检索结果-南通市图书馆

作者：江志辉江西中医药大学

学位级别：硕士

随着人们的生活水平逐渐提高,肥胖人的数量也在逐年增加。全世界的肥胖发病率以惊人的速度增长并已成为人类公共卫生的主要威胁,肥胖会促进高血压,糖尿病,中风,骨关节炎以及癌症的发生,因此,寻找一种有效的方法预防和治疗肥胖是迫切和... 详细信息

随着人们的生活水平逐渐提高,肥胖人的数量也在逐年增加。全世界的肥胖发病率以惊人的速度增长并已成为人类公共卫生的主要威胁,肥胖会促进高血压,糖尿病,中风,骨关节炎以及癌症的发生,因此,寻找一种有效的方法预防和治疗肥胖是迫切和必要的。目前,人们普遍认为肥胖的原因是由于体内能量吸收和能量消耗的不平衡所致,这导致过量能量的以脂质的形式储存于白色脂肪组织(WAT)中,脂质储存的越多,脂滴越大、分化形成的脂肪细胞越多,人体就越胖。所以抑制肥胖的关键就是抑制前脂肪细胞的分化和促进成熟脂肪细胞的分解。东革阿里(Eurycoma lon gifolia Jack)盛产于马来西亚,在当地同燕窝、锡器并称为三大国宝,其具有很好的降脂作用,此外,还具有抗癌、抗疟疾、改善男性性功能障碍等功效。苦木素二萜类是东革阿里所含主要的化学成分之一,宽缨酮(Eurycomanone,EN)是其主要的活性成分之一。目前EN的降脂作用机制并不明确,这也限制该成分的进一步开发和利用。目的:通过建立体外3T3-L1脂肪细胞模型,研究EN对脂肪分解的作用机制及抑制脂肪细胞形成作用,从而了解其对前脂肪分化阶段及脂肪细胞分解阶段的影响。为EN合理利用提供科学依据,为其开发新药成为可能奠定理论基础。方法:(1)通过检测EN促进脂肪细胞中的甘油三酯的分解效果以及对3T3-L1前脂肪细胞分化成成熟的脂肪细胞的抑制作用,利用油红O染色脂肪细胞,再观察小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的过程中细胞形态变化及脂滴形成情况。(2)通过免疫荧光、Western blotting、荧光定量PCR、siRNA细胞转染、(Q-PCR)等技术阐释EN促进脂肪细胞的脂肪分解的作用机制。结果:(1)当EN浓度≤200μM时,经过EN作用后72 h内,小鼠3T3-L1前脂肪细胞的增殖作用正常,其细胞存活率均在90%左右,和空白对照组(NC)比较无显著性差异(p>0.05)。用台盼蓝检测EN对成熟脂肪细胞的影响,研究结果表明当EN≤200μM时,经过EN作用后24 h内,成熟的脂肪细胞存活率均在100%左右。(2)油红O染色,观察到NC组被油红O染色的区域大于EN组,再用异丙醇重新溶解被染细胞中的油红O,将EN和NC组中油红O进行定量检测,结果NC组的检测值大于EN组的值。用激光共聚焦扫描显微镜观察脂肪细胞分化情况,其拍照结果与油红O检测结果一致。(3)EN显著促进脂肪细胞的脂肪分解,药物作用后PKA、HSL和AKT、AMPK磷酸化蛋白表达水平显著升高,通过H89作用后,PKA、HSL磷酸化蛋白表达水平显著降低,抑制H89均能够在一定程度上显著抑制药物EN促进的脂肪分解。实时荧光定量PCR检测各组细胞脂肪代谢相关基因mRNA结果表明,EN作用后脂肪细胞整个作用过程中促进甘油三酯分解重要的关键基因C-AMP(Cyclic Adenosine monop hosp hate)、PKA(Protein kinase A)和HSL(Hormone-sensitive lipase)的mRNA和蛋白质表达的水平均显著上调,脂肪甘油三酯脂酶ATGL(Adipose tri glyceride lipase)mRNA的表达无明显影响。siRNA转染脂肪细胞中,降低PKA-CA基因的表达,EN作用后,上调PKA-CA、HSL,然而PKA-CB基因基本不受影响。结论:综上所述,EN显著刺激小鼠脂肪细胞的脂肪分解并且能有效的抑制前脂肪细胞的分化,c-AMP/PKA通路和AKT/PDE-3B通路可能同时参与了EN刺激的脂肪分解,同时能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化成成熟的脂肪细胞。本研究为其在治疗肥胖的开发应用上建立了科学研究基础。

关键词： EN 蛋白激酶A 3T3-L1脂肪细胞脂肪分解甘油释放机制研究

芦丁、运动及其联合干预对高脂饮食诱导的小鼠肥胖模型脂肪组织脂肪分解和内质网应激的影响

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芦丁、运动及其联合干预对高脂饮食诱导的小鼠肥胖模型脂肪组织脂...

作者：陈能苏州大学

学位级别：硕士

我国是肥胖和超重增速较快的国家之一,目前已有超过3亿的超重和肥胖人群。肥胖和超重状况下人体最显著的病理变化之一是白色脂肪组织数量的增加和功能受损。脂肪组织功能受损还会导致胰岛素抵抗、炎症反应等病理变化,从而增加糖尿病等... 详细信息

我国是肥胖和超重增速较快的国家之一,目前已有超过3亿的超重和肥胖人群。肥胖和超重状况下人体最显著的病理变化之一是白色脂肪组织数量的增加和功能受损。脂肪组织功能受损还会导致胰岛素抵抗、炎症反应等病理变化,从而增加糖尿病等慢性代谢性疾病的发病风险。因此探讨有效的改善肥胖状况下脂肪组织功能受损的措施及具体机制具有重要理论及现实意义。目的:研究芦丁、运动及联合干预对高脂饮食诱导的小鼠脂肪组织脂肪分解信号通路紊乱、内质网应激、脂联素及TRPV4相关蛋白的影响,以及这些干预作用是否存在部位特异性。方法:随机将60只C57BL/6J小鼠分成5组,分别为普通饲料组（CHOW,碳水化合物、蛋白质、脂肪供能比为:70%:20%:10%）、高脂饲料组（HFD,碳水化合物、蛋白质、脂肪供能比为:20%:20%:60%）、高脂饲料芦丁组（HR,在上述高脂饲料中添加0.1%的芦丁）、高脂饲料运动组（HE,小鼠摄取高脂饲料的同时进行跑台训练,训练强度:15m/min,5天/周,1小时/天）和高脂饲料芦丁运动组（HRE,即上述芦丁和运动干预的联合）,干预16周。实验结束后,进行如下指标检测:1.基础指标及血液生化指标:进行糖耐量（GTT）和胰岛素耐量（ITT）试验并计算曲线下面积;测定血清学指标:葡萄糖、胰岛素、脂联素、甘油和游离脂肪酸。2.脂肪组织甘油三酯分解:脂肪组织体外培养,测定异丙肾上腺素（ISO）诱导下的甘油分泌和相关蛋白表达。Western blot检测脂肪组织中脂肪分解通路关键蛋白表达。3.脂肪组织内质网应激及脂联素分泌:Western blot检测内质网应激通路关键蛋白即GRP78、CHOP和p-JNK的表达;实时荧光定量PCR技术检测脂联素及PPAR-γmRNA的表达。4.脂肪细胞形态及TRPV4相关蛋白:HE染色观察小鼠睾周和皮下脂肪组织中脂肪细胞大小和形态;Western blot检测TRPV4及相关蛋白的表达。结果:1.基础指标及血液生化指标实验过程中各组小鼠体重稳定增长,从第3周开始到实验结束,hfd组体重均显著高于chow组,而hr、he组和hre组体重与chow组相比无显著性差异,且显著低于hfd组（p＜0.05）。hfd组空腹血糖及胰岛素水平显著高于chow组,hr、he组和hre组出现不同程度的下降。hfd、hr、he组和hre组血清脂联素水平较chow组均具有显著下降。糖耐量实验中,hre组血糖曲线下面积较hfd组有显著减少;胰岛素耐量实验中,hr、he和hre组血糖曲线下面积较hfd组有显著减少。2.脂肪组织甘油三酯分解在睾周脂肪组织（epi）中,相比于chow组,hfd组甘油三酯分解过程中的关键蛋白表达量即磷酸化的激素敏感性脂肪酶660（p-hsl660）和脂滴包被蛋白（perilipina）显著下降（p＜0.05）;he组和hre组小鼠p-hsl660表达量较hfd组有显著性增加（p＜0.05）,perilipina蛋白表达量与chow组小鼠无显著差异（p＞0.05）;体外培养实验中,chow组、he组和hre组睾周脂肪组织在iso诱导下甘油分泌量显著增加（p＜0.05）,而hfd组和hr组小鼠睾周脂肪组织的甘油分泌量在诱导前后没有显著差异（p＞0.05）。在皮下脂肪组织（sc）中,hfd对p-hsl660和atgl的表达量并无影响（p＞0.05）。3.内质网应激及脂联素分泌在epi中,与chow组相比,hfd组内质网应激标识蛋白,即grp78、chop和p-jnk的表达量呈现显著升高,脂联素mrna表达及其关键调节蛋白ppar-γ和dsba-l表达水平明显降低（p＜0.05）,hre组grp78和p-jnk显著下降（p＜0.05）。而he和hre组小鼠ppar-γ和dsba-l蛋白表达水平与chow组相比差异无显著性（p＜0.05）。在sc中,与chow组相比,hfd组小鼠grp78和p-jnk表达水平显著升高（p＜0.05）,同时ppar-γ蛋白和脂联素mrna表达量显著增加（p＜0.05）,而dsba-l蛋白表达显著降低（p＜0.05）。与hfd组相比,he组和hre组p-jnk和ppar-γ蛋白表达量显著降低,与chow组相比差异无显著性（p＞0.05）。4.脂肪细胞形态、trpv4及相关蛋白表达在epi中,hfd和hr组小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α,β蛋白（pgc-1α+β）表达水平较chow组显著降低（p＜0.05）,he组和hre组pgc-1α+β蛋白表达与CHOW组相比差异无显著性（p＞0.05）。在SC中,HFD组TRPV4蛋白表达量较CHOW组显著升高（p＜0.05）,HE组和HRE组TRPV4蛋白表达较HFD组有显著降低（p＜0.05）。HR组、HE组和HRE组PGC-1α+β

关键词：芦丁运动白色脂肪组织高脂饮食脂肪分解内质网应激

亮氨酸对3T3-L1脂肪细胞中脂肪分解和瘦素信号通路的影响

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亮氨酸对3T3-L1脂肪细胞中脂肪分解和瘦素信号通路的影响

作者：杨江涛苏州大学

学位级别：硕士

肥胖和超重已经成为全球性的健康问题,最近的研究发现亮氨酸可以通过降低食物摄入量、改善胰岛素抵抗、抑制脂肪生成、促进脂肪分解以及促进能量消耗等途径减轻体重。但是也有很多研究认为亮氨酸并不能减轻体重甚至还会促进体重增长。... 详细信息

肥胖和超重已经成为全球性的健康问题,最近的研究发现亮氨酸可以通过降低食物摄入量、改善胰岛素抵抗、抑制脂肪生成、促进脂肪分解以及促进能量消耗等途径减轻体重。但是也有很多研究认为亮氨酸并不能减轻体重甚至还会促进体重增长。这可能跟亮氨酸激活的mTOR通路对代谢的多重调控有关。本研究则探讨亮氨酸对脂肪分解和瘦素信号通路的影响。第一部分:亮氨酸对3T3-L1细胞增殖和分化的影响目的:以3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,观察不同浓度的亮氨酸对其增殖和分化的影响,确定亮氨酸的合适浓度。方法:MTT法测量不同浓度的亮氨酸对3T3-L1前脂肪细胞增殖状况的影响。IBMX、地塞米松和胰岛素诱导3T3-L1细胞分化成脂肪细胞,分别在分化过程中和分化完成后用亮氨酸干预,并用油红O染色,观察不同浓度的亮氨酸对3T3-L1细胞分化过程及分化后的3T3-L1细胞中脂滴数的影响。结果:0,0.5,1,2mM的亮氨酸处理3T3-L1细胞,48h后,细胞数量无明显差异。整个分化过程中添加亮氨酸作用14d,3T3-L1细胞内的脂滴数会随着亮氨酸浓度的增加而减少,但是亮氨酸对分化后的3T3-L1脂肪细胞中的脂滴数并无影响。结论:0--2mM的亮氨酸不影响3T3-L1细胞增殖。亮氨酸抑制分化过程中的3T3-L1细胞内脂滴的生成,不影响分化完成脂肪细胞内脂滴的生成。第二部分:亮氨酸对脂肪分解的影响目的:在第一部分研究的基础上,进一步了解亮氨酸对3T3-L1前脂肪细胞内脂滴数影响的原因,即研究细胞内脂肪分解相关的信号通路。方法:收集细胞培养过程中的培养基,用试剂盒检测其中的甘油含量。收集细胞,裂解提取蛋白,用Western blot的方法检测细胞中HSL、磷酸化HSL、PLIN和PKA蛋白的变化情况。结果:在分化过程中添加亮氨酸,培养基中的甘油含量随亮氨酸浓度的增加而增加;分化完成后添加亮氨酸,培养基中的甘油含量不随亮氨酸浓度的增加而改变。在分化过程中添加亮氨酸,第4天和第14天细胞中HSL蛋白和PKA蛋白的表达量不随亮氨酸浓度的增加而改变;但磷酸化HSL蛋白的表达量随亮氨酸浓度的增加而增加,且第14天比第4天更为明显;细胞中PLIN蛋白的表达量随亮氨酸浓度的增加而减少,且第14天比第4天更为明显。在分化完成后添加亮氨酸,细胞中的HSL、磷酸化HSL、PLIN和PKA蛋白的表达量都不随亮氨酸浓度的增加而改变。结论:分化过程中添加亮氨酸,降低脂滴周围环绕的PLIN蛋白,上调磷酸化HSL,促进脂肪分解,产生甘油向培养基中分泌。但对分化完成后的细胞则无影响。第三部分:亮氨酸对瘦素信号通路的影响目的:在第二部分的基础上进一步探讨亮氨酸对3T3-L1脂肪细胞中与脂代谢密切相关的瘦素信号通路的影响。方法:在3T3-L1分化的不同阶段添加不同的亮氨酸进行干预,在不同的时间点收集细胞,Western blot检测细胞中Leptin、Ob-R、JAK1、JAK2和STAT3蛋白表达量的变化。结果:在分化过程中添加亮氨酸,第4天和第14天细胞中Leptin、Ob-R、JAK1、JAK2、STAT3蛋白表达量随亮氨酸浓度的增加而减少,且第14天更为明显。在分化完成后添加亮氨酸,以上蛋白的表达量不随亮氨酸浓度的增加而改变。结论:在分化过程中添加亮氨酸,由于抑制了脂肪的生成,而使其分泌的瘦素减少,其下游的通过Ob-R激活的JAK/STAT3信号通路也相应被抑制。而对分化完成后的细胞则无抑制作用。总的结论:亮氨酸促进3T3-L1细胞在分化过程中的脂肪分解,但不影响分化完成后的脂肪细胞。

关键词：亮氨酸脂肪生成脂肪分解瘦素通路 3T3-L1细胞

醛缩酶B（ALDOB）通过ATGL促进肝脏脂肪分解的作用机制

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醛缩酶B（ALDOB）通过ATGL促进肝脏脂肪分解的作用机制

作者：杨雪刚安徽大学

学位级别：硕士

生命有机体的生理活动离不开能量的代谢,脂肪分解便是机体能量代谢必不可少的供能方式之一。脂肪分解是一个精密而复杂的调控过程,其中受到许多激素与脂相关蛋白以及细胞自噬的影响。细胞内的甘油三酯（TG）转化为二酰基甘油（DAG）,紧... 详细信息

生命有机体的生理活动离不开能量的代谢,脂肪分解便是机体能量代谢必不可少的供能方式之一。脂肪分解是一个精密而复杂的调控过程,其中受到许多激素与脂相关蛋白以及细胞自噬的影响。细胞内的甘油三酯（TG）转化为二酰基甘油（DAG）,紧接着二酰基甘油转化为单酰基甘油并分解为甘油与脂肪酸。这一系列的分解过程都离不开ATGL、HSL、MAGL水解酶的功能发挥。脂肪的分解除了为机体提供能量外,也是对肥胖及肥胖引发的代谢疾病的一种调控。在引发肥胖产生的因素中,果糖占有很高的比例。果糖代谢在机体维持生理平衡方面尤为重要,糖酵解与糖异生作为其代谢过程中的两个能量转换方式显得必不可少。果糖1-6-二磷酸醛缩酶（ALDOB）都参与了糖酵解与糖异生这两个重要通路,因此成为了果糖代谢中的关键酶之一。在特异性敲除小鼠肝脏中的ALDOB基因后,观察到小鼠体内产生了脂质的堆积现象。虽然有明显的脂质堆积现象,但是脂质堆积与ALDOB基因的敲除二者之间的联系尚未阐释清楚,因此在本研究中我们以果糖代谢关键酶ALDOB为研究对象,阐释了ALDOB参与脂肪分解的作用机制。结论如下:1、在He La细胞中过量表达ALDOB时,细胞内的脂滴数量、甘油三酯含量明显少于对照组,甘油释放量则明显高于对照组。在Hep G2细胞中过量表达ALDOB时,ATGL、HSL、G0S2这三个与脂质水解有关联的基因,在m RNA表达水平被上调;SCD、FASN这两个与脂质的合成有关联的基因,在m RNA表达水平上被下调;与自噬相关的基因LC3B、LAMP1、p62,以及ATGL、G0S2在蛋白表达水平上被上调。因此可以确定ALDOB参与了脂肪的分解。2、免疫共沉淀实验、脂滴变化观察、甘油三酯含量与甘油释放测定等结果,共同显示了ALDOB与ATGL、MAGL、G0S2、RGN存在相互作用;并且ALDOB作用于ATGL的PT（10-178）区域,ALDOB上调ATGL的表达并不依赖于p53激活ATGL的表达通路;ALDOB与RGN为直接相互作用。ALDOB能与ATGL、MAGL、RGN共同促进细胞内脂滴减少,甘油三酯含量的降低,使细胞释放更多的甘油。ALDOB可能抑制G0S2在细胞内抑制脂肪分解的功能,从而促进细胞内脂肪的分解。3、解析了鼠源ALDOB蛋白的结构。增加了对ALDOB蛋白的了解,同时也能更直接地去探究ALDOB参与生理活动的机制,并为此提供研究基础。ALDOB通过多种方式参与了细胞脂肪的分解,对这一机制的研究可以为治疗因果糖摄入过多而引起的肥胖以及因肥胖所引起的一系列代谢疾病提供新的治疗方向。但是ALDOB参与脂肪分解的更为具体的作用机制仍然有待我们去探索。

关键词：脂肪分解结构解析 ALDOB ATGL GOS2 MAGL RGN

牛磺熊脱氧胆酸缓解TNF-a诱发3T3-L1细胞脂肪分解及其机制

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牛磺熊脱氧胆酸缓解TNF-a诱发3T3-L1细胞脂肪分解及其机制

作者：夏文燕福建医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨牛黄熊脱氧胆酸(TUDCA)对TNF-a诱发3T3-L1细胞脂肪分解的影响及其可能机制。方法：以3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成3T3-L1脂肪细胞;将TNF-a以不同浓度和不同时间作用3T3-L1脂肪细胞后，观察TNF-a对细胞生存率的影响，以确定TN... 详细信息

目的：探讨牛黄熊脱氧胆酸(TUDCA)对TNF-a诱发3T3-L1细胞脂肪分解的影响及其可能机制。方法：以3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成3T3-L1脂肪细胞;将TNF-a以不同浓度和不同时间作用3T3-L1脂肪细胞后，观察TNF-a对细胞生存率的影响，以确定TNF-a适宜的作用浓度和时间;通过测定培养基中甘油含量和观察细胞内脂滴的形态变化评价TUDCA对TNF-a诱发脂肪分解的影响;同时用WesternBlotting检测脂解关键调节者围脂滴蛋白PerilipinA蛋白和内质网应激标志蛋白Bip、IRE、JNK、p-IRE、p-JNK的表达,进一步明确其具体信号机制。结果：TNF-(a50ng/ml)孵育3T3-L1脂肪细胞24h后，甘油释放量明显增高(x±s，.89±0.24)，脂滴弥碎，而TUDCA(1mmol/L)预处理3h后甘油释放量减少(x±s，2.41±0.17)(P脂肪分解，增加游离脂肪酸(FFA)的释放，引发内质网应激，调控PerilipinA蛋白表达。②TUDCA可缓解TNF-a诱发的脂肪分解，其机制可能涉及抑制内质网应激信号通路IRE/JNK信号通路，进而影响PerilipinA的表达。

关键词：脂肪分解 TUDCA TNF-a 3T3-L1脂肪细胞内质网应激

不同发酵剂对羊肉发酵香肠理化品质和脂肪分解的影响

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不同发酵剂对羊肉发酵香肠理化品质和脂肪分解的影响

作者：马丹内蒙古农业大学

学位级别：硕士

本实验将筛选出性状优良的乳酸菌并与实验组保存的木糖葡萄球菌进行复配,选出最佳比例作为发酵剂制作羊肉发酵香肠。研究不同发酵剂对羊肉发酵香肠加工过程理化指标尤其是脂质变化规律的影响,以期为发酵剂的筛选,发酵香肠脂质氧化风味... 详细信息

本实验将筛选出性状优良的乳酸菌并与实验组保存的木糖葡萄球菌进行复配,选出最佳比例作为发酵剂制作羊肉发酵香肠。研究不同发酵剂对羊肉发酵香肠加工过程理化指标尤其是脂质变化规律的影响,以期为发酵剂的筛选,发酵香肠脂质氧化风味形成机理研究、品质调控提供依据。研究结果如下：通过对内蒙古农业大学微生物实验室保存的从内蒙古传统肉肠中初步筛选出来的33株乳酸菌进行进一步的筛选,筛选出适合用于发酵香肠的乳酸菌共3株,即X3-9、X3-10、X3-12。通过耐盐性、.耐亚硝酸性、生长曲线的测定,初步证实了这3株乳酸菌可以适应发酵香肠的环境,可以用作香肠发酵剂。通过鉴定X3-9是植物乳杆菌,X3-10和X3-12是干酪乳杆菌干酪亚种。我们选用X3-9和X3-12做后续实验。将上述X3-9、X3-12分别与木糖葡萄球菌进行复配实验,发现菌株之间无拮抗作用,且X3-9与木糖葡萄球菌最佳复配比为1：2,X3-12与木糖葡萄球菌最佳复配比为1：2。以植物乳杆菌X3-9(X3-9单一组),干酪乳杆菌X3-12(X3-12单一组),植物乳杆菌复配组(X3-9复配组),干酪乳杆菌复配组(X3-12复配组)为发酵剂,自然发酵为对照组制作5组羊肉发酵香肠。X3-12复配组乳酸菌数显著高于X3-12单一组(p脂肪酸尤其是多不饱和脂肪酸的释放,在发酵香肠中HSL有比ATGL更重要的作用。X3-9单一组和X3-12复配组多不饱和脂肪酸含量较高,达到70mg/100g,高于对照组(50mg/100g)。在香肠成熟时,X3-9单一组亚油酸含量高于其他组,X3-12复配组EPA含量高于其他组。

关键词：乳酸菌羊肉发酵香肠理化性质脂肪分解影响

BRL37344对3T3-L1细胞脂肪分解及瘦素、TNF-α表达的影响

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BRL37344对3T3-L1细胞脂肪分解及瘦素、TNF-α表达的影响

作者：岳杉天津医科大学

学位级别：硕士

目的：肥胖已成为严重影响人类健康的世界公共卫生间题,与2型糖尿病(type2diabetes mellitus, T2DM)、高血压、冠心病、肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关,但目前对于肥胖的病因、发病机制仍有待研究,且缺少直接有效的治疗手段。选择性... 详细信息

目的：肥胖已成为严重影响人类健康的世界公共卫生间题,与2型糖尿病(type2diabetes mellitus, T2DM)、高血压、冠心病、肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关,但目前对于肥胖的病因、发病机制仍有待研究,且缺少直接有效的治疗手段。选择性β3-肾上腺素受体激动剂((33-adrenergic receptor agonist, β3-ARa)能够增加啮齿类动物白色脂肪组织(white adipose tissue, WAT)的脂质分解与棕色脂肪组织(brown adipose tissue, BAT)的非颤栗性产热,降低体脂含量,为肥胖的治疗提供了新的思路。脂肪组织是能量储存器官,也是人体最大的内分泌组织,其分泌的许多脂肪细胞因子对体内能量平衡、糖脂代谢有不可或缺的作用。本研究旨在通过观察选择性β3-ARa BRL37344对分化成熟的3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及与脂代谢相关的脂肪细胞因子瘦素、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-a, TNF-a)表达分泌的影响,进一步明确β3-ARa改善脂代谢降低体重的效应,并探讨其作用机制。方法：在37℃,5%C02条件下培养3T3-L1前脂肪细胞,采用含有胰岛素、地塞米松及3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-l-methylxanthine, IBMX)的分化培养基诱导其分化成熟,通过观察细胞形态与油红O染色鉴定细胞。脂肪细胞分化成熟后,采用不同浓度(0、10-9、10-7mo1/L)与不同作用时间(0、12、24、48h)的BRL37344干预,收集细胞及培养基于-80℃冻存。通过比色法测定培养基中的甘油含量作为评价脂肪分解的指标,采用RT-PCR法检测细胞内瘦素、TNF-α mRNA的表达,ELISA法测定培养基内瘦素、TNF-a的蛋白含量。实验数据以均数±标准差(x+s)表示,采用SPSS13.0统计软件进行t检验和方差分析,P脂肪细胞培养基内的甘油含量,增高水平呈剂量与时间依赖性。最大刺激作用为10-7mol/L BRL37344干预48h,甘油含量较对照组增加了95～102%(P脂肪细胞瘦素、TNF-a的表达与分泌,差异均有统计学意义,随着浓度的增加,瘦素、TNF-a的表达、分泌量降低的更为显著,10-7mol/L BRL37344干预48h时达最低水平瘦素、TNF-α mRNA的表达量分别降低了97%(P脂肪细胞12h后,瘦素、TNF-α的表达、分泌量与干预前相比无明显变化(P>0.05),干预24h后可表现出显著的抑制作用,48h后达到最低水平,瘦素、TNF-α mRNA的表达量分别降低了119%(P脂肪细胞的脂质分解,减少细胞内的脂质含量。 ***37344能够增加脂肪细胞对瘦素、TNF-α的敏感性,改善其抵抗引起的代谢紊乱,促进其减重作用的发挥。BRL37344与脂肪细胞内分泌功能之间的相互作用也是药效产生的基础。

关键词： β3-肾上腺素受体激动剂 BRL37344 3T3-L1脂肪细胞瘦素 TNF-α 脂肪分解肥胖

脂肪细胞特异性NFE2L1缺失对小鼠脂肪分解代谢的影响

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脂肪细胞特异性NFE2L1缺失对小鼠脂肪分解代谢的影响

作者：王婉绮中国医科大学

学位级别：硕士

目的:伴随着生活水平的不断提高,我国居民脂肪摄入量逐渐增多,加剧了肥胖及其相关疾病的流行。肥胖发生的本质是脂肪细胞功能障碍和过度蓄积。已有研究发现,有多个蛋白亚型的转录因子NFE2L1参与包括脂质代谢在内的多种生物学功能。本课... 详细信息

目的:伴随着生活水平的不断提高,我国居民脂肪摄入量逐渐增多,加剧了肥胖及其相关疾病的流行。肥胖发生的本质是脂肪细胞功能障碍和过度蓄积。已有研究发现,有多个蛋白亚型的转录因子NFE2L1参与包括脂质代谢在内的多种生物学功能。本课题组在前期研究中发现,脂肪细胞特异性Nfe2l1基因敲除（Nfe2l1（f）-KO）损伤小鼠脂肪分解能力,导致脂肪细胞肥大和造成严重的脂肪萎缩和炎症。由脂肪细胞特异性NFE2L1缺失造成的脂肪炎症可被促进脂肪生成的PPARγ激动剂罗格列酮处理加重,和被刺激脂肪分解的β3-AR激动剂CL316243处理缓解。前期研究表明NFE2L1在脂肪分解代谢中发挥着关键作用。然而,脂肪细胞特异性NFE2L1缺失对全身能量代谢的影响及其作用机制仍未明了。为此,我们进一步探索了脂肪细胞特异性NFE2L1缺失对小鼠糖脂代谢的影响及其作用机制,为脂代谢紊乱的机制研究和制定预防肥胖相关疾病策略提供实验依据。研究方法:1.给予Nfe2l1（f）-KO及其同窝对照小鼠禁食处理:禁食前更换垫料,撤掉饲料并保持其正常饮水,进行16 h（17:00至次日9:00）隔夜禁食处理。2.称重Nfe2l1（f）-KO及其同窝对照小鼠的皮下脂肪、性腺旁脂肪和肝脏等重要脏器,计算脏器系数;提取原代白色脂肪细胞蛋白,应用Western Blot技术检测NFE2L1及脂解酶相关蛋白;提取原代白色脂肪细胞RNA,应用q RT-PCR技术检测脂解酶相关基因转录水平;分离白色脂肪基质细胞,应用流式细胞术检测白色脂肪组织巨噬细胞浸润情况。3.应用相关试剂盒检测禁食后小鼠血浆中的脂联素与瘦素含量和肝脏中的甘油三酯与糖原含量;应用病理切片H＆E染色观察禁食后小鼠肝脏组织中的脂滴变化情况;应用q RT-PCR技术检测禁食后小鼠肝脏脂肪酸代谢及糖异生相关基因转录水平。4.应用小鼠呼吸代谢笼系统监测小鼠摄食、饮水和呼吸代谢情况。5.检测脂肪组织对胰岛素的敏感性:对Nfe2l1（f）-KO及其同窝对照小鼠腹腔注射胰岛素（1.0 U/kg,10 min）,以PBS处理为对照组,应用Western Blot技术对白色脂肪组织p-AKT和总AKT的蛋白水平进行检测。6.评价Nfe2l1（f）-KO及其同窝对照小鼠的脂肪分解能力:设立禁食、非禁食以及CL316243（1 mg/kg,15 min）处理组,应用相关检测试剂盒检测小鼠血浆中甘油、甘油三酯和自由脂肪酸含量。7.应用荧光素酶报告基因方法和染色质免疫共沉淀方法分析NFE2L1对脂解酶基因的转录调控作用。结果:1.脂肪细胞特异性NFE2L1缺失导致脂肪组织炎症和分泌功能受损。流式细胞术分析结果显示,脂肪细胞特异性NFE2L1缺失增加巨噬细胞浸润,提示脂肪组织发生炎症损伤;对小鼠血浆脂联素与瘦素水平的检测结果显示,脂肪细胞特异性NFE2L1缺失降低小鼠血浆脂联素和瘦素水平,提示脂肪细胞分泌功能受损。2.脂肪细胞特异性NFE2L1缺失后,脂肪组织对胰岛素的敏感性无明显变化。对p-AKT和总AKT蛋白的检测结果显示,Nfe2l1（f）-KO及其对照小鼠对胰岛素反应性并无明显差异。3.脂肪细胞特异性NFE2L1缺失抑制禁食诱发的脂肪分解作用。小鼠呼吸代谢监测结果显示,在禁食过程中,Nfe2l1（f）-KO小鼠的呼吸熵显著高于其对照小鼠,提示脂肪细胞特异性NFE2L1缺失可能会抑制禁食所诱发的脂肪分解过程和供能底物的转换。4.脂肪细胞特异性NFE2L1缺失后,肝脏糖脂代谢功能紊乱。禁食后,对照组相比,Nfe2l1（f）-KO小鼠肝脏中的甘油三酯含量显著降低;H＆E染色结果显示Nfe2l1（f）-KO小鼠肝脏中的脂滴体积变少;Nfe2l1（f）-KO小鼠肝脏组织中糖原含量呈下降趋势;q RT-PCR结果显示,Nfe2l1（f）-KO小鼠脂肪酸代谢相关基因以及糖异生相关基因表达相对升高。上述结果提示肝脏脂肪生成减少,糖异生增加。5.在β3-AR激活和禁食条件下,脂肪细胞特异性NFE2L1缺失导致脂解能力降低。我们检测了正常喂食,CL316243处理和禁食三种条件下小鼠血浆中的自由脂肪酸,甘油和甘油三酯含量。结果显示,禁食后Nfe2l1（f）-KO小鼠血浆中的三个指标水平均相对降低;在CL316243处理后,Nfe2l1（f）-KO小鼠血浆中甘油含量也显著减少。上述结果说明在β3-AR激活和禁食条件下,Nfe2l1（f）-KO小鼠的脂解能力减弱。6.脂肪细胞特异性NFE2L1缺失降低了小鼠原代脂肪细胞中脂解酶基因及蛋白的表达。Nfe2l1（f）-KO小鼠原代脂肪细胞中脂解酶相关基因的m RNA和蛋白表达水平均降低。***2L1调控HSL的转录表达。荧光素酶报告基因分析结果显示,NFE2L1-583亚型显著激活了包含ARE序列的Lipe2启

关键词： NFE2L1 白色脂肪脂肪分解糖脂代谢

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RGN在脂肪分解的作用机制

RGN在脂肪分解的作用机制

作者：张兴政安徽大学

学位级别：硕士

脂肪分解过程受到激素信号、脂滴相关蛋白和脂肪酶的高度调控。脂解失调会影响能量的平衡。脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）作为脂解第一步的限速酶,将甘油三酯（TG）分解为甘油二酯（DG）并释放出自由脂肪酸。激素敏感性脂肪酶（HSL）作为... 详细信息

脂肪分解过程受到激素信号、脂滴相关蛋白和脂肪酶的高度调控。脂解失调会影响能量的平衡。脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）作为脂解第一步的限速酶,将甘油三酯（TG）分解为甘油二酯（DG）并释放出自由脂肪酸。激素敏感性脂肪酶（HSL）作为催化水解甘油三酯（TG）的第二步的限速酶,将甘油二酯（MG）分解为甘油单酯并释放自由脂肪酸。单酰基甘油脂肪酶（MGL）进一步将甘油单酯分解为脂肪酸和甘油。ATGL、HSL和MGL作为全身能量稳态的关键酶,介导脂解作用,与代谢疾病密切相关。衰老标记蛋白（RGN）,又称为钙调蛋白,参与脂代谢的调节机制,但RGN在脂代谢中的具体作用及机制并不明确。因此,本文以RGN为研究对象,阐述了RGN介导的甘油三酯分解的机制。结论如下:1.根据细胞内甘油三酯含量测定分析,发现在He La细胞中过表达RGN导致甘油三酯含量降低,甘油的释放量升高,因此推测RGN影响甘油三酯的代谢。进一步研究RGN介导甘油三酯分解机制的发现,在饥饿刺激的脂解条件下,RGN的过表达可以促进脂滴中甘油三酯的水解。***是脂肪分解的限速水解酶,免疫共沉淀结果显示RGN与ATGL相互作用。甘油三酯测定和甘油释放测定结果证实,RGN介导的细胞甘油三酯含量的降低与ATGL相关。RGN通过ATGL介导的脂肪分解促进甘油三酯含量降低。***是脂肪分解的第二个水解酶,免疫共沉淀结果显示RGN与HSL相互作用。甘油三酯测定和甘油释放测定结果证实,RGN介导的细胞甘油三酯含量的降低与HSL相互作用有关。RGN通过HSL介导的脂肪分解促进甘油三酯的降低。实验结果显示:RGN对HSL作用的效率没有RGN对ATGL作用效率高。***是脂肪分解的最后一步水解酶,免疫共沉淀结果显示RGN与MGL有相互作用。然而,RGN与MGL的结合位点并不清楚,是否与N端patatin结构域结合还需要进一步实验验证。RGN与ATGL相互作用促进ATGL脂解进而促进脂质分解,作为脂解的促进剂,在细胞中过表达可促进脂肪分解。RGN与ATGL、HSL和MGL作用机制及其对甘油三酯分解的发现可能为靶向肥胖相关代谢紊乱疾病提供了潜在治疗靶标。

关键词：衰老标记蛋白(RGN) 脂肪甘油三酯脂肪酶(ATGL) 激素敏感性脂肪酶(HSL) 脂肪分解

Grb14通过HSL促进肝脏细胞脂肪分解的作用机理

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Grb14通过HSL促进肝脏细胞脂肪分解的作用机理

作者：瞿敏安徽大学

学位级别：硕士

甘油三酯(TG)作为动物体内脂肪最主要的贮存形式之一,在机体缺乏外界能量供给或需要脂肪分解提供能量时,TG在脂肪酶如脂肪甘油三酯酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、单酰基甘油脂肪酶(MGL)等作用下释放出游离的脂肪酸(FA)和甘油。脂解... 详细信息

甘油三酯(TG)作为动物体内脂肪最主要的贮存形式之一,在机体缺乏外界能量供给或需要脂肪分解提供能量时,TG在脂肪酶如脂肪甘油三酯酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)、单酰基甘油脂肪酶(MGL)等作用下释放出游离的脂肪酸(FA)和甘油。脂解代谢除了受这些分解酶的调控,还受各种生长因子、激素、转录因子等调控,当这些过程出现异常时,机体可能会产生各种病症如:肥胖症、代谢综合征、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、高胰岛素血症以及癌症等。生长因子受体结合蛋白14(Grb14)是一种接头蛋白,既往研究表明Grb14通过特异性地抑制胰岛素受体酪氨酸激酶的活性调控葡糖代谢,然而Grb14在脂肪分解代谢中的作用暂不清楚。因此,本研究通过免疫荧光、免疫沉淀、甘油三酯及甘油含量的测定、体外蛋白纯化、实时荧光定量PCR等分子生物学方法分别在蛋白水平及RNA水平探究Grb14在脂肪分解代谢中的作用,旨在揭示Grb14在调控脂肪分解代谢中具体的作用机理。主要结论如下:(1)Grb14促进肝脏细胞的脂肪分解。在人源肝脏细胞HL-7702中过表达Grb14测定细胞中甘油三酯含量以及培养液中甘油的释放量,结果发现:表达Grb14的细胞中甘油三酯含量较对照组显著下调,甘油的释放量上升。其次在He La细胞中过表达Grb14检测脂滴的变化,免疫荧光结果发现:表达Grb14的细胞中脂滴的数目较对照组明显减少。因此推测Grb14的高表达,促进细胞中脂肪的分解。(2)Grb14与HSL协同促进肝脏细胞的脂肪分解。HSL作为最先发现的脂肪酶,既往研究表明它参与甘油三酯、甘油二酯及胆固醇酯的水解。试验发现Grb14的N端与HSL的N端有相互作用,通过对肝细胞中积累的甘油三酯及培养基中释放的甘油含量的测定,发现Grb14与HSL协同促进细胞中甘油三酯的水解。免疫荧光试验得到相同的结果,单表达Grb14或HSL的细胞,脂滴含量明显减少,而共表达Grb14与HSL的细胞中,脂滴几乎完全消失。在HL-7702细胞中过表达Grb14发现,脂肪分解相关基因如ATGL,HSL、CGI-58、ADRB、ACOX和LPL在m RNA水平显著上调;敲低Grb14,大多数脂肪分解相关基因的表达显著下调。结果显示:无论在RNA水平还是在蛋白质水平,Grb14都促进肝脏细胞的脂肪分解。(3)Grb14通过调控HSL的水解酶活性与肝脏细胞的自噬促进脂肪的分解。试验结果显示Grb14能直接影响PKA介导的HSL的磷酸化,调控HSL介导的脂滴的水解;同时,Grb14通过影响自噬标记蛋白的含量及自噬底物的积累促进肝细胞中的脂噬,为肝细胞中脂滴的分解提供新的思路。综上所述,Grb14作为肝细胞中HSL的上游元件,一个新的信号节点调控脂解代谢,同时也为脂肪代谢类疾病的药物开发提供新思路。

关键词：生长因子受体结合蛋白14(Grb14) 激素敏感性脂肪酶(HSL) 脂肪分解磷酸化脂噬