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二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的抑制作用及其机制

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期27卷 352-356页

作者：吴加华周嘉强浙江大学医学院附属邵逸夫医院内分泌科浙江杭州310016

目的探讨二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因表达作用及其分子机制。方法应用稳定表达G6Pase的鼠肝细胞瘤H4ⅡE M1.3细胞,一组细胞分别给予二甲双胍0.1～5.0mmol·L-1孵育16h;另一组细胞先加入化合物C 20μmol·L-1,Bay11-7085 5μ... 详细信息

目的探讨二甲双胍对葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)基因表达作用及其分子机制。方法应用稳定表达G6Pase的鼠肝细胞瘤H4ⅡE M1.3细胞,一组细胞分别给予二甲双胍0.1～5.0mmol·L-1孵育16h;另一组细胞先加入化合物C 20μmol·L-1,Bay11-7085 5μmol·L-1或雷帕霉素25nmol·L-1作用30min后,再加入二甲双胍2mmol·L-1共育16h,采用荧光素酶报告基因检测方法测定G6Pase基因表达水平;细胞加入化合物C 20μmol·L-1作用30min后,再分别加入二甲双胍2mmol·L-1、5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)1mmol·L-1孵育15min,Western印迹法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白表达及其磷酸化水平;细胞加入二甲双胍2mmol·L-1和胰岛素1μmol·L-1作用15min,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)蛋白表达及其磷酸化水平。结果二甲双胍0.5,1,2和5 mmol·L-1作用16h可以显著抑制G6Pase基因表达(P6Pase基因表达26%(P磷酸化,与AICAR作用相似,但这一作用可被化合物C抑制。结论二甲双胍抑制G6Pase基因表达,其作用机制可能与激活AMPK有关,而可能与Akt,雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及核因子-κB(NF-κB)介导的通路无关。

关键词：二甲双胍葡萄糖-6-磷酸酶蛋白激酶类分子作用机制

葡萄糖-6-磷酸酶在大白鼠心肌细胞超微结构的定位

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解剖学报 1987年第4期 418-421,463页

作者：韩玉昇祁小平陈玉英上海第二医科大学生物物理教研室

葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)是内质网的标志酶,本研究观察了大白鼠左心室心肌细胞的G6Pase的定位。实验结果表明,G6Pase活性遍布于心肌细胞的肌浆网(内质网)腔内,包括肌原纤维之间的肌浆网小管、肌膜下池和核膜。尤其是酶的反应产物在肌原... 详细信息

葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)是内质网的标志酶,本研究观察了大白鼠左心室心肌细胞的G6Pase的定位。实验结果表明,G6Pase活性遍布于心肌细胞的肌浆网(内质网)腔内,包括肌原纤维之间的肌浆网小管、肌膜下池和核膜。尤其是酶的反应产物在肌原纤维处显示了肌浆网小管的特征性分布:即在A带处肌浆网小管排列紧密形成致密网格,而在I带处排列稀疏,形成多角形大网格。这种排列特点可能和肌肉的舒缩功能有关,在收缩时I带的细丝向A带粗丝处滑动,肌节缩短。在I带处肌浆网小管排列成大网格、稀疏,便于伸长或缩短,是适应性的分布。

关键词：超微结构心肌细胞肌浆网葡萄糖-6-磷酸酶大鼠

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葡萄糖-6-磷酸酶与糖尿病

国外医学（内分泌学分册） 2003年第5期23卷 305-307页

作者：方显锋刘德敏天津医科大学代谢病医院，天津300070

葡萄糖-6-磷酸酶是肝脏糖异生的两个关键酶之一,该酶的活性变化直接影响肝脏葡萄糖的输出。大量的研究表明,葡萄糖-6-磷酸酶的活性及其基因表达水平在胰岛素抵抗、糖尿病中均明显增加。因此,该酶同胰岛素抵抗、糖尿病高血糖有着密切的... 详细信息

葡萄糖-6-磷酸酶是肝脏糖异生的两个关键酶之一,该酶的活性变化直接影响肝脏葡萄糖的输出。大量的研究表明,葡萄糖-6-磷酸酶的活性及其基因表达水平在胰岛素抵抗、糖尿病中均明显增加。因此,该酶同胰岛素抵抗、糖尿病高血糖有着密切的关联。葡萄糖-6-磷酸酶作为糖尿病治疗药物的一个潜在靶点正日益成为人们研究的重点。

关键词：葡萄糖-6-磷酸酶糖尿病胰岛素抵抗病因学病理生理学

葡萄糖-6-磷酸酶的酶动力学研究及其特异性测定法的建立

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中国优生与遗传杂志 1991年第1期 4-6页

作者：李世新何善述同济医科大学基础医学部生化教研室 430030

本文通过对G6Pase酶动力学的系统研究,建立了G6Pase的特异性测定法,该法具有以下特点:1）通过向酶促反应波中加牛血清白蛋白,使该法的灵敏度有所提高。2）通过测定前用TritonX—100破膜,消除了膜对酶活性的影响,从而提高了测定的重复性... 详细信息

本文通过对G6Pase酶动力学的系统研究,建立了G6Pase的特异性测定法,该法具有以下特点:1）通过向酶促反应波中加牛血清白蛋白,使该法的灵敏度有所提高。2）通过测定前用TritonX—100破膜,消除了膜对酶活性的影响,从而提高了测定的重复性和灵敏度。3）采用热失活G6Pase样品作对照管,提高了测定的特异性。4）以氯仿代替乙醇—乙醚混合液作为清浊剂,提高了测定的灵敏度和重复性。

关键词：葡萄糖-6-磷酸酶特异性测定法

葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠中的表达及意义

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肝胆胰外科杂志 2012年第4期24卷 296-300,304页

作者：温暖邬善敏陈辰蔡杰卢超武汉大学人民医院肝胆外科湖北武汉430060

目的研究梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达的改变及意义,探讨梗阻性黄疸影响糖代谢的分子机制。方法 30只健康雄性大鼠随机分为5组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、... 详细信息

目的研究梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达的改变及意义,探讨梗阻性黄疸影响糖代谢的分子机制。方法 30只健康雄性大鼠随机分为5组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、梗阻性黄疸2周组(C组)、梗阻性黄疸1周再通1周组(D组)、梗阻性黄疸2周再通1周组(E组)。检测各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(DBIL),总胆红素(TBIL)水平;光镜观察肝脏形态学改变;采用RT-PCR方法检测大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA的表达。结果胆道梗阻后,B、C两组血清TBIL、DBIL、ALT水平较A组明显升高,尤其是C组升高的更明显;光镜下可见B组和C组肝细胞肿胀,炎性细胞浸润,汇管区可见胆管增生,C组较B组除以上改变更加严重外,还可见典型的片状肝细胞坏死;B、C两组肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达显著升高。相比,D、E两组血清TBIL、DBIL、ALT水平均分别低于B、C两组,肝脏形态改变也明显趋于正常,肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达亦均低于B、C两组,且D组在血清、肝组织mRNA表达及光镜下肝细胞损伤方面与E组比较均降低。结论梗阻性黄疸模型形成后,大鼠肝脏分泌的胆汁排泄不畅形成淤积。肝脏中G-6-P、PEPCK mRNA表达开始增强且随梗阻时间延长其表达增强趋势更加明显,加强了糖异生的过程,可导致血糖浓度的升高。梗阻解除后,受损肝脏形态及肝功能开始恢复,肝脏G-6-P、PEPCKmRNA表达开始降低,及早解除梗阻,恢复越快。提示肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达升高可能是梗阻性黄疸时糖代谢紊乱的主要原因之一。

关键词：胆道梗阻及再通模型葡萄糖-6-磷酸酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶大鼠

栎精对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达和活性的影响

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栎精对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达和活性的影响

作者：赵慧茹天津医科大学

学位级别：硕士

目的:葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase)是糖代谢过程中一个重要的酶,由于它是糖异生和糖原分解的最后一步反应的限速酶,因此其基因表达水平及活性的变化直接影响到内生性糖的输出。事实上,2型糖尿病的高血糖同肝脏胰岛... 详细信息

目的:葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase)是糖代谢过程中一个重要的酶,由于它是糖异生和糖原分解的最后一步反应的限速酶,因此其基因表达水平及活性的变化直接影响到内生性糖的输出。事实上,2型糖尿病的高血糖同肝脏胰岛素抵抗所致肝糖过度输出有着紧密的关系。因此G-6-Pase是糖尿病治疗的一个潜在靶点。本实验旨在研究栎精,G-6-Pase的一种新型抑制剂,对该酶基因表达和活性的影响,为进一步探讨利用该酶的抑制剂作为糖尿病的治疗手段提供理论依据和实验基础。方法:以胶原酶原位灌注消化的方法分离大鼠肝细胞,用含10%FBS的1640培养液进行原代培养,利用抗大鼠CK-18作为一抗,采用免疫组化方法对细胞进行鉴定。待细胞贴壁换用新鲜的含诱导剂和不同浓度抑制剂的培养液培养16小时后:1)提取细胞总RNA,采用半定量RT-PCR的方法测定G-6-pase两个亚基的mRNA的丰度;2)利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定酶的活性。结果:1.采用以胶原酶原位灌注消化的方法分离的肝细胞产率及活率均比较高。细胞活率可达到85%以上。 2.免疫组化染色结果呈阳性着色(有阴性对照)。 3.大鼠肝细胞在高糖培养液(25mM Glu)中培养16小时后,G-6-Pase催化亚基和转运亚基mRNA的丰度和酶活性均明显增加。(P糖联合培养16小时后,G-6-Pase的两个亚基的mRNA的丰度均下降(P酶活性测定的结果与基因水平的结果相一致,加入栎精后,酶活性下降(P<0.05)。

关键词：葡萄糖-6-磷酸酶肝细胞栎精糖尿病半定量RT-PCR

胰淀素对人肝细胞L-02葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响

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胰淀素对人肝细胞L-02葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响

作者：李士颖天津医科大学

学位级别：硕士

目的:葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase)是糖代谢过程中一个重要的酶,由于它是糖异生和糖原分解的最后一步反应的限速酶,因此其基因表达水平的变化可影响到内生性糖的输出。事实上,2型糖尿病的高血糖同肝脏胰岛素抵抗所... 详细信息

目的:葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-Pase)是糖代谢过程中一个重要的酶,由于它是糖异生和糖原分解的最后一步反应的限速酶,因此其基因表达水平的变化可影响到内生性糖的输出。事实上,2型糖尿病的高血糖同肝脏胰岛素抵抗所致肝糖过度输出有关。胰淀素作为胰岛β细胞重要的活性激素,参与血糖调节。目前研究表明,其异常分泌参与了胰岛素抵抗。本实验旨在研究胰淀素对该酶基因表达的影响,从而进一步探讨胰淀素与肝糖输出及与胰岛素抵抗的相关性。方法:1引进人肝细胞系L-02,参照文献进行体外培养。2在不同浓度的血糖、胰岛素及不同浓度胰淀素的培养基下培养肝细胞,然后提取细胞总RNA,应用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法,检测G-6-Pase的表达水平。结果1经相差显微镜观察人肝细胞生长良好。2人肝细胞在高糖(15mM)高胰岛素(100IU/L)培养液中培养24小时后,G-6-Pase mRNA丰度比对照组(低糖低胰岛素组)增高,具有统计学意义。3加入不同浓度的胰淀素与高糖高胰岛素联合培养2小时后,0.1μM、1μM胰淀素组G-6-Pase mRNA水平无明显变化,10μM胰淀素会使G-6-Pase mRNA丰度较高糖高胰岛素组明显增高,具有统计学意义。结论:1人肝细胞L-02体外培养良好。2在高糖高胰岛素的培养基培养24小时后,与对照组(低糖低胰岛素组)相比,G-6-Pase的表达水平增高,提示了高浓度葡萄糖降低了胰岛素对G-6-Pase mRNA的抑制作用;加入不同浓度的胰淀素后,与高糖高胰岛素组相比,0.1μM、1μM胰淀素组G-6-PasemRNA水平无明显变化;10μM的胰淀素会使G-6-PasemRNA的表达水平明显增高,(P＜0.01),显示高浓度胰淀素、高浓度葡萄糖条件使胰岛素对G-6-PasemRNA的抑制作用进一步降低。提示糖尿病患者异常分泌的胰淀素干扰了肝糖输出,参与了胰岛素抵抗。

关键词：葡萄糖-6-磷酸酶肝细胞胰淀素胰岛素抵抗半定量RT-PCR

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铈捕获法对葡萄糖-6-磷酸酶超微结构定位

湖南医学院学报 1988年第4期 391-393页

作者：周小玲韩英士曾庆善湖南医学院组胚教研组湖南医学院电镜室

以铈代铅作捕获剂、经实质灌注固定、液氮冷冻组织来研究小鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）。电镜观察见酶反应沉淀物位于内质网的膜上、池内及核膜上,颗粒细微、均匀,电子密度较高,未见非特异性反应产物和酶反应物弥散。反应物积聚... 详细信息

以铈代铅作捕获剂、经实质灌注固定、液氮冷冻组织来研究小鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）。电镜观察见酶反应沉淀物位于内质网的膜上、池内及核膜上,颗粒细微、均匀,电子密度较高,未见非特异性反应产物和酶反应物弥散。反应物积聚量与细胞内酶活性相一致。细胞超微结构保存完好。

关键词：葡萄糖-6-磷酸酶细胞组织化学超微结构铈方法小鼠

类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体和葡萄糖-6-磷酸酶联合检测在类风湿关节炎中的临床意义

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中国医药导报 2012年第12期9卷 105-106页

作者：胡玲南京医科大学附属淮安第一医院江苏淮安223000

目的探讨及评价类风湿因子（RF）联合抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和G-6-磷酸酶（GPI）检测在自身类风湿性关节炎（RA）诊断中的意义。方法选择我院2009~2010年收治的RA患者80例（A组）,非RA自身免疫病患者60例（B组）,健康体检者52例（C组... 详细信息

目的探讨及评价类风湿因子（RF）联合抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和G-6-磷酸酶（GPI）检测在自身类风湿性关节炎（RA）诊断中的意义。方法选择我院2009~2010年收治的RA患者80例（A组）,非RA自身免疫病患者60例（B组）,健康体检者52例（C组）,取空腹血制备血清,采用速率散射免疫比浊法检测RF,以酶联免疫固相吸附试验法（ELISA）检测抗CCP抗体,采用双抗体夹心酶联免疫固相吸附试验法检测血清GPI水平,并分析RF、抗CCP抗体和GPI在诊断RA中的价值。结果 RA患者中RF、抗CCP抗体、GPI的敏感性分别为63.75%,70.00%和83.75%,以GPI最高;三者特异性分别为66.25%、90.00%和91.25%;三项指标联合检测敏感性为96.25%,显著高于任意单项指标（P〈0.05）,且阳性符合率为91.25%。结论抗CCP抗体和GPI可作为RA诊断的实验室有效指标,临床中与RF联合应用可以起到增加敏感性,提高阳性符合率的互补作用。

关键词：类风湿因子抗环瓜氨酸肽抗体葡萄糖-6-磷酸酶类风湿性关节炎