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豚鼠心肌组织Cav1.2钙通道蛋白的提取与纯化

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中国药理学通报 2013年第11期29卷 1610-1613页

作者：封瑞于丽凤胡慧媛郭凤龟山正树郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001 鹿儿岛大学医学部

目的探寻从豚鼠心肌组织中提取纯化全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白的实验方法。方法采用组织匀浆、超高速离心的方法获得溶解状态的Cav1.2钙通道蛋白,使用亲和层析的方法对钙通道蛋白进行进一步的纯化,再应用Western blot技术使用不同的Cav... 详细信息

目的探寻从豚鼠心肌组织中提取纯化全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白的实验方法。方法采用组织匀浆、超高速离心的方法获得溶解状态的Cav1.2钙通道蛋白,使用亲和层析的方法对钙通道蛋白进行进一步的纯化,再应用Western blot技术使用不同的Cav1.2钙通道抗体对所制备的心肌Cav1.2钙通道蛋白进行鉴定。结果比较CHAPS和Triton X-100的增溶效果,发现去污剂CHAPS能够更好地促进钙通道蛋白的溶解,且浓度为2%CHAPS是能够使钙通道蛋白溶解且不损害钙通道结构的最适浓度;同时,蛋白电泳和免疫印迹结果显示,提取制备所得的蛋白为心肌Cav1.2钙通道蛋白。结论亲和层析方法提取了纯度较高的全长的心肌Cav1.2钙通道蛋白,为系统研究心肌Cav1.2钙通道奠定了坚实的基础。

关键词： Cav1 2钙通道蛋白心肌豚鼠亲和层析表面活性剂

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豚鼠胎仔肾脏巨细胞病毒感染的实验研究

中华妇产科杂志 2004年第2期39卷 91-93页

作者：王昕荣陈素华刘海智熊锦文凌霞珍华中科技大学附属同济医院妇产科武汉430030

目的　探讨豚鼠胎仔肾脏巨细胞病毒感染与妊娠结局的关系。方法　随机选择孕早期豚鼠 2 0只 ,腹腔接种巨细胞病毒 ,观察其妊娠结局 ,分娩后 2 4h内处死新生豚鼠。用地高辛标记的巨细胞病毒晚期mRNA三相探针进行原位杂交 ,检测豚鼠胎仔... 详细信息

目的　探讨豚鼠胎仔肾脏巨细胞病毒感染与妊娠结局的关系。方法　随机选择孕早期豚鼠 2 0只 ,腹腔接种巨细胞病毒 ,观察其妊娠结局 ,分娩后 2 4h内处死新生豚鼠。用地高辛标记的巨细胞病毒晚期mRNA三相探针进行原位杂交 ,检测豚鼠胎仔肾脏内巨细胞病毒负荷量及分布情况。结果　 2 0只母豚鼠共妊娠 6 3只胎仔 ,其中足月活产并存活到 2 4h以上的胎仔 4 2只 ,流产等异常胎仔 2 1只。原位杂交检测正常胎仔巨细胞病毒感染率 7 1% (3/ 4 2 )、平均吸光度 (A)为 0 10 5±0 0 5 2 ,异常胎仔巨细胞病毒感染率 2 8 6 % (6 / 2 1)、平均A为 0 15 8± 0 0 4 7,两者平均A比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。杂交阳性信号主要分布在肾小管和集合管上皮细胞。结论　巨细胞病毒晚期mRNA主要在肾小管和集合管上皮细胞中表达 ,其表达水平与异常妊娠结局相关。

关键词：原位杂交巨细胞病毒感染豚鼠妊娠结局垂直疾病传播

豚鼠肌注庆大霉素10天和17天畸变产物耳声发射特性研究

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生物医学工程学杂志 2008年第1期25卷 57-60页

作者：叶林峰陶泽璋华清泉肖伯奎武汉大学人民医院耳鼻咽喉-头颈外科

研究豚鼠肌注庆大霉素(GM)10和17 d耳声发射DP-gram和I/O曲线的特征性改变。选用健康豚鼠40只,随机分为4组:I组肌注GM 10 d,II组肌注等容量生理盐水10 d,III组肌注GM 17 d,IV组肌注等容量生理盐水17 d;采用CELESTA 503型耳声发射测试分... 详细信息

研究豚鼠肌注庆大霉素(GM)10和17 d耳声发射DP-gram和I/O曲线的特征性改变。选用健康豚鼠40只,随机分为4组:I组肌注GM 10 d,II组肌注等容量生理盐水10 d,III组肌注GM 17 d,IV组肌注等容量生理盐水17 d;采用CELESTA 503型耳声发射测试分析系统,观测四组豚鼠DP-gram和I/O曲线特征性改变,计数耳蜗外毛细胞缺失率。(1)I组DP-gram在4、6和8 kHz处DPOAE(Distortion product otoacoustic emission)幅值明显下降,同II组相比有显著性差异(t为2.52、1.92、2.10,P豚鼠肌注庆大霉素10 d和17 d,畸变产物耳声发射频率特异性好,DPOAE的改变与耳蜗形态学变化一致,DPOAE可以作为监测庆大霉素耳毒性敏感指标。

关键词：豚鼠畸变产物耳声发射庆大霉素

豚鼠早期动脉粥样硬化模型的建立、机制研究及与大鼠模型的比较

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中国药理学通报 2011年第2期27卷 285-289页

作者：杨润梅李金莲高南南陈慧敏蔡大勇屠宴会中国医学科学院药用植物研究所药理毒理研究中心北京100193

目的建立豚鼠早期动脉粥样硬化模型,探讨模型形成机制,并与大鼠模型进行比较,为豚鼠模型优势提供科学依据。方法应用高脂饲料诱导法,观察豚鼠和大鼠是否可形成早期动脉粥样硬化模型,并应用免疫组化和酶联免疫分析技术探讨模型形成机制... 详细信息

目的建立豚鼠早期动脉粥样硬化模型,探讨模型形成机制,并与大鼠模型进行比较,为豚鼠模型优势提供科学依据。方法应用高脂饲料诱导法,观察豚鼠和大鼠是否可形成早期动脉粥样硬化模型,并应用免疫组化和酶联免疫分析技术探讨模型形成机制。结果豚鼠模型组摄入高脂饲料6周后主动脉内膜-中膜明显增厚、内膜单核细胞、巨噬细胞浸润与聚集增多,同时比例为0.40的动物动脉内膜表层进一步发展形成脂纹脂斑病变。而大鼠模型组未见类似病变。机制研究表明,血清脂蛋白(a)[Lipoprotein(a),LP(a)]、胆固醇酯转运蛋白(Cholesteryl ester transfer protein,CETP)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)浓度,肝脏脂酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase,ACAT)活性和主动脉增殖细胞核抗原(Proliferating cell nu-clear antigen,PCNA)、分化抗原簇-36(Cluster of differentiation36,CD36)和血管细胞黏附分子(Vascular cell adhesion mole-cule,VCAM-1)表达的变化是动脉病理改变的重要机制。结论豚鼠可能是一种模拟早期动脉粥样硬化的适宜动物模型。

关键词：豚鼠早期动脉粥样硬化酯酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT) 胆固醇酯转移蛋白(CETP) 脂蛋白(a)[LP(a)] 细胞分化抗原36(CD36) 血管细胞黏附分子(VCAM-1) 增殖细胞核抗原(PCNA)

豚鼠耳蜗不同发育阶段神经生长因子的分布及意义

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第5期42卷 386-387页

作者：池君张学渊宋武战石东文吴军第三军医大学附属西南医院耳鼻咽喉科重庆400038 成都军区昆明总医院核医学科疾病蛋白质组学重庆市市级重点实验室

多种神经营养因子参与内耳的发生、发育和听觉功能的维护，如脑源性神经营养因子，胶质细胞源性营养因子等。神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是最早发现的神经营养因子，主要对神经元尤其是感觉神经元的存活、发育和正常功能... 详细信息

多种神经营养因子参与内耳的发生、发育和听觉功能的维护，如脑源性神经营养因子，胶质细胞源性营养因子等。神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是最早发现的神经营养因子，主要对神经元尤其是感觉神经元的存活、发育和正常功能的维持起重要作用。我们于2005年9月至2006年2月利用免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹技术检测豚鼠耳蜗各发育阶段NGF的表达及分布，初步探讨NGF在听觉通路发育中的作用。

关键词：神经生长因子发育阶段脑源性神经营养因子耳蜗豚鼠免疫组织化学染色感觉神经元胶质细胞源性

豚鼠气道上皮对钾通道开放剂 Rp 52891 作用的影响

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中华内科杂志 1997年第8期36卷 516-518页

作者：陆月明罗文侗石昭泉修清玉第二军医大学长征医院呼吸内科

为了观察气道上皮对钾通道开放剂Ｒｐ５２８９１作用的影响，将正常豚鼠和致敏豚鼠的气管螺旋条随机分成完整上皮组和去除上皮组，用组胺诱发收缩后，分别加入Ｒｐ５２８９１、氨茶碱及异丙肾上腺素，测定气管螺旋条对组胺及上述三种物... 详细信息

为了观察气道上皮对钾通道开放剂Ｒｐ５２８９１作用的影响，将正常豚鼠和致敏豚鼠的气管螺旋条随机分成完整上皮组和去除上皮组，用组胺诱发收缩后，分别加入Ｒｐ５２８９１、氨茶碱及异丙肾上腺素，测定气管螺旋条对组胺及上述三种物质的反应。结果发现，正常豚鼠和致敏豚鼠气管螺旋条对组胺的反应性在两组间差异无显著性（Ｐ＞０．０５），Ｒｐ５２８９１对去除上皮组的舒张作用明显弱于完整上皮组（Ｐ＜０．０５），氨茶碱和异丙肾上腺素的舒张作用在两组间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。提示Ｒｐ５２８９１可直接舒张气道平滑肌，气道上皮参与介导其舒张作用。

关键词：豚鼠气道上皮钾通道 Rp52891 哮喘

豚鼠炎性胸膜腔积液模型的建立及巴曲酶预防胸膜腔积液包裹的实验研究

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中华结核和呼吸杂志 2002年第12期25卷 736-738页

作者：冯源殷凯生王祥徐颖南京医科大学第一附属医院老年医学科南京210029 南京医科大学第一附属医院呼吸科南京210029 北京东菱医药信息咨询有限公司南京办事处

目的　研究建立一种炎性胸膜腔积液的动物模型及探索巴曲酶对胸膜腔积液包裹的预防作用。方法　 (1)选择 40只豚鼠分为实验组和对照组 ,分别于右胸腔注入 1%角叉菜胶 0 8～ 1 0ml和生理盐水 1 0ml,分批处死观察。 (2 )选择 60只豚鼠分... 详细信息

目的　研究建立一种炎性胸膜腔积液的动物模型及探索巴曲酶对胸膜腔积液包裹的预防作用。方法　 (1)选择 40只豚鼠分为实验组和对照组 ,分别于右胸腔注入 1%角叉菜胶 0 8～ 1 0ml和生理盐水 1 0ml,分批处死观察。 (2 )选择 60只豚鼠分为实验组及对照组 ,每只豚鼠右胸膜腔注入 1%角叉菜胶 0 8～ 1 0ml,实验组于注药后次日右胸膜腔注入 3巴曲酶单位 (3BU) ,对照组则注入生理盐水 1 0ml,分批处死对比观察。结果　角叉菜胶注射后 1天即出现胸膜腔积液 ,2～ 3天积液量最多 ,胸膜炎性改变亦达高峰 ,并逐渐出现胸膜纤维化粘连与包裹 ;而用巴曲酶后 ,胸液量明显减少 ,胸膜炎症反应减轻 ,胸液中纤维蛋白原 (Fbg)含量下降 ,组织纤溶酶原激活剂 (t PA)及D 二聚体 (D dimer)增加 ,未形成胸膜粘连及包裹。结论　使用角叉菜胶能够建立满意的豚鼠炎性胸膜腔积液模型 ;巴曲酶具有减轻炎症反应、减少胸膜腔渗液。

关键词：实验研究胸腔积液豚鼠动物疾病模型蛇毒凝血酶角叉菜胶

豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定

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西安交通大学学报（医学版） 2018年第6期39卷 917-921页

作者：肖靖杰张治平王洋司超张亮张伟李丽李新芝马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832000 石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院耳鼻喉科新疆石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院老干二科新疆石河子832000 石河子大学医学院病理生理学教研室新疆石河子832000

目的联合2种常用的细胞培养方法从豚鼠耳蜗螺旋动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠耳蜗中分离出螺旋动脉,应用1.25g/L的胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,运用自然纯化法及根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进... 详细信息

目的联合2种常用的细胞培养方法从豚鼠耳蜗螺旋动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠耳蜗中分离出螺旋动脉,应用1.25g/L的胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,运用自然纯化法及根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进行纯化,通过形态学观察及免疫荧光、免疫组化和Western blot对细胞进行鉴定。结果 85%的组织块存活,第4代平滑肌细胞纯度达95%。镜下可见细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫荧光、免疫组化及Western blot结果显示平滑肌细胞特异性的肌动蛋白呈阳性表达。结论通过本研究方法,可以得到大量高纯度的豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞,有望为内耳循环系统紊乱导致的病理生理变化的体外研究及血管平滑肌药物评价提供一个理想的研究材料。

关键词：豚鼠耳蜗螺旋动脉细胞培养肌动蛋白

豚鼠高脂血症模型LDL-C代谢紊乱的机制研究

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中国药理学通报 2012年第3期28卷 342-346页

作者：宋鑫高南南杨润梅刘芳中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所药理毒理研究中心北京100193

目的建立豚鼠高胆固醇血症模型,并对形成机制进行探讨。方法高脂饲料诱导法建立豚鼠高胆固醇血症模型,分别于造模1、2、4周检测血清脂质的动态变化;检测肝脏脂质;酶联免疫分析法测定血清ox-LDL浓度;实时荧光定量PCR法检测肝脏CYP7A1(cho... 详细信息

目的建立豚鼠高胆固醇血症模型,并对形成机制进行探讨。方法高脂饲料诱导法建立豚鼠高胆固醇血症模型,分别于造模1、2、4周检测血清脂质的动态变化;检测肝脏脂质;酶联免疫分析法测定血清ox-LDL浓度;实时荧光定量PCR法检测肝脏CYP7A1(cholesterol 7a-hydroxylaseA1)、肝脏法尼酯X受体(hepatic farnesoid X receptor,FXR)、肝X受体α(liver X receptor,LXRα)、HMG-CoA还原酶mRNA的相对表达;Western blot法检测肝脏LDL-R的蛋白表达情况。结果豚鼠经高脂饲料诱导1周后,模型组与对照组比较血清TC、LDL-C即发生升高,随造模时间延长,血脂一直维持在较高水平。造模4周后模型组血清ox-LDL、sd-LDL浓度,肝脏TC水平比正常组升高。肝脏HMG-CoA还原酶表达下调,LDL-R蛋白表达量明显高于正常组。值得注意的是豚鼠肝脏法尼酯X受体(FXR)表达明显上调,且肝X受体α(LXRα)表达也明显上调,但二者激活水平相当,最终未改变肝脏CYP7A1mRNA的表达水平。结论高脂诱导豚鼠形成高胆固醇血症主要与外源性胆固醇和低密度脂蛋白的清除发生障碍有关。

关键词：豚鼠高胆固醇血症 ox-LDL sd-LDL CYP7A1 FXR LXRα LDL-R