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小鼠胰腺炎模型中PDG与胰腺导管上皮修复再生关系的研究

小鼠胰腺炎模型中PDG与胰腺导管上皮修复再生关系的研究

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作者：刘旭呈东南大学

学位级别：硕士

目的:利用腹腔注射雨蛙素法诱导小鼠胰腺急慢性炎症模型,通过组织病理学切片观察胰腺导管腺体(pancreatic duct glands,PDG)及胰腺导管上皮细胞的变化,并利用免疫组化等实验方法,观察在炎症情况下PDG的变化以及与胰腺导管上皮修复再生... 详细信息

目的:利用腹腔注射雨蛙素法诱导小鼠胰腺急慢性炎症模型,通过组织病理学切片观察胰腺导管腺体(pancreatic duct glands,PDG)及胰腺导管上皮细胞的变化,并利用免疫组化等实验方法,观察在炎症情况下PDG的变化以及与胰腺导管上皮修复再生的关系,为PDG与胰腺上皮修复再生的关系提供实验依据。方法:1、C57BL/6小鼠胰腺炎模型的建立:AP组(n=6)以雨蛙素50μg/kg腹腔注射6次,间隔1小时,诱导急性胰腺炎模型;CP组(n=14)以雨蛙素50g/kg腹腔注射6次,间隔1小时,5天/周,连续六周;Control组(n=12)以生理盐水腹腔注射6次/天,间隔1小时。AP组于初次给药24h后腹腔麻醉,取胰腺组织,CP组分别于连续给药2、4、6周取材。留取模型小鼠胰腺组织称重,计算胰体比;再对胰腺组织进行病理学评分评估炎症模型的建立;2、研究PDG及胰腺导管上皮细胞的变化:应用HE染色法观察在急慢性炎症下PDG及胰腺导管上皮细胞形态学的变化;应用AB-PAS染色法观察PDG及胰腺导管上皮细胞粘蛋白的分泌情况;应用Ki67免疫组化观察PDG及胰腺导管上皮细胞的增殖情况;3、研究在炎症模型中PDG蛋白标记物的表达变化:用免疫组化的方法来检测炎症模型Pdx1、CK19、Sox9、Ngn3等标记物在PDG中的表达情况。结果:1、雨蛙素腹腔注射法成功建立急慢性胰腺炎模型,AP组的胰体比为1.10±0.140%,Control组胰体比为0.66±0.02%,两者P胰腺组织出现腺泡水肿、组织充血、炎症细胞浸润等现象,胰腺病理学评分为3.33±0.52;CP 组的胰体比为 0.18±0.02%,与 Control 组相比 P胰腺组织出现腺泡萎缩坏死、组织纤维化等现象,胰腺病理学评分为 8.50±0.55。2、在急性胰腺炎模型中胰腺导管上皮周围出现少数的PDG,胰腺组织充血水肿,而在慢性胰腺炎模型中,导管上皮周围可见较多的PDG,胰腺腺泡萎缩,导管上皮明显增生。在CP组中胰腺导管AB-PAS染色呈均质红色,而在PDG中染色呈特异性的蓝紫色,且PDG中Ki67的HIS评分为3.5677±0.5854,与CP组胰腺导管中 Ki67 的 HIS 评分 1.1333±0.3266 及 Control 组 PDG 中 Ki67 的 HIS评分0.2667±0.1033有明显的差异性,P胰腺炎模型中,PDG中Pdx1、CK19、Sox9、Ngn3蛋白的表达与对照组无明显的差异性;而在慢性胰腺炎模型中,PDG中Pdx1、CK9、Sox9、Ngn3蛋白均有阳性表达,其HIS评分分别为1.9667±0.2338、1.000±0.1789、0.7000±0.2098、0.9000±0.2098,与 Control 组 PDG 的 HIS 评分 0.0333±0.0817、0.4667±0.2422、0.0333±0.0817、0.0000±0.0000 相比有显著差异性,P胰腺炎模型,其诱导的急性胰腺炎模型的病理学表现属于急性水肿型胰腺炎,腺泡坏死不明显,导管上皮组织损伤轻微;而在慢性胰腺炎模型中腺泡萎缩坏死,导管上皮组织损伤较严重。2、在急性胰腺炎模型中,胰腺损伤轻微,导管上皮修复再生作用较弱,PDG增殖不明显;而在慢性胰腺炎模型中,导管上皮损伤严重,在其周围组织可见PDG明显的增殖变化,且PDG与导管均分泌粘蛋白,而PDG能够分泌AB-PAS染色呈特异性蓝紫色的粘蛋白,可以推断PDG参与胰腺损伤导管上皮的修复再生过程。3、在慢性胰腺炎模型中,PDG中Pdx1、CK19、Sox9、Ngn3蛋白表达呈阳性,这些标记物与胰腺组织的发生发育、胰腺细胞的分化成熟等都有着密切联系,因此推断PDG可能以胰腺干细胞巢的形式分布于胰腺组织中;在胰腺导管上皮损伤时,PDG中的细胞可能会定向分化导管上皮细胞来完成上皮组织的修复再生。

关键词：胰腺炎模型 PDG 修复再生胰腺干细胞标记物

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