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过表达JHDM2A对猪iPSCs诱导效率的影响

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中国畜牧兽医 2021年第12期48卷 4412-4421页

作者：任宣宋延霞孙乐黄时海石德顺李湘萍广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004 广西大学生命科学技术学院南宁530004

研究旨在探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶(JHDM2A)对猪成纤维细胞诱导为多能干细胞效率的影响,并对其内在的分子机制进行探究。以猪成纤维细胞为材料,采用多西环素(DOX)诱导的慢病毒生产诱导多能干细胞(iPSCs)体系,在此基础上过表达JHDM2A,... 详细信息

研究旨在探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶(JHDM2A)对猪成纤维细胞诱导为多能干细胞效率的影响,并对其内在的分子机制进行探究。以猪成纤维细胞为材料,采用多西环素(DOX)诱导的慢病毒生产诱导多能干细胞(iPSCs)体系,在此基础上过表达JHDM2A,通过碱性磷酸酶染色和绘制诱导时间轴检测其对诱导效率的影响;普通PCR技术检测克隆的多能性;免疫荧光检测多能因子的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测JHDM2A在形成克隆后以及克隆分化过程中对多能因子、组蛋白甲基化相关基因表达的影响。结果表明,JHDM2A过表达组细胞在第3天发生形态变化,第8天形成iPSCs克隆,相比于对照组分别提前了1和2 d。碱性磷酸酶染色结果显示,与对照组相比,JHDM2A过表达组克隆形态明显改善,染色着色更深,诱导效率提高8倍。普通PCR结果显示,JHDM2A过表达组iPSCs、对照组iPSCs以及猪成纤维细胞(PFF)均表达内源性Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog,且iPSCs的Oct4表达量高于PFF。免疫荧光结果显示,JHDM2A过表达组iPSCs表达Oct4、Sox2、Stat3、JHDM2A,弱表达SSEA1、SSEA4。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组和猪成纤维细胞相比,JHDM2A过表达组iPSCs的Sox2、Klf4、c-Myc、Nanog、Oct4、Tcl1的表达显著升高(P诱导效率。

关键词：猪 JHDM2A iPSCs 诱导效率

过表达JHDM2A基因对猪iPSCs诱导效率影响的初步研究

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过表达JHDM2A基因对猪iPSCs诱导效率影响的初步研究

作者：宋延霞广西大学

学位级别：硕士

iPS技术为构建疾病模型、研制评估新药、基因治疗及再生医学等研究奠定了基础,是干细胞研究领域的里程碑。猪在生理及体型上与人相似,因此研究猪的iPS细胞意义重大。但目前猪成纤维细胞诱导为iPS的重编程效率不足1%。研究发现,组蛋白H3K... 详细信息

iPS技术为构建疾病模型、研制评估新药、基因治疗及再生医学等研究奠定了基础,是干细胞研究领域的里程碑。猪在生理及体型上与人相似,因此研究猪的iPS细胞意义重大。但目前猪成纤维细胞诱导为iPS的重编程效率不足1%。研究发现,组蛋白H3K9甲基化阻碍体细胞重编程,降低H3K9甲基化水平可促进iPS诱导。组蛋白甲基化水平受组蛋白甲基转移酶与组蛋白去甲基化酶共同调节。JHDM2A,即JmjC结构域组蛋白去甲基化酶2,可使H3K9me1/2发生去甲基化。过表达JHDM2A基因可促进与ESCs融合的小鼠NSCs重编程为iPS,促进iPSCs诱导;还可调节胚胎干细胞的自我更新。本研究首先采用DOX诱导型的慢病毒载体体系,诱导获得猪多能干细胞(piPSCs),在此基础上通过过表达JHDM2A基因,探究组蛋白H3K9me1/2甲基化水平对猪iPSCs诱导效率的影响,并对其分子机制进行初步探究,以便为进一步提高iPSCs诱导效率、建立大家畜ESCs系奠定基础。本研究主要结果如下:1、猪JHDM2A基因克隆及其表达载体构建根据NCBI上公布的猪JHDM2A基因序列,设计特异性扩增引物,克隆得到猪JHDM2A基因,其编码区长度为3945bp,编码1315个氨基酸。多重氨基酸序列比对发现,猪JHDM2A基因与黄牛、水牛、绵羊和人相应氨基酸序列的同源性分别为93.5%、94.7%、94.7%、93.8%。蛋白质分子系统进化树分析结果表明,JHDM2A基因在物种进化过程中高度保守。免疫组化结果显示,JHDM2J蛋白在不同发育阶段猪卵泡中均有表达。进一步构建并验证了 pLVX-IRES-ZsGreen1-JHDM2A真核表达载体。2、过表达JHDM2A基因对猪iPSCs形成及相关基因表达的影响首先利用DOX诱导型慢病毒载体体系,将OSKM因子组合导入猪成纤维细胞,将其诱导为iPSCs,在此基础上过表达JHDM2A基因,并分别对获得的iPSCs进行鉴定。当过表达JHDM2A基因时,细胞在第3 d出现形变,第8 d形成piPSCs克隆,分别比未处理组提前了 1d、2d。AP检测阳性克隆数结果发现,与未处理组相比,过表达JHDM2A基因实验组的诱导效率提高了 8倍,且iPSCs克隆大小更均匀、边缘更整齐、细胞更致密,AP染色着色更深。RT-PCR分析结果显示,所检测的三种细胞均表达Klf、c-Myc、Nanog多能性基因,弱表达Sox2基因;过表达JHDM2A实验组和未处理组的piPSCs均表达Oct4,而PFF弱表达表达Oct4。定量PCR结果显示,与未处理组相比,过表达JHDM2A实验组 piPSCs 多能性基因 Sox2、klf4、c-Myc、Nanog表达显著升高(P诱导效率。

关键词：基因克隆 JHDM2A piPSCs 诱导效率组蛋白去甲基化

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城市道路交叉口交通信息诱导效率研究

城市交通 2018年第5期16卷 87-90,104页

作者：骆晨刘澜西南交通大学交通运输与物流学院四川成都610031 西南交通大学综合交通运输智能化国家地方联合工程实验室四川成都610031

现有城市道路交叉口交通信息诱导效率相关研究内容笼统,尚未量化驾驶人对交通诱导信息的认知效率和决策误差。针对这一问题,提出基于云模型的交通信息诱导效率评价方法,设计四种不同组合方式的交通诱导信息实验情景。采用全功能汽车模... 详细信息

现有城市道路交叉口交通信息诱导效率相关研究内容笼统,尚未量化驾驶人对交通诱导信息的认知效率和决策误差。针对这一问题,提出基于云模型的交通信息诱导效率评价方法,设计四种不同组合方式的交通诱导信息实验情景。采用全功能汽车模拟驾驶器进行实验,结果显示:数字、语言、图像组合而成的交通诱导信息对驾驶人路径变更影响显著,语言和数字类信息组合发布有利于提高驾驶人对道路交通状况的认知效率,数字和图像类信息组合发布有利于降低驾驶人路径决策误差。

关键词：城市道路交叉口交通信息诱导云模型诱导效率

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激素对油蓖5号外植体愈伤组织的诱导效率

适用技术市场 1999年第5期 22-23页

作者：李亚东严兴初邱东茹湖北大学生命科学院 430077 中国农科院油料作物研究所 430062 中国科学院水生生物研究所 430072

采用不同激素及浓度配比对蓖麻不同外植体进行愈伤组织诱导。结果表明以幼嫩真叶、茎尖愈伤组织诱导效率最高,子叶柄、真叶柄次之,而子叶、根、胚轴愈伤组织诱导效率较低。

关键词：蓖麻外核体激素愈伤组织组织培养诱导效率

诱导多潜能干细胞(iPSCs):安全高效的诱导策略

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第11期28卷 1005-1010页

作者：黄聪蒋思文华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室武汉430070

在分化的体细胞中,导入特定的转录因子能诱导得到诱导多潜能干细胞(induced pluripotentstem cells,iPSCs).iPSCs在细胞形态、生长特性、表面标志物以及畸胎瘤形成等方面与胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)非常相似,而且跟ESCs相... 详细信息

在分化的体细胞中,导入特定的转录因子能诱导得到诱导多潜能干细胞(induced pluripotentstem cells,iPSCs).iPSCs在细胞形态、生长特性、表面标志物以及畸胎瘤形成等方面与胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)非常相似,而且跟ESCs相比,iPSCs具有避免免疫排斥和不涉及伦理问题的优势,因此iPSCs的临床应用潜力巨大.然而,iPSCs具有成瘤性,而且其诱导效率极低,此二者严重阻碍了iPSCs的临床应用.为解决这两大难题,本综述将主要探讨安全高效的iPS细胞诱导策略,以期为促进其临床应用提供借鉴.

关键词：诱导多潜能干细胞转录因子诱导效率安全性

大家畜诱导多潜能干细胞(iPSCs)研究进展

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农业生物技术学报 2014年第10期22卷 1286-1297页

作者：王峰刘灿潘传英西北农林科技大学生命科学学院西北农林科技大学动物科技学院

向分化的体细胞内导入特定的诱导因子,可将其重编程为诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs),iPSCs同胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)一样具有自我更新并维持未分化状态的能力。iPSCs的出现,有效地解决了ESCs... 详细信息

向分化的体细胞内导入特定的诱导因子,可将其重编程为诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs),iPSCs同胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)一样具有自我更新并维持未分化状态的能力。iPSCs的出现,有效地解决了ESCs研究领域存在的伦理道德限制和免疫排斥问题。自2006年国际上首次成功获得小鼠(Mus musculus)诱导多潜能干细胞以来,iPSCs研究发展迅猛。从利用病毒载体到普通质粒载体,从导入DNA、RNA和蛋白质,再到利用小分子化合物组合进行体细胞重编程,iPSCs诱导技术正在向多元化发展;同时,研究者们对细胞重编程机理的认识也在加深。与此同时,大家畜iPSCs研究领域也相继获得了猪(Sus scrofa)、牛(Bos taurus)和绵羊(Ovis aries)等动物的iPSCs,并得到了iPSCs嵌合猪和iPSCs嵌合羊。由于猪等大家畜不仅在解剖和生理结构等方面与人相似,还是人类(Homo sapiens)最主要的肉类和奶类等食物来源,关系着人类的健康,因此大家畜iPSCs在临床应用和生产实践上具有重大价值。鉴于此,本文对iPSCs诱导方法、效率、机制和大家畜iPSCs研究现状做一综述。

关键词：大家畜诱导多潜能干细胞(iPSCs) 诱导方法诱导效率

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青麻叶大白菜小孢子培养及新品种选育

华北农学报 2005年第2期20卷 26-29页

作者：赵冰闻凤英王玉龙宋连久刘晓晖张斌天津科润蔬菜研究所天津300384

对影响青麻叶大白菜游离小孢子培养的因素进行了研究。结果表明:供体植株的基因型与小孢子胚胎发生密切相关;33℃,24h高温处理有助于小孢子转化成胚状体,每蕾成胚数比25℃恒温培养提高4 5倍;在培养基中加入外源激素和多种氨基酸可以提... 详细信息

对影响青麻叶大白菜游离小孢子培养的因素进行了研究。结果表明:供体植株的基因型与小孢子胚胎发生密切相关;33℃,24h高温处理有助于小孢子转化成胚状体,每蕾成胚数比25℃恒温培养提高4 5倍;在培养基中加入外源激素和多种氨基酸可以提高胚状体的诱导效率,平均比对照增加59.64%;培养基的琼脂含量增加到12g/L能显著提高小孢子胚的成苗率,比含琼脂8g/L的高出40.5个百分点。通过对青麻叶大白菜小孢子胚的培养,获得二倍性的双单倍体植株,从中选出性状优良的纯系进行杂交组合的选配,培育出青麻叶大白菜的新品系。

关键词：青麻叶大白菜新品种选育游离小孢子培养单倍体植株胚胎发生高温处理恒温培养诱导效率外源激素杂交组合胚状体培养基基因型氨基酸成苗率新品系琼脂供体倍性纯系

对服务生产率内涵的再认识:基于服务的参与方

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华东经济管理 2012年第5期26卷 88-90页

作者：张懿玮上海杉达学院管理学院上海201209

一直以来,人们普遍使用传统制造业的生产率概念来衡量服务企业的生产率水平。然而,制造业生产率内涵中没有考虑到顾客参与性、产品不可储存性等服务业所独具的特性,这就使得传统生产率在服务业中的适用性受到影响。文章主要从员工和顾... 详细信息

一直以来,人们普遍使用传统制造业的生产率概念来衡量服务企业的生产率水平。然而,制造业生产率内涵中没有考虑到顾客参与性、产品不可储存性等服务业所独具的特性,这就使得传统生产率在服务业中的适用性受到影响。文章主要从员工和顾客两大服务参与方的角度出发,对服务生产率的内涵进行了再认识,构建了服务生产率模型。并在此基础上,提出了提高服务生产率的措施。

关键词：服务生产率员工效率顾客效率诱导效率

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诱导多能干细胞研究进展

生物技术通报 2009年第7期25卷 5-7,11页

作者：罗庆宋关斌袁琳重庆大学生物工程学院生物流变科学与技术教育部重点实验室重庆400044

用4个外源基因从完全分化的人成纤维细胞诱导获得了具有胚胎干细胞特性的诱导多能干细胞(iPS细胞),成功逆转了细胞单向发育的规则,取得了细胞重编程和干细胞研究中的重大突破。围绕c-Myc基因和基因载体、诱导效率和外源基因替代因子等... 详细信息

用4个外源基因从完全分化的人成纤维细胞诱导获得了具有胚胎干细胞特性的诱导多能干细胞(iPS细胞),成功逆转了细胞单向发育的规则,取得了细胞重编程和干细胞研究中的重大突破。围绕c-Myc基因和基因载体、诱导效率和外源基因替代因子等方面的研究内容,综述了自2007年人iPS细胞构建至今,国内外在改进iPS细胞诱导方法上的主要研究进展。

关键词：诱导多能干细胞重编程肿瘤形成诱导效率替代因子