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茶黄素对鸡蛋溶菌酶的非共价/共价相互作用及其复合物结构与功能的变化研究

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茶黄素对鸡蛋溶菌酶的非共价/共价相互作用及其复合物结构与功能...

作者：李远桥成都大学

学位级别：硕士

蛋白质作为主要的营养来源,它们能与多酚等生物活性化合物发生相互作用,可改善某些功能性质,如抗氧化能力、热稳定性等。这些相互作用可以形成蛋白质-多酚复合物,在食品、营养保健品和制药行业具有不同的特性和应用。此外,通过接枝、偶... 详细信息

蛋白质作为主要的营养来源,它们能与多酚等生物活性化合物发生相互作用,可改善某些功能性质,如抗氧化能力、热稳定性等。这些相互作用可以形成蛋白质-多酚复合物,在食品、营养保健品和制药行业具有不同的特性和应用。此外,通过接枝、偶联或聚合进行分子修饰是合成新材料或修饰具有理想物理和化学结构的生物分子的另一种有前途的方法。该策略旨在改善选定食品成分的特性或为特定应用产生新的特性。鸡蛋溶菌酶是食品加工种常见的一种模型蛋白质,在较高温度环境下会失去活力或者降解,并且几乎没有抗氧化活性,其应用将受到限制。此外,鸡蛋溶菌酶作为一种致敏原很少被关注到。茶黄素作为茶叶蛋染色的一种多酚,具有优秀的抗氧化能力,但因稳定性差和生物利用度低等因素限制了其在食品加工中的应用。因此,为了克服蛋白质与多酚本身的一些缺点,挖掘这些蛋白质-多酚复合物的潜力,应了解它们的相互作用机理和功能变化。本次研究以鸡蛋溶菌酶和茶黄素为研究对象,建立了鸡蛋溶菌酶与茶黄素非共价/共价相互作用的互作模型,在分子水平上分析了鸡蛋溶菌酶与茶黄素的结合模式。并分别进一步表征了非共价/共价相互作用对鸡蛋溶菌酶和茶黄素的相关功能的变化。主要研究内容和结果如下:（1）基于全局分子对接预测茶黄素与鸡蛋溶菌酶的最优结合位点位于鸡蛋溶菌酶的裂口区,最小结合能为9.39 kcal·mol,鸡蛋溶菌酶和茶黄素的结合主要由范德华力、静电相互作用力和氢键驱动。致敏性线性表位局部分子对接显示大约有30个氨基酸残基参与了相互作用,可以预测茶黄素可能影响鸡蛋溶菌酶的敏化线性表位。分子动力学模拟结果表明,30 ns后茶黄素使鸡蛋溶菌酶整体变得更加致密,二级结构以α-螺旋和不规则卷曲为主,但不会破坏其主要结构。（2）茶黄素导致鸡蛋溶菌酶猝灭的机制是静态猝灭。鸡蛋溶菌酶与茶黄素非共价复合物具有10～4 L·mol的中等亲和力和更低的表面疏水性。热力学参数表明鸡蛋溶菌酶和茶黄素非共价结合是自发进行的,静电力是主要的作用力。三维荧光和同步荧光光谱表明,鸡蛋溶菌酶与茶黄素非共价结合后其空间构象发生轻微改变,色氨酸残基所处的微环境极性增大,疏水性减小。圆二色光谱分析表明非共价相互作用使得鸡蛋溶菌酶的α-螺旋含量改变,其中鸡蛋溶菌酶的α-螺旋为24%,当以1:6的摩尔浓度比加入茶黄素后,鸡蛋溶菌酶的α-螺旋升高至28.53%。抗氧化实验结果表明茶黄素和鸡蛋溶菌酶结合后会降低其本身的抗氧化活性,但鸡蛋溶菌酶会对茶黄素的抗氧化活性产生一定的保护效果。酶活实验表明茶黄素会轻微抑制鸡蛋溶菌酶的活性,呈浓度依赖性。（3）通过碱法制备的鸡蛋溶菌酶和茶黄素的共价复合物的枝接率约为80%。通过共价修饰,一方面茶黄素使得鸡蛋溶菌酶的构象发生改变,表面疏水性增加。另一方面它们的热稳定性和抗氧化性有所提高,但其酶活性和体外抗菌性均有所下降。

关键词：溶菌酶茶黄素相互作用共价食品功能

HPLC-MS/MS法测定茶叶中儿茶素类、茶黄素类物质

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中国测试 2024年第7期50卷 63-69页

作者：刘培琴胡超琼邹燕杨潇陈祥贵冯德建叶善蓉黄玉坤西华大学食品与生物工程学院食品微生物四川省重点实验室四川成都610039 中国测试技术研究院茶叶标准与检测技术四川省重点实验室四川成都610021

针对同时测定茶叶中儿茶素、茶黄素的方法较少的现状,该研究建立了同时定性和定量测定茶叶中8种儿茶素类和4种茶黄素类物质的高效液相色谱-串联质谱法。研究采用Agilent Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱,甲酸-乙腈为流动相... 详细信息

针对同时测定茶叶中儿茶素、茶黄素的方法较少的现状,该研究建立了同时定性和定量测定茶叶中8种儿茶素类和4种茶黄素类物质的高效液相色谱-串联质谱法。研究采用Agilent Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱,甲酸-乙腈为流动相,流量为0.2 mL/min进行梯度洗脱,采用ESI源正、负离子扫描模式,多反应监测(MRM)。结果表明,儿茶素类和茶黄素类物质分别在10~10000μg/L和25~5000μg/L范围内线性关系良好,相关系数R>0.99,回收率在96.53%~106.08%之间,精密度的相对标准偏差均小于10%。相较于分别检测儿茶素类和茶黄素类物质的国家标准方法,该方法提高了检测效率且具有更低的检出限和定量限,能够提供更加准确、全面的检测结果。

关键词：茶叶儿茶素茶黄素高效液相色谱-串联质谱

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茶黄素在代谢综合征中相关作用机制的研究进展

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食品研究与开发 2024年第10期45卷 217-224页

作者：张晨陈晓晶刘琨毅毕煜辰徐紫芸方崇业云南农业大学茶学院食品科学技术学院云南昆明650201 宜宾职业技术学院五粮液技术与食品工程学院四川宜宾644100

代谢综合征(metabolic syndrome,MetS)是代谢系统疾病中一组慢性进行性疾病,其发生与发展过程涉及多种代谢因子和信号网络。可食用的天然植物成分由于其安全性和良好的耐受性,被广泛应用于代谢性疾病的预防和控制。茶黄素作为茶叶中天... 详细信息

代谢综合征(metabolic syndrome,MetS)是代谢系统疾病中一组慢性进行性疾病,其发生与发展过程涉及多种代谢因子和信号网络。可食用的天然植物成分由于其安全性和良好的耐受性,被广泛应用于代谢性疾病的预防和控制。茶黄素作为茶叶中天然成分,具有多种生理活性,已有较多研究表明其食用价值。综述近年来茶黄素在预防和缓解代谢综合征中应用的研究结果,并总结其主要的作用机制,以期为茶黄素在代谢综合征相关疾病中更进一步的应用提供理论支撑。

关键词：代谢综合征微循环微循环障碍茶黄素信号通路

基于氧化聚合规律和特征质谱信息鉴定云南红茶中的新型茶黄素

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分析化学 2024年第6期52卷 846-867页

作者：李咏琳郭洁俞之豪李斯屿胡永丹易伦朝任达兵昆明理工大学食品科学与工程学院

茶黄素类化合物（TFs）是红茶中决定感官品质的一类重要物质，具有显著的生物活性。茶叶中除了存在4种常见的TFs外，还存在许多其它具有类似化学结构的茶黄素类似物（TFAs）。针对TFs及TFAs，本研究采用超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC... 详细信息

茶黄素类化合物（TFs）是红茶中决定感官品质的一类重要物质，具有显著的生物活性。茶叶中除了存在4种常见的TFs外，还存在许多其它具有类似化学结构的茶黄素类似物（TFAs）。针对TFs及TFAs，本研究采用超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）技术，结合该类成分的特征结构及一、二级质谱信息，提出了基于氧化聚合规律和特征质谱信息的TFAs识别和鉴定方法。通过分析现有TFs的氧化聚合过程，总结形成TFs的理论反应模型，并基于此计算潜在成分的前体离子值；同时，根据标准品和文献数据分析TFs的质谱裂解规律，总结该类成分的特征碎片离子及中性丢失碎片。最终，基于计算获得的前体离子值以及特征碎片离子或中性丢失信息，从原始的色谱-质谱数据中共鉴定出36种TFAs，其中6种为首次报道，并采用体外合成实验进行了部分验证。基于36种成分的定性和定量分析结果，采用偏最小二乘判别分析（PLS-DA）研究了这些成分在红茶加工中的变化，结果表明，TFAs可用于有效区分红茶发酵前后的样品。

关键词：茶黄素氧化缩合质谱中性丢失特征碎片离子

茶黄素通过调节Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

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广东药科大学学报 2024年第1期40卷 73-77页

作者：郭永木苏亚勇刘双平王丽惠徐成润中国人民解放军联勤保障部队第九〇九医院(厦门大学附属东南医院)感染科福建漳州363100

目的探讨茶黄素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路的影响。方法肝癌HepG2细胞用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μmol/L的茶黄素分别培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测HepG2细胞活性。根据HepG2细胞... 详细信息

目的探讨茶黄素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路的影响。方法肝癌HepG2细胞用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μmol/L的茶黄素分别培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测HepG2细胞活性。根据HepG2细胞活性实验结果将后续实验分为空白对照组,茶黄素低剂量(20μmol/L)组、中剂量(40μmol/L)组和高剂量(80μmol/L)组,细胞培养24 h。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡;Western blot检测HepG2细胞中Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HepG2细胞中GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量。结果与空白对照组相比,茶黄素组HepG2细胞增殖显著降低(P茶黄素可通过调控Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。

关键词：茶黄素肝癌HepG2细胞细胞增殖细胞凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 Hedgehog信号通路

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茶黄素对oxLDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化和氧化应激的影响

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中国动脉硬化杂志 2024年

作者：石萌萌黄锐黄子乐胡军威肖靖杰刘艳红武军驻武汉大学泰康医学院(基础医学院) 武汉大学中南医院心血管内科武汉大学人民医院检验科(武汉大学人民医院转化医学研究院)

[目的] 探索茶黄素对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化和氧化应激的影响及其机制。[方法] 使用50 μmol/L茶黄素预处理THP-1来源的巨噬细胞，随后加入100 mg/L oxLDL刺激细胞24 h建立泡沫细胞模型。通过CCK-8法和... 详细信息

[目的] 探索茶黄素对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化和氧化应激的影响及其机制。[方法] 使用50 μmol/L茶黄素预处理THP-1来源的巨噬细胞，随后加入100 mg/L oxLDL刺激细胞24 h建立泡沫细胞模型。通过CCK-8法和LDH释放量检测茶黄素对THP-1巨噬细胞活力的影响。通过RT-qPCR和Western blot检测炎症因子白细胞介素6（IL6）、白细胞介素1B（IL1B）、肿瘤坏死因子α（TNFα）的表达；ELISA法检测炎症因子的释放。采用油红O染色检测细胞内脂质积聚，Dil标记氧化型低密度脂蛋白（Dil-oxLDL）染色检测脂质吸收，DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）水平。通过Western blot和RT-qPCR检测脂质摄取、胆固醇外排及氧化应激相关蛋白的表达。[结果] 经100 mg/L oxLDL处理，THP-1巨噬细胞活力明显降低，脂质摄取、积累明显增加，胆固醇外排明显减少，炎症与ROS水平明显增加，髓过氧化物酶（MPO）和NADPH氧化酶2（NOX2）表达增加（P＜0.05）；加入茶黄素后，细胞活力升高，细胞内脂质积累明显减少，胆固醇外排明显增多，炎症因子IL6、IL1B、TNFα的表达与释放明显降低，ROS水平降低，MPO与NOX2表达减少（P＜0.05）。茶黄素预处理改变了转录因子核因子E2相关因子2（NRF2）信号通路中NRF2、血红素加氧酶-1（HO-1）、Kelch样ECH关联蛋白1（KEAP1）的表达，增加了NRF2核易位，减缓了细胞内氧化应激。[结论] 茶黄素可以显著抑制THP-1巨噬细胞泡沫化，抑制oxLDL诱导的THP-1巨噬细胞炎症并通过NRF2/HO-1信号通路减缓了氧化应激。

关键词：茶黄素泡沫细胞 THP-1巨噬细胞炎症氧化应激

基于单宁酶处理原料制备的高茶黄素速溶红茶品质分析

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食品安全质量检测学报 2024年第7期15卷 261-268页

作者：杨丽娟王伟伟叶水心张梦雪许勇泉江和源中国农业科学院茶叶研究所农业农村部特种经济动植物生物学与遗传育种重点实验室浙江省茶叶加工工程重点实验室杭州310008 中国农业科学院研究生院北京100081 浙江农林大学食品与健康学院杭州311300

目的研究基于单宁酶发酵加工的红茶原料,制备高茶黄素含量的速溶红茶。方法以速溶红茶中的茶黄素含量为主要评价指标,对红茶原叶和红茶粉碎叶进行两种提取溶剂处理,分析制备得到速溶红茶的感官品质及主要化学成分含量。结果研究发现,用... 详细信息

目的研究基于单宁酶发酵加工的红茶原料,制备高茶黄素含量的速溶红茶。方法以速溶红茶中的茶黄素含量为主要评价指标,对红茶原叶和红茶粉碎叶进行两种提取溶剂处理,分析制备得到速溶红茶的感官品质及主要化学成分含量。结果研究发现,用60%乙醇提取红茶粉碎叶制备得到的速溶红茶中,茶黄素含量显著高于水提取工艺,速溶红茶茶黄素含量达到2.3%,是传统红茶原料中茶黄素的3倍,并且速溶红茶得率达到了38%,其感官品质以水提取工艺较佳。结论以高茶黄素茶叶为原料,将其磨成粉,用60%乙醇为提取剂制备的速溶红茶,富含茶黄素。研究结果为速溶红茶的生产加工提供了一定的理论依据,也可以为夏秋茶资源的开发利用提供新方法。

关键词：单宁酶红茶速溶红茶茶黄素浸提工艺

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天然染料茶黄素对棉布的染色工艺研究

纺织报告 2024年第6期43卷 15-17页

作者：王晓雨王文侠曹天天赵兵张俊王遥苏州经贸职业技术学院纺织服装与艺术传媒学院江苏苏州215009

茶黄素作为红茶的一种色素,可以起到预防心血管疾病和调节血脂的作用。除此之外,茶黄素作为一种天然染料,在纺织印染领域也发挥着重要作用。文章通过对天然染料茶黄素染液pH、温度、染色时间、不同质量分数与染色性能之间关系的研究,得... 详细信息

茶黄素作为红茶的一种色素,可以起到预防心血管疾病和调节血脂的作用。除此之外,茶黄素作为一种天然染料,在纺织印染领域也发挥着重要作用。文章通过对天然染料茶黄素染液pH、温度、染色时间、不同质量分数与染色性能之间关系的研究,得到了茶黄素染料对棉布的最优染色工艺条件。实验结果表明,茶黄素染料具备较好的发展前景。

关键词：茶黄素天然染料棉布染色

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茶黄素生物学活性研究进展

食品科学 2022年第19期43卷 318-329页

作者：刘昌伟张梓莹王俊懿周方曾鸿哲张盛黄建安刘仲华湖南农业大学茶学教育部重点实验室湖南长沙410128 国家植物功能成分利用工程技术研究中心湖南长沙410128 植物功能成分利用省部共建协同创新中心湖南长沙410128 中国人民公安大学侦查学院北京100008

茶黄素是红茶加工过程中儿茶素在多酚氧化酶的催化作用下缩合而成的一类具有苯骈卓酚酮结构的化合物的总称,它是红茶品质形成的决定因素,具有多种生物学功能,被称为“茶叶中的软黄金”,在食品、保健品以及天然药物等领域具有巨大的潜力... 详细信息

茶黄素是红茶加工过程中儿茶素在多酚氧化酶的催化作用下缩合而成的一类具有苯骈卓酚酮结构的化合物的总称,它是红茶品质形成的决定因素,具有多种生物学功能,被称为“茶叶中的软黄金”,在食品、保健品以及天然药物等领域具有巨大的潜力与广阔的应用前景。茶黄素因其具有多种特殊的生物学活性而受到消费市场追捧,近年关于其具体生物学活性的研究也逐步成为热点。目前,众多研究表明,茶黄素具有降血脂、抗肿瘤、调节血糖、延缓衰老等多种生物学活性,并且其作用机制涉及广泛,包括核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)、激活蛋白1(activating protein-1,AP-1)等信号通路,具有多靶点、多环节、多效应等作用特点。但由于高纯度茶黄素与茶黄素单体难以获取,茶黄素性质不稳定、生物利用度低等原因,茶黄素生物学活性的作用机制尚未研究清晰。本文概述了茶黄素的多种生物学活性最新研究进展,以期为以茶黄素为原料的天然膳食补充剂及功能性食品的研究开发提供借鉴。

关键词：茶黄素抗炎抗氧化抗肿瘤抑菌抗病毒保护肌肉