种手性色谱法 ,用于普萘洛尔经人肝细胞色素 P4 5 0转基因细胞 S9代谢的立体选择性研究。方法 :以 S- (+) -普罗帕酮为内标 ,用柱前 GITC手性衍生化反相高效液相色谱法测定普萘洛尔对映体在 S9孵育液中的浓度。结果 :S- (- ... 详细信息

目的 :建立一种手性色谱法 ,用于普萘洛尔经人肝细胞色素 P4 5 0转基因细胞 S9代谢的立体选择性研究。方法 :以 S- (+) -普罗帕酮为内标 ,用柱前 GITC手性衍生化反相高效液相色谱法测定普萘洛尔对映体在 S9孵育液中的浓度。结果 :S- (- ) -普萘洛尔、内标及 R- (+) -普萘洛尔获基线分离。在 5～ 5 0 0 μmol/ L范围内线性良好。定量限 5 μmol/ L(n=5 ,RSD<10 % )。S- (- ) -和 R- (+) -普萘洛尔的平均回收率分别为 98.7%和 98.1%。日内、日间精密度均小于 10 %。经时孵育试验表明 ,普萘洛尔经 CYP2 C18有 S- (- ) -体优先代谢的立体选择性 ,而经CYP2 C9有 R- (+) -体优先代谢的立体选择性。结论 :该法简便、准确、重现性好、专属性强 ,可以用于普萘洛尔体外代谢的立体选择性研究。

关键词：普萘洛尔人肝细胞色素P450 转基因细胞立体选择性测定手性色谱法

人4-1BB转基因细胞的构建及其对SHI-1细胞的促增殖作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华血液学杂志 2003年第12期24卷 655-656页

作者：徐颖沈丽琴丁天邓忠彬於葛华李文香陈苏宁薛永权张学光苏州大学医学生物技术研究所 215007 上海复旦大学生物化学系苏州大学附属第一人民医院

4-1BB（CD_(137)）又名淋巴细胞激活诱导受体，4-1BB及其配体4-1BBL分别属TNFR/RNF家族分子，是近年颇受重视的一对新型共刺激分子。它们不仅在特异性免疫应答中起着重要的调节作用，而且以其独特的信号传导方式产生效应。我们进行了4-1... 详细信息

4-1BB（CD_(137)）又名淋巴细胞激活诱导受体，4-1BB及其配体4-1BBL分别属TNFR/RNF家族分子，是近年颇受重视的一对新型共刺激分子。它们不仅在特异性免疫应答中起着重要的调节作用，而且以其独特的信号传导方式产生效应。我们进行了4-1BB cDNA的克隆和4-1BB转基因细胞的构建，发现4-1BB转基因细胞能促进急性单核细胞白血病细胞系（SHI-1）的增殖。

关键词： 4-1BB 转基因细胞构建 SHI-1细胞促增殖作用急性单核细胞白血病

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

两种不同的转基因细胞构建体系的比较

中国免疫学杂志 2004年第1期20卷 46-49页

作者：葛彦陈永井施勤孙建军王勤张学光苏州大学医学生物技术研究所苏州215007

目的:比较目的基因在两种不同表达体系构建的转基因细胞上的表达,选择更好的构建体系。方法:脂质体法将重组真核细胞表达载体pcDNA3/FD-L1导入L929细胞,G418(600μg/ml)筛选抗性细胞株,同时将重组逆转录病毒载体pGEZ-Term/PD-L1与辅助... 详细信息

目的:比较目的基因在两种不同表达体系构建的转基因细胞上的表达,选择更好的构建体系。方法:脂质体法将重组真核细胞表达载体pcDNA3/FD-L1导入L929细胞,G418(600μg/ml)筛选抗性细胞株,同时将重组逆转录病毒载体pGEZ-Term/PD-L1与辅助载体共转染293T细胞,包装病毒颗粒,其上清感染L929细胞后,经Zeocin(500μg/ml)筛选抗性细胞。流式细胞仪(FCM)检测目的蛋白在两种细胞膜上的表达。结果:两种体系对目的基因的瞬时表达无明显差别;用pcDNA3构建的转基因细胞膜上目的分子表达稳定性差,表达率低,而用pGEZ-Term构建的则目的蛋白稳定高表达,表达率近100％。结论:两种构建体系均能瞬时表达目的分子,pGEZ-Term表达体系更适于构建长期稳定表达目的基因的转基因细胞。

关键词：真核表达转基因细胞表达效率