检索结果-南通市图书馆

TβR-Ⅱ-RANTES融合基因重组腺病毒的抗肿瘤作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肿瘤杂志 2007年第6期29卷 405-410页

作者：王旭东刘虹曹水李慧任秀宝郝希山天津医科大学附属肿瘤医院免疫治疗中心教育部乳腺癌防治重点实验室 300060

目的构建表达融合基因TGF-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)胞外区及活化T细胞表达和分泌的调节因子(RANTES)重组腺病毒载体,并观察其抗肿瘤作用。方法RT-PCR扩增小鼠TβR-Ⅱ胞外区和RANTES基因,重叠PCR扩增融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES。采用adMax... 详细信息

目的构建表达融合基因TGF-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)胞外区及活化T细胞表达和分泌的调节因子(RANTES)重组腺病毒载体,并观察其抗肿瘤作用。方法RT-PCR扩增小鼠TβR-Ⅱ胞外区和RANTES基因,重叠PCR扩增融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES。采用adMax adenovjrus vector creation试剂盒构建表达融合基因重组腺病毒。体外感染小鼠肺腺痛LA795细胞系,绘制细胞生长曲线。采用Western blot法检测感染后细胞融合基因的表达;酶联免疫吸附试验(FLISA)法检测其培养上清的蛋白含量;Annexin V-FITC法检测感染后细胞的凋亡;并观察感染后细胞培养上清对小鼠脾细胞的趋化作用。将感染后的细胞(1×105个)接种于T739小鼠,观察成瘤时间和生存时间;1×1010pfu的重组腺病毒局部注射荷瘤小鼠,观察肿瘤的大小变化,并统计肿瘤的重量和计算抑瘤率。结果经测序证实,RT-PCR正确扩增小鼠TβR-Ⅱ胞外区和RANTFS基因,重叠PCR正确扩增融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES。重组质粒pDC316-融合基因经酶切鉴定正确,与pJM17双质粒共转染获得表达融合基因重组腺病毒,病毒滴度为8×1010pfu/ml。Western blot结果表明,感染后的LA795细胞有融合蛋白的特异性条带出现;培养上清中,游离TGF-β1的水平显菩减低,而RANTES的水平显著升高。感染融合基因重组腺病毒的细胞生长速度明显减低,凋亡率为16.9%;培养上清可趋化小鼠脾细胞,与对照组之间差异均有统计学意义。感染融合基因重组腺病毒组与对照组相比,体内成瘤时间和生存时间明显延长;局部注射融合基因重组腺病毒可显著抑制肿瘤的生长,抑瘤率为37.6%。结论成功构建表达融合基因TβR-Ⅱ胞外区-RANTES重组腺病毒可有效结合TGF-β1,显著逆转TGF-β介导的免疫抑制状态,高水平表达RANTES强化肿瘤局部的免疫功能,具有显著的抗肿瘤作用。

关键词： TGF—β RANTES 融合基因重组腺病毒载体肿瘤

21羟化酶缺陷症患者CYP21A2基因拷贝数变异及CYP21A1P/CYP21A2融合基因类型

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2019年第48期99卷 3765-3769页

作者：高寅洁于冰青卢琳伍学焱茅江峰王曦童安莉陈适聂敏北京协和医院内分泌科国家卫生健康委员会内分泌重点实验室北京100730

目的分析21羟化酶缺陷症(21-OHD)患者的CYP21A2基因拷贝数变异情况,明确CYP21A2基因3拷贝重复、单拷贝缺失及CYP21A1P/CYP21A2融合基因的分型及所占比例。方法纳入2015年1月至2018年1月于北京协和医院就诊的424例21-OHD患者,年龄(17.1±... 详细信息

目的分析21羟化酶缺陷症(21-OHD)患者的CYP21A2基因拷贝数变异情况,明确CYP21A2基因3拷贝重复、单拷贝缺失及CYP21A1P/CYP21A2融合基因的分型及所占比例。方法纳入2015年1月至2018年1月于北京协和医院就诊的424例21-OHD患者,年龄(17.1±12.4)岁,其中男140例,女284例,收集其临床和生化资料。提取外周血白细胞DNA,利用Sanger测序方法和多重连接探针扩增技术(MLPA)分别检测CYP21A2基因突变及拷贝数变异。结果424例21-OHD患者中有287例(67.7%)的CYP21A2基因为2拷贝;137例患者(32.3%)存在拷贝数变异,其中1例患者(0.2%)的CYP21A2基因为3拷贝,136例(32.1%)携带CYP21A2基因大片段缺失/转换突变。存在3拷贝CYP21A2基因的患者检测到3个致病突变,包含1个Q319X蛋白截短突变。携带CYP21A2基因大片段缺失/转换突变的患者中,82例(60.3%)携带CYP21A1P/CYP21A2融合基因,其余54例为CYP21A2全基因单拷贝缺失。最常见的CYP21A1P/CYP21A2融合基因类型是CH-5型、1型和2型,各占31.7%(26例)、26.8%(22例)和19.5%(16例);其次是CH-4型和7型,各占8.5%(7例)和4.9%(4例);此外发现CH-3型、6型和8型各2例,CH-9型1例。结论本研究首次在较大样本的21-OHD患者中检测了CYP21A2基因拷贝数及CYP21A1P/CYP21A2融合基因的发生情况。对于21-OHD患者遗传学特征的进一步研究应在常规突变检测的基础上结合拷贝数及融合基因的筛查。

关键词： 21羟化酶缺陷症 DNA拷贝数异常融合基因突变大片段缺失

NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因重组腺相关病毒的构建及鉴定

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2008年第8期24卷 754-756页

作者：王健生张明鑫刘德纯段小艺周苏娜张广健杨广笑王全颖西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科陕西西安710061 河南科技大学第一附属医院普外科河南洛阳471003 西安交通大学医学院第一附属医院核医学科陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院胸外科陕西西安710061 西安华广生物工程公司陕西西安710025

目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体。方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pAAV/Ad、... 详细信息

目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体。方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pAAV/Ad、腺病毒质粒pFG140共同转染HEK-293细胞,通过同源重组获得NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,收集病毒上清,Dot blot法测定其滴度。MTT比色法观察NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞存活率的影响。结果:经酶切及测序证实克隆出NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因;得到高滴度的(3.14×1015pfu/L)重组腺相关病毒表达载体。NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞有强烈的诱导凋亡作用,与对照组比较,处理组细胞的存活率明显降低。结论:通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4-Ap-optin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,为下一步的Apoptin应用于基因治疗奠定了基础。

关键词： NT4-Apoptin-HA2-TAT 重组腺相关病毒肿瘤融合基因

IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2005年第3期31卷 255-262页

作者：万旺军谢荣辉李龙许健于涟浙江大学生物医学工程系浙江杭州310027 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310009 浙江大学动物预防医学研究所浙江省重点实验室浙江杭州310029

构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyoverlappingextension),分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3IL2、IL2VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,在脂质体介导下,分别转染Vero细胞.RTPCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实重组质粒在Vero细胞中正确表达了插入的外源基因编码的融合蛋白,且表达的融合蛋白具有免疫反应性.重组真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3的成功构建及其在Vero细胞中的有效表达,为进一步探讨ChIL2作为分子免疫佐剂对IBDVDNA疫苗的特异性免疫增强作用奠定了基础.

关键词：传染性法氏囊病病毒多聚蛋白鸡白细胞介素2 融合基因真核表达

克唑替尼靶向治疗间变性淋巴瘤激酶与C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶融合基因阳性晚期非小细胞肺癌患者的效果分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国医药 2023年第11期18卷 1627-1631页

作者：李莉赵振慧李妍马小平刘丹李冰玉赵兵新疆医科大学附属肿瘤医院肿瘤内科乌鲁木齐830011

目的分析克唑替尼靶向治疗间变性淋巴瘤激酶(ALK)、C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶(ROS1)融合基因阳性晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的效果。方法选取2020年6月至2022年6月来新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的123例ALK阳性(ALK组)、15例ROS... 详细信息

目的分析克唑替尼靶向治疗间变性淋巴瘤激酶(ALK)、C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶(ROS1)融合基因阳性晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的效果。方法选取2020年6月至2022年6月来新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的123例ALK阳性(ALK组)、15例ROS1阳性(ROS1组)晚期NSCLC患者为研究对象,所有患者均给予克唑替尼治疗,并纳入同期来本院进行健康检查的50名健康志愿者作为对照组。比较对照组入组时以及ALK组和ROS1组治疗前及治疗1、3个月后的循环肿瘤细胞(CTCs)、循环肿瘤DNA(CTDNA)、循环血液外泌体微小RNA-145(miR-145)、miR-200水平及ALK、ROS1阳性率。结果治疗前ALK组和ROS1组CTCs和CTDNA水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P融合基因阳性晚期NSCLC能够通过调节患者CTCs、CTDNA、miR-145、miR-200水平而降低ALK、ROS1阳性表达率。

关键词：非小细胞肺癌克唑替尼间变性淋巴瘤激酶 C-ros原癌基因1-受体酪氨酸激酶融合基因靶向治疗

实时荧光聚合酶链反应联合检测法检测非小细胞肺癌组织中间变性淋巴瘤激酶和c—ros原癌基因1酪氨酸激酶融合基因的临床价值

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华肿瘤杂志 2016年第12期38卷 898-903页

作者：白冬雨张海萍钟山索文昊高德宏丁毅涂金花厦门大学附属第一医院病理科 361003

目的探讨实时荧光聚合酶链反应（PCR）联合检测法检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中间变性淋巴瘤激酶（ALK）和c－ros原癌基因1酪氨酸激酶（ROS1）融合基因的临床应用价值。方法采用ALK和ROS1融合基因联合检测试剂盒，以实时荧光PCR法对... 详细信息

目的探讨实时荧光聚合酶链反应（PCR）联合检测法检测非小细胞肺癌（NSCLC）组织中间变性淋巴瘤激酶（ALK）和c－ros原癌基因1酪氨酸激酶（ROS1）融合基因的临床应用价值。方法采用ALK和ROS1融合基因联合检测试剂盒，以实时荧光PCR法对302例NSCLC标本进行ALK和ROS1融合基因的联合检测，并应用Sanger DNA测序法对其进行验证，分析两种检测方法的一致性。结果实时荧光PCR联合检测法检测302例NSCLC标本的成功率为100%。ALK融合基因阳性12例（4.0%），其中ALK－M1融合基因型3例，ALK－M2融合基因型3例，ALK－M3融合基因型3例，ALK－M4融合基因型1例，ALK－M6融合基因型2例。ROS1融合基因阳性12例（4.0%），其中ROS1－M7融合基因型1例，ROS1－M8融合基因型8例，ROS1－M12融合基因型1例，ROS1－M14融合基因型1例，ROS1－M3和ROS1－M8融合基因型双阳性1例。ALK融合基因和ROS1融合基因的阳性总检出率为7.9%（24/302），ALK融合基因和ROS1融合基因阴性278例。Sanger DNA测序法的检测成功率也为100%。实时荧光PCR联合检测法与Sanger DNA测序法检测的阳性率和融合基因类型完全一致。结论经Sanger DNA测序法验证，实时荧光PCR联合检测法对NSCLC组织中ALK和ROS1融合基因的检测具有等效性。在NSCLC患者筛选靶向药物时，实时荧光PCR联合检测法对样本中微量ALK和ROS1融合基因进行同时检测，可以节省时间，避免重复取样，是一种值得推荐的快速、可靠的检测方法。

关键词：癌,非小细胞肺间变性淋巴瘤激酶 c-ros原癌基因1酪氨酸激酶融合基因聚合酶链反应

儿童B系急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华血液学杂志 1999年第2期20卷 61-64页

作者：牛超黄薇苏欣莹曹琪顾柏炜贾培敏顾龙君蒋慧陈竺陈赛娟上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医院

目的了解ＴＥＬＡＭＬ１融合基因在儿童Ｂ系急性淋巴细胞白血病（急淋）中的发生率及其与临床诊断和预后的关系，并比较巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和双标记荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）两种方法。方法采用巢式ＲＴＰＣ... 详细信息

目的了解ＴＥＬＡＭＬ１融合基因在儿童Ｂ系急性淋巴细胞白血病（急淋）中的发生率及其与临床诊断和预后的关系，并比较巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和双标记荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）两种方法。方法采用巢式ＲＴＰＣＲ和双标记ＦＩＳＨ技术检测ＴＥＬＡＭＬ１融合基因。结果和结论ＲＴＰＣＲ检测发现儿童Ｂ系急淋中２２．５％（４０例中９例）的患者有ＴＥＬＡＭＬ１融合基因转录本，这类患者预后较好，完全缓解率达１００％。ＲＴＰＣＲ和ＦＩＳＨ技术是检测ＴＥＬＡＭＬ１的有效方法，并为临床诊断和预后估计提供了有一定价值的手段。

关键词：白血病 ALL 聚合酶链反应 TEL-AML1 融合基因

实时定量逆转录-聚合酶链反应监测慢性粒细胞白血病患者融合基因转录本水平及其变化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华医学杂志 2005年第7期85卷 453-457页

作者：邢文顾柏炜朱勇梅姜春雷赵瑞华王爱华孙慧平李军民沈志祥陈竺陈赛娟上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025

目的探讨实时定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)在监测慢性粒细胞白血病(慢粒)患者微小残留病变、考核疗效以及预测疾病预后方面的应用。方法应用实时定量RT PCR对11例慢粒患者治疗前后融合基因(BCR ABL)转录本水平的变化进行监测,对55例... 详细信息

目的探讨实时定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)在监测慢性粒细胞白血病(慢粒)患者微小残留病变、考核疗效以及预测疾病预后方面的应用。方法应用实时定量RT PCR对11例慢粒患者治疗前后融合基因(BCR ABL)转录本水平的变化进行监测,对55例不同病期患者之间的转录本水平进行比较。结果对于慢性期患者,造血干细胞移植后其BCR ABL转录本水平明显下降,甚至检测不到,甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗可获得类似结果,而羟基脲、干扰素α或三尖杉酯碱治疗后,其BCR ABL转录本水平虽有下降但仍维持在较高水平;患者发生急变时,其BCR ABL转录本水平升高约10倍;急变期患者的转录本水平明显高于慢性期或加速期患者。结论实时定量RT PCR方法准确可靠,对于监测慢粒患者的微小残留病变、考核疗效以及预测慢粒急变具有重要的临床应用价值。

关键词：患者监测 ABL 逆转录-聚合酶链反应慢性粒细胞白血病融合基因慢性期实时定量 RT—PCR 水平

NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因重组腺相关病毒载体的构建及鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2008年第12期24卷 1143-1146页

作者：汤小江平宝华潘承恩杨广笑王全颖西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院控制感染科陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院老年外科陕西西安710061 西安华广生物工程公司陕西西安710025

目的:设计构建融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒表达载体。方法:应用非对称引物/模板法,PCR技术制备Ant-Shepherdin[79-87]cDNA片段,通过连接pGEM-T-Easy载体及PBV220-NT4质粒,转化感受态细胞,获得NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因,连接腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV,采用磷酸钙沉淀法三质粒共转染HEK-293细胞获取重组腺相关病毒,Dot-blot法测定重组病毒滴度,MTT比色法观察重组腺相关病毒对A549细胞存活率的影响。结果:合成Ant-Shepherdin[79-87]基因,连接PBV220-NT4,经克隆、酶切,琼脂糖凝胶电泳证实获得321bp的NT4-Ant-Shepherdin[79-87]目的基因;得到高滴度的(3.4×1013pfu/L)重组腺相关病毒表达载体;带有融合基因NT4-Ant-Shepherdin[79-87]的重组腺相关病毒对A549细胞具有强烈的诱导凋亡作用。结论:成功构建了NT4-Ant-Shepherdin[79-87]融合基因的重组腺相关病毒表达载体,为进一步研究针对Survivin的靶向抗肿瘤作用奠定了基础。

关键词： Survivin Ant NT4 融合基因重组腺相关病毒