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替格瑞洛抑制小鼠肢体缺血后血管新生及机制探讨

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替格瑞洛抑制小鼠肢体缺血后血管新生及机制探讨

作者：王晓丽江苏大学

学位级别：硕士

目的:探讨P2Y抑制剂替格瑞洛对小鼠后肢缺血后血管新生的影响及其可能机制。方法:建立小鼠后肢缺血模型,将野生型小鼠(IL-10)随机分为假手术组（sham组）、对照组(IL-10组)和替格瑞洛治疗组(IL-10+tica组);将敲除IL-10基因小鼠(IL-10)... 详细信息

目的:探讨P2Y抑制剂替格瑞洛对小鼠后肢缺血后血管新生的影响及其可能机制。方法:建立小鼠后肢缺血模型,将野生型小鼠(IL-10)随机分为假手术组（sham组）、对照组(IL-10组)和替格瑞洛治疗组(IL-10+tica组);将敲除IL-10基因小鼠(IL-10)随机分为对照组(IL-10组)和药物治疗组(IL-10+tica组)。激光多普勒灌注成像和毛细血管密度测量用于量化血管的生成,免疫荧光染色法检测CD31,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定小鼠肌肉IL-10活性,Western blot分析血管内皮生长因子（VEGF）水平。为了解替格瑞洛在体外对血管新生的影响,分离和培养了大鼠SMCs,并给予b FGF处理。本次实验共分为5组:Control组、b FGF组、b FGF+tica组、IL-10depleted组和tica组,采用CCK-8和Edu检测细胞增殖能力、成管能力实验检测细胞成管能力、Western blot检测细胞内AKT/VEGFR2/VEGF/e IF4E1蛋白表达。通过LPS（细菌脂多糖）刺激诱导SMCs的炎症反应,分析替格瑞洛在体外对SMCs炎症反应的影响,采用ELISA检测炎症因子IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-13、IFY-γ和TNF-α。结果:野生型小鼠(IL-10)缺血后肢血管生成与敲除IL-10基因(IL-10)小鼠相比显著减少。在野生型(IL-10)小鼠中,替格瑞洛治疗能够抑制小鼠缺血后肢血管生成和血流恢复并显著提高IL-10水平,从而降低野生型小鼠IL-10缺血后肢VEGF的表达。然而,在敲除IL-10基因(IL-10)小鼠中,替格瑞洛治疗并未出现明显的抗血管生成和抑制血流恢复作用。细胞实验提示:替格瑞洛促使b FGF诱导的大鼠平滑肌细胞增殖能力、成管能力和迁移能力下降,而当IL-10耗尽后,大鼠平滑肌细胞增殖能力、成管能力和迁移能力回升。另外,大鼠主动脉平滑肌细胞中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-13、IFY-γ和TNF-α在LPS组均表达增高,使用替格瑞洛处理后,上述炎症因子均表达下降,当使用IL-10中和抗体后,IL-10耗尽,上述炎症因子表达均增加。大鼠主动脉平滑肌细胞中的AKT/p-AKT、VEGFR2、VEGF、e IF4E1蛋白在b FGF组均表达增高,使用替格瑞洛处理后,所有蛋白均表达下降,而使用IL-10中和抗体后,IL-10耗尽,上述蛋白的表达增加。结论:替格瑞洛的抗血管生成功能与较高的IL-10表达有关,可能与IL-10抑制炎症反应以及SMCs的增殖、迁移有关。

关键词：替格瑞洛肢体缺血血管新生炎症反应 IL-10

肢体缺血再灌注后微循环变化及其发生机制的实验研究——1.兔足背肌腱表面微循环活体观察法的建立

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中华整形烧伤外科杂志 1994年第1期10卷 52-54页

作者：邢新郭恩覃上海第二军医大学长海医院整形外科 200433

我们对兔后肢趾长伸肌腱的血供系统进行了解剖观察,发现其环韧带以远接近跖趾关节的一段是制作微循环活体观察标本的理想部位。该处肌腱表面有丰富的微血管,且血管的背景为白色的肌腱,反衬明显;肌腱上方仅有皮肤和少量疏松组织覆盖,因... 详细信息

我们对兔后肢趾长伸肌腱的血供系统进行了解剖观察,发现其环韧带以远接近跖趾关节的一段是制作微循环活体观察标本的理想部位。该处肌腱表面有丰富的微血管,且血管的背景为白色的肌腱,反衬明显;肌腱上方仅有皮肤和少量疏松组织覆盖,因此容易解剖。在此基础上,我们成功地创立了足背肌腱表面微循环活体观察法,为利用兔后肢缺血模型研究肢体缺血再灌注后的活体微循环变化开辟了一条新途径。

关键词：肌腱肢体缺血活体观察法微循环

肢体缺血大鼠骨髓内皮祖细胞的动员与组织血管新生的相关性研究

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中华实验外科杂志 2004年第12期21卷 1537-1538页

作者：张喜成何延政李跃武刘勇陈一尘江苏省淮安市第二人民医院普通外科 223002 四川省泸州医学院附属医院血管外科江苏省淮安市第二人民医院病理科 223002

目的　探讨肢体缺血因素对骨髓内皮祖细胞 (EPC)的动员及肢体血管新生的影响。方法　切除、结扎单侧股总、股浅动脉建立大鼠后肢缺血模型 ,另设对照组。 1周后通过细胞培养 ,观察外周血EPC数量的变化 ,4周后检测缺血组织微血管密度 (MV... 详细信息

目的　探讨肢体缺血因素对骨髓内皮祖细胞 (EPC)的动员及肢体血管新生的影响。方法　切除、结扎单侧股总、股浅动脉建立大鼠后肢缺血模型 ,另设对照组。 1周后通过细胞培养 ,观察外周血EPC数量的变化 ,4周后检测缺血组织微血管密度 (MVD )及血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果　实验组外周血EPC (4 8.6± 7.5 )个 /mm2 较对照组 (2 3 .1± 4.3 )个 /mm2 明显增加 (P 缺血组织VEGF表达明显增强 (吸光度值A :0 .162± 0 .0 18) ,对照组仅少量表达 (A :0 .0 5 5± 0 .0 0 6) ;外周血EPC与组织MVD、VEGF吸光度之间有非常显著相关 (P 肢体缺血通过动员骨髓EPC ,促进缺血组织的新血管生成 ,改善局部供血 ,达到部分代偿目的。

关键词：肢体缺血大鼠骨髓内皮祖细胞细胞动员组织血管新生血管内皮生长因子

远端灌注导管对VA-ECMO患者肢体缺血和预后影响的Meta分析

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中华危重病急救医学 2020年第11期32卷 1361-1366页

作者：张晓玲方强陈琨浙江大学医学院附属第一医院重症医学科杭州310003 金华市中心医院重症医学科浙江金华321000

目的观察远端灌注导管(DPC)对静脉-动脉体外膜肺氧合(VA-ECMO)动脉导管相关性肢体缺血发生率和预后的影响。方法系统检索中国知网(CNKI)、万方医学数据库、美国国立医学图书馆(PubMed)数据库、荷兰医学文摘Embase系统、Scopus数据库、Co... 详细信息

目的观察远端灌注导管(DPC)对静脉-动脉体外膜肺氧合(VA-ECMO)动脉导管相关性肢体缺血发生率和预后的影响。方法系统检索中国知网(CNKI)、万方医学数据库、美国国立医学图书馆(PubMed)数据库、荷兰医学文摘Embase系统、Scopus数据库、Cochrane图书馆、Google学术等中英文数据库从建库至2019年2月发表的有关DPC对VA-ECMO患者动脉导管相关性肢体缺血影响的文献,检索词为体外膜肺氧合、肢体缺血、limb ischemia、extracorporeal membrane oxygenation、distal perfusion cannula。结局指标包括肢体缺血发生率和病死率。由2名评价员按纳入与排除标准选择文献,提取资料。应用RevMan 5.3软件进行Meta分析;采用敏感性分析检验Meta分析结果的稳定性;采用漏斗图分析发表偏倚。结果共纳入17篇文献,其中11篇为病例系列研究、2篇为技术描述研究、4篇为回顾性队列研究,共1850例患者,其中预防性置入DPC 1180例,未预防性置入DPC 670例。Meta分析显示,与未预防性置入DPC组比较,预防性置入DPC组肢体缺血发生率明显降低〔相对危险度(RR)=0.48,95%可信区间(95%CI)为0.37~0.62,P肢体缺血发生率,但对病死率无影响。由于研究数量较少,且存在研究人群异质性等因素的影响,仍需要进行更多大样本、高质量的随机对照试验(RCT)进一步证实。

关键词：体外膜肺氧合肢体缺血远端灌注导管病死率

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脐血内皮祖细胞移植改善肢体缺血的研究

中华医学杂志 2003年第16期83卷 1437-1441页

作者：杨晨张志华卢士红杨仁池钱冠清韩忠朝中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的　研究脐血来源血管内皮祖细胞 (endothelialprogenitorcells,EPC)的移植对局部缺血的恢复作用。方法　脐血CD133+ 细胞在体外诱导扩增 10～ 14d后 ,收集贴壁梭形细胞 ,检测其内皮细胞特异标志的表达。将荧光标记的贴壁细胞从尾静... 详细信息

目的　研究脐血来源血管内皮祖细胞 (endothelialprogenitorcells,EPC)的移植对局部缺血的恢复作用。方法　脐血CD133+ 细胞在体外诱导扩增 10～ 14d后 ,收集贴壁梭形细胞 ,检测其内皮细胞特异标志的表达。将荧光标记的贴壁细胞从尾静脉移植到后肢单侧缺血的裸鼠体内。结果从脐血CD133+ 细胞中可诱导出EPC ,表现为表达内皮细胞标志的贴壁细胞。移植后 ,可整合到缺血部位新生血管内。移植EPC后裸鼠缺血后肢的毛细血管密度、血流灌注及坏死程度均较对照组明显改善 :缺血手术后 2周EPC组的缺血肢 /正常肢的血流比由 19 1%± 3 1%恢复为 77 3%± 5 6 % ,而对照组仅恢复为 4 0 6 %± 3 4 % (P 缺血后肢的完全恢复率由对照组的 1/10上升至 7/12 (P 缺血局部VEGFmRNA上调 ,体外VEGF对EPC具有趋化作用。 4h内趋化到下腔的细胞数为817个± 33个 ,而对照组为 4 74个± 6 2个 (P 肢体缺血的恢复 ,而缺血局部上调的VEGF表达可能是EPC定向整合到缺血局部的关键因素。

关键词：脐血内皮祖细胞移植肢体缺血研究贴壁细胞

一氧化氮在大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中的作用

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生理学报 2002年第3期54卷 234-238页

作者：杨秀红张连元孙树勋董淑云门秀丽景有伶张一兵华北煤炭医学院病理生理教研室唐山063000

在大鼠肢体缺血再灌注 (LIR)损伤模型上 ,观察应用一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂氨基胍 (AG)及一氧化氮(NO)合成前体物质L 精氨酸 (L Arg)对大鼠骨骼肌和肺组织的NOS活性、NO含量、丙二醛 (MDA)、髓过氧化物酶(MPO)和湿 /干重 (W/D)值的影... 详细信息

在大鼠肢体缺血再灌注 (LIR)损伤模型上 ,观察应用一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂氨基胍 (AG)及一氧化氮(NO)合成前体物质L 精氨酸 (L Arg)对大鼠骨骼肌和肺组织的NOS活性、NO含量、丙二醛 (MDA)、髓过氧化物酶(MPO)和湿 /干重 (W/D)值的影响以及肺磷脂酰胆碱 (PC)的改变 ,并观察了肺组织在光镜下形态学的变化。结果显示 ,与对照组比较 ,LIR组骨骼肌和肺组织NOS活性均增强 ,MDA值、MPO活性增加 ,W/D值增大 ,肺PC含量降低 ;光镜下 ,肺间质多形核粒细胞 (PMN)聚集和浸润 ,肺间隔面密度值增加。给予AG后 ,与LIR组相比NOS活性降低 ,NO产生下降 ,而MPO活性、W/D比值增加 ,肺PC含量进一步降低 ;镜下PMN聚集和浸润增加 ,肺间隔面密度值增大。而给予L Arg后能减轻LIR引起的上述变化。上述结果提示 ,LIR后 2h时 ,骨骼肌和肺组织NOS活性增加 ,NO产生增多 ;内源性NO可能在LIR所诱发的早期急性肺损伤中起保护作用。

关键词：一氧化氮肢体缺血再灌注成人呼吸窘迫综合症

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肢体缺血性溃疡患者膝下动脉血运的重建

中华普通外科杂志 2017年第9期32卷 746-749页

作者：谢辉叶猛薛冠华陈佳俭曾庆坛张岚上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科 200127

目的分类分析重症肢体缺血（critical limb ischemia，CLI）性溃疡膝下动脉血管腔内治疗的临床效果。方法对2011年6月至2013年6月间成功实施angiosome概念指导下膝下动脉血运重建的CLI缺血性溃疡患者152例（152条下肢）的临床资料行回... 详细信息

目的分类分析重症肢体缺血（critical limb ischemia，CLI）性溃疡膝下动脉血管腔内治疗的临床效果。方法对2011年6月至2013年6月间成功实施angiosome概念指导下膝下动脉血运重建的CLI缺血性溃疡患者152例（152条下肢）的临床资料行回顾性研究，根据踝下流出道数（runoff），术后造影伤口呈色（wound blush，WB）情况，angiosome血运重建方式，足部动脉弓情况等不同条件分组．比较各分组临床疗效的差异。结果12个月再干预率（reintervention or amputation，RAO）runoff0组高于runoff〉1组（P〈0．05）和runoff1组（P〈0．05），差异有统计学意义。18个月保肢率WB（＋）组显著高于WB（-）组（P〈0．05），差异有统计学意义。12个月溃疡愈合率、18个月保肢率间接供血无侧支（indirect revascularization without collaterals，IRw）组均低于直接供血（direct revascularization，DR）组（P〈0．05）和间接供血经侧支（indirect revascularization through collaterals，IRc）组（P〈0．05），差异有统计学意义。12个月RAO率IRw组均高于DR组（P〈0．05）和IRC组（P〈0．05），差异有统计学意义。12个月溃疡愈合率、18个月保肢率无足部动脉弓（non—pedal arch，NPA）组均低于完全足部动脉弓（complete pedal arch，CPA）组（P〈0．05）和不完全足部动脉弓（incomplete pedal arch，IPA）组（P〈0．05）差异有统计学意义。12个月RAO率NPA组均高于CPA组（P〈0．05）和IPA组（P〈0．05）。结论WB（＋）者有较高的保肢率，但并没有增加溃疡愈合率。IRc血运重建可以获得与DR血运重建相当的溃疡愈合率和保肢率。CPA与IPA患者溃疡愈合率和保肢率均优于NPA者。

关键词：肢体缺血腿溃疡血管内操作