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脐带沃顿胶间充质干细胞的分离培养及其诱导分化

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第10期14卷 1734-1738页

作者：蒋洁谭灿张李洋肖玲张建湘中南大学湘雅基础医学院组织学与胚胎学系湖南省长沙市410013 怀化医学高等专科学校组织学与胚胎学教研室湖南省怀化市418000 中南大学生物科学与技术学院细胞生物学系湖南省长沙市410013

背景:骨髓是目前间充质干细胞的主要来源,但由于取材不便、细胞数量受年龄限制等原因,其应用具有一定局限性。近年来,脐带作为间充质干细胞的新来源已经得到广泛关注。目的:探讨从人脐带沃顿胶中分离、扩增间充质干细胞的方法,鉴定其免... 详细信息

背景:骨髓是目前间充质干细胞的主要来源,但由于取材不便、细胞数量受年龄限制等原因,其应用具有一定局限性。近年来,脐带作为间充质干细胞的新来源已经得到广泛关注。目的:探讨从人脐带沃顿胶中分离、扩增间充质干细胞的方法,鉴定其免疫表型与分化潜能。方法:种植法分离和扩增间充质干细胞;用FasGrow培养基培养,光镜观察获得的人脐带沃顿胶间充质干细胞的形态;免疫组织化学方法检测其免疫表型;Gomori钙钴碱性磷酸酶染色、vonKossa钙结节染色、四环素荧光标记鉴定其向成骨方向分化的能力及油红O染色鉴定其向成脂肪分化的能力。结果与结论:种植法容易从人脐带沃顿胶中获得间充质干细胞;原代培养后12～16d达70%～80%融合,传代后可维持未分化状态并稳定增殖;细胞倍增时间为2d左右,体外增殖达20代以上;表面标记分析显示:CD44、CD105、CD133、MHC-Ⅰ呈阳性,CD34、CD45呈阴性;体外诱导实验表明:该细胞具有体外成脂肪、成骨和神经样细胞分化的能力。

关键词：脐带沃顿胶间充质干细胞细胞分离细胞培养诱导分化

脐带挤推对剖宫产分娩新生儿出生后相关结局影响的meta分析

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中华围产医学杂志 2024年第3期27卷 177-187页

作者：陈世江陶伏莹付东英田莹莹傅洁蒋佳男南京医科大学附属妇产医院(南京市妇幼保健院)手术室南京210004

目的评价脐带挤推对剖宫产分娩新生儿出生后相关结局指标的影响。方法计算机检索中英文数据库(包括中国知网、万方医学数据库、中国生物医学文献数据库、维普数据库、中华医学期刊全文数据库、PubMed、Embase、CINAHL、Web Of Science、... 详细信息

目的评价脐带挤推对剖宫产分娩新生儿出生后相关结局指标的影响。方法计算机检索中英文数据库(包括中国知网、万方医学数据库、中国生物医学文献数据库、维普数据库、中华医学期刊全文数据库、PubMed、Embase、CINAHL、Web Of Science、the Cochrane Library、Google Scholar)及临床试验注册平台(***)中关于剖宫产分娩新生儿脐带挤推的随机对照研究,时间均从建库至2023年7月。纳入标准:研究类型为随机对照研究;研究对象为剖宫产分娩行脐带挤推后断脐的新生儿,种族不限;结局指标为出生后血红蛋白水平、红细胞压积、胆红素峰值、蓝光治疗、脐血pH值、脑室内出血、死亡、红细胞增多症、新生儿坏死性小肠结肠炎、Apgar评分;偏倚风险评估(risk of bias assessment tool 2.0)为低风险或可能存在风险。采用RevMan5.3进行meta分析,并根据新生儿的胎龄进行亚组分析。采用推荐分级的评价、制订与评估(grades of recommendations assessment,development,and evaluation,GRADE)系统进行证据质量评级。结果最终纳入11篇文献,共计2347例新生儿(包含足月儿1322例和早产儿1025例)。meta分析结果显示:(1)与立即断脐相比,脐带挤推能提高新生儿出生后24 h内血红蛋白水平(MD=1.40,95%CI:1.11~1.70,Z=9.32,P0.05);(2)与延迟脐带结扎相比,脐带挤推能提高新生儿出生后24 h内血红蛋白水平(MD=0.83,95%CI:0.75~0.91,Z=20.11,P脐带挤推组胆红素峰值低于延迟脐带结扎组(MD=-1.30,95%CI:-2.26~0.34,Z=2.66,P脐带挤推对新生儿蓝光治疗、脑室内出血(Ⅰ~Ⅳ级)、死亡、红细胞增多症、新生儿坏死性小肠结肠炎、Apgar 1 min评分和Apgar 5 min评分的影响均无统计学意义(P值均>0.05)。结论脐带挤推能提高剖宫产分娩新生儿出生后短期的血红蛋白和红细胞压积水平,可能有益于预防新生儿出生后短期内贫血,但对胆红素峰值、蓝光治疗、红细胞增多症等发生风险影响不大,亦未增加剖宫产分娩新生儿的不良结局。但仍需更多高质量、大样本的随机对照研究进一步证实。

关键词：结扎术脐带剖宫产术婴儿,新生 meta分析

氯化钴作用人脐带间充质干细胞的差异蛋白质组学分析

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中华血液学杂志 2011年第11期32卷 739-743页

作者：曾慧兰钟启贾海涛覃永亮卜欠欠韩新爱刘宏伟暨南大学附属第一医院血液科广州510632 暨南大学附属第一医院整形美容科广州510632 暨南大学生命与健康工程研究院南方医科大学附属第三医院

目的用蛋白质二维凝胶电泳图谱，结合质谱技术鉴定、分析化学低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）作用人脐带间充质干细胞（MSC）前后蛋白质组的差异表达。方法CoCl2作用人脐带MSC，应用双向凝胶电泳技术（2-DE）分离细胞总蛋白。ImageMaster 2D ... 详细信息

目的用蛋白质二维凝胶电泳图谱，结合质谱技术鉴定、分析化学低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）作用人脐带间充质干细胞（MSC）前后蛋白质组的差异表达。方法CoCl2作用人脐带MSC，应用双向凝胶电泳技术（2-DE）分离细胞总蛋白。ImageMaster 2D Platinum软件分析差异蛋白质点，用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱对差异表达蛋白做质谱鉴定，对差异蛋白进行功能分类。结果建立了CoCl2作用人脐带MSC的蛋白质组图谱，鉴定出26个差异表达蛋白，其中11个表达上调，15个表达下调。其生物学功能涉及糖代谢、蛋白质代谢和修饰、脂类代谢、辅酶与辅基、细胞周期、免疫和防御、细胞结构和运动、信号转导、蛋白靶向和定位、神经细胞的活动、肌肉收缩等。其中过氧化物还原酶-1（Prdx1）表达下调，α-烯醇化酶（ENO1）、单胺囊泡转运蛋白1（VAT1）表达上调。结论低氧对人脐带MSC的影响涉及多蛋白及多个功能通路。

关键词：氯化钴脐带间充质干细胞蛋白质组

人脐带间充质干细胞外泌体免疫调节功能的研究

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中华医学杂志 2015年第32期95卷 2630-2633页

作者：刘明汪劲松刘沐芸胡祥徐军呼吸疾病国家重点实验室广州呼吸疾病研究所广州医科大学附属第一医院广州510120 深圳市北科生物科技有限公司

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）分泌的外泌体（exosomes）的免疫调节能力.方法分离培养hUC-MSCs,收集第3代hUC-MSCs上清,提取外泌体,Western印迹检测其表面特异标志CD81、CD9的表达,BCA法测定浓度;不同浓度外泌体与CD3/CD28... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）分泌的外泌体（exosomes）的免疫调节能力.方法分离培养hUC-MSCs,收集第3代hUC-MSCs上清,提取外泌体,Western印迹检测其表面特异标志CD81、CD9的表达,BCA法测定浓度;不同浓度外泌体与CD3/CD28单抗刺激的正常人外周血单个核细胞（PBMC）作用72 h,流式检测作用前后Th17和Treg细胞的比例变化,检测对CD4^＋T、CD8^＋T细胞增殖能力的影响,ELISA检测干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）的水平变化.结果 hUC-MSCs外泌体高表达CD9、CD81,可明显抑制CD4＋T和CD8＋T细胞的增殖,升高CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋ Treg细胞比例,经CD3/CD28单抗刺激后CD45＋ CD4^＋ Ki67^＋和CD45^＋ CD8^＋ Ki67^＋细胞比例为85.3％±5.6％和72.6％±6.3％,同时升高PBMC分泌的TGF-β1水平,降低IFN-γ、IL-6、TNF-α的水平（均P＜0.05）.结论 hUC-MSCs分泌的外泌体具有免疫调节功能,有望成为一种免疫治疗的新选择.

关键词：间充质干细胞脐带外泌体免疫

胎儿镜下脐带结扎术在复杂性多胎妊娠减胎中的应用

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中华妇产科杂志 2013年第10期48卷 750-754页

作者：魏瑗龚丽君熊光武原鹏波赵扬玉北京大学第三医院妇产科北京100191

目的探讨复杂性多胎妊娠在胎儿镜下行脐带结扎减胎术的临床效果及其安全性。方法收集2009年1月至2012年11月北京大学第三医院因复杂性多胎妊娠行胎儿镜下脐带结扎减胎术的孕妇18例，其中选择性宫内生长受限（sIUGR）6例，双胎妊娠中1胎... 详细信息

目的探讨复杂性多胎妊娠在胎儿镜下行脐带结扎减胎术的临床效果及其安全性。方法收集2009年1月至2012年11月北京大学第三医院因复杂性多胎妊娠行胎儿镜下脐带结扎减胎术的孕妇18例，其中选择性宫内生长受限（sIUGR）6例，双胎妊娠中1胎畸形4例，双胎反向动脉灌流（TRAP）4例，双绒毛膜双羊膜囊（DCDA）三胎1例，单绒毛膜三羊膜囊（DCTA）三胎1例，单绒毛膜双羊膜囊（MCDA）双胎＋瘢痕子宫妊娠1例，双胎输血综合征（TTTS）伴受血胎儿心脏畸形1例。于孕17—27周“时，在联合麻醉下对孕妇行胎儿镜下脐带结扎减胎术，对手术情况和胎儿结局进行分析。结果（1）18例孕妇减胎术均获成功，平均手术时间为63min（24～156min）。术中平均出血量为7．6ml（5～20m1），手术时平均孕周为21周（17～27周^＋6），新生儿平均出生体质量为2441g（1000～3400g）。（2）手术拟保留胎儿20例，术后监测发现存活胎儿畸形而引产2例，TRAP减胎术后间隔3—14周发生不明原因胎死宫内3例，最终出生15例活产儿，其中1例孕28周分娩的早产儿出现重度呼吸窘迫综合征（RDS）和缺血缺氧性脑病，家属放弃治疗而死亡。14例活产儿随访3～51个月，其生长发育情况均正常。（3）妊娠至28周以上14例，延长孕周5～21周（平均为13周^＋6），分娩孕周为28～38周（平均33周^＋1），早期早产3例，晚期早产（34～36周^＋6）3例。结论胎儿镜下脐带结扎应用于复杂性多胎妊娠的减胎术安全有效，无严重临床并发症发生。

关键词：妊娠减少多胎胎儿镜检查脐带结扎术

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人脐带间充质干细胞的生物学特性和超微结构

中国医学科学院学报 2011年第4期33卷 382-386页

作者：朱少芳何援利付霞霏南方医科大学附属珠江医院妇产科广州510282

目的分离和培养人脐带间充质干细胞(MSC),研究其生物学特性和超微结构。方法提取人脐带MSC,测定其增殖、周期和凋亡情况,采用透射电镜观察细胞的超微结构,酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)、类胰岛素生长因子-... 详细信息

目的分离和培养人脐带间充质干细胞(MSC),研究其生物学特性和超微结构。方法提取人脐带MSC,测定其增殖、周期和凋亡情况,采用透射电镜观察细胞的超微结构,酶联免疫吸附测定法检测细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)、类胰岛素生长因子-1(IGF-1)、肝细胞生长因子(HGF)水平。结果人脐带MSC为成纤维细胞样,增殖能力强,超微结构分析其细胞代谢活跃,迁移分化能力强,能分泌VEGF、IGF-1和HGF等细胞因子。结论人脐带MSC能分泌多种抗凋亡因子,具有良好的生物学特性。

关键词：脐带间充质干细胞超微结构

人脐带间充质干细胞与食管癌细胞融合后的转录组比较

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中华肿瘤杂志 2014年第10期36卷 726-732页

作者：王勇周兵樊宏斌遇珑郭黎平陆士新中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室病因及癌变研究室北京市癌症发生及预防分子机理重点实验室 100021 中国科学院遗传与发育研究所发育及分子生物学重点实验室系统生物学研究中心

目的探讨人脐带间充质干细胞（hMSCs）和食管癌细胞融合前后基因表达的差异和信号通路的改变.方法分选和鉴定融合细胞（EMFs）后,通过基因芯片比较食管癌细胞、hMSCs和EMFs的表达谱.PCA聚类分析转录组的整体关系,LIMMA分析获得差异表... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞（hMSCs）和食管癌细胞融合前后基因表达的差异和信号通路的改变.方法分选和鉴定融合细胞（EMFs）后,通过基因芯片比较食管癌细胞、hMSCs和EMFs的表达谱.PCA聚类分析转录组的整体关系,LIMMA分析获得差异表达基因,PCC确定差异表达基因的表达模式,再通过DAVID、ToppGene和MSigDB数据库分析各个模式的基因功能、信号通路富集、染色体定位和富集,以KEGGanim和Idiographica分别绘制核心差异表达基因的信号通路关联图和染色体分布图.结果 EMFs细胞中DNA损伤修复、细胞周期阻滞和凋亡通路的核心基因高表达,为EC9706或hMSCs细胞的4倍（Pi ＜0.05）,而抑制因子DUSP6的高表达可能负反馈地抑制促分裂素原活化蛋白激酶通路.hMSCs细胞中细胞因子和趋化因子高表达,为EC9706或EMFs细胞的2倍（Pi＜ 0.05）,而EMFs细胞中33个免疫功能相关基因高表达,为EC9706细胞的2倍（Pi＜0.05）.M期阻滞和氨基酸代谢相关的位于食管癌染色体扩增区的39个差异表达基因中,其中30个表达下降,为EC9706细胞的0.5倍（Pi＜0.05）.结论 hMSCs和EC9706细胞融合后可能通过诱导促凋亡信号和DUSP6负反馈抑制机制来发挥抑制食管癌细胞的作用,免疫调节和分化相关基因的改变提示融合细胞继承了干细胞的部分免疫功能.

关键词：间质干细胞脐带食管肿瘤细胞融合转录因子

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人脐带来源的基质细胞分化为神经细胞

四川大学学报（医学版） 2005年第1期36卷 13-16页

作者：杨立业郑佳坤汪朝阳许曼丹广东省潮州市中心医院神经外科潮州521021

目的　探索人脐带组织来源的基质细胞向神经细胞分化的可能性 ,为神经移植探寻新的细胞来源。方法　采用组织块培养法培养人脐带基质细胞 ,酶消化法对细胞进行传代 ,应用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果　从脐带组织成功培养出... 详细信息

目的　探索人脐带组织来源的基质细胞向神经细胞分化的可能性 ,为神经移植探寻新的细胞来源。方法　采用组织块培养法培养人脐带基质细胞 ,酶消化法对细胞进行传代 ,应用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果　从脐带组织成功培养出基质细胞 ,这种细胞可以随机分化为平滑肌细胞 ,表达平滑肌肌动蛋白 ;丹参注射液诱导基质细胞向神经细胞分化 ,分化的神经元样细胞具有典型的神经细胞的形态 ,早期表达巢蛋白、β-管蛋白和神经元特异性烯醇化酶 ,后期表达神经微丝 2 0 0 ;在合适的诱导条件下 ,分化的神经元样细胞的比例在 90 %左右 ,分化的细胞中星型胶质细胞的比例在 1%左右 ,无髓鞘基础蛋白的表达 ,说明无少突胶质细胞产生。结论　脐带组织来源的基质细胞可以表达神经细胞的标志物 ,在体外能够分化为形态复杂的神经元样细胞。

关键词：脐带基质细胞干细胞神经元分化丹参

人脐带间充质干细胞在不同孔径聚碳酸酯膜上的生长及迁移

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中华医学杂志 2011年第10期91卷 699-702页

作者：李东杰柴家科韩焱福孙天骏邓虎平赵京玉刘玲英解放军总医院第一附属医院烧伤整形科北京100048

目的观察人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）在不同孔径Transwell插件底部聚碳酸酯膜上的生长、迁移情况，探讨对hUCMSCs进行非直接接触式共培养诱导分化时选择适宜膜孔径Transwell插件的依据。方法体外分离、培养hUCMSCs，以丝裂霉素C处理... 详细信息

目的观察人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）在不同孔径Transwell插件底部聚碳酸酯膜上的生长、迁移情况，探讨对hUCMSCs进行非直接接触式共培养诱导分化时选择适宜膜孔径Transwell插件的依据。方法体外分离、培养hUCMSCs，以丝裂霉素C处理后接种于常用的0．4、3．0和8．0μm三种膜孔径的6孔板Transwell插件中，培养7d，观察、计数三种孔径插件底部贴壁细胞，计算迁移率，并在扫描电镜下观察细胞在多孔膜上的生长、迁移情况。结果培养7d后，0．4、3．0和8．0μm三种插件内贴壁hUCMSCs的迁移率分别为0、1．8％、8．0％，0．4μm孔径迁移率与其他两组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。扫描电镜下观察到细胞在3．0和8．0μm孔径聚碳酸酯膜底面生长以及穿越微孔的现象，而在0．4μm孔径膜则未发现。结论3．0和8．0μm孔径聚碳酸酯膜允许hUCMSCs迁移穿越，而0．4μm孔径聚碳酸酯膜则不允许，或可利用其正反面进行近距离非直接接触式共培养诱导hUCMSCs分化。

关键词：充质干细胞人类脐带细胞分化