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中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中单核苷酸多态性位点分析

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中华流行病学杂志 2006年第7期27卷 604-606页

作者：魏建春张恩民马凤琴张建中中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的分析中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点特征。方法选择18株炭疽芽胞杆菌,采用PCR方法扩增炭疽芽胞杆菌致死因子基因、测序,并进行SNP位点分析。结果实验中所用中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中第895位核苷酸... 详细信息

目的分析中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点特征。方法选择18株炭疽芽胞杆菌,采用PCR方法扩增炭疽芽胞杆菌致死因子基因、测序,并进行SNP位点分析。结果实验中所用中国炭疽芽胞杆菌致死因子基因中第895位核苷酸均为G,与国外菌株不同。中国不同地区(包括新疆、广西、北京、内蒙古等地区)、不同年代和不同来源(包括土壤、牛、羊、骡、狗、患者等)分离的菌株,具有相同的SNP位点特征。结论致死因子基因中第895位核苷酸均为G的SNP位点特征很可能是中国炭疽芽胞杆菌的共同特征。

关键词：炭疽芽胞杆菌单核苷酸多态性致死因子

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重组炭疽致死因子的表达及生物活性分析

微生物学报 2004年第6期44卷 749-751页

作者：郭强徐俊杰董大勇付玲陈薇宋小红军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

使用分泌型表达质粒 ,实现了重组炭疽致死因子 (rLF)在大肠杆菌周质腔中的分泌表达。表达量约占菌体总蛋白的 4 %。经过离子交换和凝胶过滤纯化 ,每升诱导培养物可获得约 3mg电泳纯的rLF。蛋白N端测序表明 ,rLF序列与天然炭疽LF一致。... 详细信息

使用分泌型表达质粒 ,实现了重组炭疽致死因子 (rLF)在大肠杆菌周质腔中的分泌表达。表达量约占菌体总蛋白的 4 %。经过离子交换和凝胶过滤纯化 ,每升诱导培养物可获得约 3mg电泳纯的rLF。蛋白N端测序表明 ,rLF序列与天然炭疽LF一致。体外细胞毒性试验亦显示rLF具有很好的生物活性。rLF的成功表达为今后研究LF的作用机理、发展新型炭疽疫苗。

关键词：炭疽杆菌致死因子蛋白表达蛋白纯化大肠杆菌

利用细胞毒性实验检测血液中炭疽毒素致死因子的方法学研究

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军事医学 2013年第5期37卷 390-395页

作者：刘炬郭强张军吴诗坡董大勇李亮亮付玲徐俊杰陈薇军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的探索利用炭疽毒素致死因子(lethal factor,LF)的细胞毒性检测血液中LF的可行性,为炭疽的临床检测、治疗及相关研究提供支持。方法利用小鼠巨噬细胞系J774A.1对LF细胞毒性的高度敏感性,检测血液中LF的浓度,对实验条件进行优化,并利用... 详细信息

目的探索利用炭疽毒素致死因子(lethal factor,LF)的细胞毒性检测血液中LF的可行性,为炭疽的临床检测、治疗及相关研究提供支持。方法利用小鼠巨噬细胞系J774A.1对LF细胞毒性的高度敏感性,检测血液中LF的浓度,对实验条件进行优化,并利用Fischer 344大鼠模型验证该方法的可行性。结果细胞毒性实验能够检测到血浆中的LF浓度可低至5 ng/ml,该方法操作简单,灵敏度高,并在大鼠模型中得到了验证,利用本法测定LF在大鼠血液中的半衰期为4.8～6.5 h。结论初步建立了利用细胞毒性实验检测血液中LF的方法,该方法在灵敏性、经济性和实用性等方面具备一定优势,为炭疽相关研究及临床检测提供了新的选择。

关键词：炭疽毒素致死因子细胞毒性检测

炭疽杆菌致死因子LF253的制备及活性分析

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南京医科大学学报（自然科学版） 2015年第3期35卷 340-345页

作者：许小明郑峰周婷婷熊四平刘鹏王长军冯振卿周玮朱进蚌埠医学院附属解放军第八二医院内分泌科江苏淮安223001 南京军区军事医学研究所江苏南京210002 南京医科大学病理学系江苏南京210029

目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的D... 详细信息

目的 :制备具有生物学活性的重组致死因子253(lethal factor 253,LF253)抗原,获得纯化的目的蛋白,检测其与全分子致死因子(lethal focfor,LF)蛋白竞争性结合保护性抗原(protective antigen,PA)的能力。方法:PCR扩增致死因子LF253片段的DNA,将目的基因插入p ET-28a(+)表达载体中,利用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌,IPTG诱导重组蛋白表达,通过His标签亲和层析柱获得目的蛋白,Western blot和ELISA法检测蛋白抗原性,Biacore T-100测定重组蛋白与保护性抗原PA结合的亲和力,细胞毒性实验检测其生物学活性。结果:成功构建原核表达载体p ET-28a/LF253,诱导获得重组蛋白s LF253的表达。Western blot和ELISA检测结果证实,该重组蛋白具有良好抗原特异性;细胞毒实验结果表明,重组蛋白可在体内外中和致死毒素引起的生物学效应。结论:本研究制备的融合蛋白s LF253能够与保护性抗原PA结合,可竞争性抑制LF全分子蛋白与PA的聚合,阻断炭疽毒素的致死作用,为今后炭疽疫苗等药物的研发奠定了基础。

关键词：炭疽致死因子表达活性分析

小鼠肿瘤致死因子α诱导的TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ亚单位的相互作用

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湖南师范大学自然科学学报 2004年第3期27卷 70-74页

作者：胡小晓熊熙文周建林张健湖南师范大学生命科学学院生化系中国长沙410081

人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α的诱导的蛋白,在小鼠中又称为TNFAIP1,其功能尚未见报导.采用蛋白质pull down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ的亚单位P50发生直接相互作用.由此推测T... 详细信息

人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α的诱导的蛋白,在小鼠中又称为TNFAIP1,其功能尚未见报导.采用蛋白质pull down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶δ的亚单位P50发生直接相互作用.由此推测TNFAIP1蛋白参与DNA复制过程,并为研究人TNFAIP1基因的功能提供参考.

关键词：蛋白亚单位致死因子小鼠肿瘤诱导 DNA聚合酶肿瘤坏死因子a DNA复制相互作用基因

黄缘闭壳龟卵的性状及胚胎发育中致死因子的研究

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淡水渔业 2005年第5期35卷 35-37页

作者：黄斌信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000

黄缘闭壳龟卵重一般为(14.46±2.27)g,卵的长径与短径之比为1.88∶1;卵黄和蛋白的质量比为1.22∶1;卵黄和卵壳的质量比为3.12∶1。孵化温度不宜,孵化介质湿度不当以及霉菌感染是导致受精卵发育过程中胚胎死亡的主要因素。胚胎在孵化过... 详细信息

黄缘闭壳龟卵重一般为(14.46±2.27)g,卵的长径与短径之比为1.88∶1;卵黄和蛋白的质量比为1.22∶1;卵黄和卵壳的质量比为3.12∶1。孵化温度不宜,孵化介质湿度不当以及霉菌感染是导致受精卵发育过程中胚胎死亡的主要因素。胚胎在孵化过程中的死亡曲线呈双峰型。

关键词：黄缘闭壳龟卵重卵黄胚胎发育致死因子孵化温度

炭疽芽胞杆菌致死因子在大肠埃希菌中的表达与纯化

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中国媒介生物学及控制杂志 2012年第4期23卷 295-297页

作者：魏建春张恩民张慧娟张建华中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的在大肠埃希菌中表达炭疽致死因子,获得纯化蛋白,用于炭疽快速诊断方法以及炭疽致病机制研究。方法 PCR方法扩增炭疽致死因子,构建表达质粒pETLF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,通过Ni离子金属螯合树脂进行纯化,West... 详细信息

目的在大肠埃希菌中表达炭疽致死因子,获得纯化蛋白,用于炭疽快速诊断方法以及炭疽致病机制研究。方法 PCR方法扩增炭疽致死因子,构建表达质粒pETLF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,通过Ni离子金属螯合树脂进行纯化,Western blot(WB)试验检查免疫原性,MTT方法检查生物学活性。结果获得重组炭疽致死因子,WB结果显示重组蛋白具有良好的免疫反应性,MTT方法进行的生物学活性测定表明致死因子与保护性抗原联合,细胞毒性与文献报道相比有明显降低。结论所获得的重组炭疽致死因子,对于发展炭疽快速诊断方法,以及研究炭疽毒素的作用机制具有一定的促进作用。

关键词：炭疽芽胞杆菌致死因子克隆表达

hTERT启动子特异性调控炭疽毒素致死因子表达以杀伤人肺腺癌A549细胞的研究

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重庆医学 2012年第11期41卷 1051-1054页

作者：卓文磊陈芳琳陶光利第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所重庆400037 第三军医大学新桥医院全军肾脏病中心重庆400037

目的观察人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)靶向调控炭疽毒素致死因子(LF)表达对人肺腺癌A549细胞活力及凋亡/坏死的影响。方法构建含hTERTp或CMV启动子(CMVp)且表达LF的真核质粒表达载体(phTERTp-LF或pCMV-LF),分别转染人肺腺癌A549细胞... 详细信息

目的观察人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)靶向调控炭疽毒素致死因子(LF)表达对人肺腺癌A549细胞活力及凋亡/坏死的影响。方法构建含hTERTp或CMV启动子(CMVp)且表达LF的真核质粒表达载体(phTERTp-LF或pCMV-LF),分别转染人肺腺癌A549细胞株和正常人胚肺成纤维MRC-5细胞株。针对A549、A549hTERTp-LF、A549CMVp-LF、MRC-5、MRC-5hTERTp-LF、MRC-5CMVp-LF六组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot检测LF mRNA和蛋白表达,用MTT分析检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡/坏死。结果与A549组比较,A549hTERTp-LF组、A549CMVp-LF组均出现明显的LF mRNA和蛋白表达,以及细胞活力降低和凋亡/坏死率上升;与A549hTERTp-LF组相比,A549CMVp-LF组LF mRNA和蛋白表达更高,细胞活力降低和凋亡/坏死率上升更明显。与MRC-5组比较,MRC-5hTERTp-LF组也不能测出LF mRNA和蛋白表达,细胞活力和凋亡/坏死率亦无明显变化,但MRC-5CMVp-LF组的LF mRNA和蛋白表达上升,细胞活力降低和凋亡/坏死率增加。结论 hTERTp能特异性地驱动LF表达并杀伤人肺腺癌A549细胞,但避免了对MRC-5细胞的毒性,可望提供一种针对肺腺癌细胞且不良反应小的靶向治疗策略。

关键词：人端粒酶逆转录酶启动区致死因子细胞凋亡 A549细胞

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杉木球果致死因子的研究

浙江林业科技 1998年第6期18卷 27-29页

作者：陈梅香北京市农林科学院林业果树研究所北京100093

根据杉木球果的死亡特征归纳出9个致死因子即失踪、机械损伤、杉木球果麦蛾为害、长角岗缘蝽为害、杉木扁长蝽为害、其它虫害、病害、败育、其它死亡因子，并总结出杉木球果死亡因子的判断步骤。

关键词：杉木球果致死因子为害病虫害败育