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芸香柚皮苷对OVA诱导过敏性哮喘免疫失衡的干预作用研究

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芸香柚皮苷对OVA诱导过敏性哮喘免疫失衡的干预作用研究

作者：刘佳慧吉林大学

学位级别：硕士

陈皮属药食同源植物,具有理气宽中,行滞消胀的功效。常用于治疗胸闷气短、肚胀疼痛、积食不化、吐痰不畅、胃下垂、脱肛及子宫下垂等。芸香柚皮苷和柚皮苷是陈皮中主要的黄酮类成分,多年研究发现,它具有多种生理活性如抗炎、抗癌和抗过... 详细信息

陈皮属药食同源植物,具有理气宽中,行滞消胀的功效。常用于治疗胸闷气短、肚胀疼痛、积食不化、吐痰不畅、胃下垂、脱肛及子宫下垂等。芸香柚皮苷和柚皮苷是陈皮中主要的黄酮类成分,多年研究发现,它具有多种生理活性如抗炎、抗癌和抗过敏等。目前,通常采用体内和体外两种实验方式对黄酮类化合物的抗过敏活性进行评价。本文采用RBL-2H3细胞株初步考察芸香柚皮苷与柚皮苷的抗过敏活性。结果表明,与柚皮苷相比,芸香柚皮苷对β-HEX释放的抑制作用更强。通过建立动物模型考察芸香柚皮苷对OVA诱导的过敏性哮喘的影响。结果表明,芸香柚皮苷能通过影响T细胞免疫应答实现其对OVA诱导的过敏性哮喘的干预作用。实验方法及结论:1、芸香柚皮苷与柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用。(1)MTT法考察芸香柚皮苷和柚皮苷对RBL-2H3细胞增殖活性的影响;在0.3-80μmol/L的浓度范围内,芸香柚皮苷与柚皮苷对RBL-2H3的细胞增殖活性无显著性影响;(2)考察芸香柚皮苷和柚皮苷对抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放β-HEX的影响;在0.3-30μmol/L的浓度范围内,芸香柚皮苷和柚皮苷抑制IgE抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放β-HEX呈浓度依赖性,由实验结果可知,与柚皮苷相比,芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放β-HEX具有更强的抑制作用;(3)采用ELISA法考察经芸香柚皮苷作用后,RBL-2H3细胞上清中IL-4的变化;结果显示,在3.125-12.5μmol/L的浓度范围内,芸香柚皮苷抑制RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放IL-4效果显著。2、建立动物模型考察芸香柚皮苷抗过敏活性(1)考察了芸香柚皮苷对OVA诱导过敏性哮喘小鼠模型血清中抗体水平的影响,结果表明,芸香柚皮苷能够显著降低小鼠血清中IgE、IgG1的水平;(2)考察了小鼠肺泡灌洗液中细胞因子的水平,结果表明,芸香柚皮苷能够显著降低IL-4、IL-5的水平;升高小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ;(3)考察了芸香柚皮苷对脾脏细胞中T细胞分化的影响,结果表明,芸香柚皮苷对CD4和CD8T细胞在脾脏淋巴细胞中含量百分比的影响,结果表明,芸香柚皮苷可以显著降低脾脏中CD4细胞的百分比,显著升高脾脏中CD8细胞的百分比。(4)考察了芸香柚皮苷抑制过敏性哮喘的机制,结果表明,芸香柚皮苷能够抑制OVA诱导的p44/42和JNK通路的激活,使P-p44/42和P-JNK的表达下降。综上所述,在体外方面,与柚皮苷相比,芸香柚皮苷可以更有效抑制RBL-2H3细胞释放β-HEX,并且降低细胞培养上清液中IL-4水平,初步判断芸香柚皮苷具有较好的体外抑制肥大细胞脱颗粒的活性;在体内方面,通过动物实验,证明芸香柚皮苷显著降低血清中IgE和IgG1水平,降低肺泡灌洗液中Th2分泌的典型炎性因子IL-4和IL-5水平,升高Th1分泌的细胞因子IFN-γ,对脾脏中CD4和CD8T细胞比例有影响,并且可以抑制OVA诱导的p44/42和JNK通路的激活,对OVA诱导的过敏性哮喘具有一定的干预作用。

关键词：芸香柚皮苷肥大细胞脱颗粒食物过敏抑制作用

芸香柚皮苷酶解辅助提取工艺优化及其对OVA诱导口服耐受的影响

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芸香柚皮苷酶解辅助提取工艺优化及其对OVA诱导口服耐受的影响

作者：赵丽娜吉林大学

学位级别：硕士

鸡蛋含有丰富的优质蛋白,是婴幼儿早期的膳食蛋白主要来源,然而蛋清中有多种过敏原,诱导婴幼儿食物过敏,严重影响过敏患儿的生活质量。卵白蛋白(OVA)作为蛋清中含量最多的蛋白质,是引起鸡蛋过敏的关键过敏原。口服耐受是指口服无害抗原... 详细信息

鸡蛋含有丰富的优质蛋白,是婴幼儿早期的膳食蛋白主要来源,然而蛋清中有多种过敏原,诱导婴幼儿食物过敏,严重影响过敏患儿的生活质量。卵白蛋白(OVA)作为蛋清中含量最多的蛋白质,是引起鸡蛋过敏的关键过敏原。口服耐受是指口服无害抗原(如食物蛋白)而引起机体产生局部或全身免疫无反应状态。文献表明,口服耐受建立失败,会发生食物过敏反应,如何成功建立口服耐受是防治食物过敏的主要途径。柑橘属植物果皮含有黄酮类化合物等多种生物活性物质,但常作为废弃物被浪费。芸香柚皮苷是果皮中含有的主要的黄酮类化合物,具有抗氧化、抗癌、抗病毒和抗炎等方面的生物活性,但其对口服耐受的影响尚未报道。本实验对芸香柚皮苷的提取工艺进行优化,采用OVA诱导BALB/C小鼠口服耐受模型考察其对口服耐受的影响。具体研究内容如下:1.芸香柚皮苷提取工艺优化,采用酶解辅助乙醇回流法提取(以本课题组前期建立的提取工艺为基础),乙醇提取条件:8倍量的60%乙醇回流提取3次,每次时间分别为1.5、1.0和0.5 h;酶解辅助条件:通过考察酶的种类及浓度、酶解温度、酶解时间和酶解pH对芸香柚皮苷提取率的影响,获得最优单因素,分别是0.2 mg/mL果胶酶、45℃、120 min和pH 4.5,芸香柚皮苷的提取率达到5.31 mg/g,在此基础上,采用L(3)正交实验,最终确定最佳提取工艺:0.3 mg/mL果胶酶、45℃、120 min和pH 5.0,芸香柚皮苷的提取率达到5.83 mg/g。2.芸香柚皮苷对口服耐受的影响,建立OVA诱导BALB/c小鼠口服耐受模型,利用小鼠体重、体温、粪便评分、血清中抗体水平和肠道内容物中IgA水平,以及结肠组织中的GATA3、Foxp3、STAT5、MHCⅡ、CXCR1和CCR7的蛋白表达情况,考察芸香柚皮苷对OVA口服耐受的影响。结果表明,与致敏模型组相比,口服耐受组和芸香柚皮苷联合作用耐受组能够抑制由过敏导致的小鼠体温降低;减轻其腹泻症状;使血清中OVA特异性IgE、IgA和IgG1水平降低;血清MCP-1水平升高;肠道内容物OVA特异性IgA水平降低;小鼠结肠组织GATA3、MHCⅡ、CXCR1和CCR7表达水平降低及Foxp3和STAT5表达水平升高。由上述可知,与口服耐受组相比,不同浓度的芸香柚皮苷耐受组可以更好的促进口服耐受的形成。

关键词： OVA 食物过敏口服耐受芸香柚皮苷提取

芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响及其作用机制研究

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芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响及其作用机制研究

作者：牛丽艳吉林大学

学位级别：硕士

食物过敏作为全球公共健康问题,预防、控制其发生是食品质量与安全把控的首要问题。RBL-2H3细胞具有与肥大细胞相似的生物学特征,细胞表面可表达高亲和力受体FcεRI,是研究食物过敏的一种常见细胞模型。芸香柚皮苷是一种具有抗过敏活性... 详细信息

食物过敏作为全球公共健康问题,预防、控制其发生是食品质量与安全把控的首要问题。RBL-2H3细胞具有与肥大细胞相似的生物学特征,细胞表面可表达高亲和力受体FcεRI,是研究食物过敏的一种常见细胞模型。芸香柚皮苷是一种具有抗过敏活性的黄酮类化合物。本文首先采用传统的RBL-2H3细胞脱颗粒模型,探讨芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响及具体作用机制;其次,通过构建OVA激活的RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒免疫模型,探讨芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒的影响及其作用机制,旨在进一步明确芸香柚皮苷的抗过敏活性。芸香柚皮苷对IgE介导的细胞脱颗粒的影响:基于对RBL-2H3细胞活力无影响的芸香柚皮苷浓度,通过ELISA考察芸香柚皮苷对β-Hex、组胺、IL-4和TNF-α释放的影响,并结合AFM对细胞形态考察,证实了芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞脱颗粒有显著抑制作用;通过荧光显微镜考察RBL-2H3细胞内荧光强度,证实了芸香柚皮苷对胞内钙离子增加有显著性抑制作用;通过RT-PCR法考察表面受体FcεRI亚基mRNA的表达,证实了芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞表面受体FcεRI亚基mRNA的表达无显著性影响;通过WB法考察芸香柚皮苷对P-p38/p38、P-JNK/JNK、P-ERK1/2/ERK1/2,P-Iκκα/β/Iκκα/β、P-IκBα/IκBα、P-p65/p65,P-Lyn/Lyn P-Syk/Syk、P-LAT/LAT、P-PLCγ1/PLCγ1蛋白表达的影响,证实了芸香柚皮苷对P-p38/p38、P-J NK/JNK、P-ERK1/2/ERK1/2,P-Iκκα/β/Iκκα/β、P-IκBα/IκBα,P-Syk/Syk、P-LAT/LAT、P-PLCγ1/PLCγ1蛋白的表达有显著性抑制作用。(P芸香柚皮苷对sIgE介导的RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒的影响:基于获得的致敏血清含sIgE约为3516 ng/mL,通过流式细胞术考察纯IgE、sIgE与RBL-2H3细胞结合力,通过β-Hex的释放考察细胞脱颗粒程度,通过C CK8考察OVA、致敏血清对RBL-2H3细胞活力的影响,明确RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒免疫模型的建立条件:OVA浓度10 ng/mL,作用时间45 min,致敏血清稀释度1:40,作用时间24 h。随后,通过ELISA、WB考察芸香柚皮苷对RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒的影响及其作用机制,结果表明,芸香柚皮苷显著性地抑制了RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒。结论:在IgE介导的RBL-2H3细胞脱颗粒模型中,芸香柚皮苷通过抑制Lyn激酶信号通路中相关蛋白的磷酸化,进而抑制了RBL-2H3细胞胞内钙离子增加,也间接抑制了MAPK和NF-κB信号通路中相关蛋白的磷酸化,最终抑制了RBL-2H3细胞上清中β-Hex、组胺、IL-4和TNF-α的释放,从而明确了其抗过敏活性;在sIgE介导的RBL-2H3细胞高反应性脱颗粒免疫模型中,芸香柚皮苷通过抑制Syk表达而抑制LAT表达,进而抑制了MAPK和NF-κB信号通路中相关蛋白的表达,最后显著性地抑制了RBL-2H3细胞的高反应性脱颗粒反应,降低了β-He x、组胺和IL-4的释放,明确了芸香柚皮苷在特定抗原OVA构建的高反应性脱颗粒免疫模型中的抗过敏活性及其作用机制,且发现芸香柚皮苷对两种模型脱颗粒的抑制机制不同。

关键词：芸香柚皮苷 RBL-2H3细胞脱颗粒高反应性 IgE 致敏血清

UPLC-MS/MS法测定香砂平胃颗粒中苍术素、厚朴酚、和厚朴酚、橙皮苷、芸香柚皮苷和甘草苷

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现代药物与临床 2023年第2期38卷 330-334页

作者：井妍南京医科大学第四附属医院药剂科江苏南京210031

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定香砂平胃颗粒中苍术素、厚朴酚、和厚朴酚、橙皮苷、芸香柚皮苷和甘草苷。方法色谱条件采用Waters HSS T3 C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈–0.1%甲酸水,梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,柱温4... 详细信息

目的建立UPLC-MS/MS法同时测定香砂平胃颗粒中苍术素、厚朴酚、和厚朴酚、橙皮苷、芸香柚皮苷和甘草苷。方法色谱条件采用Waters HSS T3 C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈–0.1%甲酸水,梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,柱温40℃,进样量5μL。质谱条件选择离子源:电喷雾离子源(ESI),采集模式:多反应检测(MRM),正负离子同时扫描,离子源温度150℃,毛细管电压:正离子3.0 kV,负离子2.5 kV,去溶剂气流量800 L/h,去溶剂气温度400℃,氩气为高纯氩气。结果甘草苷、芸香柚皮苷、橙皮苷、和厚朴酚、厚朴酚、苍术素线性范围在0.29~14.75、0.38~18.58、1.85~92.63、1.62~81.11、1.37~68.5、0.49~24.41 ng,平均回收率分别为100.48%、97.79%、98.67%、93.52%、101.72%、100.30%,RSD值分别为4.31%、3.40%、1.45%、2.78%、2.59%、4.06%。结论本法分析速度快、灵敏度高、专属性强,可以为香砂平胃颗粒的质量标准改进提供依据。

关键词：香砂平胃颗粒甘草苷芸香柚皮苷橙皮苷和厚朴酚厚朴酚苍术素超高效液相色谱串联质谱

反相高效液相色谱法测定枳实中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量

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中南药学 2013年第12期11卷 934-937页

作者：朱露雷鹏黄琪刘海涛林弘地中南大学湘雅医院药剂科长沙410008 中南大学药学院长沙410013

目的建立反相高效液相色谱法同时测定枳实中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量。方法采用Promosil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水（22：78）,流速为1.0 mL· min^-1,检测波长283 nm,柱温为25℃。结果 ... 详细信息

目的建立反相高效液相色谱法同时测定枳实中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量。方法采用Promosil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水（22：78）,流速为1.0 mL· min^-1,检测波长283 nm,柱温为25℃。结果枳实中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分别在0.4116～2.470μg（r=0.9997）、0.413 2～2.066μg（r=1.000 0）、0.474 4～3.795μg（r=0.999 9）、0.198 2～1.982μg（r=0.999 7）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为100.4%、103.3%、101.2%、99.2%;RSD分别为2.2%、1.6%、2.7%、2.0%。结论该方法简便、准确、可靠,为枳实的质量控制提供一定的依据。

关键词：反相高效液相色谱法枳实芸香柚皮苷柚皮苷橙皮苷新橙皮苷含量测定

枳壳中芸香柚皮苷和橙皮苷配伍对正常小鼠小肠推进作用的影响

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江西中医药大学学报 2017年第4期29卷 73-75页

作者：谭舒舒陈海芳罗小泉宋玉鹏胡源祥皮达杨武亮江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室南昌330004

目的:分别考察枳壳(主要含有柚皮苷和新橙皮苷)和"杂交枳壳"(主要含有芸香柚皮苷和橙皮苷)水煎液以及芸香柚皮苷和橙皮苷配伍给药对正常小鼠小肠推进作用的影响,以期寻找枳壳的药效物质。方法:采用炭末推进法,以正常小鼠小肠的炭末推进... 详细信息

目的:分别考察枳壳(主要含有柚皮苷和新橙皮苷)和"杂交枳壳"(主要含有芸香柚皮苷和橙皮苷)水煎液以及芸香柚皮苷和橙皮苷配伍给药对正常小鼠小肠推进作用的影响,以期寻找枳壳的药效物质。方法:采用炭末推进法,以正常小鼠小肠的炭末推进率为指标,观察枳壳和"杂交枳壳"水煎液、芸香柚皮苷和橙皮苷配伍给药对正常小鼠小肠推进作用的影响。结果:枳壳和"杂交枳壳"水煎液,芸香柚皮苷和橙皮苷配伍给药各剂量组与空白对照组比较均有显著性差异(P芸香柚皮苷和橙皮苷是枳壳的药效物质。

关键词：枳壳芸香柚皮苷橙皮苷小肠推进组分配伍

4种炮制方法对陈皮中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的影响

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中国药业 2020年第21期29卷 9-11页

作者：丁琛郑艳萍陈丽江苏省中医院江苏南京210029 江苏弘典中药产业研究院江苏南京210042

目的考察4种炮制方法对陈皮中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的影响。方法采用高效液相色谱二极管阵列检测法(HPLC-DAD)测定醋制、蜜制、麸炒、土炒炮制方法对陈皮中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的影响。结果麸炒陈皮中橙皮苷、芸香柚皮苷含量最高,... 详细信息

目的考察4种炮制方法对陈皮中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的影响。方法采用高效液相色谱二极管阵列检测法(HPLC-DAD)测定醋制、蜜制、麸炒、土炒炮制方法对陈皮中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的影响。结果麸炒陈皮中橙皮苷、芸香柚皮苷含量最高,分别为10.57%和2.42%。结论不同炮制方法对陈皮中橙皮苷和芸香柚皮苷含量的影响显著,麸炒陈皮中橙皮苷和芸香柚皮苷含量最高。

关键词：陈皮橙皮苷芸香柚皮苷炮制方法含量高效液相色谱二极管阵列检测法

HPLC法测定枳实消痞丸中芸香柚皮苷、柠檬苦素、和厚朴酚及厚朴酚含量

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中国药师 2016年第2期19卷 397-399页

作者：薛建文林华黄兴振云浮市人民医院药学部广东云浮527300 广西柳州食品药品检验所广西医科大学

目的:建立高效液相色谱法同时测定枳实消痞丸中芸香柚皮苷、柠檬苦素、和厚朴酚及厚朴酚含量的分析方法。方法:色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为乙腈-甲醇(1∶2),流动相B为水,梯度洗脱,流速为1.0... 详细信息

目的:建立高效液相色谱法同时测定枳实消痞丸中芸香柚皮苷、柠檬苦素、和厚朴酚及厚朴酚含量的分析方法。方法:色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为乙腈-甲醇(1∶2),流动相B为水,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^(-1),柱温为30℃,进样量为20μl;芸香柚皮苷检测波长为λ_1=283 nm,柠檬苦素检测波长为λ_2=210nm,和厚朴酚、厚朴酚检测波长为λ_3=294 nm。结果:芸香柚皮苷、柠檬苦素、和厚朴酚、厚朴酚分别在5.26~105.20μg·ml^(-1)(r=0.999 8)、7.65~153.00μg·ml^(-1)(r=0.999 4)、6.21~124.20μg·ml^(-1)(r=0.999 3)、6.45~129.00μg·ml^(-1)(r=0.999 6)范围内线性关系良好,平均加样回收率(n=6)分别为99.00%(RSD=0.77%)、98.17%(RSD=1.19%)、98.78%(RSD=0.86%)、97.90%(RSD=0.99%)。结论:该方法简便、准确、可靠,可用于枳实消痞丸的质量控制。

关键词：高效液相色谱枳实消痞丸芸香柚皮苷柠檬苦素和厚朴酚厚朴酚

HPLC指纹图谱和化学模式识别结合多成分定量的土（赤石脂）炒陈皮炮制前后化学成分差异研究

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中草药 2025年第1期 89-97页

作者：辛力黄玉珍龚文慧郑郁清商杰赵蓓蓓严世豪乐颖娜金姝含薛艳华张金莲江西中医药大学建昌帮药业有限公司

目的建立陈皮土（赤石脂）炒前后的HPLC指纹图谱及多成分定量测定方法，结合化学计量学进行比较，分析其特征指标成分，为陈皮及土（赤石脂）炒陈皮的质量控制和综合利用提供科学依据。方法采用菲罗门Superlu C18色谱柱，流动相为乙腈... 详细信息

目的建立陈皮土（赤石脂）炒前后的HPLC指纹图谱及多成分定量测定方法，结合化学计量学进行比较，分析其特征指标成分，为陈皮及土（赤石脂）炒陈皮的质量控制和综合利用提供科学依据。方法采用菲罗门Superlu C18色谱柱，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min；检测波长283 nm；柱温30℃；进样量10μL;HPLC法建立陈皮和土（赤石脂）炒陈皮的指纹图谱，运用相似度分析、主成分分析（principal component analysis,PCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）等化学模式识别技术，筛选出土（赤石脂）炒陈皮炮制前后特征指标成分并进行定量分析。结果建立了陈皮和土（赤石脂）炒陈皮的HPLC指纹图谱，共提取出16个共有峰，通过与对照品对比，指认了6种成分，分别为辛弗林（1号峰）、芸香柚皮苷（10号峰）、橙皮苷（12号峰）、橙皮内酯（14号峰）、川陈皮素（15号峰）、橘皮素（16号峰）；通过PCA和OPLS-DA可明显将陈皮和土（赤石脂）炒陈皮分为2类，综合筛选了辛弗林、芸香柚皮苷、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素5种特征指标成分，炮制后辛弗林含量升高明显（P芸香柚皮苷、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量稍有降低。结论确定了辛弗林、芸香柚皮苷、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素5种特征指标成分作为评价陈皮及土（赤石脂）炒陈皮质量差异的潜在标志性成分，建立的陈皮及土（赤石脂）炒陈皮HPLC指纹图谱及多成分定量测定方法稳定、可靠，可为陈皮及土（赤石脂）炒陈皮的质量控制、综合利用和临床应用提供参考。

关键词：陈皮土炒赤石脂指纹图谱辛弗林橙皮苷芸香柚皮苷川陈皮素橘皮素