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蚕豆萎蔫病毒2号分离物侵染对蚕豆叶片光合活性和叶绿体超微结构的影响

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植物生理与分子生物学学报 2006年第4期32卷 490-496页

作者：李燕宏洪健谢礼杨勇周雪平蒋德安浙江大学生物技术研究所杭州310029 浙江大学生命科学学院杭州310029

研究了受蚕豆萎蔫病毒2号(Broadbeanwiltvirus2,BBWV2)中国分离物B935和欧洲分离物PV131侵染的蚕豆(Vicicafaba)叶片光合特性、叶绿素荧光诱导动力学参数和叶绿体超微结构变化。感病蚕豆叶绿素含量减少,叶绿素a/b比逐步降低;光合气体交... 详细信息

研究了受蚕豆萎蔫病毒2号(Broadbeanwiltvirus2,BBWV2)中国分离物B935和欧洲分离物PV131侵染的蚕豆(Vicicafaba)叶片光合特性、叶绿素荧光诱导动力学参数和叶绿体超微结构变化。感病蚕豆叶绿素含量减少,叶绿素a/b比逐步降低;光合气体交换参数Pn值和Gs值降低,Ci值升高;叶绿素荧光诱导动力学参数Fv/Fm、Fv'/Fm'、ΦPSII、qP值均有不同程度降低,NPQ值升高;光合器结构遭到不同程度的破坏,B935侵染后叶绿体发育不良,片层结构疏松,PV131侵染后叶绿体肿胀变圆,片层结构疏松瓦解。与B935相比,PV131侵染对以上各参数的变化有更大影响,且对叶绿体的破坏更为严重。实验结果表明BBWV2不同分离物对光系统II(PSII)的抑制作用与光合器受损程度相关。

关键词：蚕豆萎蔫病毒2号蚕豆叶绿体超微结构光合作用叶绿素荧光

蚕豆萎蔫病毒2号山西分离株的全基因组序列测定与分析

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中国生物化学与分子生物学报 2014年第9期30卷 927-932页

作者：牛颜冰赵欣赵慧琪张西梅山西农业大学生命科学学院山西太谷030801

本试验在生物学接种的基础上,利用非序列依赖性PCR扩增（sequence-independent amplification,SIA）对感病青椒（Capsicum annuum）进行了分子鉴定.序列测定及分析发现,侵染青椒的病毒为蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus 2,BBWV2... 详细信息

本试验在生物学接种的基础上,利用非序列依赖性PCR扩增（sequence-independent amplification,SIA）对感病青椒（Capsicum annuum）进行了分子鉴定.序列测定及分析发现,侵染青椒的病毒为蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus 2,BBWV2）.为明确BBWV2青椒分离物（BBWV2-Ca）的分类地位,对BBWV2-Ca的全基因组序列进行了分段克隆、序列测定和分析.BBWV2-Ca RNA1全长5 929 bp,含有1个***2-Ca RNA2全长3 559 bp,含有1个ORF,编码3种蛋白：VP53/VP37、外壳蛋白大亚基（large coat protein,LCP）和外壳蛋白小亚基（small coat protein,SCP）.全序列核苷酸同源性分析显示,BBWV2-Ca RNA1与BBWV2其它分离物核苷酸同源性在77.9%-93.7%之间;RNA2与BBWV2其它分离物核苷酸同源性在80.2%-93.8%之间.全序列系统进化分析显示,BBWV2-Ca RNA1与BBWV2-XJ14-3以及BBWV2-RP3株系聚为一簇,亲缘关系最近;RNA2与BBWV2-Am形成一个独立分支,亲缘关系最近.

关键词：青椒蚕豆萎蔫病毒2号全基因组序列

蚕豆萎蔫病毒2号分离物PV131和P158侵染寄主植物的细胞病理比较观察

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植物病理学报 2009年第2期39卷 168-173页

作者：刘成科李燕宏王卫兵洪健周雪平浙江大学生物技术研究所杭州310029 浙江大学分析测试中心杭州310029

透射电镜观察比较了蚕豆萎蔫病毒2号(BBWV-2)分离物PV131和P158侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)和蚕豆(Viciafaba)的细胞超微结构变化。结果显示:受PV131分离物侵染的昆诺藜叶肉细胞质中膜结构大量增生,形成有膜状结构、大小泡囊及电子... 详细信息

透射电镜观察比较了蚕豆萎蔫病毒2号(BBWV-2)分离物PV131和P158侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)和蚕豆(Viciafaba)的细胞超微结构变化。结果显示:受PV131分离物侵染的昆诺藜叶肉细胞质中膜结构大量增生,形成有膜状结构、大小泡囊及电子致密物质的特殊膜增生区;病毒粒子散布在细胞质中,形成大块结晶体和管状结构,该管状结构直径约75nm,横切面由9个病毒粒子组成;受PV131侵染的蚕豆叶肉细胞中也形成膜增生区和管状结构,未见病毒结晶体。受P158分离物侵染的昆诺藜和蚕豆叶肉细胞病变情况与PV131分离物相似,形成膜增生区和相同的管状结构,在蚕豆叶肉细胞中也未观察到病毒结晶体。上述结果表明:2个BBWV-2分离物虽然在不同寄主植物上引起的细胞病变程度有差异,但其细胞病理学特征是由病毒基因结构所决定,与寄主的种类无关。

关键词：蚕豆萎蔫病毒2号细胞病理学电子显微镜

蚕豆萎蔫病毒2号安徽分离物全基因组序列测定与分析

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植物保护 2018年第1期44卷 67-73页

作者：严丹侃郑红英张海珊沈艳顾江涛章东方燕飞安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所合肥230031 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021

利用酶联免疫和RT-PCR技术对采自安徽地区的蚕豆病株进行检测,确定其病原为蚕豆萎蔫病毒2号Broad bean wilt virus 2(BBWV2)。为明确BBWV2安徽分离物(BBWV2-AH)的分类地位,克隆了该分离物的全基因组序列,分析了其基因组特征。结果表明,B... 详细信息

利用酶联免疫和RT-PCR技术对采自安徽地区的蚕豆病株进行检测,确定其病原为蚕豆萎蔫病毒2号Broad bean wilt virus 2(BBWV2)。为明确BBWV2安徽分离物(BBWV2-AH)的分类地位,克隆了该分离物的全基因组序列,分析了其基因组特征。结果表明,BBWV2-AH RNA1全长为5 944 bp(GenBank登录号:KY606992),含有1个ORF;BBWV2-AH RNA2全长3 587bp(GenBank登录号:KY606993),含有1个ORF。全序列核苷酸和氨基酸相似性分析显示,BBWV2-AH RNA1与BBWV2其他分离物的核苷酸、氨基酸相似性分别为78.4%~96%和87.1%~99%;BBWV2-AH RNA2与BBWV2其他分离物的核苷酸、氨基酸相似性分别为76.8%~95.5%和88.2%~98.3%。全基因组核苷酸序列系统发育分析显示,BBWV2-AH RNA1与中国的BBWV2-Hunan RNA1的亲缘关系最近,而BBWV2-AH RNA2与韩国的多个分离物聚集在一起,再与中国的分离物BBWV2-B935形成一个分支。

关键词：蚕豆萎蔫病毒2号安徽分离物基因组序列分析

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蚕豆萎蔫病毒2号辽宁藜分离物的鉴定

沈阳农业大学学报 2020年第4期51卷 446-453页

作者：李梁杨彩霞侯秋实王筠竹于美春沈阳大学生命科学与工程学院/辽宁省城市有害生物治理与生态安全重点实验室沈阳110044

2016年6月在辽宁省沈阳市采集到表现为疑似蚕豆萎蔫病毒2号所致皱缩症状的藜病叶样品。选取明显病症样品送华大基因进行RNA提取和质量检测,得到OD260/280为2.09,OD260/230为1.85,RIN值为7以及28S/18S为1.3的合格样品。利用该RNA样品构... 详细信息

2016年6月在辽宁省沈阳市采集到表现为疑似蚕豆萎蔫病毒2号所致皱缩症状的藜病叶样品。选取明显病症样品送华大基因进行RNA提取和质量检测,得到OD260/280为2.09,OD260/230为1.85,RIN值为7以及28S/18S为1.3的合格样品。利用该RNA样品构建了去除rRNA的转录组库,经BGISEQ-500平台测序得到11.83 Gb数据。数据经过CLC Genomics Workbench(CLC bio v10.0,Aarhus,Denmark)软件过滤和拼接后获得长度为5945和3550的2个contigs,其经BLASTn和BLASTx比对显示与BBWV2的高度同源。基于此contigs序列,设计7对引物对病毒样品进行RT-PCR扩增,得到5891个核苷酸的RNA1序列(GenBank登录号为MN786954),3549个核苷酸的RNA2序列(GenBank登录号为MN786955)。基于该病毒cp基因的氨基酸序列进行同源性分析,发现该病毒与韩国益母草分离物BBWV2-[SK:Leonurus sibiricus](KM076649)同源性最高,为96.5%。根据Fabavirus的分类标准,认为该病毒是BBWV2的辽宁分离物。这是国际上首次报道藜科植物感染BBWV2。

关键词： Fabavirus 蚕豆萎蔫病毒2号藜分子特征

蚕豆萎蔫病毒2号板蓝根分离株全基因组序列测定与分析

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中国生物化学与分子生物学报 2019年第3期35卷 333-340页

作者：王宝霞齐永红辛敏崔丽艳王德富牛颜冰山西农业大学生命科学学院山西太谷030801 山西省果业工作总站太原030001

板蓝根(Isatidis Radix)病毒病害的发生已对其产量和品质造成了严重影响。因此,建立一套灵敏、快速、有效的板蓝根病毒病害检测手段十分重要。本研究利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)和非序列依赖PCR扩增(sequence-independent a... 详细信息

板蓝根(Isatidis Radix)病毒病害的发生已对其产量和品质造成了严重影响。因此,建立一套灵敏、快速、有效的板蓝根病毒病害检测手段十分重要。本研究利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)和非序列依赖PCR扩增(sequence-independent amplification,SIA)等技术对感病板蓝根进行鉴定,确定其被蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus 2, BBWV2)所侵染。为明确BBWV2板蓝根分离物(BBWV2-IR)的进化关系,对其全基因组进行序列扩增与分析,获得其RNA1序列全长为5 955 bp,RNA2序列全长为3 602 bp,分别编码由1 870和1 064个氨基酸组成的多聚蛋白质。序列比对发现,BBWV2-IR RNA1与BBWV2-Am分离物的同源性最高,RNA2与BBWV2-SN分离物的同源性最高。全基因组变异情况分析表明,BBWV2-IR RNA1和RNA2分别与其同源性最高的株系存在多个氨基酸变异位点。系统进化分析表明,BBWV2-IR RNA1与BBWV2-Am RNA1聚为一簇,RNA2与BBWV2-SN RNA2聚为一簇,亲缘性最近。本研究获得了BBWV2板蓝根分离株的全基因组序列,并明确其在进化过程中的地位和区域变化情况,为进一步研究BBWV2-IR致病性变异提供一定的理论基础。

关键词：板蓝根蚕豆萎蔫病毒2号全基因组扩增

蚕豆萎蔫病毒2号VP37蛋白在BY-2细胞内的定位

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电子显微学报 2009年第5期28卷 405-409页

作者：刘成科洪健孟春梅叶露飞周雪平浙江大学生物技术研究所浙江杭州310029 浙江大学分析测试中心浙江杭州310029

将绿色荧光蛋白(GFP)连接于蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2,BBWV-2)VP37蛋白的N-端,构建融合基因GFP-VP37,用农杆菌法在BY-2悬浮细胞内进行表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的分布。结果显示:GFP-VP37主要定位于细胞核的周... 详细信息

将绿色荧光蛋白(GFP)连接于蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2,BBWV-2)VP37蛋白的N-端,构建融合基因GFP-VP37,用农杆菌法在BY-2悬浮细胞内进行表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的分布。结果显示:GFP-VP37主要定位于细胞核的周围呈网络状,并在细胞边缘形成点状结构;ER-tracker标记显示VP37在细胞内与内质网共定位;电镜免疫金标记显示VP37蛋白主要定位在细胞质中;用BFA处理转染细胞后,VP37在细胞质及细胞边缘的定位受到抑制。推测内质网参与VP37的细胞内转运和分布。

关键词：蚕豆萎蔫病毒2号 VP37蛋白绿色荧光蛋白细胞定位

蚕豆萎蔫病毒2号山西分离株的全基因组序列测定与分析

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蚕豆萎蔫病毒2号山西分离株的全基因组序列测定与分析

作者：赵欣山西农业大学

学位级别：硕士

青椒(Capsaicam annuum)为菊亚纲(Asteridae),茄科(Solanaceae)一年生或多年生草本植物,是我国深受人们喜爱的蔬菜之一。现如今,青椒的种植面积越来越大,使得其被病毒侵染的现象逐渐严峻,造成了农业经济的极大损失。本研究对山西太谷范... 详细信息

青椒(Capsaicam annuum)为菊亚纲(Asteridae),茄科(Solanaceae)一年生或多年生草本植物,是我国深受人们喜爱的蔬菜之一。现如今,青椒的种植面积越来越大,使得其被病毒侵染的现象逐渐严峻,造成了农业经济的极大损失。本研究对山西太谷范村蔬菜种植基地具有典型病毒病症状的青椒病样进行了分子生物学检测以及鉴定,发现青椒被蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2, BBWV2)所侵染,并克隆了BBWV2的全基因组序列。依据生物学检测法,利用dsRNA、非序列依赖性PCR扩增(sequence-independent amplification, SIA)、RT-PCR对感病青椒进行了检测。结果发现侵染青椒的病毒为蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2, BBWV2),将青椒分离物命名为BBWV2-Ca。为了进一步明确青椒BBWV2-Ca的分类地位,对BBWV2-Ca的全基因组序列进行分段克隆、序列测定和分析。结果显示BBWV2-Ca具有蚕豆病毒属(Fabavirus)的典型特征,它是二分体病毒,包括RNA1和RNA2。RNA1全长5929nt,含有1个ORF。BBWV2-CaRNA1与BBWV2其它分离物的氨基酸同源性为86.8%-97.3%。系统进化显示,BBWV2-Ca RNA1与中国的BBWV2-XJ14-3以及韩国的BBWV2-RP3株系聚为一簇,同源性最高,而与西班牙的BBWV1-Ben株系同源性最低。 BBWV2-Ca RNA2全长3559nt,含有1个ORF,编码三种蛋白,分别是运动蛋白(VP53/VP37),外壳蛋白大亚基(Large Coat Protein, LCP)和外壳蛋白小亚基(Small Coat Protein, SCP)。BBWV2-Ca RNA2与BBWV2其它分离物的氨基酸同源性为89.9%-97.1%。系统进化表明,BBWV2-Ca RNA2与来自中国的BBWV2-Am同源性最高,形成一个独立分支,而与来自西班牙的BBWV1-Ben株系同源性最低。

关键词：植物病毒病蚕豆萎蔫病毒2号青椒全基因组

侵染白术的蚕豆萎蔫病毒2号的分子检测与序列分析

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病毒学报 2015年第1期31卷 58-64页

作者：牛颜冰时晓丽张西梅赵慧琪赵保佳山西农业大学生命科学学院太谷030801

为鉴定引起山西绛县白术花叶、黄化等症状的病原，利用生物学接种、非序列依赖性PCR扩增（SIA）和RT-PCR的研究方法，对白术病样进行了研究，结果表明：接种感病白术病汁液的指示植物昆诺藜表现退绿枯斑，经单斑分离后转接健康白术植株... 详细信息

为鉴定引起山西绛县白术花叶、黄化等症状的病原，利用生物学接种、非序列依赖性PCR扩增（SIA）和RT-PCR的研究方法，对白术病样进行了研究，结果表明：接种感病白术病汁液的指示植物昆诺藜表现退绿枯斑，经单斑分离后转接健康白术植株呈现出与病样类似的症状，初步证明白术病害可能为病毒引起的；SIA检测表明感病白术为蚕豆萎蔫病毒2号（Broad bean wilt virus 2，BBWV2）侵染所致；为明确BBWV2白术分离物（BBWV2-Am）的分类地位，进一步克隆了BBWV2-Am RNA2外壳蛋白大亚基基因（LCP）和外壳蛋白小亚基基因（SCP）序列；序列同源性分析表明，LCP基因和SCP基因与已发表的BBWV2其它株系相应基因核苷酸序列的同源性分别为79.3%～87.2%和80.1%～89.2%，氨基酸序列同源性分别为91.2%～95.7%和89.4%～95.5%；系统进化树分析显示，BBWV2-Am与BBWV2地黄分离物（BBWV2-Rg）形成一个独立分支，二者亲缘关系最近。这是BBWV2侵染白术的首次报道。

关键词：白术生物学接种非序列依赖性PCR扩增蚕豆萎蔫病毒2号