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花粉管通道法转柱头外露棉DNA及转化体RAPD分析

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湖南师范大学自然科学学报 2004年第4期27卷 81-86页

作者：周平兰梁满中高健陈良碧湖南师范大学生命科学学院植物学系中国长沙410081 湖南科技大学生命科学学院生物系中国湘潭411201

提取"异9-3"柱头外露棉总基因组DNA,通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707 1的胚囊内,D1代田间筛选到柱头外露的转化植株.遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制.50个随机引物进行PCR扩增,33个引物扩增出的DNA在供... 详细信息

提取"异9-3"柱头外露棉总基因组DNA,通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707 1的胚囊内,D1代田间筛选到柱头外露的转化植株.遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制.50个随机引物进行PCR扩增,33个引物扩增出的DNA在供体、受体和转化体之间呈现出多态性,其中引物S462(TCGGCACGCA)在供体和转化体之间出现相同产物而受体没有出现扩增产物,该引物有可能作为柱头外露系的分子标记.RAPD分析结果表明转化体与受体有较多相同基因位点,而与供体相同基因位点较少.转化体还有供体和受体都不具有的基因位点,这可能是外源DNA导入时引起碱基突变所致.

关键词：柱头外露花粉管通道法 RAPD分析基因位点引物供体转化受体 DNA CGC

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花粉管通道法转基因育种研究进展

热带作物学报 2012年第5期33卷 956-961页

作者：简纯平李开绵欧文军海南大学农学院海南儋州571737 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南儋州571737

介绍花粉管通道法的创立与发展、转化方法与转化机理,综述应用此方法在主要农作物育种中所取得的最新研究进展,并探讨该技术在运用中存在的主要问题和应用前景。

关键词：花粉管通道法育种研究进展

花粉管通道法转基因技术的细胞胚胎学机理探讨

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西北植物学报 2006年第3期26卷 628-634页

作者：王艳杰申家恒哈尔滨师范大学生命与环境学院生物系哈尔滨150080

本文从细胞胚胎学出发,从理论上对花粉管通道、花粉管通道法的转化机理进行了研究。认为,外源DNA进入胚囊的途径,即外源DNA沿着连接柱头与胚囊的花粉管外界面渗入胚囊;外源DNA转化的受体应为合子;外源DNA转化的时期应限定在精卵融合至... 详细信息

本文从细胞胚胎学出发,从理论上对花粉管通道、花粉管通道法的转化机理进行了研究。认为,外源DNA进入胚囊的途径,即外源DNA沿着连接柱头与胚囊的花粉管外界面渗入胚囊;外源DNA转化的受体应为合子;外源DNA转化的时期应限定在精卵融合至合子分裂前这一段时期,此时合子细胞壁尚未封闭;外源DNA转化受体的机制可能是外源DNA与处于原生质体状态的合子的随机融合。强调在应用此方法时,应对植物雌蕊结构以及受精经历的时间有全面了解,并列出了一些重要植物授粉后受精过程各阶段的时间,对外源DNA导入部位和方法提出了建议,并分析了花粉管通道法转基因技术转化率较低的原因。

关键词：花粉管通道法途径转化机理外源DNA导入受精间隔期

花粉管通道法导入高粱DNA创造优良小麦新品系的分子聚合育种

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干旱地区农业研究 2013年第2期31卷 6-12,22页

作者：欧巧明崔文娟王炜倪建福王红梅杨芳萍罗俊杰甘肃省农业科学院生物技术研究所甘肃兰州730070

采用优化的花粉管通道法将高粱(Sorghum bicolorL.)基因组DNA导入高感条锈病、籽粒粉质的稳定小麦品系,并借助幼胚培养挽救加代、早代变异筛选等技术,经多代连续选择优良变异系,获得2个稳定的优良变异新品系,其中2001502-23-26两年度位... 详细信息

采用优化的花粉管通道法将高粱(Sorghum bicolorL.)基因组DNA导入高感条锈病、籽粒粉质的稳定小麦品系,并借助幼胚培养挽救加代、早代变异筛选等技术,经多代连续选择优良变异系,获得2个稳定的优良变异新品系,其中2001502-23-26两年度位居省区试第一位,已申请生产试验和品种审定。变异新品系与感病受体小麦比较,某些生物学性状发生明显变异,对条锈病免疫,品质指标得到提升,HMW-GS发生明显变异,Gul D1位点基因发生等位变异,过氧化物酶发生明显变化,说明外源高粱基因导入引起了相应基因表达的变化,地区适应性也相应的较受体不同。这说明异源高粱基因组DNA导入小麦可实现高粱抗条锈性和HMW-GS等优良性状的遗传转育和聚合,达到生物学性状、产量、抗条锈性和品质指标等目标性状得到遗传改良的目的。性状改良的原因,推测可能是高粱抗条锈基因转化和HMW-GS基因生物诱变和多基因聚合的结果,而导入后代HMW-GS的GulD1位点基因的等位变异机理可归结为生物诱变所致,条锈病抗性的变异可能属于高粱抗锈基因的定向转移所致。

关键词：小麦高粱DNA 花粉管通道法高分子量谷蛋白亚基抗条锈分子聚合育种

花粉管通道法获得棉花转基因株系主要农艺性状变异分析

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棉花学报 2007年第6期19卷 450-454页

作者：刘冬梅武芝霞刘传亮李成伟李付广中国农业科学院棉花研究所农业部棉花遗传改良重点实验室河南安阳455000 商丘师范学院生命科学系河南商丘476600

通过对花粉管通道法获得的38个棉花转基因株系稳定后代T5代主要农艺性状的变异进行分析发现,外源基因的导入可引起受体植株后代农艺性状可遗传的非靶标变异,且变异广泛,多个农艺性状出现了显著性变异。叶长和叶宽均有变短的趋势,但裂叶... 详细信息

通过对花粉管通道法获得的38个棉花转基因株系稳定后代T5代主要农艺性状的变异进行分析发现,外源基因的导入可引起受体植株后代农艺性状可遗传的非靶标变异,且变异广泛,多个农艺性状出现了显著性变异。叶长和叶宽均有变短的趋势,但裂叶缺刻深浅变异方向不定,说明部分叶片变得更加皱缩。株高变异方向不定。与对照相比,吐絮期提前,单株结铃数增加,使皮棉和子棉产量均增加。纤维品质变异也很大,如比强度增大、麦克隆值变大、纤维长度也显著增加;短纤维指数变异方向不定。

关键词：棉花花粉管通道法转基因农艺性状变异

花粉管通道法将Bt-CPTI双价抗虫基因转入玉米自交系的研究

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玉米科学 2010年第1期18卷 29-33,41页

作者：李茫雪张赫然于晶周子珊苍晶王振华东北农业大学理学院哈尔滨150030 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 东北农业大学农学院哈尔滨150030

利用花粉管通道法将Bt-CPTI双价抗虫基因对优良玉米自交系进行遗传转化。采用组培和盆栽两种方法对大量t0代转基因种子进行卡那霉素抗性筛选,获得的卡那抗性植株进行PCR及PCR-Southern检测,初步证明外源目的基因已整合到玉米基因组中,PC... 详细信息

利用花粉管通道法将Bt-CPTI双价抗虫基因对优良玉米自交系进行遗传转化。采用组培和盆栽两种方法对大量t0代转基因种子进行卡那霉素抗性筛选,获得的卡那抗性植株进行PCR及PCR-Southern检测,初步证明外源目的基因已整合到玉米基因组中,PCR-Southern阳性率达到2.19%。

关键词：玉米花粉管通道法 Bt-CPTI基因

花粉管通道法转EPSPS基因创制耐草甘膦玉米种质

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福建农业学报 2023年第5期38卷 524-529页

作者：李向龙郑登俞张春张中保吴忠义北京市农林科学院生物技术研究所/农业基因资源与生物技术北京市重点实验室北京100097

【目的】对T_(0)-T_(3)代转基因植株进行抗草甘膦EPSPS基因的筛选检测,以期得到遗传稳定的转基因株系。【方法】利用花粉管通道法将EPSPS基因转入优良自交系京92中,通过田间草甘膦筛选和分子检测鉴定外源基因在世代间的遗传表达。【结... 详细信息

【目的】对T_(0)-T_(3)代转基因植株进行抗草甘膦EPSPS基因的筛选检测,以期得到遗传稳定的转基因株系。【方法】利用花粉管通道法将EPSPS基因转入优良自交系京92中,通过田间草甘膦筛选和分子检测鉴定外源基因在世代间的遗传表达。【结果】在田间用200 mg·L^(-1)的草甘膦除草剂筛选,T_(0)代15个抗性植株经PCR鉴定,共获得10个阳性植株,转化率为1.03%;对各株系从T_(1)代到T_(3)代逐代筛选淘汰,株系内阳性株数逐渐增多,在T_(3)代5个株系中分离出K3和K8两个整合了EPSPS外源基因的稳定遗传株系;进一步对K3和K8两个株系的T_(3)代采用试纸条进行功能表达分析,发现目的基因均能正常表达。【结论】K3和K8两个转基因玉米株系后期可作为培育耐草甘膦的基础材料。

关键词：玉米花粉管通道法 EPSPS基因草甘膦耐性

花粉管通道法介导山葡萄VaCBF3基因转化杨树的初步研究

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2016年第5期42卷 500-504页

作者：冯连荣王占斌尹杰宋立志彭儒胜赵鑫闻东北林业大学林学院黑龙江哈尔滨150040 辽宁省杨树研究所辽宁盖州115213

以美洲黑杨‘D189’和辽宁杨为杂交亲本,利用花粉管通道法,经柱头滴注,将携带山葡萄CBF3(VaCBF3)基因的质粒导入杨树中。结果显示:在杂交授粉后,经过目的基因导入,共获得了52株转化后代,经PCR检测,有5株扩增出目的条带,初步推断目的基... 详细信息

以美洲黑杨‘D189’和辽宁杨为杂交亲本,利用花粉管通道法,经柱头滴注,将携带山葡萄CBF3(VaCBF3)基因的质粒导入杨树中。结果显示:在杂交授粉后,经过目的基因导入,共获得了52株转化后代,经PCR检测,有5株扩增出目的条带,初步推断目的基因已导入到杨树中。本研究结果可为进一步利用花粉管通道培育抗寒杨树新品系提供参考。

关键词：山葡萄VaCBF3基因美洲黑杨'D189’ 辽宁杨花粉管通道法遗传转化

花粉管通道法将Bt毒蛋白基因导入优良玉米自交系

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吉林农业大学学报 2002年第4期24卷 40-44页

作者：王罡张艳贞魏松红胡应刚吴颖季静解放军军需大学植物基因工程研究中心吉林长春130062

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系为材料 ,用花粉管通道法介导质粒pGBIL0 4(actin Bt 35S bar)DNA的转化 ,经对T0 代 1 4 0 3株植株Basta抗性筛选和PCR分子鉴定 ,共获得 5株PCR阳性植株 ,分别为授粉后 8,1 2 ,1 4 ,1 8h导入所得 ,... 详细信息

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系为材料 ,用花粉管通道法介导质粒pGBIL0 4(actin Bt 35S bar)DNA的转化 ,经对T0 代 1 4 0 3株植株Basta抗性筛选和PCR分子鉴定 ,共获得 5株PCR阳性植株 ,分别为授粉后 8,1 2 ,1 4 ,1 8h导入所得 ,总的平均转化率为 0 36 %。结果表明 :只要掌握好导入时机。

关键词： Bt毒蛋白基因玉米自交系花粉管通道法苏云金牙孢杆菌转化率基因转化