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miR-29c对二氧化硅诱导的肺成纤维细胞转分化抑制作用的研究

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中华劳动卫生职业病杂志 2019年第5期37卷 321-326页

作者：杨杰张洋黄磊兰亚佳张勤四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院环境卫生与职业医学系成都610041 四川煤矿安全监察局安全技术中心(四川省安全生产监督管理局安全技术中心) 成都610046 四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院职业危害评价科成都610041

目的探讨miR-29c对二氧化硅(SiO2)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化过程的调控作用。方法取清洁级成年健康雄性SD大鼠1只,分离培养大鼠的肺成纤维细胞,与肺巨噬细胞(NR8383)共培养构建SiO2诱导的肺纤维化体外细胞模型,使用实时... 详细信息

目的探讨miR-29c对二氧化硅(SiO2)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化过程的调控作用。方法取清洁级成年健康雄性SD大鼠1只,分离培养大鼠的肺成纤维细胞,与肺巨噬细胞(NR8383)共培养构建SiO2诱导的肺纤维化体外细胞模型,使用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫印迹(Westernblot)实验检测共培养细胞模型中成纤维细胞miR-29c和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达量的改变。构建miR-29c过表达和抑制表达的矽肺体外细胞模型,观察α-SMA基因和蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,SiO2处理12、18h后肺巨噬细胞-肺成纤维细胞共培养体系中肺成纤维细胞miR-29c表达量明显下降,α-SMA表达量明显升高,差异均有统计学意义(P肺成纤维细胞α-SMA表达量出现相应的下降或升高,差异均有统计学意义(P肺成纤维细胞转分化过程,通过抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化从而阻碍SiO2诱导的肺纤维化。

关键词：微RNA 肺成纤维细胞肌成纤维细胞 α-平滑肌肌动蛋白

Smad泛素化调节因子2在转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞活化中的作用及其分子机制

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吉林大学学报（医学版） 2015年第5期41卷 891-897页

作者：杨俊侠曹述任张敏暨南大学第四附属医院广东省广州市红十字会医院呼吸内科广东广州510220

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10μg·L-1 TGF-β1作用1、2和6h(分别为TGF-β1 1h组、TGF-β1 2h组和... 详细信息

目的:观察Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,10μg·L-1 TGF-β1作用1、2和6h(分别为TGF-β1 1h组、TGF-β1 2h组和TGF-β1 6h组),并设对照组(不加TGF-β1),RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smurf1和Smurf2mRNA和蛋白的表达水平。MRC-5细胞随机分为对照组(未加入TGF-β1或siRNA)、TGF-β1组(10μg·L-1 TGF-β1)、Control siRNA转染组(10μg·L-1 TGF-β1+Control siRNA)和Smurf2siRNA转染组(10μg·L-1 TGF-β1+Smurf2siRNA)。Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达水平;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βⅠ型受体(TβRⅠ)、Smad2和Smad3mRNA和蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,各TGF-β1组细胞中Smurf2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P细胞中Smurf1表达水平无明显变化(P>0.05)。与TGF-β1组比较,Smurf2siRNA组细胞中Smurf2蛋白表达水平下降(P细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均明显升高(P细胞中α-SMA和COL1A1蛋白表达水平均下降(P细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平均升高(P细胞中Smad7和SnoN mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平均明显下降(P细胞中Smad7和SnoN蛋白表达水平明显升高(P细胞中TβRⅠmRNA和蛋白表达水平均明显升高(P细胞中TβRⅠmRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。各组细胞中Smad2和Smad3mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Smurf2可能通过泛素化降解Smad7和SnoN,参与调控TGF-β1/Smads信号通路,从而发挥其促进TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。

关键词： Smurf2 肺成纤维细胞转化生长因子β1 信号转导

IL-34诱导肺成纤维细胞IL-6、IL-8表达机制研究

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中国免疫学杂志 2020年第4期36卷 405-410页

作者：吴夏楠罗艳邹鳞赖晓霏重庆医科大学附属第一医院医学检验科

目的:探究IL-34诱导肺成纤维细胞IL-6、IL-8表达的分子机制。方法:体外培养原代人肺成纤维细胞,给予外源性重组IL-34刺激,检测IL-6、IL-8 mRNA和蛋白的变化及MAPK、PI3K-Akt、JAK等信号通路的活化;MAPK、PI3K-Akt、JAK等信号分子抑制剂... 详细信息

目的:探究IL-34诱导肺成纤维细胞IL-6、IL-8表达的分子机制。方法:体外培养原代人肺成纤维细胞,给予外源性重组IL-34刺激,检测IL-6、IL-8 mRNA和蛋白的变化及MAPK、PI3K-Akt、JAK等信号通路的活化;MAPK、PI3K-Akt、JAK等信号分子抑制剂预处理细胞,观察IL-34刺激IL-6、IL-8 mRNA和蛋白的变化。结果:IL-34可以诱导肺成纤维细胞中IL-6、IL-8表达上调及MAPK、PI3K-Akt、JAK、NF-κB信号通路的活化;特异性信号分子抑制剂可以逆转IL-34诱导肺成纤维细胞中IL-6、IL-8 mRNA和蛋白表达的升高。结论:IL-34可以诱导肺成纤维细胞中IL-6、IL-8表达上调,MAPK、PI3K-Akt、JAK、NF-κB等多种信号通路参与了IL-34诱导IL-6、IL-8表达的信号转导过程。

关键词： IL-34 炎症肺成纤维细胞

抗氧化剂超氧化物歧化酶对大鼠肺巨噬细胞二氧化硅条件上清介导的肺成纤维细胞增殖及c-myc表达的影响

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中国组织工程研究 2022年第14期26卷 2202-2206页

作者：阚泉张岩王海涛李冉田艳霞吕翠平华北理工大学组胚教研室河北省唐山市063000 华北理工大学附属医院河北省唐山市063000

背景:c-Myc是一种众所周知的致癌基因,在许多癌症中过表达。肺泡巨噬细胞是肺脏重要的功能细胞,它不但参与肺脏的免疫防御,吞噬侵入肺脏的细菌颗粒,还可分泌大量生物活性物质,维持肺脏和机体正常的生理功能。超氧化物歧化酶和肿瘤有着... 详细信息

背景:c-Myc是一种众所周知的致癌基因,在许多癌症中过表达。肺泡巨噬细胞是肺脏重要的功能细胞,它不但参与肺脏的免疫防御,吞噬侵入肺脏的细菌颗粒,还可分泌大量生物活性物质,维持肺脏和机体正常的生理功能。超氧化物歧化酶和肿瘤有着密切的关系。目的:观察抗氧化剂超氧化物歧化酶对二氧化硅(SiO_(2))刺激的大鼠肺泡巨噬细胞培养上清诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖及c-myc表达的影响。方法:采用肺泡原位灌洗技术获取肺泡巨噬细胞,①制备条件培养上清:超氧化物歧化酶培养上清(超氧化物歧化酶+肺泡巨噬细胞+不加血清DMEM)、二氧化硅培养上清(二氧化硅+肺泡巨噬细胞+不加血清DMEM)、二氧化硅+超氧化物歧化酶培养上清(二氧化硅+超氧化物歧化酶+肺泡巨噬细胞+不加血清DMEM);分别在培养1,2,4,8,16,32 h不同时间点收取上清;②肺成纤维细胞诱导培养:取第3代肺成纤维细胞,将条件上清与含体积分数5%FBS的DMEM按照1∶1比例配制进行诱导,实验分组为:阴性对照组(体积分数2.5%FBS-DMEM培养),阳性对照组(体积分数10%FBS-DMEM培养);超氧化物歧化酶培养上清组;二氧化硅培养上清组;二氧化硅+超氧化物歧化酶培养上清组;培养时间与上述时间点同步进行。采用MTT法、免疫细胞化学法和RT-PCR法分别检测肺成纤维细胞增殖、c-myc蛋白和mRNA的表达情况。实验方案经华北理工大学动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①与对照组相比较,二氧化硅培养上清组能够显著促进成纤维细胞增殖,使c-myc蛋白及mRNA表达水平上调;与二氧化硅培养上清组相比较,二氧化硅+超氧化物歧化酶培养上清组成纤维细胞增殖减少,c-myc蛋白及mRNA表达水平下调(P肺泡巨噬细胞培养上清介导的肺成纤维细胞增殖和c-myc表达水平的上调。

关键词：肺纤维化超氧化物歧化酶肺成纤维细胞肺泡巨噬细胞 c-myc 免疫细胞化学法反转录聚合酶链式反应大鼠

细胞外信号调节激酶1／2在慢性肺疾病新生大鼠肺成纤维细胞中的研究

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中华急诊医学杂志 2012年第1期21卷 33-37页

作者：胡瑜刘雪雁富建华薛辛东中国医科大学附属盛京医院儿科沈阳110004

目的探讨持续吸人高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺成纤维细胞中细胞外信号调节激酶（ERK）1／2蛋白信号表达的动态变化。方法足月新生鼠生后12h内分别持续吸人体积分数90％的高氧和空气，于3、7、14d随机处死动物后，进行肺成纤维细胞的原... 详细信息

目的探讨持续吸人高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺成纤维细胞中细胞外信号调节激酶（ERK）1／2蛋白信号表达的动态变化。方法足月新生鼠生后12h内分别持续吸人体积分数90％的高氧和空气，于3、7、14d随机处死动物后，进行肺成纤维细胞的原代培养，应用免疫组化、Western—blot及real—timePCR方法检测ERKl／2蛋白及mRNA表达。结果免疫组化及Westernblot结果显示，高氧7、14d时高氧组肺成纤维细胞p-ERKl／2蛋白的表达均明显高于同时间点对照组（P〈0．01）。Westernblot结果同时显示各组间ERKl／2总蛋白的表达差异无统计学意义。real-timePCR结果表明各组问ERKl、ERK2mRNA水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ERKl／2蛋白水平磷酸化活化参与了高氧致新生大鼠慢性肺疾病中肺纤维化的发生。

关键词：高氧新生大鼠肺成纤维细胞细胞外信号调节激酶

高氧、维甲酸对早产大鼠肺成纤维细胞MMP-2及TIMP-2表达的调控

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中国病理生理杂志 2009年第3期25卷 555-561页

作者：李文斌常立文容志惠汪鸿刘伟华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科湖北武汉430030

目的:探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下早产大鼠肺成纤维细胞(LFs)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其特异性组织抑制物-2(TIMP-2)表达的影响。方法:建立原代培养的早产大鼠LFs高氧暴露模型,采用半定量RT-PCR方法检测MMP-2和TIMP-2 mRNA表达,明胶... 详细信息

目的:探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下早产大鼠肺成纤维细胞(LFs)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其特异性组织抑制物-2(TIMP-2)表达的影响。方法:建立原代培养的早产大鼠LFs高氧暴露模型,采用半定量RT-PCR方法检测MMP-2和TIMP-2 mRNA表达,明胶酶谱法检测MMP-2酶原和活酶表达,Western blot-ting检测其磷酸化和总的ERK1/2、JNK1/2、p38和c-Jun表达。结果:(1)与对照组比较,高氧可促进早产大鼠LFsMMP-2 mRNA及其酶原和活酶表达(P肺损伤。

关键词：高氧症维甲酸肺成纤维细胞早产大鼠基质金属蛋白酶-2 有丝分裂素激活蛋白激酶素

TGF-β1影响肺成纤维细胞结缔组织生长因子基因表达的研究

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中国当代儿科杂志 2011年第1期13卷 36-39页

作者：富建华杨海萍潘丽薛辛东高红中国医科大学附属盛京医院儿科辽宁沈阳110004 中国医科大学附属盛京医院中心实验室辽宁沈阳110004

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对体外培养早产鼠的肺成纤维细胞(LFs)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响。方法以孕19dWistar大鼠剖宫取出的仔鼠为对象,原代培养LFs,实验组分别采用不同浓度(1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL)和不同作... 详细信息

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对体外培养早产鼠的肺成纤维细胞(LFs)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响。方法以孕19dWistar大鼠剖宫取出的仔鼠为对象,原代培养LFs,实验组分别采用不同浓度(1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL)和不同作用时间(12h、24h、48h)TGF-β1刺激LFs,对照组无血清培养基培养(即0ng/mL)。应用RT-PCR方法检测LFs的CTGFmRNA表达。结果与对照组比较,实验组LFs的CTGFmRNA水平增高(P肺成纤维细胞中CTGF基因表达,并且以剂量和时间依赖方式上调CTGF基因表达。

关键词：转化生长因子-β1 结缔组织生长因子肺成纤维细胞大鼠

CTGF-siRNA对低氧诱导肺成纤维细胞胶原合成的影响

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四川大学学报（医学版） 2009年第3期40卷 378-381页

作者：王佑娟黄燕汤辉刘小菁四川大学华西医院呼吸内科成都610041 四川大学华西医院心血管疾病研究室成都610041

目的观察针对结缔组织生长因子(CTGF)的小干扰RNA(siRNA)对低氧诱导的人肺成纤维细胞胶原合成的影响。方法应用siRNA表达载体介导的RNA干扰(RNAi)技术,将CTGF-siRNA表达质粒稳定转染人肺成纤维细胞MRC-5,并将人肺成纤维细胞在低氧条件下... 详细信息

目的观察针对结缔组织生长因子(CTGF)的小干扰RNA(siRNA)对低氧诱导的人肺成纤维细胞胶原合成的影响。方法应用siRNA表达载体介导的RNA干扰(RNAi)技术,将CTGF-siRNA表达质粒稳定转染人肺成纤维细胞MRC-5,并将人肺成纤维细胞在低氧条件下(37℃,5%CO2,1%O2)培养1、2、4、6及12h。采用定量PCR法测定CTGF及Ⅰ型胶原基因表达,并应用Westernblot法检测CTGF及Ⅰ型胶原蛋白表达变化。结果低氧培养1h后,人肺成纤维细胞即可刺激诱导CTGFmRNA表达,其升高水平可持续至6h。而在CTGF-siRNA表达质粒稳定转染的MRC-5细胞内,低氧诱导的CTGF、Ⅰ型胶原基因及蛋白表达均降低(P肺成纤维细胞的胶原合成。

关键词：结缔组织生长因子 RNA干扰低氧肺成纤维细胞胶原

瘦素促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞的转分化

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第2期31卷 199-202页

作者：陈碧吕茜张淼张毛为刘文静朱述阳徐州医学院附属医院呼吸科江苏徐州221004 徐州市心血管病研究所江苏徐州221009

目的探讨瘦素对肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化的影响及其作用机制。方法体外培养HFL-1人胚肺成纤维细胞，用（0—200）ng／mL重组人瘦素（rHL）干预或联合转化生长因子β1（TGF-β1）处理HFL-1细胞，Western blot法测定α平滑肌肌... 详细信息

目的探讨瘦素对肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化的影响及其作用机制。方法体外培养HFL-1人胚肺成纤维细胞，用（0—200）ng／mL重组人瘦素（rHL）干预或联合转化生长因子β1（TGF-β1）处理HFL-1细胞，Western blot法测定α平滑肌肌动蛋白（***）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化的AKT（p-AKT）的表达。CCK-8法测定细胞增殖，ELISA测定细胞上清液1型胶原蛋白含量。结果（50、100、200）ng／mL的rHL处理HFL-1细胞48h，α-SMA的蛋白表达水平均较对照组明显上调；与200ng／mL rHL或5ng／mLTGF—β1单独处理的细胞相比，200ng／mL rHL和5ng／mLTGF-β1联合处理HFL-1细胞48h，HFL-1细胞α-SMA蛋白表达水平显著上调。rHL能够上调HFL-1细胞P-AKT的表达，LY294002可抑制rHL对HFL-1细胞α-SMA表达的诱导作用。与对照组相比，（12．5、25、50、100、200）ng／mL作用72h，细胞存活率无显著性差异。（50—200）ng／mLrHL作用48h，细胞上清液中1型胶原蛋白含量明显升高。结论瘦素能够促进肺成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化，其作用机制与激活P13K／AKT信号通路有关。

关键词：瘦素肺成纤维细胞肌纤维母细胞转分化