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α-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

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中华眼底病杂志 2012年第5期28卷 501-506页

作者：刘兵郭大东毕宏生郭媛媛陈宁虹马晓华山东中医药大学附属眼科医院济南250014

目的观察α-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞（RGc）的保护作用。方法将RGC分为正常对照组、阴性对照组、单纯加压组、加压联合不同浓度α-硫辛酸干预组。正常对照组和单纯加压组不做任何处理；阴性对照组仅接受200μmol／L... 详细信息

目的观察α-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞（RGc）的保护作用。方法将RGC分为正常对照组、阴性对照组、单纯加压组、加压联合不同浓度α-硫辛酸干预组。正常对照组和单纯加压组不做任何处理；阴性对照组仅接受200μmol／L α-硫辛酸预处理；加压联合不同浓度的α-硫辛酸干预组分别用50、100、200μmol／L等3种不同浓度的α-硫辛酸对其进行干预。α-硫辛酸预处理1h后，单纯加压组和各干预组置于50mmHg（1mmHg=0．133kPa）下培养24h；正常对照组、阴性对照组置于常压下培养24h。分别用噻唑蓝比色法检测各组细胞的活性；4，6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色观察各组细胞核形态改变；实时聚合酶链反应（Real—timePCR）及蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测并比较各组细胞中锰超氧化物歧化酶（MnSOD）mRNA和蛋白表达水平的变化。结果单纯加压组细胞活性为（65．64-3．4）％，50、100、200μmol／L3种浓度的α-硫辛酸干预组细胞活性分别为（75．14-3．3）％、（81．8±2．9）％、（87．9±3．1）％，均较单纯加压组显著增高（t=5．108、10．007、12．513，P〈0．05）。DAPI染色显示，加压后RGC-5细胞核可见空泡、染色质高度凝聚、边缘化等典型的凋亡特征，而α-硫辛酸干预组仅有部分细胞核染色质表现出浓缩现象。Real—timePCR及Westernblot检测结果显示，加压培养后细胞内MnSODmRNA和蛋白相对表达量较正常对照组显著降低（t=22．045、26．979，P％0．01）；与单纯加压组相比，α-硫辛酸干预组细胞内MnSODmRNA和蛋白相对表达量均显著增高，差异有统计学意义（t=9．171、12．267、23．567、7．723、12．009、28．198，P〈0．05）；不同浓度的α-硫辛酸干预组之间，随α-硫辛酸浓度增加，MnSODmRNA和蛋白相对表达量呈升高趋势，且差异有统计学意义（F=134．273、194．597，P〈0．01）。结论应用α-硫辛酸可以显著提高高压条件下大鼠RGC的细胞活性及细胞内MnSOD的表达水平，增强细胞抗氧化损伤能力。

关键词：视网膜神经节细胞/病理学硫辛酸/治疗应用细胞,培养的动物实验

腺苷抑制P2X7和N-甲基-D-天冬氨酸受体诱导的视网膜神经节细胞死亡

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中华眼底病杂志 2007年第2期23卷 133-136页

作者：张秀兰张梅胡慧玲李昂葛坚中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室广州510060

目的研究腺苷（adenosine）对嘌呤受体P2X7和谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体激活诱导的大鼠视网膜神经节细胞（RGC）死亡的神经保护作用。方法（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物荧光金（aminostilbamidine）以标记... 详细信息

目的研究腺苷（adenosine）对嘌呤受体P2X7和谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体激活诱导的大鼠视网膜神经节细胞（RGC）死亡的神经保护作用。方法（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物荧光金（aminostilbamidine）以标记RGC，检测P2X7激动剂BzATP（50μmol/L）、谷氨酸NMDA受体激动剂（100μmol/L）和腺苷（300μmol/L）对体外培养RGC存活率的影响；（2）体外培养未经荧光金标记的新生大鼠RGC，以10μmol/L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2乙酸甲酯（Fura-2Am）标记后，利用Ca^2＋影像测定仪分别测定BzATP、NMDA和腺苷对RGC内Ca^2＋浓度的影响。结果BzATP和NMDA均可引起体外培养的RGC死亡，BzATP在50μmol/L、NMDA在100μmol/L浓度下，均杀死约30%RGC。而300μmol/L腺苷则可明显减轻两者对RGC的毒性作用，使RGC存活率分别从68.9%±2.3%、69.9%±3.2%提高至91.2%±3.5%（P〈0.001）、102.1%±3.9%（P〈0.001）。BzATP可引起RGC内Ca^2＋持续升高，在50μmol／L浓度下可使细胞内Ca^2＋升高至（1183±109）nmol／L。在300μmol／L腺苷作用下，BzATP介导的Ca^2＋升高幅度显著降低，仅升高为（314±64）nmol／L（P〈0.001）。结论腺苷能阻止P2X，受体和NMDA受体激活诱导的RGC死亡和细胞内钙离子浓度升高，具有神经保护作用。

关键词：腺苷/治疗应用受体.嘌呤能受体,谷氨酸视网膜神经节细胞/病理学

雄激素预处理对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠视神经和视网膜神经节细胞的影响

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中华眼底病杂志 2007年第5期23卷 327-331页

作者：高阳刘瑛袁敏而顾欣祖中山大学中山眼科中心中山大学眼科学国家重点实验室广州510060

目的观察雄激素预处理对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠视神经形态功能和视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的影响。方法将雌性Wistar大鼠41只随机分为正常组10只、未用药对照组15只和雄激素组16只。正常组和未用药对照组每天以1%乙醇... 详细信息

目的观察雄激素预处理对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠视神经形态功能和视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的影响。方法将雌性Wistar大鼠41只随机分为正常组10只、未用药对照组15只和雄激素组16只。正常组和未用药对照组每天以1%乙醇灌胃,雄激素组每天以0.25mg/kg甲睾酮灌胃。用药20d后,未用药对照组和雄激素组注射0.4ml完全弗佐剂-豚鼠脊髓匀浆,并辅以注射百日咳疫苗诱导EAE模型。诱导前7d,大鼠上丘和外侧膝状体注射荧光金以逆行标记RGC。继续用药至诱导后14～30d,取正常鼠和出现症状48～72h内的未用药对照组和雄激素组大鼠,应用光学显微镜和闪光视觉诱发电位（FVEP）观察其视神经形态和功能的变化;荧光显微镜下观察视网膜铺片并计数RGC;原位缺口末端标记法（TUNEL）观察RGC的凋亡情况。结果诱导后10d开始,EAE大鼠相继出现尾及后肢无力,麻痹等症状。与未用药对照组相比,雄激素组的发病潜伏期延长（P=0.035）,症状评分降低（P=0.042）。未用药对照组大鼠视神经纤维走行纡曲呈波浪状,弥漫脱髓鞘改变;雄激素组视神经纤维走行较规则,脱髓鞘改变不明显。FVEP显示与未用药对照组相比,雄激素组的N1、P和N2波潜伏期明显缩短（P〈0.05）,N1-P和P-N2振幅提高（P〈0.05）。正常组、未用药对照组和雄激素组RGC数分别为（2284±132）、（934±78）、（1725±95）个/mm^2,雄激素组RGC数较未用药对照组增多（P=0.028）。正常组、未用药对照组和雄激素组TUNEL阳性细胞数分别为（4.02±0.16）、（24.44±2.22）、（9.84±2.36）个/高倍视野,雄激素组TUNEL阳性细胞数较未用药对照组明显减少（P=0.025）。结论雄激素可降低EAE发病率和症状评分,抑制EAE鼠RGC的凋亡,减轻视神经脱髓鞘改变,改善视神经传导功能。

关键词：雄激素类/生理学视神经/病理生理学视网膜神经节细胞/病理学脑脊髓炎,自身免疫性,实验性动物实验

移植含嗅鞘细胞和体外溃变的周围神经对成年大鼠视网膜神经节细胞轴突再生作用的比较

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中华眼底病杂志 2007年第2期23卷 130-132页

作者：武明媚罗娜杨浩焦西英游思维第四军医大学全军神经科学研究所西安710032

目的比较含嗅鞘细胞（OEC）或（和）体外溃变的周围神经移植对成年大鼠视网膜神经节细胞（RGC）轴突再生的影响。方法将24只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组，每组各6只大鼠：A组（周围神经对照组）：将取出的一段自体坐骨神经... 详细信息

目的比较含嗅鞘细胞（OEC）或（和）体外溃变的周围神经移植对成年大鼠视网膜神经节细胞（RGC）轴突再生的影响。方法将24只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组，每组各6只大鼠：A组（周围神经对照组）：将取出的一段自体坐骨神经与眶内切断的左侧视神经近侧断端吻合；B组（OEC注入周围神经组）：自取出的坐骨神经两端注入10μlOEC悬液后移植于视神经断端。C组（周围神经体外溃变组）：将取出的坐骨神经在体外单独培养5d后植于视神经断端；D组（OEC-周围神经共培养组）：将取出的坐骨神经与OEC共培养5d后植于视神经断端。移植术后4周处死动物，计数各组以5%荧光金逆行标记的再生RGC数量。结果B、C、D三组RGC均数1481±268、1235±266和1464±285显著高于A组799±109（P值分别为0.0002、0.0010和0.0003）；B、C、D三组间差异无统计学意义（P值分别为0.3644、0.9167和0.4344）。结论OEC具有促进RGC轴突在新鲜周围神经移植物中再生的作用，但这种作用与体外溃变的周围神经相比无明显差异，二者亦无协同作用。

关键词：视网膜神经节细胞/病理学细胞移植

视网膜神经纤维层缺损对开角型青光眼的诊断价值

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中华眼科杂志 1987年第1期23卷 12-18+65页

作者：申尊茂吕大光袁淑玉韩淑珍黑龙江省医院眼科

通过对青光眼患者的视网膜神经纤维层缺损(RNFLD)的研究,证明早期病例多表现为局限性 NFL 缺损,而中、晚期病例表现为弥漫性 NFL 萎缩。RNFLD 与杯盘比、视盘荧光充盈缺损和视野缺损都有密切关系,并可出现于视野改变之前。因此,进行 RNF... 详细信息

通过对青光眼患者的视网膜神经纤维层缺损(RNFLD)的研究,证明早期病例多表现为局限性 NFL 缺损,而中、晚期病例表现为弥漫性 NFL 萎缩。RNFLD 与杯盘比、视盘荧光充盈缺损和视野缺损都有密切关系,并可出现于视野改变之前。因此,进行 RNFLD 检查,对开角型青光眼的早期诊断有十分重要的意义。

关键词：青光眼开角型/诊断视网膜神经节细胞/病理学