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绞股蓝对环磷酰胺致免疫力低下小鼠的免疫调节及菌群紊乱调节

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中国微生态学杂志 2023年第4期35卷 420-425,430页

作者：刘晓宇磨榕芸于师洋李彧媛李明大连医科大学附属第二医院辽宁大连116000 大连医科大学

目的探讨绞股蓝水提物对环磷酰胺诱导免疫力低下小鼠免疫力及菌群紊乱的影响。方法利用免疫抑制剂环磷酰胺诱导建立免疫低下小鼠模型。将21只SPF小鼠随机分为对照组、模型组和绞股蓝组,每组7只。建模后测定脾脏指数、脾脏淋巴细胞亚群水... 详细信息

目的探讨绞股蓝水提物对环磷酰胺诱导免疫力低下小鼠免疫力及菌群紊乱的影响。方法利用免疫抑制剂环磷酰胺诱导建立免疫低下小鼠模型。将21只SPF小鼠随机分为对照组、模型组和绞股蓝组,每组7只。建模后测定脾脏指数、脾脏淋巴细胞亚群水平,采用高通量测序技术分析各组小鼠结肠内容物菌群。结果绞股蓝水提液能增强免疫功能低下小鼠的免疫功能,显著提高免疫低下小鼠的脾脏指数及CD4^(+)T淋巴细胞水平,从而发挥免疫调节作用。绞股蓝水提液还可以显著降低小鼠肠道菌群中致病菌葡萄球菌的相对丰度,增加乳杆菌、拟杆菌等有益菌的相对丰度,从而发挥其免疫调节能力。结论绞股蓝水提液能够提高环磷酰胺诱导免疫力低下小鼠的免疫力,其机制可能与调节肠道微生态平衡密切相关。

关键词：绞股蓝环磷酰胺免疫调节菌群紊乱

灵芝子实体-益生菌发酵液对环磷酰胺诱发的肠黏膜损伤及菌群紊乱的调节作用

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中国微生态学杂志 2022年第1期34卷 7-11页

作者：李彧媛刘赫唐炜孔振贾尚一杜柏荣李明袁杰力大连医科大学辽宁大连116044 合肥康春堂药业有限责任公司酒泉市人民医院

目的建立灵芝子实体-益生菌发酵体系,并研究该发酵液对于环磷酰胺诱导的肠黏膜损伤及菌群紊乱的防治作用。方法通过吸光度(A值)、多糖含量检测等方法评价嗜酸乳杆菌及短双歧杆菌在灵芝子实体提取液中的生长情况。将混合益生菌菌种与灵... 详细信息

目的建立灵芝子实体-益生菌发酵体系,并研究该发酵液对于环磷酰胺诱导的肠黏膜损伤及菌群紊乱的防治作用。方法通过吸光度(A值)、多糖含量检测等方法评价嗜酸乳杆菌及短双歧杆菌在灵芝子实体提取液中的生长情况。将混合益生菌菌种与灵芝培养基进行共同发酵,发酵液用于对环磷酰胺诱导的肠黏膜损伤模型小鼠的治疗。结果嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌均能在灵芝子实体的培养基上生长,且A值及总糖含量均高于对照组。该发酵液对环磷酰胺诱导的肠黏膜损伤模型动物有一定的治疗作用,表现为发酵液干预后由环磷酰胺导致的小鼠体质量降低、结肠组织损伤、炎细胞浸润均有所缓解;并恢复肠道菌群结构,显著增加乳杆菌属丰度,降低肠球菌属和鞘脂单胞菌属丰度。结论灵芝子实体-益生菌发酵液可以有效改善环磷酰胺诱导的肠黏膜损伤的症状,其机制可能与调节肠道微生态平衡密切相关。

关键词：灵芝益生菌发酵肠黏膜损伤菌群紊乱

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全氟癸酸诱导肠道菌群紊乱的机制及影响

全氟癸酸诱导肠道菌群紊乱的机制及影响

作者：贾守印山东大学

学位级别：硕士

背景和目的全氟癸酸(Perfluorodecanoic acid,PFDA)是一种应用广泛的全氟化合物,因其具有类似二恶英的毒性特点而倍受关注,毒性包括免疫毒性以及肝毒性等。但目前PFDA暴露导致菌群紊乱并引发的机体毒性作用尚不明确,其与疾病发生发展的... 详细信息

背景和目的全氟癸酸(Perfluorodecanoic acid,PFDA)是一种应用广泛的全氟化合物,因其具有类似二恶英的毒性特点而倍受关注,毒性包括免疫毒性以及肝毒性等。但目前PFDA暴露导致菌群紊乱并引发的机体毒性作用尚不明确,其与疾病发生发展的相关性也不清楚。肠道是人体的“发酵罐”,肠道菌群维持着精妙的动态平衡。菌群及其代谢产物会通过神经传导、代谢产物和炎性因子等与大脑发生双向关联,即肠-脑轴(Gut-Brain axis,GBA),其在环境污染物毒性作用中的功能有待阐明。本论文通过研究PFDA暴露所引发的肠道菌群紊乱、胆汁酸代谢异常、免疫抑制和行为学异常效应,解析了 PFDA处理下肠道菌群紊乱的可能机制及其影响,为环境污染物PFDA对人体的损伤和致病机理提供了新的参考依据。研究方法以粪便16S rRNA测序检测PFDA暴露后小鼠肠道菌群紊乱情况,转录组结果以DAVID(The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery)分析找出PFDA暴露最可能影响的KEGG通路与主要基因表达变化,以Western Blot、qRT-PCR和代谢组学结果进行验证。对粪便进行分离培养,经BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)比对得到肺炎克雷伯菌分离株,以分离株灌肠处理C57BL/6J小鼠,采用流式细胞术监测PFDA与分离株处理的小鼠脾脏中免疫细胞。检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NLR family pyrin domain containing 3,NLRP3)敲除鼠在 PFDA 暴露前后的肠道菌群的改变。以强迫游泳和悬尾实验评估PFDA暴露后小鼠的动物行为学特征,旷场实验以排除小鼠自发活动情况及环境的影响。病理和免疫学检测相关脑区实验。结果1.PFDA暴露诱导小鼠肠道功能受损和肠道菌群紊乱小鼠肠道组织H&E染色结果显示肠壁细胞受损。粪便16S rRNA测序结果显示肠道菌群发生紊乱,其中肺炎克雷伯菌是丰度上升最显著的菌属。2.PFDA暴露引发小鼠胆汁酸的代谢异常可能是肠道菌群紊乱的因素之一据报道,菌群紊乱常与肠道组织免疫状态和胆汁酸分泌信号通路等因素的改变有关。PFDA处理后小鼠肝细胞损伤,转录组结果显示胆汁酸分泌信号通路为肝脏组织富集的信号通路。mRNA和蛋白水平的验证了此通路所涉及基因ATP结合盒亚家族C成员 4(ATP binding cassette subfamily C member 4,ABCC4)、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员 1A2(Solute Carrier Organic Anion Transporter Family Member 1A2,SLCO1A2)和溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1A2(Solute Carrier Organic Anion Transporter Family Member 1A2,SULT2A1)等的表达改变。非靶向代谢组学结果也显示,去氧胆酸等小鼠的次级胆汁酸代谢物及相关产物含量上升,β-鼠胆酸等初级胆汁酸及相关产物含量下降,进一步证明了胆汁酸分泌信号通路的改变。3.PFDA抑制NLRP3表达是肠道菌群失调的重要因素在PFDA所引发的小鼠肠道菌群紊乱中,肺炎克雷伯菌丰度呈现显著上升。而我们的既往研究显示,PFDA会引发炎症小体基因NLRP3的表达改变。肠道转录组结果也表明NLRP3的表达下调。粪便16S rRNA测序结果显示,PFDA处理后的NLRP3敲除鼠(KOT鼠)较对照鼠(KOC鼠)、较野生型(NC鼠),肺炎克雷伯菌的丰度均无显著差异,提示PFDA引起的小鼠免疫抑制与肺炎克雷伯菌的丰度改变有关。4.肺炎克雷伯菌分离株可导致小鼠免疫抑制流式细胞术结果显示,PFDA暴露后小鼠脾脏中的巨噬细胞和Th1细胞亚群比例显著下降。因PFDA暴露后小鼠肺炎克雷伯菌数量上升,所以用肺炎克雷伯菌分离株灌肠处理小鼠,结果显示小鼠脾脏中巨噬细胞和Th1细胞的改变也出现了与PFDA处理相一致的变化,提示PFDA引起的肺炎克雷伯菌丰度上升对其诱发的免疫抑制有贡献。5.PFDA暴露后小鼠出现躁狂样行为及腹侧海马损伤肠道菌群的失衡会作用于肠-脑轴,可能影响情绪和行为。PFDA暴露后小鼠肠道的转录组结果显示,神经配体-受体相互作用信号通路为富集信号通路,粪便代谢组结果显示多巴胺能神经突触是阳离子中p值最小最具有统计学意义的通路。这些高通量结果都提示PFDA可能影响肠-脑轴。因此对小鼠的行为学特征进行检测,结果表明PFDA处理小鼠在强迫游泳和悬尾实验中表现出明显异常,出现躁狂样行为,腹侧海马损伤,胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)蛋白出现异常,星形胶质细胞数量增加,表现为反应性激活,提示中枢神经元损

关键词：全氟癸酸菌群紊乱免疫抑制肺炎克雷伯菌胆汁酸代谢情感障碍

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菌群紊乱对肝胆肿瘤影响的研究进展

中华消化外科杂志 2020年第12期19卷 1336-1340页

作者：宋晓玲顾钧刘颖斌上海交通大学医学院附属新华医院普通外科 200092 上海交通大学医学院附属仁济医院胆胰外科 200127

人微生物菌群是指由寄生在人皮肤及黏膜等部位的细菌、病毒、真菌和原生动物组成的微生物群。通常情况下,微生物菌群同宿主之间保持稳态,共同参与人的生命活动,而当致病菌或机会致病菌异常侵入或富集时可引起菌群失调,从而引起疾病。近... 详细信息

人微生物菌群是指由寄生在人皮肤及黏膜等部位的细菌、病毒、真菌和原生动物组成的微生物群。通常情况下,微生物菌群同宿主之间保持稳态,共同参与人的生命活动,而当致病菌或机会致病菌异常侵入或富集时可引起菌群失调,从而引起疾病。近些年来,微生物菌群失调与疾病特别是恶性肿瘤的关系成为临床研究的热点。笔者根据国内外研究进展,就肝胆肿瘤与微生物菌群失调关系的研究进展进行综述。

关键词：肝肿瘤胆道肿瘤菌群紊乱发展机制治疗

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脓毒症患者肠道菌群紊乱的临床研究

中华急诊医学杂志 2019年第6期28卷 736-742页

作者：刘丹王晓红张小彬闫晶杨小娟刘勤富孙婷杨晓军宁夏医科大学银川750004 宁夏医科大学总医院重症医学科银川750004 宁夏医科大学总医院生物样本库银川750004

目的分析ICU内脓毒症及非脓毒症患者肠道菌群紊乱特征。方法采用前瞻性观察性研究方法,纳入2017年2月至2017年6月收住宁夏医科大学总医院重症医学科(ICU)的脓毒症患者10例(脓毒症组)、同期入住宁夏医科大学总医院ICU内未并发脓毒症的患... 详细信息

目的分析ICU内脓毒症及非脓毒症患者肠道菌群紊乱特征。方法采用前瞻性观察性研究方法,纳入2017年2月至2017年6月收住宁夏医科大学总医院重症医学科(ICU)的脓毒症患者10例(脓毒症组)、同期入住宁夏医科大学总医院ICU内未并发脓毒症的患者10例(非脓毒症组)以及健康人10例(对照组)。采集脓毒症、非脓毒症组患者入住ICU后2 d内的粪便标本,健康对照组为随机粪便样本,运用高通量16S rRNA基因测序技术进行肠道菌群检测。记录脓毒症组及非脓毒症组患者入ICU第1天急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHE Ⅱ)、序贯器官衰竭(SOFA)评分。结果与健康对照组比较,非脓毒症组、脓毒症组患者肠道菌群α多样性呈下降趋势,β多样性显示菌群结构均存在差异,且个体差异性更加明显。在菌门水平,非脓毒症组和脓毒症组患者肠道厚壁菌门+拟杆菌门比例均明显下降(P=0.013、0.028)、变形菌门比例升高(P=0.017、0.026),而梭杆菌门仅在非脓毒症组比例升高(P菌群中的梭杆菌属、放线菌属、消化链球菌属、链球菌属等条件致病菌比例升高(P分别为0.001、0.019、0.011和0.014),而致病葡萄球菌属(P=0.035、0.006)、肠球菌属(P=0.001、0.001)、厌氧球菌属(P=0.006、0.006)、芽孢杆菌属(均P菌群紊乱,表现为多样性下降、菌群结构改变、专性厌氧菌减少而兼性厌氧菌增多、有益共生菌减少而机会致病菌增多,且致病菌属可成为主要菌属。

关键词：脓毒症肠道微生态肠道菌群 16S rRNA 菌群紊乱菌群多样性有益菌属致病菌属

益生菌对炎症性肠病小鼠肠道菌群紊乱及细菌移位的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2010年第2期30卷 186-190页

作者：王坚镪丁在咸张旻陈红旗秦环龙蒋燕群上海交通大学第六人民医院检验科上海200233 上海交通大学第六人民医院动物实验中心上海200233 上海交大昂立医药研究院上海200233 上海交通大学第六人民医院普外科上海200233

目的探讨植物乳杆菌(LP)对炎症性肠病(IBD)小鼠肠道菌群及细菌移位的影响。方法采用白介素10基因敲除(IL-10^(-/-))小鼠作为IBD动物模型,将8周龄雌性小鼠随机分成空白对照组、IL-10^(-/-)组和IL-10^(-/-)+LP组三组。IL-10^(-/-)+LP组每... 详细信息

目的探讨植物乳杆菌(LP)对炎症性肠病(IBD)小鼠肠道菌群及细菌移位的影响。方法采用白介素10基因敲除(IL-10^(-/-))小鼠作为IBD动物模型,将8周龄雌性小鼠随机分成空白对照组、IL-10^(-/-)组和IL-10^(-/-)+LP组三组。IL-10^(-/-)+LP组每日灌胃0.5 mL LP菌液(1.0×10~9CFU/mL),其余两组灌胃Ringer缓冲液0.5 mL,持续4周。以小鼠粪便中的双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌和产气荚膜梭菌数量及肠系膜淋巴结、脾脏细菌移位为检测指标。结果IL-10^(-/-)小鼠肠内双歧杆菌、乳酸杆菌含量明显下降,肠球菌、产气荚膜梭菌含量升高,且肠道细菌移位明显增加;而连续灌胃LP菌液4周后,益生菌发挥了对肠道的调节作用,纠正了肠道菌群失衡,并降低了肠道细菌移位。结论LP能纠正炎症性肠病小鼠肠道菌群紊乱,减少细菌移位,从而增强了肠道屏障功能。

关键词：益生菌植物乳杆菌CGMCC 1258 菌群紊乱细菌移位

溃疡性结肠炎中PFOR免疫识别致肠道菌群紊乱的作用研究

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溃疡性结肠炎中PFOR免疫识别致肠道菌群紊乱的作用研究

作者：王楷若山东大学

学位级别：硕士

研究背景与目的炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）包括克罗恩病（Crohn’s disease,CD）和溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）,其在西方国家较为常见,在我国的发病率也逐年上升。UC的病因与发病机制不完全清楚,涉及基... 详细信息

研究背景与目的炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）包括克罗恩病（Crohn’s disease,CD）和溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）,其在西方国家较为常见,在我国的发病率也逐年上升。UC的病因与发病机制不完全清楚,涉及基因、环境、免疫和微生物因素等。UC患者存在显著的肠道菌群组成改变,其中普拉梭菌（Faecalibacterium prausnitzii,F.prausnitzii）和人罗斯拜瑞氏菌含量显著下降为其主要特征。已有研究证实肠道菌群中的F.prausnitzii可以通过多种途径缓解肠道炎症反应,且F.prausnitzii是UC患者重要的干预靶点。而作为肠道中识别微生物的重要免疫防线,肠腔内免疫球蛋白A（ImmunoglobulinA,IgA）已经被证实可以介导免疫-菌群互作,从而对菌群结构进行调节。随着流式分选及高通量测序的发展,研究者发现UC患者肠道中IgA包裹的F.prausnitzii含量升高。然而UC患者中F.prausnitzii含量下降是否由IgA升高引起尚无人研究。因此我们开展临床及动物实验,说明溃疡性结肠炎患者中IgA识别F.prausnitzii致其在肠道定植下降,并挖掘特定抗原识别蛋白,探讨针对该蛋白的IgA免疫反应参与肠道菌群紊乱和黏膜炎症过程,为UC的临床治疗提供了新的理论基础。研究方法:1.临床样本收集:纳入诊断明确的UC患者和健康对照者,签署书面知情同意书后,收集粪便样本,并进行16S rRNA测序,同时采集患者基本信息及临床检验信息。2.临床样本粪便IgA检测:溶解并稀释粪便上清后,进行ELISA实验检测粪便上清中总IgA及F.prausnitzii特异性IgA含量,进行Western Blot识别F.prausnitzii.与IgA结合的特异性位点。3.抗原鉴定与验证:将电泳后的F.prausnitzii蛋白进行考马斯亮蓝染色,切取与Western Blot条带位置一致的蛋白送检,经过鉴定及筛选,我们选定丙酮酸铁氧蛋白还原酶[pyruvate:ferredoxin（flavodoxin）oxidoreductase,PFOR]为目标抗原,经过进一步的克隆表达并纯化出PFOR蛋白。进一步通过ELISA实验,检测PFOR特异性IgA含量,运用Taxfun4预测粪便中含PFOR基因细菌的含量。4.PFOR刺激PBMCs实验:提取人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）进行培养,加入纯化后的PFOR蛋白及硝唑尼特（Nitazoxanide,NTZ）进行刺激,进行实时荧光定量PCR实验检测Il1b、Il6、Il117a、Tnfa、Ifnr炎症因子表达,并进行IFN-γELISpot评估抗原特异性T细胞反应。5.构建F.prausnitzii致敏模型:将新西兰大耳白兔分为PBS对照组,QuilA致敏组,QuilA+FP致敏组,于第一天进行颈部皮下注射,每日称量体重并收集粪便样本,进行各肠段H＆E染色评估上皮完整性及炎症细胞浸润,进行16S rRNA测序分析菌群改变,进行ELISA评估粪便上清中总IgA及F.prausnitzii、PFOR特异性IgA含量,进行PCR检测pIgR、Ifnr、Il6、Il1b、Il22、Cox2等炎症因子表达。6.构建PFOR致敏模型:将新西兰大耳白兔分为QuilA致敏组及QuilA+PFOR致敏组,于第一天进行颈部皮下注射。记录体重并检测组织炎症程度,肠道菌群改变,IgA含量及组织mRNA表达。7.PFOR相关微生物挖掘:挖掘肠道菌群中其余含PFOR基因的细菌,比较PFOR氨基酸序列相似性,分析同源性并构建系统进化树,检测含PFOR基因的细菌的丰富度。研究结果:1.UC患者较健康志愿者肠道菌群α-多样性显著下降,个体间差异变大,且F.prausnitzii含量显著减少。ROC曲线表示使用F.prausnitzii含量进行UC的诊断具有较高的特异性。2.UC患者粪便上清中总IgA及抗F.prausnitzii特异性IgA显著升高,Western Blot结果显示在130kDa及85kDa处见明显条带。经鉴定丙酮酸铁氧蛋白还原酶（PFOR）为目标抗原。我们进一步发现UC患者中PFOR特异性IgA含量明显升高且粪便菌群中PFOR基因含量下降。3.PFOR促进PBMC中IFN-γ表达,NTZ可以抑制PFOR对IFN-γ表达的促进作用。4.F.prausnitzii免疫导致新西兰大耳白兔体重一过性下降及盲肠、回肠组织炎症;粪便上清总IgA、F.prausnitzii特异性IgA及PFOR特异性IgA升高;QuilA及QuilA+FP组回肠组织Ifnr均升高,QuilA组结肠组织Ifnr表达升高;同时F.spraunitzii免疫后肠道菌群

关键词：溃疡性结肠炎普拉梭菌丙酮酸铁(核黄素)氧化还原酶 IgA 菌群紊乱

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重症急性胰腺炎中的肠道免疫与菌群紊乱

中华胰腺病杂志 2021年第3期21卷 168-172页

作者：殷诺铭曾悦上海交通大学附属第一人民医院消化内科上海胰腺病重点实验室上海200080

SAP是临床常见的急腹症之一,病情凶险,病死率高。SAP早期即可出现肠道屏障功能障碍。肠道免疫系统和肠道菌群与肠道屏障功能密切相关,二者在SAP期间会出现不同程度的改变,影响病情及预后。基于肠道菌群的肠道免疫疗法治疗SAP备受关注,... 详细信息

SAP是临床常见的急腹症之一,病情凶险,病死率高。SAP早期即可出现肠道屏障功能障碍。肠道免疫系统和肠道菌群与肠道屏障功能密切相关,二者在SAP期间会出现不同程度的改变,影响病情及预后。基于肠道菌群的肠道免疫疗法治疗SAP备受关注,但其临床应用的有效性及安全性仍有待更深层次的研究。

关键词：急性胰腺炎肠道免疫菌群紊乱

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玫瑰痤疮与肠道菌群紊乱的相关性研究

中国美容医学 2019年第7期28卷 48-51页

作者：梁博李国东何明璇崔昭刘亚维李会荣周建华保定市第二医院皮肤科

目的:探讨玫瑰痤疮与肠道菌群的相关性。方法:选取2015年1月-2017年12月笔者医院皮肤科门诊确诊的玫瑰痤疮志愿者80例为实验组,并选取同期健康志愿者60例为对照组。采用荧光定量PCR检测肠道菌群中双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌、梭... 详细信息

目的:探讨玫瑰痤疮与肠道菌群的相关性。方法:选取2015年1月-2017年12月笔者医院皮肤科门诊确诊的玫瑰痤疮志愿者80例为实验组,并选取同期健康志愿者60例为对照组。采用荧光定量PCR检测肠道菌群中双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌、梭杆菌和乳酸杆菌的拷贝数,分析两组肠道菌群拷贝数的差异,以及肠道菌群与玫瑰痤疮的相关性。结果:玫瑰痤疮志愿者肠道菌群中乳酸杆菌、梭杆菌、双歧杆菌的拷贝数及双歧杆菌与肠杆菌比值(B/E值)均低于健康对照组,肠球菌及拟杆菌拷贝数高于健康对照组,差异有统计学意义(均P0.05)。乳酸杆菌、梭杆菌及双歧杆菌拷贝数与玫瑰痤疮病情呈负相关(P0.05)。结论:肠道菌群紊乱可能在玫瑰痤疮发病中起到一定作用。

关键词：玫瑰痤疮肠道菌群荧光定量PCR 相关性菌群紊乱