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枸橼酸铁铵对小鼠黑质多巴胺能神经元电活动影响

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青岛大学学报(医学版) 2024年

作者：谢如意修民霞石丽敏青岛大学医学部基础医学院生理学与病理生理学系

目的探讨枸橼酸铁铵(FAC)对小鼠黑质多巴胺能神经元电活动影响。方法取出生15～20 d的C57BL/6小鼠制备脑片,应用全细胞膜片钳技术观察FAC对黑质多巴胺能神经元自发放电活动及膜电位的影响。结果小鼠黑质脑片置于FAC溶液(100μmol/L)... 详细信息

目的探讨枸橼酸铁铵(FAC)对小鼠黑质多巴胺能神经元电活动影响。方法取出生15～20 d的C57BL/6小鼠制备脑片,应用全细胞膜片钳技术观察FAC对黑质多巴胺能神经元自发放电活动及膜电位的影响。结果小鼠黑质脑片置于FAC溶液(100μmol/L)中5 min后,多巴胺能神经元自发放电频率明显降低(t=5.533,P<0.01)。10 min后,多巴胺能神经元自发放电频率则显著减慢(t=7.297,P<0.001)。神经元膜电位明显向超级化方向移动(t=4.227,P<0.01)。结论 FAC能够抑制正常小鼠黑质多巴胺能神经元的电活动。

关键词：帕金森病铁多巴胺能神经元膜片钳术小鼠,近交C57BL

一种检测细胞膜离子通道功能的新技术——膜片钳术

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广州中医药大学学报 2001年第3期18卷 275-278页

作者：周丽萍罗荣敬广州中医药大学 99级硕士研究生广州510405

简要介绍一种新的电生理技术——膜片钳术,对其概念、产生、原理、方法及其应用进行综述,并展望其应用于中药药理研究及中医基础理论研究的前景。

关键词：膜片钳术电生理学中医基础理论研究中药药理学细胞膜离子通道功能

大鼠耳蜗切片螺旋神经元的红外可视膜片钳技术

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第6期42卷 457-460页

作者：查定军林颖乔莉王志明刘涛李云庆邱建华第四军医大学西京医院耳鼻咽喉头颈外科西安710032 第四军医大学基础部解剖学教研室梁銶琚脑研究中心

目的建立大鼠离体耳蜗切片技术,结合红外可视膜片钳技术探讨耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)的电生理特性。方法 0～2日龄、3～6日龄及7～14日龄的健康 SD 大鼠各10只,快速制作耳蜗切片,应用红外微分干涉相差技术,结合膜片... 详细信息

目的建立大鼠离体耳蜗切片技术,结合红外可视膜片钳技术探讨耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)的电生理特性。方法 0～2日龄、3～6日龄及7～14日龄的健康 SD 大鼠各10只,快速制作耳蜗切片,应用红外微分干涉相差技术,结合膜片钳记录,观察 SGN 的基本电生理特性,并分析影响耳蜗切片制作质量及膜片钳记录成功的因素。结果 3～6日龄大鼠耳蜗切片的成功率最高,每只耳蜗可制备2～4张切片;保持部分颅骨与耳蜗的连接及耳蜗骨壳的完整是影响切片成功的关键,切片时蜗轴与刀片的位置及切片取材的时间也是影响切片质量和细胞活性的重要因素。红外可视膜片钳技术可准确找到状态良好的 SGN,有助于对封接过程的判断。全细胞记录 SGN静息膜电位平均为(-45.6±5.3)mV(±s,n=52),可记录到 Na^+和 K^+电流。结论耳蜗切片技术能够较完整地保持耳蜗结构以及各种构成细胞的活性及其相互之间的联系,红外可视膜片钳技术具有实时、直视的特点,可操作性强,二者结合能为深入研究 SGN 的电生理特性及听觉传导机制提供良好的手段和平台。

关键词：螺旋神经节显微切片术膜片钳术

可视法脑片膜片钳技术观察大鼠前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体的电生理特性

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2007年第1期42卷 48-52页

作者：张宇孔维佳刘邦华郭长凯孙大为夏交朱云张建华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科武汉430022

目的建立大鼠前庭内侧核脑片可视法膜片钳实验技术,探讨前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体(muscarinic cholinergic receptor,M 受体)介导电流的生物学特性。方法选用15只Wistar 大鼠用于制备前庭内侧核脑片,应用红外微分干涉相差(inf... 详细信息

目的建立大鼠前庭内侧核脑片可视法膜片钳实验技术,探讨前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体(muscarinic cholinergic receptor,M 受体)介导电流的生物学特性。方法选用15只Wistar 大鼠用于制备前庭内侧核脑片,应用红外微分干涉相差(infrared differential interferencecontrast,IR-DIC)技术结合电荷耦合式感光成像(charge coupled device-camera,CCD-camera)系统,在可视法膜片钳全细胞记录模式下对20个正常功能状态的前庭内侧核神经元 M 受体的通道电流性质进行观察和分析。结果可视法脑片膜片钳技术可对神经元直接进行准确定位和功能状态的筛选。前庭内侧核神经元给予毒草碱后电流-电压(I-V)曲线斜率增加,毒蕈碱引发效应电流的反转电位为(-88.4±4.9)mV(±s,下同),表明 M 受体去极化效应是由钾电导的减少所介导;M 受体介导电流的电压敏感性测试显示:毒蕈碱引发的效应曲线呈线性关系,反转电位为(-86.7±3.5)mV,提示毒蕈碱所阻断的钾电流为非电压敏感性的漏钾电流。结论可视法脑片膜片钳实验技术克服了盲法脑片膜片钳技术的缺陷,提高了神经元封接的成功率。通过对前庭内侧核神经元 M 受体通道电流性质的分析,进一步揭示毒蕈碱样胆碱能机制的兴奋性调节作用,为临床抗胆碱药物的应用提供新思路。

关键词：前庭神经核受体,毒蕈碱膜片钳术

膜片钳-激光扫描共聚焦显微镜同步实时控制系统的建立及其在心肌细胞膜钙离子通道研究中的应用

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第二军医大学学报 2012年第2期33卷 123-129页

作者：刘红王晔汤莹沈亚峰杨勇骥雷长海第二军医大学网络信息中心上海200433 第二军医大学基础部生物物理学教研室上海200433

目的建立膜片钳-激光扫描共聚焦显微镜同步实时控制系统,并将其应用于体外心肌细胞膜钙离子通道的研究,验证其应用效果。方法通过在激光扫描共聚焦显微镜上加装膜片钳装置,采用计算机自动控制技术建立膜片钳与激光扫描共聚焦显微镜的同... 详细信息

目的建立膜片钳-激光扫描共聚焦显微镜同步实时控制系统,并将其应用于体外心肌细胞膜钙离子通道的研究,验证其应用效果。方法通过在激光扫描共聚焦显微镜上加装膜片钳装置,采用计算机自动控制技术建立膜片钳与激光扫描共聚焦显微镜的同步实时控制系统;将建立好的装置应用于观察体外雄性大鼠心肌细胞膜钙离子通道,并分析观察结果。结果成功建立膜片钳-激光扫描共聚焦显微镜同步实时控制系统;当刺激心肌细胞时,激光扫描共聚焦显微镜-膜片钳同步实时控制系统在通过激光扫描共聚焦显微镜观察钙火花的同时可通过膜片钳记录心肌细胞膜钙离子通道电流信号。定量分析结果表明相邻两个钙火花之间的时间间距分别为(10.055±0.021)、(10.079±0.021)、(10.087±0.021)s,符合膜片钳设定的刺激间隔(10 s);单个钙火花在空间上均局限于2μm直径范围,在时间上平均经历了约30 ms,从出现至达到最高浓度平均需10 ms,从达到最高浓度到消失平均需20 ms,与钙火花理论吻合。结论成功建立膜片钳-激光扫描共聚焦显微镜同步实时控制系统,在心肌细胞实现了在利用膜片钳进行全细胞记录观测和测定钙离子通道电流及其开闭时程的同时,利用激光扫描共聚焦显微镜获得了钙火花的显微结构形态图像,测定钙离子的位点变化,有助于进一步了解质膜钙离子通道的内部机制。

关键词：膜片钳术共焦显微镜检查同步控制钙通道

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新生大鼠海马神经元的急性分离与膜片钳技术

中国临床康复 2006年第46期10卷 132-134页

作者：张艳朱峰李明华张利彬杜爱林李东亮新乡医学院科技处机能学研究室河南省新乡市453003 新乡医学院第一附属医院普通外科河南省新乡市453003 新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南省新乡市453003

目的:获得适用于膜片钳技术的单个海马神经元。方法:实验于2005-09/11在新乡医学院机能学研究室完成。应用酶消化及机械分离法,急性分离出生3～6d的SD大鼠海马神经元,在倒置显微镜下,选取已贴壁直径约10～15μm的锥体形神经元观察其急... 详细信息

目的:获得适用于膜片钳技术的单个海马神经元。方法:实验于2005-09/11在新乡医学院机能学研究室完成。应用酶消化及机械分离法,急性分离出生3～6d的SD大鼠海马神经元,在倒置显微镜下,选取已贴壁直径约10～15μm的锥体形神经元观察其急性分离效果和细胞活性状态。电生理学的鉴定采用全细胞膜片钳的模式记录电流反应,首先在大鼠海马CA1区锥体神经元诱发出内向离子流。在大鼠海马CA1锥体神经元诱发出内向离子流后,通过程控灌流系统在细胞外液中加1μmol/L的钠通道阻断剂河豚毒素灌流同一神经元,记录内向离子流的变化。结果:①该法可获得形态良好的单个海马神经元,海马锥体细胞具有锥形胞体穴10～20μm雪和厚墩的顶树突特征。活性较好的海马神经元熏胞体呈三角形或椭圆形,表面光亮,细胞膜完整、清晰的,立体感较强。一般有1个较长的顶树突和2个以上较短的基树突。②利用膜片钳技术内向电流被诱发,用1μmol/L河豚毒素完全阻断该电流,说明该内向电流为钠电流。结论:该法可获得形态和生理特性良好的单个海马神经元,证实该方法适用于海马神经元膜片钳研究,对深入探讨药物和毒物对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要价值。

关键词：海马神经元膜片钳术钠通道

听觉皮质-丘脑兴奋性突触传递的盲法膜片钳研究

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中国临床康复 2005年第48期9卷 1-3页

作者：赵明亮刘国龙周光纪李雪松熊鹰解放军第三军医大学基础部生理学教研室重庆市400038

目的:制备包含大鼠听皮质与内侧膝状体及两者间功能联系的脑片,采用盲法膜片钳全细胞记录技术,对听皮质-内侧膝状体兴奋性突触传递的生理和药理学特性进行实验观察。方法:实验于2004-04/06在第三军医大学基础部生理学教研室完成。实验... 详细信息

目的:制备包含大鼠听皮质与内侧膝状体及两者间功能联系的脑片,采用盲法膜片钳全细胞记录技术,对听皮质-内侧膝状体兴奋性突触传递的生理和药理学特性进行实验观察。方法:实验于2004-04/06在第三军医大学基础部生理学教研室完成。实验动物选择出生后7～15d健康SD大鼠21只,制备与水平方向呈15°的600μm的内侧膝状体脑片,采用膜片钳全细胞记录。电极内液成分及其浓度(mmol/L)为:甲磺酸铯120、氯化镁2、羟乙基哌嗪乙磺酸10、乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸0.5、三磷酸腺苷2、QX-3142;灌流液中常规加入γ-氨基丁酸A受体拮抗剂荷包牡丹碱(10μmol/L)。获得内侧膝状体神经元全细胞模式后,在电流钳或电压钳模式下,双极钨丝刺激听皮质颗粒下层(Ⅴ～Ⅵ层),给予时程为100μs的方波刺激,在内侧膝状体分离记录兴奋性突触后电位和兴奋性突触后电流;观察N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂D,L-2-氨基-5磷酸基戊酸(50μmol/L)和α-氨基羟甲基恶唑丙酸受体拮抗剂氰基-2-硝基喹啉-2,3-二酮(20μmol/L)对兴奋性突触后电流的影响。结果:①观察15例内侧膝状体神经元对皮层刺激的反应,其平均膜静息电位为(49±13.5)mV,膜输入阻抗为(432±109)MΩ。电流钳模式下,刺激听皮质,可在80%(12/15)的内侧膝状体神经元记录到兴奋性突触后电位,其幅度与刺激强度在一定范围内呈正相关,在3例记录中采用了不含QX-314的电极内液,可以观察到当刺激达到阈值水平,在兴奋性突触后电位的波峰上爆发了动作电位。②选择电压钳模式;电压钳下,刺激听皮质后可在内侧膝状体神经元记录到兴奋性突触后电流,钳制电位为-70mV时,电流是内向的,加入氰基-2-硝基喹啉-2,3-二酮后,兴奋性突触后电流的幅度显著下降,进一步加入D,L-2-氨基-5磷酸基戊酸后,兴奋性突触后电流几乎完全消失。结论:600μm的旁水平位脑片包含了内侧膝状体与听皮质以及两者之间的功能性纤维联系;刺激听皮质,可在内侧膝状体记录到兴奋性突触后电位和兴奋性突触后电流;兴奋性突触后电流可以被D,L-2-氨基-5磷酸基戊酸和氰基-2-硝基喹啉-2,3-二酮所阻断。听皮质-内侧膝状体突触的兴奋性传递以谷氨酸为神经递质,主要由α-氨基羟甲基恶唑丙酸和N-甲基-D-天冬氨酸受体两种受体介导。

关键词：听觉皮质膝状体膜片钳术

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细胞膜片技术在组织工程中的应用与研究进展

中国组织工程研究 2016年第11期20卷 1630-1636页

作者：周术奎张楷乐王营傅强上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科上海市200233

背景:细胞膜片技术无须支架材料和酶消化,通过刺激细胞外基质分泌形成致密膜片组织,能有效地修复组织缺损和改善器官功能。目的技术和新进展,为相关基础和临床研究:回顾近年来国内外细胞膜片技术应用于组织工程领域的新提供新的思路。方... 详细信息

背景:细胞膜片技术无须支架材料和酶消化,通过刺激细胞外基质分泌形成致密膜片组织,能有效地修复组织缺损和改善器官功能。目的技术和新进展,为相关基础和临床研究:回顾近年来国内外细胞膜片技术应用于组织工程领域的新提供新的思路。方法:由第一作者检索CNKI全文数据库、万方数据库及PubM ed数据库2010年1月至2015年7月的相关文献,检索关键词为"细胞膜片,组织工程;cell sheet,tissue engineering"。结果与结论:与传统细胞膜片技术相比,支架材料与细胞膜片技术相整合用于重建和修复坚韧组织器官,多层细胞膜片相互层叠形成三维组织修复软组织器官等新技术不断涌现。与单层细胞膜片相比,通过相同或不同的细胞片层叠而成的3D细胞膜片具有更强组织再生功能,而且在体外就能构建出理想的靶组织模型。利用支架材料复合细胞膜片技术来提高复合物机械强度和减少细胞流失,并用于牙齿、骨与软骨等机体坚韧组织修复取得较大进展。目前细胞膜片技术仍主要处于实验室研究阶段,临床应用研究不多,期待有更多的创新性手段融入到细胞膜片技术上来。

关键词：膜片钳术再生医学新生血管化,生理性组织构建组织工程细胞膜片技术血管化国家自然科学基金

海马脑片锥体神经元钙离子通道动力学特性的盲法膜片钳研究(英文)

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中国临床康复 2003年第22期7卷 3056-3058页

作者：刘振伟李凤敏刘传缋解放军军事医学科学院毒物药物研究所北京市100850 天津医科大学总医院康复科天津市300052

目的观察大鼠海马脑片盲法全细胞记录技术研究CA1区锥体神经元电压门控性Ca2+通道的动力学特征,为在海马脑片上进行神经科新药开发提供依据。方法选用出生20～30d的Wistar雄性大鼠20只,断头取脑,将海马切为厚400μm的薄片,解剖镜下选CA... 详细信息

目的观察大鼠海马脑片盲法全细胞记录技术研究CA1区锥体神经元电压门控性Ca2+通道的动力学特征,为在海马脑片上进行神经科新药开发提供依据。方法选用出生20～30d的Wistar雄性大鼠20只,断头取脑,将海马切为厚400μm的薄片,解剖镜下选CA1区锥体神经元细胞线行盲法全细胞记录。结果大鼠海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性Ca2+通道电流具有如下特点:①激活的阈电位偏低,为(-49±9)mV,范围为-65～-30mV(n=23)。②衰减时间常数τ值较大,且变化范围大(100～700ms)(n=12),并且衰减具有Ca2+电流幅值的依赖性。③稳态失活呈现电压依赖性,半失活电压为(-55±10)mV,斜率因子为(5.3±0.9)(n=10)。④当细胞外Ca2+浓度为2.5mmol/L时,Ca2+通道的反转电位为(55±13)mV(n=10)。⑤尾电流成分较为单一,不表现电压依赖性。另外,Ca2+电流对戊脉胺及双氢吡啶类化合物硝苯地平均不敏感。结论海马脑片CA1区锥体神经元上的Ca2+通道主要以N型为主。

关键词：神经元钙离子通道动力学特性大鼠 CA1区膜片钳术神经科药物海马脑片