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作者：王增增苏州大学

学位级别：硕士

目的:初步探讨膜联蛋白a2(annexin a2,ANXa2)在系统性硬化症患者(Systemic sclerosis,SSc)中的表达及其临床意义。方法:选取苏州大学附属第三医院免疫风湿科门诊及住院部收治的23例SSc患者作为实验组,留取外周血,其中4例行前臂皮肤组织... 详细信息

目的:初步探讨膜联蛋白a2(annexin a2,ANXa2)在系统性硬化症患者(Systemic sclerosis,SSc)中的表达及其临床意义。方法:选取苏州大学附属第三医院免疫风湿科门诊及住院部收治的23例SSc患者作为实验组,留取外周血,其中4例行前臂皮肤组织活检;选取16例年龄及性别相匹配的健康体检者(HC)作为对照组,留取外周血,另外选取2例同期于我院乳房科行乳腺纤维瘤手术的患者,取其病灶周围正常皮肤组织作为对照。根据患者的疾病病程分为短病程组(病程≤3年,n=11)和长病程组(病程>3年,n=12)。根据患者的皮肤病变,分为肿胀期(n=7)、硬化期(n=13)、萎缩期(n=3)。根据2016年欧洲抗风湿病联盟硬皮病试验研究组(EULAR Scleroderma Trials and Research group,EUSTAR)对SSc患者病情活动程度的修正参数(revised index)分为活动组(revised index>2.5,n=11)和非活动组(revised index≤2.5,n=12)。根据患者有无肢端溃疡分为肢端溃疡(digital ulcer,DU)组(n=10)和无肢端溃疡组(n=13)。根据患者有无肺动脉高压,分为肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)组(n=8)和无肺动脉高压组(n=15)。采用RT-PCR检测SSc患者及对照组人群外周血单个核细胞(PBMC)中 ANX a2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、组织因子(Tissue factor,TF)的相对表达水平。收集SSc患者的一般情况、临床表现、辅助检查结果。比较各组间ANX a2及VEGF、TF的相对表达水平,并分析ANXa2与VEGF、TF及临床表现、各辅助检查之间的相关性。结果:(1)ANX a2在正常皮肤组织的血管内皮细胞、表皮细胞中呈阳性表达,在SSc肿胀期患者皮肤组织血管内皮细胞、表皮细胞中呈强阳性表达,在SSc硬化-萎缩期患者皮肤组织表皮细胞中呈弱阳性表达。(2)SSc组与HC组PBMC中ANX a2的相对表达水平(17.39 vs 23.75),VEGF的相对表达水平(18.33 vs 22.41),TF的相对表达水平(17.77 vs 20.80),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SSc肿胀期PBMC中ANXa2的相对表达水平显著低于HC组(6.57 vs 14.38,P=0.011)及SSc硬化期(6.50 vs 12.65,P=0.024),差异具有统计学意义。SSc硬化期及萎缩期PBMC中TF的相对表达水平均显著高于肿胀期(13.31 vs 5.29,P=0.004)、(9.00 vs 4.00,P=0.017),差异具有统计学意义。SSc短病程与长病程组PBMC中ANX a2的相对表达水平(9.95 vs 13.88),VEGF的相对表达水平(11.14 vs 12.79),TF的相对表达水平(9.90 vs 12.83),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。活动组与非活动组PBMC中ANXa2的相对表达水平(13.41 vs 10.71),VEGF的相对表达水平(12.13 vs 12.00),TF的相对表达水平(11.45 vs 11.55),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。肢端溃疡组与无肢端溃疡组PBMC中ANX a2的相对表达水平(13.90 vs 10.54),VEGF的相对表达水平(12.75 vs 11.42),TF的相对表达水平(11.00 vs 12.10),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺动脉高压组与无肺动脉高压组PBMC中ANX a2的相对表达水平(13.06 vs 11.43),VEGF的相对表达水平(12.00 vs 10.88),TF的相对表达水平(12.63 vs 10.86),两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)SSc患者PBMC中ANX a2的相对表达水平与SSc患者各临床表现、实验室指标之间无明显相关性(P>0.05)。(4)SSc患者PBMC中ANX a2的相对表达水平与VEGF的相对表达水平呈正相关(P=0.035),与TF的相对表达水平呈正相关(P=0.027)。结论:SSc肿胀期患者皮肤组织中ANXa2呈强阳性表达,硬化-萎缩期患者皮肤组织中ANXa2呈弱阳性表达。硬化期患者PBMC中ANXa2、TF的相对表达水平均显著高于肿胀期。PBMC中ANX a2的表达水平与VEGF、TF的相对表达水平呈显著正相关,提示ANXa2与VEGF、TF存在相互影响,并可能与SSc的发生、发展有关。

关键词：系统性硬化症膜联蛋白a2 血管内皮细胞生长因子组织因子

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膜联蛋白a2在子痫前期中的表达

膜联蛋白A2在子痫前期中的表达

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作者：赵利红华北理工大学

学位级别：硕士

目的通过检测正常妊娠孕妇和子痫前期患者的蜕膜和胎盘组织及外周血中膜联蛋白a2(Annexin,ANXa2)的表达水平,探讨ANXa2与子痫前期发生和发展的关系。方法选取2021年05月至2022年09月在河北省人民医院产科住院剖宫产分娩的正常足月妊娠... 详细信息

目的通过检测正常妊娠孕妇和子痫前期患者的蜕膜和胎盘组织及外周血中膜联蛋白a2(Annexin,ANXa2)的表达水平,探讨ANXa2与子痫前期发生和发展的关系。方法选取2021年05月至2022年09月在河北省人民医院产科住院剖宫产分娩的正常足月妊娠孕妇、子痫前期和重度子痫前期患者各7例作为研究组1,分别留取其蜕膜和胎盘组织,另外选取了14名正常足月妊娠孕妇和14名重度子痫前期患者作为研究组2,留取其外周血。研究组1采用免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)和免疫印迹(Western blotting,WB)法分别检测其蜕膜及胎盘组织中ANXa2蛋白的表达水平,用实时荧光定量逆转录PCR(Real-time q PCR,RT-q PCR)法检测蜕膜和胎盘组织ANXa2 m RNA的表达水平。研究组2用酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测其外周血中ANXa2蛋白水平。结果在蜕膜和胎盘组织中,重度子痫前期组ANXa2蛋白的表达水平较正常妊娠组和子痫前期组显著升高(Pa2 m RNA的相对表达量也显著高于正常妊娠组(Pa2蛋白水平显著高于正常妊娠组(Pa2的表达显著升高可能与子痫前期病情急剧恶化有关。2 ANXa2可能成为预测子痫前期病情恶化的一个新的生物标志物。图 14 幅;表 2 个;参 109 篇

关键词：膜联蛋白a2 子痫前期重度子痫前期蜕膜母胎界面病情恶化预测

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脑胶质瘤中膜联蛋白a2的表达及意义

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第8期26卷 787-789页

作者：卢仲谦高宜录陆建霞盐城市第一人民医院ICU 江苏盐城224001 南通大学附属医院神经外科江苏南通226001

目的：研究膜联蛋白a2在人脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的相关性，探讨其成为胶质瘤诊断标志物的可能性。方法：分别使用RT—PCR和免疫组化法检测胶质瘤和瘤周组织中膜联蛋白a2的mRNA及蛋白表达水平。结果：RT-PCR法显示胶质瘤中膜... 详细信息

目的：研究膜联蛋白a2在人脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的相关性，探讨其成为胶质瘤诊断标志物的可能性。方法：分别使用RT—PCR和免疫组化法检测胶质瘤和瘤周组织中膜联蛋白a2的mRNA及蛋白表达水平。结果：RT-PCR法显示胶质瘤中膜联蛋白a2mRNA的表达率和表达量远远高于瘤旁脑组织（P〈0．05），免疫组化的结果也显示胶质瘤中膜联蛋白a2的表达高于瘤旁组织（P〈0．05）。结论：胶质瘤中膜联蛋白a2表达明显高于瘤周脑组织，且和胶质瘤病理分级呈正相关，可作为胶质瘤诊断辅助指标之一。

关键词：胶质瘤膜联蛋白a2 逆转录聚合酶链反应法免疫组织化学法

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膜联蛋白a2通过PI3K/AKT信号通路调节视网膜新生血管形成的作用研究

膜联蛋白A2通过PI3K/AKT信号通路调节视网膜新生血管形成的作用研...

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作者：李辰跃中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究目的探讨Anxa2在RNV形成过程中所发挥的作用及机制,为治疗RNV相关疾病探索潜在的重要作用点。研究方法通过使用干扰Anxa2质粒和过表达Anxa2质粒包装为慢病毒并使其感染HRECs,将HRECs分为shNC组,sha2组,lenti-EGFP组以及lentia2组,... 详细信息

研究目的探讨Anxa2在RNV形成过程中所发挥的作用及机制,为治疗RNV相关疾病探索潜在的重要作用点。研究方法通过使用干扰Anxa2质粒和过表达Anxa2质粒包装为慢病毒并使其感染HRECs,将HRECs分为shNC组,sha2组,lenti-EGFP组以及lentia2组,而后在sha2组中加入1μl AKT激活剂SC79溶液,lentia2组中加入1μl LY294002溶液,分别构建SC79处理组和LY294002处理组。首先测定HRECs中的Anxa2的表达水平可否被有效干扰或过表达,并进一步检测各组HRECs中PI3K/AKT信号通路中主要蛋白磷酸化程度的变化,探索HRECs中Anxa2与PI3K/AKT信号通路的关系。利用体外实验来验证Anxa2通过调控PI3K/AKT信号通路对HRECs形成新生血管功能的影响。将96只健康C57BL/6J幼鼠分成对照组、OIR组和LY294002处理组,每组各32只。构建经典的OIR小鼠模型,OIR组于小鼠出生第7至11天,每天腹腔注射0.05ml PBS溶液。LY294002处理组于小鼠出生第7至11天,每天腹腔注射0.05ml PI3K抑制剂LY294002溶液,对照组无处理,利用凝集素GS-IB4荧光染色技术观察小鼠RNV情况;通过测定视网膜中Anxa2的表达水平,我们可以探索Anxa2在RNV发展过程中发挥的功能。研究结果同shNC组相比,sha2组中Anxa2的表达水平均降低,HRECs细胞处于的复制期数量、迁移量和细胞管状结构数量也明显减少(P=0.006;P=0.001;P=0.001),HRECs中PI3K/AKT信号通路的活性明显减弱,而干扰Anxa2后再加入AKT激活剂SC79,则PI3K/AKT信号通路的活性明显增强,HRECs细胞处于复制期的数量、迁移数量和管状结构数量明显回升(P=0.014;P=0.02;Pa2组中Anxa2的表达水平均增高,HRECs细胞处于复制期的数量、迁移数量和管状结构的数量得到了均明显增加(Pa2组中加入PI3K抑制剂后,HRECs中PI3K/AKT信号通路中的活性明显降低,HRECs细胞处于复制期的数量、迁移量和管状结构数量也明显回落(P=0.002;P=0.002;P=0.006)。实验构建的OIR小鼠模型视网膜新生血管迂曲扩张,血管分支走形杂乱,可见大面积无灌注区,造模成功率达87.5%,而LY294002处理组与OIR组相比,视网膜新生血管丛明显减少,异常分支严重程度明显降低,非灌注区面积明显减小。同时我们发现OIR组与LY294002处理组中Anxa2的表达水平明显提高(P膜联蛋白a2可能是通过激活HRECs细胞中PI3K/AKT信号通路活性来促进HRECs细胞的各项关键能力从而发挥作用,最终导致视网膜新生血管形成。

关键词：膜联蛋白a2 人视网膜血管内皮细胞视网膜新生血管氧诱导视网膜病变小鼠蛋白激酶B 胞内磷脂酰肌醇激酶磷酸化

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膜联蛋白a2在肝肺综合症大鼠血清致肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究

膜联蛋白A2在肝肺综合症大鼠血清致肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用...

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作者：曾静泸州医学院

学位级别：硕士

背景与目的：肝肺综合症（hepatopulmonary syndrome，HPS）是慢性肝病导致肺微血管病变引起动脉血氧合障碍的一种综合病征。肺血管重塑是肺微血管病变的主要病理变化，寻找调控HPS肺血管重塑的靶蛋白是目前研究的重点。膜联蛋白a2（ann... 详细信息

背景与目的：肝肺综合症（hepatopulmonary syndrome，HPS）是慢性肝病导致肺微血管病变引起动脉血氧合障碍的一种综合病征。肺血管重塑是肺微血管病变的主要病理变化，寻找调控HPS肺血管重塑的靶蛋白是目前研究的重点。膜联蛋白a2（annexin a2，ANXa2）是钙依赖的磷脂结合蛋白超家族成员，参与调节多种细胞的分化、增殖、迁移和凋亡，在多个生命过程中发挥重要作用。本研究拟探讨ANXa2在HPS大鼠血清致肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs）增殖中的作用，为阐明HPS肺血管重塑的分子机制及其防治提供依据。方法：原代培养大鼠PASMCs并鉴定后，随机分为2组：对照组（C组）和HPS组，分别用正常大鼠血清培养C组PASMCs，HPS大鼠血清培养HPS组PASMCs，两组PASMCs于血清中孵育24、48、72h。采用氚-胸腺嘧啶核苷掺入法（3H-TdR）、噻唑蓝比色法（MTT）检测大鼠PASMCs增殖变化，分别用RT-PCR和western blot检测大鼠PASMCs中ANXa2mRNA及其蛋白表达含量变化;运用RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术将ANXa2基因沉默，观察对HPS大鼠血清致PASMCs增殖的影响，并用western blot检测ERK1/2、NF-κB磷酸化水平。结果：HPS组PASMCs在血清孵育24、48、72h的3H-TdR以及MTT检测值明显高于C组各时间点，差异具有统计学意义（Pa2mRNA及其蛋白的表达，但与C组比较，HPS组PASMCs内ANXa2mRNA及其蛋白表达明显增加（Pa2表达后，再经HPS大鼠血清孵育，PASMCs MTT以及3H-TdR掺入量明显低于对照组（Pa2表达后，HPS大鼠血清致ERK1/2、NF-κB磷酸化明显低于对照组（Pa2介导促增殖信号ERK1/2、NF-κB活性改变可能是PASMCs异常增殖的机制之一。

关键词：增殖肺动脉平滑肌细胞膜联蛋白a2 肝肺综合症

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膜联蛋白a2与恶性肿瘤发展进程的关系

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细胞生物学杂志 2008年第3期30卷 307-311页

作者：章蔼然潘宁侯颖春陕西师范大学生命科学学院西安710062

膜联蛋白a2(annexin a2,ANXa2)是一种钙离子介导的磷脂结合特性的蛋白质,属于膜联蛋白家族成员,广泛分布于胞核、胞浆及细胞质膜外表面。它主要表达在人体内皮细胞、单核/巨噬细胞、骨髓细胞和某些肿瘤细胞中。ANXa2在细胞内参与膜形成... 详细信息

膜联蛋白a2(annexin a2,ANXa2)是一种钙离子介导的磷脂结合特性的蛋白质,属于膜联蛋白家族成员,广泛分布于胞核、胞浆及细胞质膜外表面。它主要表达在人体内皮细胞、单核/巨噬细胞、骨髓细胞和某些肿瘤细胞中。ANXa2在细胞内参与膜形成、膜转运、胞吞、胞吐、细胞增殖、信号转导、分化及凋亡等一系列重要的生命过程。近年来的研究表明其表达水平在肿瘤组织中有显著变化,并与肿瘤的发生、发展、浸润及转移密切相关。现着重就ANXa2与肿瘤发展、浸润、转移等进程的相关研究进展进行综述。

关键词：膜联蛋白a2 肿瘤肿瘤发生侵袭和转移

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膜联蛋白a2调控人脑胶质瘤细胞侵袭迁移的研究

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中华实验外科杂志 2018年第3期35卷 471-474页

作者：李永明李海洋赵亚军秦涛河南省人民医院神经外科郑州450003 河南省人民医院肝胆外科郑州450003

目的观察膜联蛋白a2（ANXa2）对人脑胶质瘤细胞侵袭迁移的调控作用。方法将ANXa2小干扰RNA（siRNA）和siRNA control转染到脑胶质瘤细胞U87中记为ANXa2 siRNA组和siRNA-NC组，同时设置Control组，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞... 详细信息

目的观察膜联蛋白a2（ANXa2）对人脑胶质瘤细胞侵袭迁移的调控作用。方法将ANXa2小干扰RNA（siRNA）和siRNA control转染到脑胶质瘤细胞U87中记为ANXa2 siRNA组和siRNA-NC组，同时设置Control组，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中ANXa2 mRNA，Western blot检测细胞中ANXa2蛋白表达，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白表达。结果siRNA-NC组细胞中ANXa2 mRNA（0.85±0.08）和蛋白（0.72±0.09）水平与Control组（mRNA和蛋白水平分别为0.87±0.05、0.75±0.07）比较差异无统计学意义（P值分别为0.258与0.751）。siRNA-NC组细胞存活率[（98.87±11.74）%，P＝0.695]、侵袭数目[（40.65±4.85）个，P＝0.410]、迁移数目[（66.87±7.64）个，P＝0.278]及E-cadherin（0.70±0.09，P＝0.320）、MMP-2蛋白（0.29±0.02，P＝0.196）水平与Control组比较差异无统计学意义。ANXa2 siRNA组细胞存活率[（52.98±5.61）%，P＝0.006]、侵袭数目[（23.22±2.25）个，P＝0.002]、迁移数目[（41.68±3.87）个，P＝0.002]、MMP-2蛋白（0.11±0.03，P＝0.001）水平与Control组比较明显降低，E-cadherin蛋白（1.14±0.11，P＝0.002）水平与Control组（0.72±0.06）比较明显升高。结论干扰ANXa2表达能够抑制脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移，降低MMP-2表达水平，促进E-cadherin表达。

关键词：脑胶质瘤侵袭膜联蛋白a2 迁移

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膜联蛋白a2促进类风湿关节炎发展的作用与机制研究

膜联蛋白A2促进类风湿关节炎发展的作用与机制研究

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作者：易君第二军医大学

学位级别：硕士

研究目的:在血管相关性疾病中,膜联蛋白a2(Annexin a2,AXⅡ)被认为是一种诱导新生血管形成的重要介质。对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)而言,新生血管网形成的血管翳在其疾病的发展过程中发挥至关重要的作用,它的侵蚀作用是引... 详细信息

研究目的:在血管相关性疾病中,膜联蛋白a2(Annexin a2,AXⅡ)被认为是一种诱导新生血管形成的重要介质。对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)而言,新生血管网形成的血管翳在其疾病的发展过程中发挥至关重要的作用,它的侵蚀作用是引起关节骨质不可逆性破坏、关节畸形与功能障碍的病理基础。目前,在临床上并没有有效的措施可以完全治愈RA。虽然关于RA的研究很多,但是AXⅡ和血管翳形成之间的相关性还没有被报道。本研究的目的是为了确定AXⅡ是否有助于RA中的血管翳形成,并探讨它所涉及的具体相关机制。研究方法:本研究通过查找基因表达库基因芯片的数据,比较RA患者与骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者和正常健康人群滑膜组织中AXⅡ和膜联蛋白a2受体(Annexin a2 receptor,AXⅡR)的表达。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RA患者与普通炎症性疾病患者血清中可溶性AXⅡ的表达水平。接下来,利用DBA/1小鼠建立胶原诱导的关节炎(collagen induced-arthritis,CIA)动物模型,通过外源性注射AXⅡ的方法,观察AXⅡ在关节炎发生、发展中的作用。再通过比较CIA小鼠的足掌厚度、关节评分与关节炎的发病率,作为衡量AXⅡ影响关节炎严重程度的指标。收集小鼠关节组织,利用苏木精—伊红(H&E)染色法观察炎性关节组织的病理改变,运用影像学技术X射线和显微CT比较各组关节骨组织的破坏情况。为了检测新生血管形成的变化,本研究利用免疫组织化学(IHC)和免疫荧光(IF)分析微血管内皮细胞表面标记物——CD31的表达,并进行CD31定量分析。CD31表达量的多少代表新生血管形成的密度高低。在细胞学研究中,一方面,利用质粒转染技术,通过抑制人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)上AXⅡR mRNA的表达,观察AXⅡ/AXⅡR与刺猬(Hedgehog,HH)信号通路之间的关系;另一方面,将HUVEC与HH信号特异性抑制剂——环杷明(cyclopamine,CYC)共培养,以确定HH信号与细胞增殖之间的关系。抑制AXⅡR表达后,利用qRT-PCR技术比较HH信号转导途径的关键分子和促血管生成因子的表达差异。研究结果:与OA患者和正常健康人群相比较,RA患者滑膜组织中AXⅡ和AXⅡR的表达增高,并且RA患者血清中可溶性AXⅡ的表达水平也显著高于普通炎症性疾病患者。在CIA动物模型中,利用AXⅡ干预的关节炎小鼠的关节肿胀程度增高,新生血管形成显著增多。细胞实验显示,高表达的AXⅡ通过结合AXⅡR促进HUVEC的增殖。进一步的机制研究表明,AXⅡ能够上调HH关键分子Ihh与Gli的表达;抑制AXⅡR的表达后,Ihh、Ptc、Smo与Gli的表达显著下调,并且HH信号下游的促血管生成因子基质金属蛋白酶-2(MMP-2),血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素-2(Ang-2)的表达也下调。结论:与普通炎症性疾病患者和健康人群相比较,AXⅡ与AXⅡR在RA患者中高表达。本研究第一次明确观察到AXⅡ能够促进CIA的发展,尤其是在血管翳形成过程中发挥着不可替代的核心作用。AXⅡ发挥的这一核心作用是通过结合AXⅡR后激活并调节HH信号及其下游VEGF,Ang-2和MMP-2的表达,引起HUVEC增殖,最终促进新生血管生成。因此,研究AXⅡ的作用对于了解RA的发展具有指导意义,抑制AXⅡ的效应有可能为治疗RA提供一个新的指导措施。

关键词：膜联蛋白a2 类风湿关节炎膜联蛋白a2受体刺猬信号通路血管生成

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下调膜联蛋白a2基因转录对肝癌细胞生物学行为的影响

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中华肝脏病杂志 2014年第8期22卷 620-624页

作者：张海健姚敏钱琦时运李景源陈心王司晔姚登福南通大学附属医院临床医学研究中心江苏省南通市226001

目的观察下调膜联蛋白a2（annxin a2，ANXa2）表达对肝癌（HCC）细胞生物学行为的影响。方法以定量PCR分析不同肝癌细胞ANXa2 mRNA转录水平，以Western blot分析ANXa2表达；以免疫荧光检测ANXa2在细胞内表达和分布；以碘化丙啶染色和流... 详细信息

目的观察下调膜联蛋白a2（annxin a2，ANXa2）表达对肝癌（HCC）细胞生物学行为的影响。方法以定量PCR分析不同肝癌细胞ANXa2 mRNA转录水平，以Western blot分析ANXa2表达；以免疫荧光检测ANXa2在细胞内表达和分布；以碘化丙啶染色和流式细胞术分析细胞周期；以CCK-8试剂盒分析细胞增殖潜能；以transwell实验分析其侵袭潜能；以创伤愈合试验分析其迁移潜能；以裸鼠移植瘤模型分析其致瘤潜能。两样本均数比较用t检验，率的比较用x^2检验，等级资料比较用秩和检验，多样本均数的两两比较采用口检验，组间差异用单因素方差分析。结果高侵袭潜能MHCC97-H细胞ANXa2表达明显高于HepG2、SMMC-7721和SMMC-7402和L02细胞；特异性shRNA沉默ANXa2效率在80％以上；免疫荧光显示ANXa2定位于细胞膜和细胞质，胞核少见；下调ANXa2表达明显下调HCC细胞s期比例（口=8．001，P=0．002），抑制细胞增殖（q=17．140，P＜0．01）、迁移潜能（q=12．808，P＜0．01）和侵袭潜能（q=9．069，P=0．002）；裸鼠移植瘤模型显示干扰组瘤重下降（g=11．968，P＜0．01），瘤体中ANXa2表达下调（Z=2．530，P=0．011）。结论下调ANxa2基因转录显著影响肝癌细胞的生物学行为，可望成为肝癌分子治疗的潜在靶目标。

关键词：癌肝细胞膜联蛋白a2 RNA 小发夹生物学行为

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膜联蛋白a2在人视网膜血管内皮细胞中的作用与机制研究

膜联蛋白A2在人视网膜血管内皮细胞中的作用与机制研究

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作者：赵子畅中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

研究目的探讨膜联蛋白a2(ANXa2)在人视网膜血管内皮细胞(HRECs)中的作用及机制,为视网膜新生血管相关疾病的预防和治疗寻找新靶点。研究方法选取64只健康C57BL/6J小鼠,随机分为对照组和实验组各32只,实验组利用高氧诱导法构建经典的氧... 详细信息

研究目的探讨膜联蛋白a2(ANXa2)在人视网膜血管内皮细胞(HRECs)中的作用及机制,为视网膜新生血管相关疾病的预防和治疗寻找新靶点。研究方法选取64只健康C57BL/6J小鼠,随机分为对照组和实验组各32只,实验组利用高氧诱导法构建经典的氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型,对照组无处理,利用凝集素GS-IB4荧光染色技术观察小鼠视网膜新生血管(RNV)情况,利用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,验证OIR小鼠模型构建是否成功;利用Western Blot,RT-PCR,检测小鼠视网膜中ANXa2的表达情况,以验证ANXa2在体内视网膜新生血管病变中的作用。利用干扰ANXa2组质粒(对照组:shNC,实验组:sha2)和过表达ANXa2组质粒(对照组:lenti-EGFP,实验组:lenti-a2)包装为慢病毒感染人视网膜血管内皮细胞(HRECs),利用Western Blot和RT-PCR检测在HRECs中是否成功干扰和过表达ANXa2。通过EdU细胞增殖实验、Transwell细胞迁移实验和Matrigel基质胶管样形成实验检测ANXa2对HRECs形成新生血管功能的影响。采用流式细胞仪检测ANXa2对HRECs细胞周期的影响,并用Western Blot检测一系列细胞周期相关蛋白的表达水平。利用基因芯片技术分析ANXa2在基因水平调控HRECs的分子表达谱差异,用RT-PCR验证基因芯片中表达较为稳定分子,利用Western Blot和核蛋白提取技术检测头帕肿瘤综合征蛋白(CYLD)、磷酸化核因子κB抑制蛋白(p-IκBα)、核因子κB(NFκB)亚基p65蛋白的表达水平,探讨ANXa2对CYLD和NFκB信号通路的影响。研究结果本实验构建的OIR小鼠模型视网膜与正常小鼠视网膜相比,新生血管迂曲扩张分布杂乱,血管分层不清且HIF-1α的基因和蛋白表达水平明显升高(mRNA t=25.57,Pa2的基因和蛋白表达水平明显提高(mRNA t=26.58,Pa2后ANXa2的基因和蛋白表达水平均降低(mRNA t=5.248,P=0.0063),过表达ANXa2后ANXa2的表达水平均升高(mRNA t=28.95,Pa2后HRECs细胞增殖量、细胞迁移量和细胞管状结构明显减少(t=10.23,P=0.0005;t=11.27,P=0.0004;t=15.37,P=0.0001),而过表达ANXa2后其三者量均增加(t=3.21,P=0.0326;t=20.19,Pa2后处于G1期的细胞数量增加,S期细胞数量减少(t=5.01,P=0.0074;t=4.51,P=0.0107),而过表达ANXa2后处于G1期的细胞数量减少,S期细胞数量增加(t=4.275,P=0.0129;t=4.915,P=0.0080);细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4和CDK6的蛋白在干扰ANXa2后表达水平减少(t=2.835,P=0.0471;t=3.434,P=0.0264;t=7.317,P=0.0019),过表达ANXa2后表达水平增加(t=4.147,P=0.0143;t=4.009,P=0.016;t=6.710,P=0.0026),而CyclinA1、CyclinB1、CyclinE1和CDK2的表达水平没有明显变化。同阴性对照组相比,干扰ANXa2后CYLD的基因和蛋白表达水平均升高(t=8.44,P=0.0011;t=9.848,P=0.0006),过表达ANXa2后CYLD的表达水平均降低(t=12.11,P=0.0003,t=6.054,P=0.003)。由于CYLD为NFκB信号通路的主要负向调节因子,我们检测了与NFκB信号通路有关的蛋白表达,发现同对照组相比,干扰ANXa2后IκBα磷酸化和核内p65的蛋白表达量均减少(t=7.29,P=0.0019;t=4.901,P=0.008),过表达ANXa2后两者表达量均增多(t=3.474,P=0.0255;t=6.069,P=0.0037)。研究结论膜联蛋白a2能够促进人视网膜血管内皮细胞的增殖、迁移和管样形成,可能是通过调节HRECs细胞周期中G1-S期的转化和抑制去泛素化酶CYLD的活性,激活NFκB信号通路来发挥作用。

关键词：膜联蛋白a2 人视网膜血管内皮细胞视网膜新生血管细胞周期氧诱导视网膜病变头帕肿瘤综合征蛋白 NFκB

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