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海豚链球菌胞外产物的抗原性及免疫保护效果研究

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2015年第4期45卷 35-39页

作者：孙敏唐小千赵娜绳秀珍战文斌中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室山东青岛266003

以健康牙鲆(Paralichthys olivaceus)为攻毒对象,检测了5株海豚链球菌(Streptococcus iniae)菌株的毒力特性。结果显示,菌株NUF849、NUF812、NUF701、NUF693和NUF633对牙鲆的半数致死浓度分别为3.0×105、1.1×106、4.2×107、1.2×107和2.4×107 CFU/mL。以平板玻璃纸法分别制备5株海豚链球菌的胞外产物,SDS-PAGE分析其蛋白组成。结果显示,5株海豚链球菌胞外产物均存在14、20、27、30、38、46、57和68kDa等主要蛋白条带,而36kDa蛋白条带仅存在于毒力较强的NUF849、NUF812和NUF693菌株。以强毒株NUF849的胞外产物免疫健康牙鲆,并在免疫后28d进行攻毒,取攻毒后存活牙鲆的血清对5株海豚链球菌的胞外产物进行western-blot检测。结果显示,制备的抗血清可与5株菌共有的46、50、62及88kDa蛋白条带发生阳性反应。以制备的强毒株NUF849和弱毒株NUF701胞外产物分别免疫牙鲆,在免疫后42d以菌株NUF812对免疫牙鲆进行攻毒。结果显示,菌株NUF849和NUF701胞外产物对牙鲆感染的相对免疫保护率分别为32.4%和16.2%。研究结果为揭示海豚链球菌胞外产物的毒力特性和亚单位疫苗候选蛋白的筛选提供了参考数据。

关键词：海豚链球菌牙鲆胞外产物抗原性免疫保护

维氏气单胞菌TH0426胞外产物酶活性及免疫原性分析

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中国兽医学报 2017年第10期37卷 1896-1899页

作者：毕建飞陈龙康元环孙武文吴同垒张海月张冬星孟良良单晓枫钱爱东吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066004

为研究维氏气单胞菌(Aeromonasveronii)胞外产物的合成及其功能,本试验采用超滤浓缩法提取Aeromonasveronii TH0426的胞外产物,通过平板琼脂扩散法对其主要酶成分进行初步研究,对蛋白酶、脂酶、卵磷脂酶、淀粉酶、脲酶、明胶酶和溶血活... 详细信息

为研究维氏气单胞菌(Aeromonasveronii)胞外产物的合成及其功能,本试验采用超滤浓缩法提取Aeromonasveronii TH0426的胞外产物,通过平板琼脂扩散法对其主要酶成分进行初步研究,对蛋白酶、脂酶、卵磷脂酶、淀粉酶、脲酶、明胶酶和溶血活性进行测定,对斑马鱼腹腔注射胞外产物测定其致病性,并对其免疫原性进行初步分析。结果显示,菌株胞外产物具有脂酶、淀粉酶、蛋白酶和溶血活性,人工感染试验结果表明,菌株胞外产物对斑马鱼具有致病性,其半数致死量为3.355 0μg/条。SDS-PAGE表明,ECP由19条蛋白带组成,利用鲤鱼抗ECP血清进行Western blot显示,组成ECP的19条蛋白带中有5条具有免疫原性,能够引发机体的免疫应答反应产生抗体,其相对分子质量为别为110 000,47 000,45 000,42 000和38 000,为Aeromonasveronii胞外产物亚单位疫苗的研制与开发提供理论依据。

关键词： Aeromonasveronii 胞外产物斑马鱼致病性免疫原性

芽孢杆菌胞外产物对凡纳滨对虾蛋白酶活性影响的体外试验

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大连水产学院学报 2007年第5期22卷 372-376页

作者：曹煜成李卓佳冯娟中国水产科学研究院南海水产研究所广东广州510300

用半透膜法收集地衣芽孢杆菌Bacillus licheniform isDe株的胞外产物(Extracellu lar products,ECP),以匀浆离心法提取凡纳滨对虾Litopenaeus vannam ei的肝胰腺和肠道消化酶,将ECP和对虾消化酶提取液按1∶9(体积比)混合,研究不同温度... 详细信息

用半透膜法收集地衣芽孢杆菌Bacillus licheniform isDe株的胞外产物(Extracellu lar products,ECP),以匀浆离心法提取凡纳滨对虾Litopenaeus vannam ei的肝胰腺和肠道消化酶,将ECP和对虾消化酶提取液按1∶9(体积比)混合,研究不同温度、pH条件下ECP对对虾蛋白酶活性的影响。结果表明:在不同温度、pH条件下,试验组与对照组没有显著性差异(P>0.05),即地衣芽孢杆菌ECP在体外条件下对对虾蛋白酶活性没有显著性影响;且试验组中芽孢杆菌ECP的添加量与其蛋白酶活性呈负相关。

关键词：地衣芽孢杆菌胞外产物凡纳滨对虾蛋白酶体外

哈维氏弧菌TS-628菌株胞外产物(ECP)蛋白酶活性的研究

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海洋水产研究 2008年第1期29卷 81-85页

作者：覃映雪苏永全陈雅芳王军集美大学水产学院厦门361021 厦门大学海洋系亚热带海洋研究所361005

采用复性电泳技术,研究环境pH、温度及培养时间对哈维氏弧菌TS-628菌株胞外产物(ECP)蛋白酶活性的影响。结果表明,胞外产物蛋白酶最适反应pH在8.5左右,酸对ECP蛋白酶活性的抑制明显强于碱对它的抑制作用;最适反应温度在20～50℃之间,20... 详细信息

采用复性电泳技术,研究环境pH、温度及培养时间对哈维氏弧菌TS-628菌株胞外产物(ECP)蛋白酶活性的影响。结果表明,胞外产物蛋白酶最适反应pH在8.5左右,酸对ECP蛋白酶活性的抑制明显强于碱对它的抑制作用;最适反应温度在20～50℃之间,20℃以下或50℃以上蛋白酶活性则受到明显抑制,表明蛋白酶不仅对高温敏感,对低温也很敏感;培养12h的胞外产物蛋白酶活性最强。最适温度和pH条件下,主要出现3种蛋白酶,其中分子量为94kDa和26kDa的两种蛋白显示了很强的蛋白酶活性,而且能在比较极端的温度和pH值条件下保持活性,而分子量为35kDa蛋白酶只在最适反应条件下出现,并且该蛋白酶的最适反应条件与弧菌病暴发时的环境条件极为相似。由此可推测分子量94kDa和分子量为26kDa的两种蛋白可能是弧菌维持生存所必需,而分子量为35kDa的蛋白酶虽然只出现在特定条件下,却可能在致病过程中起重要作用。

关键词：哈维氏孤菌胞外产物蛋白酶

杂交鲍稚鲍“漫爬病”潜在病原菌胞外产物的分析及种类鉴定

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水产科学 2007年第10期26卷 560-563页

作者：祝玲林阿乞李娟刘丽蔡俊鹏吴忠业武汉大学药学院福建省漳浦县海洋与渔业局水产技术推广站福建漳浦363200 华南理工大学轻工食品学院广东广州510640 广东省汕尾市粤顺鲍鱼养殖场广东汕尾516623

从发病的杂交鲍(皱纹盘鲍×盘鲍)稚鲍中共分离27株菌株,并对其分泌胞外产物(包括酪蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶和溶血素)的能力进行了分析。试验结果表明,具有分泌胞外蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶和溶血素能力... 详细信息

从发病的杂交鲍(皱纹盘鲍×盘鲍)稚鲍中共分离27株菌株,并对其分泌胞外产物(包括酪蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶和溶血素)的能力进行了分析。试验结果表明,具有分泌胞外蛋白酶、明胶酶、淀粉酶、脂肪酶、磷脂酶和溶血素能力的菌株分别占总菌株数的81.5%(22/27)、74.1%(20/27)、18.5%(5/27)、0%(0/27)、11.1%(3/27)、29.6%(8/27)。其中,1#、14#菌株具有很强的产胞外蛋白酶能力,而明胶酶的最大分泌者为2#、7#、9#、17#菌株,淀粉酶的为11#、14#菌株,磷脂酶的为11#、15#菌株,溶血素的为菌株10#、21#。此外,10#、11#、15#菌株可同时分泌4种胞外产物,而12#、14#、18#、21#、23#、24#菌株可同时分泌3种胞外产物。综合考虑每一种胞外酶的潜在致病作用,以及菌株分泌多种胞外酶的能力,初步确认11株菌为潜在的致病菌:1#、2#、7#、9#、10#、11#、12#、14#、15#、17#、21#。用API条带法对它们进行了种类鉴定,11株菌中巴斯德氏菌和假单胞菌所占的比例分别为45.5%、27.3%。

关键词：杂交鲍稚鲍 “漫爬病” 致病菌胞外产物

斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物的生物学特性与致病性研究

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水利渔业 2008年第1期28卷 99-101页

作者：陈德芳汪开毓耿毅黄小丽四川农业大学动物科技学院四川雅安625014

本实验对斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,Sma)胞外产物(Extracel-lular products,ECP)的生物学特性及其致病性进行了研究。结果表明,Sma胞外产物具有脂肪酶、蛋白酶、明胶酶和脲酶等多种酶活性;同时具有溶... 详细信息

本实验对斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,Sma)胞外产物(Extracel-lular products,ECP)的生物学特性及其致病性进行了研究。结果表明,Sma胞外产物具有脂肪酶、蛋白酶、明胶酶和脲酶等多种酶活性;同时具有溶血活性、肠毒性和Vero细胞毒性;且对小鼠和斑点叉尾鮰都具有明显的致病性和致死性。

关键词：胞外产物嗜麦芽寡养单胞菌生物学特性致病性斑点叉尾鮰

青虾源维氏气单胞菌胞外产物生物学特性及蛋白成分分析

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中国兽医杂志 2017年第4期53卷 105-107,I0004页

作者：单晓枫张海月孙武文康元环陈龙张冬星安鼎杰田佳鑫钱爱东吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为了研究维氏气单胞菌胞外产物在青虾感染中的致病作用以及维氏气单胞菌的致病机理,本试验以青虾源维氏气单胞菌QXF0711B为研究对象,提取其胞外产物,采用打孔法测定其胞外产物的酶活性,并对溶血活性进行溶血谱分析,同时分析其致病性。... 详细信息

为了研究维氏气单胞菌胞外产物在青虾感染中的致病作用以及维氏气单胞菌的致病机理,本试验以青虾源维氏气单胞菌QXF0711B为研究对象,提取其胞外产物,采用打孔法测定其胞外产物的酶活性,并对溶血活性进行溶血谱分析,同时分析其致病性。应用液相质谱与串联质谱相结合方法(LC-MSMS)对其胞外产物蛋白成分进行鉴定,利用Gene Ontology(GO)对已鉴定蛋白进行生物学过程、分子功能和细胞组分的分类分析。结果表明:QXF0711B菌株胞外产物具有淀粉酶活性、脂肪酶活性、蛋白酶活性和溶血活性,不具有明胶酶活性;其可溶解多种动物红细胞,尤以对鱼类红细胞溶血性更强,但对鸡、鸭红细胞无溶血活性。通过对菌株胞外产物蛋白成分分析显示有90种蛋白:共参与45种生物学过程,主要涉及碳水化合物代谢过程、运输等;共有46种分子功能,主要涉及DNA结合、ATP结合、金属离子结合等;为12种细胞组分,主要包括膜的有机组成、细胞质、细胞外膜等。

关键词：维氏气单胞菌胞外产物酶活 LC-MSMS GO分类分析

维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的克隆与生物信息学分析及原核表达

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中国兽医科学 2018年第9期48卷 1152-1159页

作者：宋海超张冬星徐洋张海朋康元环钱爱东单晓枫李影吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江湖州313001

为研究维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的可能相关功能，扩增HisJ基因，并通过同源性比较构建HisJ基因的系统进化树，利用相关软件对HisJ基因编码的蛋白进行生物信息学分析，并对HisJ基因进行原核表达以及表达产物的免疫原性进行检测。结... 详细信息

为研究维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的可能相关功能，扩增HisJ基因，并通过同源性比较构建HisJ基因的系统进化树，利用相关软件对HisJ基因编码的蛋白进行生物信息学分析，并对HisJ基因进行原核表达以及表达产物的免疫原性进行检测。结果显示，HisJ基因全长774bp，编码247个氨基酸，TH0426株HisJ与维氏气单胞茵属同一分支，具有信号肽、跨膜区，属于膜外蛋白，二级结构主要以α螺旋、无规则卷曲为主。经SDS—PAGE分析发现，重组菌可表达出融合性蛋白，并且以10‰的体积接菌、IPTG终浓度为1．0mmol／L诱导8h表达效果最好。Western—blot分析结果显示,重组HisJ蛋白在大肠杆菌中被成功表达且能被小鼠抗HiSJ蛋白血清识别，表明表达的HisJ蛋白具有一定的免疫原性。为进一步对HisJ蛋白的结构功能及与致病性、耐药性关系的研究奠定了基础。

关键词：维氏气单胞菌胞外产物 HisJ蛋白原核表达免疫原性

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维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白的筛选

中国兽医科学 2018年第1期48卷 76-80页

作者：单晓枫毕建飞张冬星陈龙康元环吴同垒孙武文钱爱东吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066004

为筛选维氏气单胞菌胞外产物的免疫反应蛋白,提取维氏气单胞菌TH 0426株胞外产物,利用双向电泳技术对其进行分离,比对蛋白胶与免疫印迹膜上的蛋白反应点,进行质谱鉴定。结果显示,应用免疫蛋白质组学方法筛选维氏气单胞菌胞外产物免疫反... 详细信息

为筛选维氏气单胞菌胞外产物的免疫反应蛋白,提取维氏气单胞菌TH 0426株胞外产物,利用双向电泳技术对其进行分离,比对蛋白胶与免疫印迹膜上的蛋白反应点,进行质谱鉴定。结果显示,应用免疫蛋白质组学方法筛选维氏气单胞菌胞外产物免疫反应蛋白,共得到24个免疫反应蛋白点,成功鉴定18个,经分析为11种蛋白,分别是肽酶S8、长链脂肪酸转运蛋白、溶血素样毒素、膜蛋白、主要外膜蛋白O mp AⅠ、麦芽糖、ABC底物结合转运蛋白和几种假定蛋白。本研究结果为维氏气单胞菌疫苗的研制奠定了基础。

关键词：维氏气单胞菌胞外产物免疫蛋白质组学免疫反应蛋白