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地衣芽孢杆菌胞外产物消化活性的研究

热带海洋学报 2005年第6期24卷 6-12页

作者：曹煜成李卓佳冯娟陈永青吴灶和中国水产科学研究院南海水产研究所广东广州510300 湛江海洋大学水产学院广东湛江524000

将地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的胞外产物置于不同的pH、温度和金属离子条件下,分别测定其蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性的变化。结果表明,当pH为7.5—8.5时胞外产物表现出较高的蛋白酶和淀粉酶活性,胞外产物消化脂肪的最适pH为9.... 详细信息

将地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis的胞外产物置于不同的pH、温度和金属离子条件下,分别测定其蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性的变化。结果表明,当pH为7.5—8.5时胞外产物表现出较高的蛋白酶和淀粉酶活性,胞外产物消化脂肪的最适pH为9.0—10.0。胞外产物水解淀粉、脂肪和蛋白质最适温度分别为60—80、40—60和50—70℃,60℃时蛋白酶活力最大。试验测定了8种金属离子对胞外产物活性的影响,发现Mg2+、Zn2+Cu2+可抑制其水解蛋白质,而Ca2+、Fe3+、Mn2+和Ba2+却无此影响;在胞外产物消化脂肪底物时Co2+、Fe3+、Mn2+和Ba2+均能抑制其活力,而Mg2+、Zn2+能使其消化活力升高,与前者相比,金属离子对淀粉水解的影响相对较小,仅Cu2+有一定的抑制作用,其它离子对其均无明显的影响。还研究了不同胞外产物浓度与生物学活性的相关性,发现当反应体系中胞外产物浓度升高时水解蛋白质的活力会相应降低,但对脂肪的消化活力则与胞外产物的浓度呈正相关。反应体系中胞外产物的浓度在0—132.4μ***-1时其水解淀粉的活力随浓度的升高而升高,浓度为191.0μ***-1时活力最大,浓度大于191.0μ***-1时活力不再变化,稳定在一个较高的水平。

关键词：地衣芽孢杆菌 Bacillus licheni formis 胞外产物 pH 温度金属离子活性

短小芽孢杆菌X93及胞外产物抑菌活性的研究

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水产学报 2013年第10期37卷 1564-1571页

作者：郭婧王娟宋增福贾亮张永华范斌张庆华上海海洋大学水产与生命学院省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室阜阳师范学院生命科学学院

从健康养殖大黄鱼肠道中筛选出对病原弧菌有拮抗作用的潜在益生菌株X93,利用细菌快速鉴定系统和16S rDNA方法进行细菌种类鉴定;通过点种法对其抗菌谱进行测定;采用平板扩散法,研究了培养时间、温度、盐度、蛋白酶K和Fe3+等因素对其胞外... 详细信息

从健康养殖大黄鱼肠道中筛选出对病原弧菌有拮抗作用的潜在益生菌株X93,利用细菌快速鉴定系统和16S rDNA方法进行细菌种类鉴定;通过点种法对其抗菌谱进行测定;采用平板扩散法,研究了培养时间、温度、盐度、蛋白酶K和Fe3+等因素对其胞外产物抑菌活性的影响。结果显示:该菌株为短小芽孢杆菌(GenBank accession ***137033);对20株病原指示菌中的13株均产生不同程度的抑制作用,抗菌谱较广;菌株培养48 h后的胞外产物抑菌作用最强;在pH为7时,抑菌活性最大;达到最大抑菌活性的温度和盐度分别为28℃、5;蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均会降低其抑菌活性。该菌对病原弧菌、迟缓爱德华菌和嗜水气单胞菌等水产上常见主要致病菌有良好的拮抗效果,且具有抑菌作用的胞外产物对温度、盐度和Fe3+有一定的适应范围,适宜作为益生菌株,有望在实际养殖环境中得到应用。

关键词：短小芽孢杆菌抗菌谱胞外产物抑菌活性

地衣芽孢杆菌De株之胞外产物对凡纳滨对虾淀粉酶活性影响的体外研究

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台湾海峡 2007年第4期26卷 536-542页

作者：曹煜成李卓佳冯娟杨莺莺陈永青中国水产科学研究院南海水产研究所广东广州510300

试验以半透膜法收集地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）De株的胞外产物（extracellular products,ECP）,以匀浆离心法提取凡纳滨对虾（Litopenaeus van-namei）成虾的肝胰腺和肠道消化酶,将芽孢杆菌胞外产物和对虾消化酶按体积... 详细信息

试验以半透膜法收集地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）De株的胞外产物（extracellular products,ECP）,以匀浆离心法提取凡纳滨对虾（Litopenaeus van-namei）成虾的肝胰腺和肠道消化酶,将芽孢杆菌胞外产物和对虾消化酶按体积比10∶90混合,采用体外分析法研究在不同温度、pH及胞外产物添加量等条件下胞外产物对对虾淀粉酶活性的影响.试验共设A、B、C、D、E 5个试验组,每组三个平行.其中空白组A为地衣芽孢杆菌的胞外产物,试验组B、C组分别为添加了胞外产物的对虾肝胰腺消化酶、肠道消化酶,对照组D、E分别为未添加胞外产物的对虾肝胰腺消化酶和肠道消化酶样品.温度为20～40℃时试验组B、C的淀粉酶活性要明显高于对照组（p〈0.05）,其中肝胰腺淀粉酶和肠道淀粉酶的活性分别提高了25.9%和19.3%,但该温度要远低于芽孢杆菌胞外淀粉酶的最适温度60～90℃.在pH为5～6时,试验组B、C的淀粉酶活性明显高于对照组（p〈0.05）,对虾肝胰腺淀粉酶和肠道淀粉酶的活性分别较对照组提高了33.3%和122.2%,而该pH同样要低于芽孢杆菌胞外淀粉酶的最适pH值（6～9）.此外,研究还表明试验组的淀粉酶活性随胞外产物添加量的升高而降低,即胞外产物在一定条件下可能抑制对虾内源淀粉酶的生物学活性.从本研究看,地衣芽孢杆菌胞外产物在一定程度上可促进对虾的淀粉酶活性,而当胞外产物活性高于0.02 U/mg蛋白质时,对虾淀粉酶活性将受到抑制.

关键词：地衣芽孢杆菌胞外产物凡纳滨对虾淀粉酶体外

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鱼源溶藻弧菌胞外产物的特性研究

水生生物学报 2006年第5期30卷 553-558页

作者：左凤琴简纪常吴灶和广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524025

溶藻弧菌经胰胨大豆胨琼脂培养基(TSA+2%NaCl)培养48h后,培养物用PBS洗脱、离心,再经孔径0.22μm微孔滤膜过滤,制得胞外产物(Extracellular product,ECP)。经检测,该ECP具有淀粉酶、酪蛋白酶、卵磷脂酶和脂肪酶等4种酶活性,其中淀粉酶... 详细信息

溶藻弧菌经胰胨大豆胨琼脂培养基(TSA+2%NaCl)培养48h后,培养物用PBS洗脱、离心,再经孔径0.22μm微孔滤膜过滤,制得胞外产物(Extracellular product,ECP)。经检测,该ECP具有淀粉酶、酪蛋白酶、卵磷脂酶和脂肪酶等4种酶活性,其中淀粉酶的活性最高,酪蛋白酶、脂肪酶活性次之,卵磷脂酶活性较低,未检测出明胶酶及脲酶活性;能溶解断斑石鲈(Pomadasys hasta)、眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus)和赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)的红细胞,而不能溶解鸡、羊及O型人红细胞;对小白鼠和石斑鱼的LD50分别为0.08mg/g和0.17mg/g,95%可信限分别为0.06—0.12mg/g和0.07—0.28mg/g;50mmol/L EDTA和100mmol/L苯甲基磺酰氟能使胞外蛋白酶(Extracellular pro-teinase,ECPase)的活性分别下降83.40%和51.32%;ECPase对热稳定性较差,碱性条件下活性较高,其最适温度为50℃,最适pH为8.0。

关键词：溶藻弧菌胞外产物特性

迟缓爱德华氏菌胞外产物的细胞毒性和动物致病性

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中国兽医学报 2000年第1期20卷 34-37页

作者：葛艳陈怀青江苏南京农业大学动物医学院

分析了２８株迟缓受德华氏菌（Ｅdwardwiella tarda,Ｅt）胞外产物（extracellular puodrcts,ＥＣＰ）的致病性。将Ｅt用覆有玻璃纸的ＴＳＡ培养，１８株（６９．２３％）的ＥＣＰ使ＨＥp－２细胞产生病认，认圆，脱落。这种细胞毒作... 详细信息

分析了２８株迟缓受德华氏菌（Ｅdwardwiella tarda,Ｅt）胞外产物（extracellular puodrcts,ＥＣＰ）的致病性。将Ｅt用覆有玻璃纸的ＴＳＡ培养，１８株（６９．２３％）的ＥＣＰ使ＨＥp－２细胞产生病认，认圆，脱落。这种细胞毒作用能被ＡＴＣＣ１５９４７株的ＥＣＰ抗体作为探针进行免疫转印分析，结果显示，不同来源的９株Ｅt的ＥＣＰ在转印膜上出现３条共同蛋白条带，相对分子质量分别约１４４００、３２、３００、７９、

关键词：迟缓爱德华氏菌胞外产物细胞毒性致病性

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海洋微藻胞外产物研究进展

海洋科学 2002年第3期26卷 35-38页

作者：高亚辉荆红梅黄德强杨心宁厦门大学生命科学学院 361005

海洋微藻是海洋生态系统中的最主要初级生产者，具有种类多、数量大、繁殖快等特点，在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着极其重要的作用。Fogg1966年和Hellebust 1974年研究发现，海洋微藻在生长过程中会不断向周围环境中释放多... 详细信息

海洋微藻是海洋生态系统中的最主要初级生产者，具有种类多、数量大、繁殖快等特点，在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着极其重要的作用。Fogg1966年和Hellebust 1974年研究发现，海洋微藻在生长过程中会不断向周围环境中释放多种代谢产物，如碳水化合物、氨基酸、酶、脂类、维生素、有机磷酸、毒素、挥发性物质以及抑制和促进因子等。这些产物统称为胞外产物（Extracellular products，ECP）。胞外多聚物（Extracellular polymeric substance, EPS）是胞外产物的一大类别。ECP（或EPS）是海水中化学物质的一个重要来源，它们在海洋生态系统碳循环、微食物环、藻菌（藻、其他生物）的相互作用中起着重要作用。海洋微藻ECP研究与海洋生产力、物质循环、能量流动赤潮。水产养殖等方面研究密切相关。因而，海洋微藻ECP的研究引起了海洋学家的高度重视，成为目前海洋科学研究的热点之一。关于海洋ECP的研究国内外已有不少报道，但研究对象多为细菌（尤其是蓝细菌）、大型藻类、无脊椎动物等。我国海洋微藻ECP的研究工作与国外相比，开始较晚，水平较低，相关报道较少。本文简要综述了海洋微藻ECP几个方面的研究进展，并展望了ECP在搞菌方面的作用。

关键词：海洋微藻胞外产物研究进展

创伤弧菌FJ03-X2胞外产物对欧洲鳗鲡的致病性和免疫原性分析

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华中农业大学学报 2006年第1期25卷 71-75页

作者：董传甫林天龙俞伏松林能锋福建省农业科学院生物技术研究所福州350003

以70％饱和硫酸铵盐析法制备鳗源创伤弧菌生物1型高致病菌株FJ03-X2的胞外产物（ECPs），攻毒试验表明，该ECPs对鳗鲡无致病力；SDSPAGE分析表明，该ECPs由约36ku为主的系列蛋白条带组成。制备ECPs的免疫刺激复合物（ISCOMs），以20pg... 详细信息

以70％饱和硫酸铵盐析法制备鳗源创伤弧菌生物1型高致病菌株FJ03-X2的胞外产物（ECPs），攻毒试验表明，该ECPs对鳗鲡无致病力；SDSPAGE分析表明，该ECPs由约36ku为主的系列蛋白条带组成。制备ECPs的免疫刺激复合物（ISCOMs），以20pg／尾的剂量腹腔注射免疫规格为15-20g／尾的欧洲鳗鲡，ELISA分析表明，21d和28d时的血清抗体效价约为1：1280，免疫印记显示，ECPs中分子量为36ku以上的蛋白成份可被免疫欧洲鳗鲡血清所识别，是构成ECPs的主要免疫原；免疫保护试验表明，免疫欧洲鳗鲡显示出较高的免疫保护力。试验结果也显示出，单纯以ECPs等剂量腹腔注射免疫欧洲鳗鲡，不能激发欧洲鳗鲡产生较高滴度的血清抗体，免疫欧洲鳗鲡也未能产生有效的保护性免疫应答。

关键词：创伤弧菌欧洲鳗鲡胞外产物致病性免疫原性

养殖石斑鱼溃疡病病原哈维氏弧菌胞外产物的研究

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海洋科学 2006年第10期30卷 30-34页

作者：陈雅芳王军苏永全覃映雪王世锋厦门大学海洋与环境学院福建厦门361005

以网箱养殖的患溃疡病青石斑鱼（Epinephlus awoara）和斜带石斑鱼（Epinephlus coioides）分离的哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）TS-628菌株为研究对象，采用平板玻璃纸覆盖技术，获得该菌株的胞外产物（ECP），并对其成分进行分析。利... 详细信息

以网箱养殖的患溃疡病青石斑鱼（Epinephlus awoara）和斜带石斑鱼（Epinephlus coioides）分离的哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）TS-628菌株为研究对象，采用平板玻璃纸覆盖技术，获得该菌株的胞外产物（ECP），并对其成分进行分析。利用杯碟法研究表明，哈维氏弧菌TS-628菌株的胞外产物具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、卵磷脂酶等多种酶活性和溶血活性，且溶血性物质具有热不稳定性。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及考马斯亮蓝R-250染色分析表明，ECP蛋白条带主要集中在分子质量范围25．0～66．2ku之间，经不同时间培养所获得的ECP在凝胶上显示出的蛋白条带几乎一致。采用复性电泳方法（G-PAGE）分析了哈维氏弧菌及其它4种弧菌属细菌的ECP蛋白酶活性，结果发现哈维氏弧菌ECP在酸性条件下，蛋白酶活性较强，在碱性条件下，蛋白酶带明显减少，活性很弱。在相同的pH条件下，5种弧菌中以副溶血弧菌的ECP蛋白酶活性最强，种类多，分子质量范围宽；而哈维氏弧菌的蛋白酶带较少，活性也稍弱。

关键词：青石斑鱼(Epinephlus awoara) 斜带石斑鱼(Epinephlus coioides) 哈维氏弧菌 (Vibrio harveyi) 胞外产物溃疡病

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三株昆虫病原线虫共生菌胞外产物的抑菌活性

中国生物防治 2008年第4期24卷 354-358页

作者：方香玲张武岗易晓华王永宏张兴西北农林科技大学无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心杨凌712100

采用生长速率法、孢子萌发法、活体组织法和盆栽试验对3株昆虫病原线虫共生菌胞外产物甲醇提取物的抑菌活性进行了系统研究。结果表明,3个菌株甲醇提取物对番茄灰霉病菌、辣椒疫霉病菌、油菜菌核病菌的菌丝生长,对番茄灰霉病菌、玉米大... 详细信息

采用生长速率法、孢子萌发法、活体组织法和盆栽试验对3株昆虫病原线虫共生菌胞外产物甲醇提取物的抑菌活性进行了系统研究。结果表明,3个菌株甲醇提取物对番茄灰霉病菌、辣椒疫霉病菌、油菜菌核病菌的菌丝生长,对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌、稻瘟病菌、白菜黑斑病菌、杨树溃疡病菌、小麦根腐病菌的孢子萌发均有很强抑制作用。其中嗜线虫致病杆菌YL001菌株对辣椒疫霉病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为35.11mg/L;伯氏致病杆菌YL002菌株对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为42.16mg/L;嗜线虫致病杆菌TB菌株对油菜菌核病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为18.95mg/L。3个菌株甲醇提取物对玉米大斑病菌孢子萌发都有很强的抑制作用,EC_(50)分别为28.03、36.77和26.40mg/L。3个菌株甲醇提取物在1000mg/L浓度下,对离体番茄果实灰霉病的治疗和保护效果均在70%以上;对盆栽番茄灰霉病和辣椒疫霉病的治疗和保护效果均在65%以上。

关键词：昆虫病原线虫共生菌胞外产物抑菌活性