检索结果-南通市图书馆

作者：于伟海南大学

学位级别：硕士

以光、温敏不育系为基础的两系法杂交稻是水稻杂种优势利用的重要途径。因此,揭示光、温敏核不育水稻育性的分子机理,对于丰富水稻花粉发育的理论和指导两系杂交水稻的育种具有重要意义。正向温敏不育系是高温条件下可育,低温条件下不... 详细信息

以光、温敏不育系为基础的两系法杂交稻是水稻杂种优势利用的重要途径。因此,揭示光、温敏核不育水稻育性的分子机理,对于丰富水稻花粉发育的理论和指导两系杂交水稻的育种具有重要意义。正向温敏不育系是高温条件下可育,低温条件下不育的低温敏感核不育型,反向温敏不育系则是高温条件下不育,低温条件下可育的高温敏感核不育型。到目前为止,在分子水平上研究水稻雄性不育机理的报道主要侧重于利用正向温敏不育系本身的基因表达和蛋白研究,而对正常水稻的花粉发育有关温度应答的研究还很少有利用基因芯片与蛋白质组技术相结合的分析方法开展研究。本研究拟利用育性正常水稻品种93-11作为材料,通过高、低温处理处于减数分裂期的水稻,利用蛋白组学技术对高温(H)和低温(D)处理后的减数分裂期水稻幼穗总蛋白进行了比较研究,对部分具有差异表达蛋白的基因进行荧光定量pcr验证,.利用基因芯片技术对高温(H)和低温(D)处理后的减数分裂期水稻雄配子体进行差异表达谱分析,结果如下：(1)通过固相pH梯度-SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳分离和银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。结果表明：高温处理和低温处理分别获得884和867个蛋白点,蛋白点主要集中于15-80kD,pH4.0-8.5之间,差异表达的蛋白质点数为61。选差异在3倍以上的蛋白点40个,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionizaton time of flight massspectrometry,MALDI-TOF-MS)进行肽质量指纹图谱分析,并用Mascot软件对SWISS-PROT和NCBI数据库查询和分析,其中22个蛋白质点在数据库得到归属鉴定,高温中明显上调的蛋白点包括染色体结构维持蛋白、反转座子反转录酶、锚蛋白、热休克蛋白90、EX070胞外复合体亚基、卤酸化脱卤化酶、磷酸丙糖异构酶、抗坏血酸过氧化物酶、微管蛋白等,明显下调的蛋白点包括葡萄糖醛酸脱羧酶、细胞壁关联蛋白激酶、抗坏血酸氧化酶、乌头酸水合酶,及未知功能的蛋白质。(2)采用SYBR Green荧光定量pcr技术对双向电泳结果中的四个差异蛋白：热休克蛋白90(H11)、微管结合蛋白(H19)、葡萄糖醛酸脱羧酶(D3)与抗坏血酸氧化酶(D7)进行了转录水平上的定量分析,所获得的荧光定量pcr扩增曲线,基线平整,指数区明显,标准曲线的循环阈值与pcr体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,结果表明：H11和H19基因在高温处理的水稻花药中表达量显著升高,D3基因在低温处理的水稻花药中表达量显著升高,这与双向电泳得到的结果基本一致。而D,在低温处理的水稻花药中表达量上调不显著。(3)对高低温处理的处于减数分裂期的水稻雄配子体利用基因芯片杂交技术,获得45个差异表达基因,其中在低温处理的水稻花药中基因表达上调的功能蛋白30个,高温处理的花药中基因表达上调的蛋白15个。进一步研究分析表明这45个相关基因参与多种代谢途径,涉及多种生物功能,如糖类代谢、蛋白质代谢、基因表达调控、信号转导、胁迫反应等等。

关键词：水稻雄配子体减数分裂期蛋白质组学技术荧光定量pcr芯片温度应答

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尿液细胞mRNA联合生物标志物对IgA肾病肾纤维化诊断价值研究

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沈阳医学院学报 2023年第5期25卷 458-462页

作者：肖梓豪王雅洁曹玉涵皖南医学院弋矶山医院肾内科安徽芜湖241001 皖南医学院麻醉学实验实训中心

目的:筛选诊断IgA肾病肾纤维化的新型无创生物标志物。方法:建立IgA肾病靶向实时荧光聚合酶链式扩增反应芯片,检测74例IgA肾病患者和31例健康对照的尿液mRNA,筛选差异表达基因建立联合生物标志物预测肾纤维化模型。结果:50种尿液mRNA在... 详细信息

目的:筛选诊断IgA肾病肾纤维化的新型无创生物标志物。方法:建立IgA肾病靶向实时荧光聚合酶链式扩增反应芯片,检测74例IgA肾病患者和31例健康对照的尿液mRNA,筛选差异表达基因建立联合生物标志物预测肾纤维化模型。结果:50种尿液mRNA在IgA肾病组和对照组之间差异表达(P<0.05)。5种mRNA与血肌酐和肾小球滤过率相关(P<0.05)。BCL-2、PAI1、TGF-β1和VIM mRNA水平与肾纤维化的严重程度相关,并且能区分中-重度纤维化和无-轻度纤维化(P<0.05)。使用Fisher线性判别建立BCL-2、PAI1、TGF-β1、VIM联合生物标志物预测模型,其敏感性91.3%,特异性85.7%,ROC曲线下面积0.92,约登指数0.77(P<0.05)。结论:4种尿液mRNA组成的无创生物标志物具备诊断IgA肾病肾纤维化的潜力。

关键词： IgA肾病荧光定量pcr芯片肾纤维化尿液mRNA 无创生物标志物

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