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肺成纤维细胞在肺损伤修复中的研究进展

中国细胞生物学学报 2024年第5期46卷 881-891页

作者：杨迪张家柱隋鹏飞中国科学院分子细胞科学卓越创新中心/生物化学与细胞生物学研究所上海200031

作为肺间质细胞的重要组成部分,成纤维细胞参与细胞外基质合成,维持肺部结构稳定,并为肺内干细胞的功能调控提供干细胞龛。在稳态以及损伤修复过程中,成纤维细胞通过旁分泌信号与肺内多种细胞互作,维持组织结构完整。在病理条件下,成纤... 详细信息

作为肺间质细胞的重要组成部分,成纤维细胞参与细胞外基质合成,维持肺部结构稳定,并为肺内干细胞的功能调控提供干细胞龛。在稳态以及损伤修复过程中,成纤维细胞通过旁分泌信号与肺内多种细胞互作,维持组织结构完整。在病理条件下,成纤维细胞则会发生异常激活,其主要通过分泌胶原蛋白和纤维蛋白参与组织纤维化,影响多种肺部疾病的发生发展过程。鉴于成纤维细胞在肺的稳态维持和损伤修复过程中的重要性,该综述系统性地归纳总结了肺成纤维细胞研究的最新进展。此外还提出了未来肺成纤维细胞研究中值得探讨的问题,旨在为解析肺部疾病的发病机制和寻找潜在治疗靶点提供新的思路。

关键词：肺成纤维细胞呼吸道干细胞细胞互作肺部疾病

鞘氨醇-1-磷酸对肺成纤维细胞活性的作用及其机制

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山西医科大学学报 2024年第9期 1170-1176页

作者：王贵佐徐海娟杨淑梅刘璐陕西省人民医院呼吸与危重症一科

目的探讨鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate, S1P）对肺成纤维细胞活性的影响及其可能机制。方法以0,0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h，筛选最佳干预浓度；随后以确定的S1P干预浓度刺激细胞0,24,48,72 h,... 详细信息

目的探讨鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate, S1P）对肺成纤维细胞活性的影响及其可能机制。方法以0,0.01,0.03,0.1,0.3,1,3μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h，筛选最佳干预浓度；随后以确定的S1P干预浓度刺激细胞0,24,48,72 h,CCK-8法检测细胞增殖。将肺成纤维细胞分为对照组、S1P组、JTE013+S1P组、CAY10444+S1P组、control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组。S1P组以1μmol/L S1P干预肺成纤维细胞24 h;JTE013+S1P组和CAY10444+S1P组细胞先分别用10μmol/L选择性S1P受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2, S1PR2)拮抗剂JTE013或10μmol/L选择性S1PR3拮抗剂CAY10444预处理1 h后再给予1μmol/L S1P干预24 h;control siRNA+S1P组和YAP siRNA+S1P组细胞先分别转染control siRNA或YAP siRNA，再给予1μmol/L S1P干预24 h。CCK-8法检测细胞增殖；免疫印迹法检测t-Yes相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）、p-YAP、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、纤维粘连蛋白（Fibronectin）水平。结果 S1P干预后，肺成纤维细胞增殖随浓度和时间依赖性增加（P细胞p-YAP水平减少（P细胞p-YAP水平均增多（P细胞增殖均受到抑制（P细胞增殖均受到抑制（P细胞α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin蛋白水平，以及细胞增殖均降低（P肺成纤维细胞活化。

关键词： S1P S1PR2/3 肺纤维化肺成纤维细胞 YAP

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LncRNA FEZF1-AS1靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞生物学行为的影响

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天津医药 2024年第3期52卷 231-236页

作者：满君高艳艳宋龙飞高福生潍坊医学院附属医院呼吸内科 261035 潍坊医学院附属医院康复医学科 261035

目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转... 详细信息

目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转染质粒不同将细胞分为Blank组、TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组和TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组。采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力;采用双萤光素酶实验检测FEZF1-AS1与miR-200c-3p的靶向作用关系。结果与Blank组比较,HLF+TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达及LncRNA FEZF1-AS1表达水平升高,miR-200c-3p表达水平降低(P细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,LncRNA FEZF1-AS1表达及α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达水平降低,miR-200c-3p表达水平升高(P肺间质纤维化的发生、发展。

关键词：特发性肺间质纤维化肺成纤维细胞肌成纤维细胞 FEZ家族锌指1-反义RNA1 微小RNA-200c-3p

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还原型谷胱甘肽对大鼠肺成纤维细胞的影响

常州大学学报（自然科学版） 2024年第3期36卷 71-79页

作者：秦晶莹王车礼孙文平乔海燕刘恒宇周晓鹰常州大学药学院江苏常州213164

研究过量的还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)对肺成纤维细胞(Lung fibroblasts,LFS)的影响,以此来探究氧化还原平衡被打破后LFS的状态和变化。提取新鲜的大鼠LFS,通过细胞活力实验、明胶酶谱法、细胞形态实验、划痕实验、细胞免疫荧光... 详细信息

研究过量的还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)对肺成纤维细胞(Lung fibroblasts,LFS)的影响,以此来探究氧化还原平衡被打破后LFS的状态和变化。提取新鲜的大鼠LFS,通过细胞活力实验、明胶酶谱法、细胞形态实验、划痕实验、细胞免疫荧光染色和蛋白质免疫印记实验,观察不同浓度的GSH对LFS的增殖、生长、迁移以及信号通路的影响。实验表明,细胞外GSH干预可以引起LFS内稳态的改变,使局部黏着斑激酶(Focal adhesion kinase,FAK)、核因子κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)、磷酸化组蛋白(Phospho-histone gamma H2A.X,γ-H2A.X)表达增高,但抑制细胞分泌的基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)的活力,使用过高浓度GSH干预时,其细胞的迁移、丝裂原活化蛋白激酶(p38)的表达、抑癌基因(p53)蛋白的表达被抑制。综上所述,过高的细胞外GSH可能导致LFS出现DNA损伤以及细胞衰竭并失能,从而引起肺组织病变。另外,过多抗氧化剂的使用会打破细胞内稳态平衡,并可能会对机体造成不可逆的损伤。

关键词：还原型谷胱甘肽肺纤维化肺成纤维细胞氧化还原平衡

肺成纤维细胞三维立体培养条件对肺纤维化组织重塑的影响(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第23期11卷 4650-4653页

作者：朱运奎肖永久薛庆亮王晓芹李继东汪莉刘卫牟玉兰解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科甘肃省兰州市730050

背景:组织细胞三维立体培养是肺纤维化破坏与组织收缩研究的理想模型,特别是在纤维化的进展过程中,几种细胞因子如肿瘤坏死因子、白细胞介素、前列腺素、胰岛素以及渗出的血浆成分可能在纤维化的损伤修复和组织重塑中起重要的作用。目的... 详细信息

背景:组织细胞三维立体培养是肺纤维化破坏与组织收缩研究的理想模型,特别是在纤维化的进展过程中,几种细胞因子如肿瘤坏死因子、白细胞介素、前列腺素、胰岛素以及渗出的血浆成分可能在纤维化的损伤修复和组织重塑中起重要的作用。目的:观察三维立体培养条件下肺成纤维细胞在血清和血清蛋白、胰岛素和细胞因子前列腺素E2、转移生长因子β、肿瘤坏死因子α的细胞外胶原基质收缩和细胞凋亡,探讨肺纤维化过程中细胞因子、胰岛素、血清及血清蛋白对肺组织重塑和纤维化形成的影响。设计:随机对照实验。单位:解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科。材料:实验于2005-08/2006-01在解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科实验室完成。人胚肺成纤维细胞(AmericanTypeCultureCollection),DMEM培养液和胎牛血清(GIBCO),胰岛素、转移生长因子(R&D),前列腺素E2(Sigma),Ⅰ型胶原提取自大鼠尾部肌腱。方法:为观察初始浓度对成纤维细胞收缩力的影响及细胞数量对胶原收缩的影响,提取大鼠尾部的胶原,与双蒸水、4×DMEM及成纤维细胞混合成胶原含量为0.75￣1.5g/L的立体组织胶原,细胞浓度为0.2×107￣4×107L-1,置入含体积分数0.05的CO2培养箱37℃培养。每天测定胶原的面积,最后计算终面积与初始面积的比值。将0.01%￣0.5%血清、0.1%的血清白蛋白和0.1%球蛋白分别加入到培养液中,观察胶原的收缩。加入10mg/L转移生长因子、10mg/L白细胞介素1、1mmol/L胰岛素和0.1μmol/L前列腺素E2,观察细胞因子对成纤维细胞介导胶原收缩的影响,对胶原中DNA含量进行测定及细胞存活率检测。主要观察指标:不同细胞因子或血清成分对肺成纤维细胞介导胶原收缩的影响,胶原内成纤维细胞数量对胶原收缩的影响,以及不同浓度胶原对胶原收缩和对细胞增殖和凋亡的影响。结果:①胶原的收缩有细胞依赖性,细胞浓度越高则胶原收缩越强烈。②血清和白蛋白的加入引起了剧烈的胶原收缩。③转化生长因子和胰岛素增强胶原的收缩,前列腺素E和白细胞介素1抑制胶原的收缩。④胶原的初始浓度越低,胶原收缩的速度越快越强烈,胶原终面积就越小,其中的成纤维细胞凋亡就越多。结论:肺成纤维细胞介导的胶原收缩可被白细胞介素1和前列腺素E抑制,胰岛素和转化生长因子则促进了胶原收缩。血清及血清成分在受损肺组织的渗出可以导致肺组织胶原的稀释与强烈收缩,而导致成纤维细胞增殖的抑制和凋亡的增加,肺纤维化进一步发展,成为无细胞胶原成分。

关键词：肺成纤维细胞三维立体肺纤维化

肺成纤维细胞在实验肺纤维化中释放生物活性物质的体外研究

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中华结核和呼吸杂志 1999年第1期22卷 54-56页

作者：赵洪文吕长俊侯显明于润江中国医科大学呼吸疾病研究所

目的阐明在肺纤维化过程中肺成纤维细胞（ＬＦ）产生透明质酸（ＨＡ）、白细胞介素８（ＩＬ８）和胶原的动态变化及作用。方法检测博莱霉素（ＢＬＭ）致大鼠肺纤维化不同时期ＬＦ培养上清中ＩＬ８活性、ＨＡ和羟脯氨酸（ＨＹＰ）水... 详细信息

目的阐明在肺纤维化过程中肺成纤维细胞（ＬＦ）产生透明质酸（ＨＡ）、白细胞介素８（ＩＬ８）和胶原的动态变化及作用。方法检测博莱霉素（ＢＬＭ）致大鼠肺纤维化不同时期ＬＦ培养上清中ＩＬ８活性、ＨＡ和羟脯氨酸（ＨＹＰ）水平。结果ＢＬＭ组ＬＦ的上清中（１）ＨＡ水平于第１天明显升高［（３２９±０．７０）μｇ／ｍｌ］，第３天达高峰［（６．１２±１．２３）μｇ／ｍｌ］，随后降低，第１４～２８天时降至正常；（２）ＩＬ８活性于第１天明显增高，每高倍镜视野细胞数为４０６±０７９，第７天达高峰，每高倍镜视野细胞数为９３６±１１０，随后降低，第２８天降到正常；（３）胶原含量于第７天明显增多［（２．４４±０．３２）μｇ／ｍｌ］，第１４天达峰值［（２．８０±０．３６）μｇ／ｍｌ］，以后降低，但至第２８天仍高于正常［（１．９６±０．４４）μｇ／ｍｌ］；（４）ＨＡ和ＩＬ８水平与支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）细胞成分之间均具有明显的正相关。结论在肺纤维化过程中ＬＦ在早期肺泡炎阶段就处于活化状态，产生ＨＡ和ＩＬ８增多，是肺内ＨＡ和ＩＬ８的主要来源之一；ＬＦ产生ＨＡ和ＩＬ８增多可反映肺泡炎的强度和疾病的活动性；肺内胶原的过多?

关键词：肺纤维化透明质酸白细胞介素8 肺成纤维细胞

肺成纤维细胞参与支气管哮喘气道重塑研究进展

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中国实用内科杂志 2016年第8期36卷 629-631页

作者：余常辉蔡绍曦南方医科大学南方医院呼吸与危重症医学科广东广州510515

支气管哮喘(哮喘)气道重塑可引起不可逆性气道阻塞和顽固性气道高反应性。哮喘患者气道上皮下肺成纤维增殖、转化为肌成纤维细胞及大量细胞外基质(ECM)合成是导致上皮下纤维化的主要机制之一。近年来,上皮下肺成纤维细胞在哮喘气道重塑... 详细信息

支气管哮喘(哮喘)气道重塑可引起不可逆性气道阻塞和顽固性气道高反应性。哮喘患者气道上皮下肺成纤维增殖、转化为肌成纤维细胞及大量细胞外基质(ECM)合成是导致上皮下纤维化的主要机制之一。近年来,上皮下肺成纤维细胞在哮喘气道重塑中的作用越来越受关注,研究也发现很多哮喘治疗药物也对肺成纤维细胞有一定的影响。明确药物对肺成纤维细胞的影响,对哮喘气道重塑的治疗有重要的意义。

关键词：支气管哮喘气道重塑肺成纤维细胞

ECM支架构建肺成纤维细胞三维培养模型研究

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中国生物医学工程学报 2008年第6期27卷 900-905页

作者：严玉兰刘洋步雪峰张志坚郑金旭江苏大学附属人民医院镇江212002 江苏大学基础医学与医学技术学院镇江212013

应用组织工程技术建立新型稳定、可靠的肺成纤维细胞(LF)三维培养模型的方法。应用细胞外基质(ECM)支架为成纤维细胞培养载体,建立成纤维细胞三维培养体系;并同时分别加入IL-13单克隆抗体、TGF-β及LPS。应用细胞荧光免疫、细胞计数及... 详细信息

应用组织工程技术建立新型稳定、可靠的肺成纤维细胞(LF)三维培养模型的方法。应用细胞外基质(ECM)支架为成纤维细胞培养载体,建立成纤维细胞三维培养体系;并同时分别加入IL-13单克隆抗体、TGF-β及LPS。应用细胞荧光免疫、细胞计数及扫描电镜观察肺成纤维细胞三维培养的生长特性及相关物质对细胞生长状况的影响。在此三维培养模型中,细胞、细胞外基质以及IL-13单克隆抗体、TGF-β等调控因素共同构成一个有机整体,成纤维细胞所表达的生物学特性接近于它们在体内肺组织中的特点。本实验应用组织工程技术成功地建立了新型肺成纤维细胞三维培养体系,并研究成纤维细胞的生物学特性,是研究间质性肺病(ILD)领域里一个新的和更为科学的方法。

关键词：组织工程三维培养肺成纤维细胞 IL-13 TGF-β

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肺成纤维细胞对嗜酸性粒细胞存活率的影响

江苏医药 2003年第8期29卷 561-563页

作者：李海浪沙莉杨莉吴祖群东南大学附属中大医院儿科南京210009

目的研究肺成纤维细胞(FB)对健康人外周血嗜酸性粒细胞(EOS)存活率的影响,并探讨其作用机制。方法将FB与EOS共同培养,采用台盼蓝拒染法检测EOS存活率、酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)含量。结... 详细信息

目的研究肺成纤维细胞(FB)对健康人外周血嗜酸性粒细胞(EOS)存活率的影响,并探讨其作用机制。方法将FB与EOS共同培养,采用台盼蓝拒染法检测EOS存活率、酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)含量。结果 (1)与EOS单独培养相比,FB和EOS共同培养后EOS存活率明显上升,两组相比有显著性差异(P肺FB在体外能明显提高外周血EOS存活率。(2)FB和EOS的共同培养可以导致细胞因子GM-CSF增加,这可能是FB延长EOS存活率的作用因素之一。

关键词：肺成纤维细胞嗜酸性粒细胞存活率粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子