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上海地区2004--2008年流行性感冒病毒亚型分布及血凝素基因进化研究

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中华预防医学杂志 2009年第4期43卷 305-308页

作者：杨吉星居丽雯蒋露芳施强姜庆五张宇艳周艳冰申惠国谈逸云复旦大学公共卫生学院上海200032 上海市普陀区疾病预防控制中心上海市闵行区疾病预防控制中心

目的了解上海地区近几年的流行性感冒（简称流感）病毒型与亚型分布及甲亚型流感病毒血凝素（HA）基因的进化。方法采集2004--2008年上海地区5个流感监测哨点流感样患者和聚集性流感暴发患者的962份咽拭子标本进行流感病毒分离鉴定，确... 详细信息

目的了解上海地区近几年的流行性感冒（简称流感）病毒型与亚型分布及甲亚型流感病毒血凝素（HA）基因的进化。方法采集2004--2008年上海地区5个流感监测哨点流感样患者和聚集性流感暴发患者的962份咽拭子标本进行流感病毒分离鉴定，确定病毒型及亚型。对上海市不同年份、不同区域的甲型流感病毒散发、聚集性暴发分离株进行HA基因全片段测序，并与近几年世界卫生组织（WHO）疫苗推荐株进行比对分析，绘制基因进化树。结果A／H3N2是近几年季节性流感的主要亚型，占阳性标本构成比为54．9％（162／295），但在2005年末至2006年夏季流行强度低，仅占阳性标本构成比分别为0％（0／16）和23．5％（8／34）；A／H1N1在2005--2006年3个流行季节活跃，占阳性标本构成比分别达到21．4％（12／56）、43．8％（7／16）、76．5％（26／34），近2年分离株明显减少，占阳性标本构成比仅分别为0％（0／44）和5．0％（7／139）；B型在2004年至2005年季节性流感中活动强度较高，占阳性标本构成比分别为42．9％（24／56）和56．2％（9／16），在2006--2007年季节性流感中未分离到，2008年流行强度又有增加，占阳性标本构成比为34．5％（48／139）。2005—2008年，A／H1N1HA基因进化树显示，同一年份HA基因成簇分布，序列相近；2004--2008年，A／H3N2HA基因进化树显示，虽然同一年份序列相近，但相近序列进化枝插有相近年份的分离株，并且同一年份存有变异较大的序列。A／H1NI、A／H3N2流行株的序列与当年WHO的疫苗推荐株序列相似。结论各年份流感流行的型与亚型分布不同，A／H3N2是近几年季节性流感的主要亚型。同一年份的A／H1N1、A／H3N2HA基因序列成簇分布，但在A／H3N2同一年份的进化枝中插有相近年份的分离株序列，并且存在变异较大的序列。近年，WHO疫苗推荐株HA序列与当年流行株序列相近。

关键词：正黏病毒科血凝素类进化

牙龈卟啉单胞菌血凝素2基因缺陷型突变株的构建

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中华口腔医学杂志 2009年第11期44卷 672-676页

作者：林梅杨秋波杨圣辉首都医科大学口腔医学院北京口腔医学研究所 100050 首都医科大学附属北京朝阳医院口腔科

目的构建牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）血凝素2（hemagglutinin—adhesin2，HA-2）基因缺陷型突变株，为研究HA-2基因功能奠定基础。方法PCR扩增PgHA-2基因两翼片段HAu、HAl，将抗性基因ermF—ermAM连接到两者之间构... 详细信息

目的构建牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）血凝素2（hemagglutinin—adhesin2，HA-2）基因缺陷型突变株，为研究HA-2基因功能奠定基础。方法PCR扩增PgHA-2基因两翼片段HAu、HAl，将抗性基因ermF—ermAM连接到两者之间构建打靶载体HA—ermF—ermAM。将HA—ermF—ermAM电转化PgATCC33277，基因同源重组整合进入PgATCC33277染色体，用选择性培养基筛选获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。进行PgATCC33277HA．2基因缺陷型突变株与其野生株凝血功能试验，比较二者的凝血功能差异。结果PCR、酶切和测序鉴定结果表明，打靶载体HA—ermF—ermAM成功构建。经PCR鉴定，打靶载体HA—ermF—ermAM通过同源重组整合进入PgATCC33277染色体，成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。凝血实验结果表明，PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株与野生株相比凝血能力明显减弱。结论成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株，为进一步研究HA-2的生物学性质奠定了基础。

关键词：紫单胞菌龈血凝素类基因打靶血液凝固

上海地区儿童新型甲型H1N1流感的临床和分子流行病学特征

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中华儿科杂志 2013年第5期51卷 356-361页

作者：王相诗蔡洁皓姚玮蕾葛艳玲朱启镕曾玫复旦大学附属儿科医院感染科上海201102

目的了解新型甲型H1N1流感病毒自暴发流行后在上海地区儿童中的流行病学特征,监测血凝素抗原区抗原位点变异及奥司他韦耐药株.方法在2009年6月至2012年5月连续3年间,前瞻性监测因流感样疾病就诊于复旦大学附属儿科医院的门诊患儿,收... 详细信息

目的了解新型甲型H1N1流感病毒自暴发流行后在上海地区儿童中的流行病学特征,监测血凝素抗原区抗原位点变异及奥司他韦耐药株.方法在2009年6月至2012年5月连续3年间,前瞻性监测因流感样疾病就诊于复旦大学附属儿科医院的门诊患儿,收集呼吸道标本和临床资料.检测新型甲型H1N1流感病毒、季节性甲型和乙型流感病毒,分析部分新型甲型H1N1流行株血凝素（hemagglutinin,HA）基因抗原位点变异及神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因耐药位点突变情况.结果共入选3475例患儿,新型甲型H1N1阳性222例（6.4％）.2009年8月至2010年2月第1次流行波和2010年12月至2011年2月第2次流行波确诊病例年龄中位数分别为53.5个月和32.0个月（Z=-4.601,P=0.000）.119例（53.6％）患儿有明确暴露史,其中68例（57.1％）暴露对象为家庭成员,47例（39.5％）暴露对象为幼儿园或学校同学.新型甲型H1N1病毒HA序列分析显示上海地区流行株与疫苗株高度同源.未检测到NA基因片段具有H275Y和N295S特征突变的奥司他韦耐药株.结论上海地区儿童在2009至201 1年经历了2次新型甲型H1N1流感的暴发流行.家庭内和学校传播是大流行株在社区儿童传播的主要模式.疫苗可提供有效的保护作用.未检测到奥司他韦耐药株.

关键词：流行病学血凝素类奥司他韦流感病毒A型,H1N1亚型

新型甲型H7N9流感病毒血凝素基因进化分析

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第二军医大学学报 2013年第6期34卷 595-601页

作者：关蔚李自雄林吉韩一芳苏彤殷建华张宏伟曹广文第二军医大学热带医学与公共卫生学系流行病学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

目的探讨2013年4月流行的新型甲型H7N9禽流感病毒的表面蛋白血凝素(HA)基因的进化,以及氨基酸的变异情况。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)和全球禽流感基因共享数据库(GISAID)中下载H7N9流感病毒以及有代表性的H7N2、H7N3、H7N7... 详细信息

目的探讨2013年4月流行的新型甲型H7N9禽流感病毒的表面蛋白血凝素(HA)基因的进化,以及氨基酸的变异情况。方法从美国国家生物技术信息中心(NCBI)和全球禽流感基因共享数据库(GISAID)中下载H7N9流感病毒以及有代表性的H7N2、H7N3、H7N7亚型流感病毒的HA基因序列,运用Molecular Evolutionary Genetics Analysis(MEGA)version 5.05软件进行序列分析,用邻接法构建基因进化树;通过氨基酸序列分析HA蛋白受体结合位点、糖基化位点和裂解位点的变化。结果 2013年新型甲型H7N9流感病毒与2011年浙江禽类H7N3流感病毒株(JQ906573.1)的相似性达到95.3%～95.6%;受体结合位点氨基酸发生变异,为Q226L,5个糖基化位点高度保守;HA裂解位点位于aa339和aa340之间,仅有1个碱性氨基酸:R。结论 2013年新型甲型H7N9流感病毒HA基因是由中国禽类H7亚型进化而来,Q226L变异导致的受体结合位点的变化可能是新型流感病毒具有人感染性的原因。

关键词： H7N9亚型流感病毒A型血凝素类进化变异(遗传学)

浙江省麻疹病毒流行株血凝素基因的变异及其与国内外流行株的差异

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中华预防医学杂志 2013年第7期47卷 616-621页

作者：冯燕钟淑玲徐昌平卢亦愚浙江省疾病预防控制中心病毒所浙江省公共卫生应急检测关键技术重点实验室杭州310051

目的探讨浙江省麻疹病毒（measlesvirus，MV）流行株血凝素基因的变异情况，及其与国内外流行株的差异。方法选取浙江省1999-2011年分离保存的麻疹病毒流行株33株，提取病毒核酸，采用RT-PCR法扩增其血凝素（H）基因全序列，并与GenBan... 详细信息

目的探讨浙江省麻疹病毒（measlesvirus，MV）流行株血凝素基因的变异情况，及其与国内外流行株的差异。方法选取浙江省1999-2011年分离保存的麻疹病毒流行株33株，提取病毒核酸，采用RT-PCR法扩增其血凝素（H）基因全序列，并与GenBank上下载的中国麻疹疫苗株沪191，以及95株国内外各基因型麻疹毒株的H基因序列进行比较分析。结果从浙江省1999-2011年麻疹患者咽拭子标本中分离麻疹病毒株33株，与1993-2007年我国其他地区麻疹流行株构建H基因系统进化树，结果表明33株浙江麻疹流行株均属于H1a亚型，流行株分布无明显时间和地域特征。以疫苗株沪191为参考株，我国2003-2011年H1a亚型流行株H基因的核苷酸、氨基酸平均变异率以及进化率分别为5．15％、4．44％和5．81％，分别高于1965-1993年（4．75％、3．86％和5．30％），以及1994-2002年（4．80％、4．08％和5．37％）流行株平均变异率与进化率；3个时间段流行株H基因非同义替换率与同义替换率的比值（dn／ds）分别为0．19、0．21和0．23，表明1993-2011年我国H1a型麻疹流行株尚未受到明显的正向选择作用。我田2003-2011年H1a亚型毒株与沪191之间，在H基因上共存在24个稳定的氨基酸变异位点；H1a亚型流行株与A基因型疫苗株间差异最大，遗传距离为0．053，氨基酸差异数为26～28个，而B3、D4型代表株与沪191间稳定的氨基酸差异仪为15个。另外，H1a型流行株与B、D基因型毒株间差异明显，组间遗传距离分别为0．074和0．071，氨基酸差异数达27～33个。结论麻疹病毒H1a亚型流行株与疫苗株以及其他基因型麻疹病毒株，在H基因上存在明显差异，且该差异随时间累积而增大，应该引起足够的重视。

关键词：麻疹病毒血凝素类基因遗传变异

2010-2012年宁波市乙型流行性感冒病毒血凝素及神经氨酸酶基因差异分析

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中华预防医学杂志 2013年第12期47卷 1100-1104页

作者：胡逢蛟李永东焦素黎张姝宁波市疾病预防控制中心病毒研究所 315010

目的分析2010-2012年宁波市乙型流行性感冒（简称流感）病毒的流行状态及表面抗原基因血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）进化情况.方法收集宁波市2010-2012年流感样患者的咽拭子和含漱液标本3440份,进行流感病毒分离鉴定;同时采集2010... 详细信息

目的分析2010-2012年宁波市乙型流行性感冒（简称流感）病毒的流行状态及表面抗原基因血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）进化情况.方法收集宁波市2010-2012年流感样患者的咽拭子和含漱液标本3440份,进行流感病毒分离鉴定;同时采集2010年正常人群血清628份,进行抗体滴度测定.选择不同时期乙型流感分离株进行HA和NA基因序列测定,分析病毒表面抗原基因的进化方向与流行规律的关系.结果共计109份临床样本分离出乙型流感病毒,其中Victoria系102份（93.6％）,Yamagata系7份（6.4％）;在628份正常人群血清中,Victoria和Yamagata系乙型流感病毒抗体阳性率分别为321 （51.1％）和300 （47.8％）,差异无统计学意义（x2=1.405,P＞0.05）.进化分析显示,2010-2012年Victoria系HA基因均聚集在疫苗株Malaysia/2506/2004分支中,而NA基因则出现了不同方向的进化分支.Victoria系流行株与Brisbane/60/2008在HA基因中仅1～5个氨基酸位点的差异,而NA基因上有6～16个位点的差异.相比HA基因,Victoria系NA的进化速度更快.结论 2010-2012年宁波市Victoria系乙型流感的NA基因进化速度比HA基因快;综合HA与NA基因序列分析对观察流感病毒的基因变异更为灵敏可靠.

关键词：流感病毒属B型血凝素类神经氨酸酶基因突变

牙龈卟啉单胞菌血凝素2与氯化血红素结合多肽的序列分析

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中华口腔医学杂志 2009年第9期44卷 538-542页

作者：杨秋波余飞燕杨圣辉首都医科大学口腔医学院北京口腔医学研究所北京100050

目的明确牙龈卟啉单胞菌血凝素2（Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2，PgHA-2）与氯化血红素结合的多肽片段氨基酸序列，为牙周病保护性抗体的制备奠定基础。方法提取Pg ATCC33277基因组DNA，原核克隆重组表达HA-2，质粒测序，... 详细信息

目的明确牙龈卟啉单胞菌血凝素2（Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2，PgHA-2）与氯化血红素结合的多肽片段氨基酸序列，为牙周病保护性抗体的制备奠定基础。方法提取Pg ATCC33277基因组DNA，原核克隆重组表达HA-2，质粒测序，蛋白质印迹法及质谱分析法鉴定重组HA-2（recombinant HA-2，rHA-2）。利用氯化血红素琼脂糖珠验证rHA-2的氯化血红素结合功能。利用多肽内切酶水解与氯化血红素结合的rHA-2，获得与氯化血红素结合的多肽片段，质谱分析多肽片段的氨基酸序列。结果PCR鉴定、质粒测序、蛋白质印迹法及质谱分析结果均证实原核表达蛋白为Pg的HA-2。氯化血红素结合实验明确了rHA-2具有与氯化血红素结合的功能。质谱分析与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列为DHYAVMISKTGTNAG。结论成功基因克隆重组与原核表达了具有与氯化血红素结合功能的PgHA-2，明确了与氯化血红素结合的多肽片段的氨基酸序列，为针对Pg的牙周病免疫预防和治疗药物的开发奠定了基础。

关键词：紫单胞菌龈血凝素类序列分析蛋白质细菌生长

2004—2005年中国B型流感病毒抗原性及基因特性研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第2期20卷 11-13页

作者：张烨温乐英赵翔李梓郭俊峰徐翠玲王敏余宏杰杨维中郭元吉舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心传染病预防控制国家重点实验室北京100052 中国疾病预防控制中心应急办

目的阐明2004—2005年中国流行的B型流感病毒血凝素抗原性及其基因变异情况。方法对2004—2005年分离的B型毒株先进行单向血凝抑制试验;在此基础上选取不同时间、地点的B型流感毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序... 详细信息

目的阐明2004—2005年中国流行的B型流感病毒血凝素抗原性及其基因变异情况。方法对2004—2005年分离的B型毒株先进行单向血凝抑制试验;在此基础上选取不同时间、地点的B型流感毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因进化特性分析。结果2004—2005年我国人群中同时流行着B型Yamagata系和Victoria系毒株。Yamagata系毒株与B/Shanghai/361/02比较,2004年有3·7%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,2005年有4·5%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,并且在血凝素基因HA1区发生9个氨基酸替换,在196为增加一个糖基化位点。Victoria系毒株与B/Hongkong/330/01比较,2004年有8·5%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,2005年有20·6%病毒单向血凝抑制效价有4倍以上差异,并且在HA1区发生9个氨基酸替换,在197位增加一个糖基化位点。结论2004—2005年我国人群中流行的B型流感病毒的抗原性与B/Shanghai/361/02、B/Hongkong/330/01相比抗原性已经发生了变化。

关键词：流感病毒B型抗原特性血凝素类

职业接触禽类致人感染高致病性H5N1型禽流感一例

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中华劳动卫生职业病杂志 2007年第3期25卷 129-132页

作者：周宏胜刘荆湖王秀全郭江华宋晓林吉安市中心人民医院呼吸内科江西吉安343000 遂川县人民医院放射科井冈山学院附属医院

目的描述人感染高致病性H5N1型禽流感的临床表现及肺部影像学特征。方法回顾分析1例确诊为人感染高致病性H5N1型禽流感的临床表现和影像学特点。结果患者有明确的职业接触史，以发热、咳嗽为首发症状，病程中流感样症状突出，伴消化道... 详细信息

目的描述人感染高致病性H5N1型禽流感的临床表现及肺部影像学特征。方法回顾分析1例确诊为人感染高致病性H5N1型禽流感的临床表现和影像学特点。结果患者有明确的职业接触史，以发热、咳嗽为首发症状，病程中流感样症状突出，伴消化道症状，实验室以白细胞总数和淋巴细胞均明显降低，肝功能和心肌酶损害为主，肺部病变发展快，累及多脏器（肺、心、肝、肾等），抗真菌、抗病毒、抗炎，机械通气以及对症支持疗法均无效；X线胸片特征病灶漫延快，变化多，吸收与发展并存；应用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）、实时聚合酶链反应（realtime PCR）技术检测患者鼻咽拭子和含漱液标本显示禽流感病毒H，N-亚型特异性HA和NA基因均为阳性，同时在鼻咽拭子标本中分离获得1株禽流感病毒A／jiangxi／1／2005（H5N1）。尸检显示双肺弥漫性肺泡损伤，弥漫性血管内凝血及多脏器损伤。结论人感染高致病性H5N。型禽流感是致命性疾病，肺部病变发展快，吸收与发展并存，无有效治疗措施，对有职业接触的人群应加强传染病的防护。

关键词：流感病毒A型鸟血凝素类病毒职业暴露