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新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体结合疫苗的制备及其免疫原性评价

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中国生物制品学杂志 2024年第7期37卷 795-800页

作者：姚永鹏张子昌许可朱慧李松王基宏魏鑫黄杰成都康华生物制品股份有限公司四川成都611130

目的制备新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体(cross-reacting material 197,CRM197)结合疫苗,并评价其免疫原性,以期为流行性脑脊髓膜炎的防控奠定基础。方法用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino p... 详细信息

目的制备新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体(cross-reacting material 197,CRM197)结合疫苗,并评价其免疫原性,以期为流行性脑脊髓膜炎的防控奠定基础。方法用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)分别将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基活化为氰基,并以己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)作为连接剂与活化多糖通过氰酸酯连接,生成裸露酰肼基的多糖-ADH衍生物,再通过4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐[4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl morpholinium chloride,DMTMM]与CRM197生成酰胺键偶联,得到各单价结合物原液,并进行相关检测。将单价结合物原液按一定比例混合后,分别加入3种冻干保护剂(蔗糖溶液、乳糖溶液及蔗糖+甘露醇溶液),经冻干,制备3种ACYW135-CRM197结合疫苗。将制备的疫苗于0、14 d经雄性NIH小鼠背部皮下注射,0.2 mL/只,每组10只,并于初次免疫后21 d,经小鼠颌下静脉采血,分离血清,ELISA法检测特异性抗体水平。结果 A、C、Y、W135-CRM197单价结合物原液的检测结果均符合质量标准。ACYW135-CRM197疫苗成品可与各群多糖抗血清形成明显沉淀线;平均分子量均在1 680 000~5 230 000范围内。3种ACYW135-CRM197结合疫苗的抗A、C、Y、W135群多糖IgG抗体阳转率均为100%;ACYW135-CRM197(蔗糖)、ACYW135-CRM197(乳糖)和ACYW135-CRM197(蔗糖+甘露醇)组比较,差异均无统计学意义(t=0.249~1.157,P均> 0.05)。结论本研究制备了新型ACYW135-CRM197结合疫苗,且该疫苗在小鼠体内具有良好的免疫原性。

关键词：脑膜炎球菌白喉毒素无毒变异体结合疫苗免疫原性

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B群脑膜炎球菌外膜囊泡疫苗研究进展

中华预防医学杂志 2022年第9期56卷 1333-1340页

作者：岳萌萌徐娟徐丽邵祝军中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206 南京医科大学公共卫生学院南京211166

B群脑膜炎球菌疫苗的研发包括外膜囊泡(OMV)疫苗和重组蛋白疫苗两条技术路线, 本文拟就B群脑膜炎球菌OMV疫苗的研发、生产和应用进展进行综述, 以期为我国B群脑膜炎球菌OMV疫苗的研发提供参考。

关键词：脑膜炎球菌疫苗 B群外膜囊泡

A群C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗的稳定性

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中国新药杂志 2022年第10期31卷 950-954页

作者：穆姗姗王振业姜志毅陈中伟刘晓磊孙述学北京成大天和生物科技有限公司北京101111

目的:评价以白喉毒素无毒变异体CRM197为载体蛋白的A群C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称Nm AC-Hib联合疫苗)于不同温度条件下存放的稳定性。方法:将3批Nm AC-Hib联合疫苗分别放置于2℃~8℃,20℃~25℃,37℃条件下,... 详细信息

目的:评价以白喉毒素无毒变异体CRM197为载体蛋白的A群C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称Nm AC-Hib联合疫苗)于不同温度条件下存放的稳定性。方法:将3批Nm AC-Hib联合疫苗分别放置于2℃~8℃,20℃~25℃,37℃条件下,定期取样,进行A群、C群、Hib多糖含量及游离多糖含量的测定,以及进行外观检查、pH值和水分含量的测定,在部分时间点同时进行鉴别试验、细菌内毒素检查、渗透压摩尔浓度、无菌检查、异常毒性及效力试验。结果:Nm AC-Hib联合疫苗于2℃~8℃保存27个月、20℃~25℃放置12个月及37℃放置6个月后,3种抗原的含量均较稳定,其他各项检测指标均符合企业内控标准。结论:以白喉毒素无毒变异体CRM197为蛋白载体的Nm AC-Hib联合疫苗具备良好的长期稳定性和热稳定性。

关键词：脑膜炎球菌 b型流感嗜血杆菌联合疫苗 CRM197 稳定性

脑膜炎球菌结合疫苗制备过程中各阶段产物的细菌内毒素含量分析

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中国新药杂志 2014年第11期23卷 1252-1259页

作者：吴兵于旭博刘方蕾孔素娟袁菲范锋锋李燕婷宣俊文赵庆萱吕存女谢贵林赵志强兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046

目的:以细菌内毒素检查法(动态浊度法)对脑膜炎球菌结合疫苗生产过程中各阶段产物进行细菌内毒素含量分析,观察疫苗生产过程细菌内毒素来源及其变化,为今后疫苗生产过程中细菌内毒素质量控制提供依据。方法:在对供试品处理和方法的标准... 详细信息

目的:以细菌内毒素检查法(动态浊度法)对脑膜炎球菌结合疫苗生产过程中各阶段产物进行细菌内毒素含量分析,观察疫苗生产过程细菌内毒素来源及其变化,为今后疫苗生产过程中细菌内毒素质量控制提供依据。方法:在对供试品处理和方法的标准化的基础上,以《中华人民共和国药典》2010年版三部所录动态浊度法对疫苗不同生产阶段的过程产物和疫苗成品进行全面监控。结果:影响脑膜炎球菌结合疫苗细菌内毒素含量的主要来源为原料多糖和载体蛋白质,疫苗制备过程可以很好控制细菌内毒素含量。结论:疫苗生产过程可以有效控制疫苗的细菌内毒素含量,降低疫苗中的细菌内毒素含量可从原料着手,对多糖和载体蛋白质纯化工艺改进,进而控制疫苗的细菌内毒素含量至更低水平以提高疫苗的安全性。

关键词：脑膜炎球菌结合疫苗生产各阶段产物细菌内毒素含量分析

脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素检查方法的建立及系统验证

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中国新药杂志 2013年第24期22卷 2878-2887,2908页

作者：吴兵刘方蕾宣俊文于旭博王轶峰孔素娟袁菲谢贵林赵志强兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046

目的:建立用于脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量的检测方法,研究其在脑膜炎球菌结合疫苗不同生产阶段应用的可行性,并对方法进行系统验证,以确保检查结果的真实性和准确性。方法:参考《中华人民共和国药典》2010年版三部附录,建立动... 详细信息

目的:建立用于脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量的检测方法,研究其在脑膜炎球菌结合疫苗不同生产阶段应用的可行性,并对方法进行系统验证,以确保检查结果的真实性和准确性。方法:参考《中华人民共和国药典》2010年版三部附录,建立动态浊度法测定细菌内毒素含量,并验证生产过程中相关原辅材料本身对方法可靠性的影响,参考相关指导原则完成方法的系统验证。结果:方法的线性符合验证要求,测定范围为0.03～10 EU·mL-1;相关原辅料中的细菌内毒素含量均低于0.01 EU·mL-1,方法的专属性符合验证要求;添加实验结果显示标准品回收率均在80%～130%,表明方法准确性良好,样品本身对方法检定无影响;方法精密度和耐用性验证实验结果均能达到方法验证要求;方法定量限度为0.03 EU·mL-1。多次检查疫苗原液和成品多批次结果差异较小,细菌内毒素含量检定准确可靠。结论:经方法验证显示方法的线性、特异性、灵敏度和准确性等技术参数达到了相关验证要求,结果稳定可靠;各种原辅材料对细菌内毒素检查无影响。本研究为该疫苗细菌内毒素检查提供了更为快捷有效的质量控制手段,验证结果为进一步方法再验证提供了数据和应用支持。

关键词：细菌内毒素检查脑膜炎球菌结合疫苗方法建立方法验证

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脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗研究进展

中国免疫学杂志 2011年第12期27卷 1143-1149页

作者：张营营李智华徐维明中国医学科学院医学生物学研究所昆明650106

流行性脑膜炎是细菌性脑脊髓膜炎中唯一能造成流行的疾病,可引起相当高的病死率和致残率。流脑从病原体的发现至今已超过100年,呈世界范围分布,全世界每年流脑病例可达30万到35万,是世界范围的一个严重公共健康问题。

关键词：多糖蛋白结合疫苗脑膜炎球菌流行性脑膜炎世界范围脑脊髓膜炎健康问题细菌性致残率

脑膜炎球菌fHBP的克隆表达与免疫原性研究

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中国病原生物学杂志 2019年第2期14卷 141-145页

作者：张赛兰永发尹元复旦大学附属妇产科医院上海200011 上海生物制品研究所有限责任公司上海中医药大学附属上海市中西医结合医院

目的选用pET蛋白表达系统重组表达A、B两个亚家族的fHBP蛋白(fHBP-A和fHBP-B),制备脑膜炎球菌蛋白疫苗,并对其进行免疫原性检测,评价该蛋白疫苗抵抗脑膜炎球菌感染的保护作用。方法以脑膜炎球菌Nm048(A家族)与Nm035(B家族)菌株裂解液为... 详细信息

目的选用pET蛋白表达系统重组表达A、B两个亚家族的fHBP蛋白(fHBP-A和fHBP-B),制备脑膜炎球菌蛋白疫苗,并对其进行免疫原性检测,评价该蛋白疫苗抵抗脑膜炎球菌感染的保护作用。方法以脑膜炎球菌Nm048(A家族)与Nm035(B家族)菌株裂解液为模版扩增目的基因fHBP-A与fHBP-B,与原核表达载体pET-24b连接,构建重组质粒pET-24b-fHBP-A和pET-24b-fHBP-B。分别用pET-24b-fHBP-A和pET-24b-fHBP-B转化大肠埃希菌,通过Western blot检测目的蛋白表达情况并用Ni^(2+)柱层析和凝胶过滤层析进行纯化。将家兔随机分为4组,fHBP-A实验组、fHBP-B实验组、fHBP-A+fHBP-B实验组用相应重组蛋白免疫,对照组注射PBS。采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测免疫家兔抗血清与靶菌的结合情况,通过血清杀菌力试验(serum bactericidal assay,SBA)评价该疫苗诱导的免疫保护效果。结果 PCR扩增出约760 bp的目的基因片段,经双酶切和测序鉴定重组质粒pET-24b-fHBP-A与pET-24b-fHBP-B构建成功.重组菌经IPTG诱导后采用Ni^(2+)柱层析和凝胶过滤层析纯化获得2个蛋白,纯度均>90%。分别用fHBP-A、fHBP-B及其混合产物免疫家兔制备的抗血清,滴度分别为1.8×10~4、4.9×10~5、4.8×10~5。经流式细胞术检测,不同抗原组合免疫抗血清均能与靶菌结合,血清杀菌力试验检测相应的杀菌效力均SBA>1∶8,其中fHBP-A+fHBP-B免疫抗原组抗血清的杀菌滴度较高且具有交叉反应。结论 2个亚家族的fHBP蛋白疫苗能诱导家兔产生较强的体液免疫,fHBP-A+fHBP-B具有较好的免疫原性,为脑膜炎球菌蛋白疫苗的研发奠定了基础。

关键词：脑膜炎球菌蛋白疫苗 H因子结合蛋白血清杀菌力试验