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超低温冷冻保存对大黄鱼精子酶活性的影响

海洋渔业 2012年第4期34卷 438-443页

作者：黄晓荣章龙珍庄平刘鉴毅张涛冯广朋赵峰中国水产科学研究院东海水产研究所农业部东海与远洋渔业资源开发利用重点实验室上海200090

研究超低温(-196℃)冷冻保存对大黄鱼(Pseudosiaena crocea)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻... 详细信息

研究超低温(-196℃)冷冻保存对大黄鱼(Pseudosiaena crocea)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后大黄鱼精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,大黄鱼精子的活力下降,精子内GR活性从(4.42±0.29)U·L-1增加到(58.93±2.26)U·L-1(P超低温冷冻保存对大黄鱼精子活力和精子酶活性均有显著影响。

关键词：超低温冷冻保存大黄鱼精子酶活性

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软鳍新光唇鱼精子的超低温冷冻保存

Zoological Research 2012年第3期33卷 283-289页

作者：王晓爱杨君兴陈小勇潘晓赋李再云中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049

2011年,对软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)进行了精子超低温冷冻保存研究。以解冻后的精子活力为指标,采用稀释液D-15,设计不同的抗冻剂种类和浓度,以及不同的实验条件(包括冷冻体积、4℃平衡时间和解冻温度等)探索软鳍新光唇鱼精... 详细信息

2011年,对软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)进行了精子超低温冷冻保存研究。以解冻后的精子活力为指标,采用稀释液D-15,设计不同的抗冻剂种类和浓度,以及不同的实验条件(包括冷冻体积、4℃平衡时间和解冻温度等)探索软鳍新光唇鱼精子的超低温冷冻保存方法。筛选出了适合软鳍新光唇鱼精子超低温冷冻保存的两种抗冻保护剂及其浓度分别为10%MeOH和15%EG,确定了精液与稀释液的最适稀释比例为1:7、4℃平衡时间区间为10～60min、冷冻体积为60μL,以及复苏方法为37℃水浴快速解冻30s。当鲜精活力为(62.33±2.05)%,综合以上最佳实验条件进行保存,解冻后精子的最高活力为(29.67±0.47)%,但效果不理想,不能达到广泛生产运用水平;产生这一结果,可能与异地保育物种的饲养管理有关。因此,在亲鱼培育管理中要最大限度地降低捕获诱发的压力,尽量提供适合的养殖条件。在珍稀鱼类异地保育时,繁殖用雄鱼的培育与雌鱼同等重要,是获得大量高质量仔鱼的关键。

关键词：软鳍新光唇鱼精子超低温冷冻保存活力

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圆口铜鱼精子超低温冷冻保存

中国水产科学 2020年第1期27卷 44-52页

作者：刘光霞吴兴兵何勇凤邓智明杨德国王小明杨少荣刘欢中国水产科学研究院长江水产研究所农业农村部淡水生物多样性保护重点实验室湖北武汉430223 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 中国三峡建设管理有限公司四川成都610041

为建立圆口铜鱼(Coreiusguichenoti)精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统(CASA)评价了4种稀释液(D15、D20、L1、D1), 3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(METH)]在3种体积浓度(7.5%、10%、12.5%, ... 详细信息

为建立圆口铜鱼(Coreiusguichenoti)精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统(CASA)评价了4种稀释液(D15、D20、L1、D1), 3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(METH)]在3种体积浓度(7.5%、10%、12.5%, V/V)下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果,并比较了150 mOsm/kg NaCl与超纯水作为激活剂对精子活力的影响。结果表明,D1组稀释液的精子活率(MOT)最高,为(74.64±13.17)%,与鲜精无显著差异(P>0.05);以10%甲醇作为抗冻保护剂的圆口铜鱼精子经超纯水激活后,测得MOT最高,达到(78.11±14.74)%,与鲜精无显著差异(P>0.05),精子运动速度达最大,平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、VAP(平均路径运动速度)分别达到(50.28±12.46)μm/s、(35.06±10.82)μm/s、(39.44±12.46)μm/s,精子快速运动时间和寿命分别为(8.67±1.15) s、(33.33±5.00) s,显著低于鲜精(P超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定了基础。

关键词：圆口铜鱼精子超低温冷冻保存稀释液抗冻剂

解冻温度和冷冻保护剂对中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存效果的影响

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中国水产科学 2024年第7期31卷 745-753页

作者：舒雪密叶欢仲嘉张鸣罗江刘源杜浩中国水产科学研究院长江水产研究所农业农村部淡水生物多样性保护重点实验室湖北武汉430223 中国农业科学院北京100010 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

中华鲟(Acipenser sinensis)是我国一级重点保护水生动物,其精原干细胞等种质资源冷冻保护技术尚不完善。本研究在前期建立的匙吻鲟(Polyodon spathula)精原干细胞冷冻保存液配方基础上,研究解冻温度、抗氧化剂和抗冻蛋白对中华鲟精原... 详细信息

中华鲟(Acipenser sinensis)是我国一级重点保护水生动物,其精原干细胞等种质资源冷冻保护技术尚不完善。本研究在前期建立的匙吻鲟(Polyodon spathula)精原干细胞冷冻保存液配方基础上,研究解冻温度、抗氧化剂和抗冻蛋白对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,以期建立高效的中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存方法。研究结果表明,实验设置的解冻温度(20、25、30和40℃)中25℃组冷冻保存效果最佳:解冻后细胞数目为(3.86±0.51)×10^(5),细胞存活率可达(96.36±0.53)%;比较不同浓度组(500、1000和1500 mg/L)的谷胱甘肽、抗坏血酸和α-生育酚等3种抗氧化剂对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,结果显示,冷冻保存液中添加1000 mg/Lα-生育酚的实验组,解冻后得到的细胞数目最多(7.64±0.34)×10^(5),显著高于其他抗氧化剂添加组,细胞存活率可达(92.82±0.72)%;通过比较不同浓度(0.1、1.0和10μg/mL)的两种类型抗冻蛋白(AFPI和AFPIII)对中华鲟精原干细胞的冷冻保存效果,发现添加了1.0μg/mL AFPI的实验组解冻效果最好,解冻后得到的细胞数目为(6.85±0.19)×10^(5),显著高于其他实验组,细胞存活率为(86.89±0.73)%。综上所述,中华鲟精原干细胞冷冻保存的最佳解冻温度为25℃,1000 mg/Lα-生育酚作为抗氧化剂,和1.0μg/mL AFPI作为抗冻蛋白对其冷冻保存效果最佳。

关键词：中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存解冻温度抗氧化剂抗冻蛋白

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中国花鲈精子的超低温冷冻保存及酶活性检测

水生生物学报 2015年第6期39卷 1241-1247页

作者：史应学程顺竺俊全吴雄飞宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室宁波315211 浙江海洋高效健康养殖协同创新中心宁波315211 宁波市海洋与渔业研究院宁波315012

精子超低温冷冻保存技术在种质资源保存、遗传育种及苗种生产上具有重要的应用价值^（[1,2]）。为了提高冷冻精子的实际应用效果,需要在提高冻精质量上进行深入研究。冻精质量的提高有赖于精子超低温冷冻保存技术参数的优化,诸如稀释液... 详细信息

精子超低温冷冻保存技术在种质资源保存、遗传育种及苗种生产上具有重要的应用价值^（[1,2]）。为了提高冷冻精子的实际应用效果,需要在提高冻精质量上进行深入研究。冻精质量的提高有赖于精子超低温冷冻保存技术参数的优化,诸如稀释液种类、稀释比例、抗冻剂种类及浓度、降温方法及速率等技术参数均需要进行研究与优化选择。

关键词：中国花鲈超低温冷冻保存精子活力酶活性

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青虾精子超低温冷冻保存技术的研究

南京大学学报（自然科学版） 2008年第4期44卷 421-426页

作者：廖馨葛家春丁淑燕陈婵娟陆全平黄亚红南京大学生命科学学院南京210093 江苏省淡水水产研究所南京210017

本文对青虾精子的超低温冷冻保存技术进行了研究.采用台盼兰染色法检测低温冷冻后青虾精子的活力,研究了3种稀释液(壬氏液,Kurokura extender,D-20)和3种冷冻保护剂(8%DMSO,12.5%甘油,10%甲醇)对青虾精子在超低温冷冻保存时的保护效果,... 详细信息

本文对青虾精子的超低温冷冻保存技术进行了研究.采用台盼兰染色法检测低温冷冻后青虾精子的活力,研究了3种稀释液(壬氏液,Kurokura extender,D-20)和3种冷冻保护剂(8%DMSO,12.5%甘油,10%甲醇)对青虾精子在超低温冷冻保存时的保护效果,以及不同保存时间后青虾精子活力的变化.结果表明,青虾精子以壬氏液为稀释液,添加8%DMSO作为抗冻保护剂,4℃平衡30 min,-20℃平衡15 min,-80℃平衡15 min后投入液氮中保存,解冻时将冷冻管浸入55℃水浴中10~15 s至半融取出自然解冻,精子能维持60%的存活力.本研究为青虾精子冷冻保存库的建立提供了实验依据和理论基础.

关键词：青虾精子超低温冷冻保存

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泥鳅胚胎玻璃化液超低温冷冻保存研究

水产学报 2002年第3期26卷 213-218页

作者：章龙珍鲁大椿柳凌郭峰张洁明中国水产科学研究院长江水产研究所中国水产科学研究院长江水产研究所湖北荆州434000 中国水产科学研究院东海水产研究所上海200090 湖北荆州434000

泥鳅胚胎（胚孔封闭期）用 10 #玻璃化液作为低温保护剂 ,经低温（- 196℃ ）冷冻保存 17h后 ,38℃水浴解冻 ,解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有 2 6 .7% ,15 .0 % ,3.0 %成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过 ... 详细信息

泥鳅胚胎（胚孔封闭期）用 10 #玻璃化液作为低温保护剂 ,经低温（- 196℃ ）冷冻保存 17h后 ,38℃水浴解冻 ,解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有 2 6 .7% ,15 .0 % ,3.0 %成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过 5 0h的培养 ,胚胎从胚孔封闭期发育至尾鳍出现期。

关键词：泥鳅胚胎超低温冷冻保存抗冻剂玻璃化液

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点带石斑鱼精子超低温冷冻保存研究

海洋科学 2014年第9期38卷 13-19页

作者：王小刚骆剑尹绍武陈国华海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室海南海口570228 海南省农业干部学校海南海口571100 南京师范大学生命科学学院江苏南京210023

为建立点带石斑鱼（Epinephelus malabaricus）精子冷冻保存技术,保存点带石斑鱼种质资源,作者通过选用TS-19、TS-2、Hank’s、MPRS、Cortland、0.75%NaCl等作为稀释液及10%～25%二甲亚砜、甘油、甲醇作为抗冻液,对繁殖季节中3个不同时... 详细信息

为建立点带石斑鱼（Epinephelus malabaricus）精子冷冻保存技术,保存点带石斑鱼种质资源,作者通过选用TS-19、TS-2、Hank’s、MPRS、Cortland、0.75%NaCl等作为稀释液及10%～25%二甲亚砜、甘油、甲醇作为抗冻液,对繁殖季节中3个不同时期的点带石斑鱼精液进行超低温冷冻保存研究。研究结果表明：（1）Hank’s溶液为点带石斑鱼精子冷冻保存最适冷冻稀释液;（2）Hank’s溶液与10%～15%DMSO溶液为点带石斑鱼精子保存的最适冷冻保护液组合,可以获得60%以上的冻精成活率,而使用不同浓度的MeOH作为抗冻液时,冻精成活率均为0%;（3）以10%～25%Gly作为抗冻液时,冷冻前未加天然海水时均能激活点带石斑鱼精子正常运动,其效果与天然海水相似,加入天然海水后精子运动效果急剧下降,精子冷冻保存后也存在同样现象;（4）为保证获得更高的冻精成活率,点带石斑鱼精液冷冻保存样品的最佳获取时期是在亲鱼自然繁殖期前进行为宜。

关键词：点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus) 精子超低温冷冻保存稀释液抗冻液

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黄鳝精液-80℃超低温冷冻保存试验

四川动物 2011年第2期30卷 207-211页

作者：闫秀明张林达张小雪贵州大学动物科学学院贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵阳550025 毕节地区畜牧兽医研究所贵州毕节551700

采用-80℃超低温冷冻方法对黄鳝精液冷冻保存技术进行了研究。获得如下结果:黄鳝精子在冻存前不需低温平衡过程;10%DMSO作为抗冻保护剂效果最好,以200μL离心管为冻存容器,保存168h,精子相对活力可达79%;以细管为冻存容器,精子相对活力... 详细信息

采用-80℃超低温冷冻方法对黄鳝精液冷冻保存技术进行了研究。获得如下结果:黄鳝精子在冻存前不需低温平衡过程;10%DMSO作为抗冻保护剂效果最好,以200μL离心管为冻存容器,保存168h,精子相对活力可达79%;以细管为冻存容器,精子相对活力可达88%。此结果为黄鳝精子冷冻保存库的建立提供了实验依据。

关键词：黄鳝精子超低温冷冻保存