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肝癥口服液含药血清对smmc-7721肝癌细胞TGFβ1/Smads信号转导通路的影响

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中国组织化学与细胞化学杂志 2006年第4期15卷 441-446页

作者：孔丽姚树坤殷飞张瑞星河北医科大学第三医院肝病科河北医科大学第四医院消化科石家庄050051

目的观察肝癥口服液含药血清对smmc-7721肝癌细胞TGFβ1/Smads信号转导通路的影响。方法以肝癌患者和健康志愿者服药前后血清培养人smmc-7721肝癌细胞,应用RT-PCR和WesternBlotting方法观察含药血清对肝癌细胞SmadsmRNA及其蛋白表达的... 详细信息

目的观察肝癥口服液含药血清对smmc-7721肝癌细胞TGFβ1/Smads信号转导通路的影响。方法以肝癌患者和健康志愿者服药前后血清培养人smmc-7721肝癌细胞,应用RT-PCR和WesternBlotting方法观察含药血清对肝癌细胞SmadsmRNA及其蛋白表达的影响。结果肝癌患者肝癥口服液含药血清可增强Smad4mRNA及其蛋白表达,而抑制Smad7的过强表达,具有显著性差异;健康志愿者肝癥口服液含药血清可明显抑制肝癌细胞Smad7mRNA表达。结论解除TGFβ1/Smads信号转导通路过度受抑状态,可能是肝癥口服液抗癌的机制之一。

关键词：肝癥口服液肝癌细胞smmc-7721 TGFβ1/Smads信号转导通路

miR-22-3p通过Snail1调控上皮-间质转化抑制人肝癌smmc-7721细胞的迁移和侵袭

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中国临床药理学杂志 2019年第18期35卷 2085-2089页

作者：贺红杰李明亮许广松南华大学附属第二医院普通外科

目的探讨miR-22-3p与Snail1的靶向关系,及其对人肝癌smmc-7721细胞的迁移和侵袭的影响。方法用实时荧光定量聚合酶链反应法检测人正常肝细胞株LO2及4种肝癌细胞株中miR-22-3p及Snail1的相对表达水平并分析二者相关性。将细胞分为miR-22... 详细信息

目的探讨miR-22-3p与Snail1的靶向关系,及其对人肝癌smmc-7721细胞的迁移和侵袭的影响。方法用实时荧光定量聚合酶链反应法检测人正常肝细胞株LO2及4种肝癌细胞株中miR-22-3p及Snail1的相对表达水平并分析二者相关性。将细胞分为miR-22-3p对照组(miR-NC)、miR-22-3p模拟物组(miR-22-3p mimics)、Snail1空载体组(pLV-NC)、Snail1过表达组(pLV-Snail1)和miR-22-3p mimics+pLV-Snail1组。用划痕实验和Transwell小室分别检测5组细胞的迁移和侵袭能力,用Western blot检测Snail1和上皮-间质转化相关蛋白的表达。结果在4种肝癌细胞株中,miR-22-3p和Snail1表达呈显著负相关性(r=-0. 966,P 细胞划痕愈合率分别为(39. 00±2. 16)%,(11. 67±2. 05)%,(38. 00±2. 16)%,(72. 33±4. 11)%和(20. 34±2. 41)%,侵袭细胞数分别为(132. 00±6. 68),(47. 00±6. 16),(136. 67±7. 41),(205. 33±6. 60)和(73. 67±4. 50)个,Snail1蛋白相对表达量分别为(0. 39±0. 05),(0. 15±0. 03),(0. 37±0. 05),(0. 88±0. 06)和(0. 24±0. 02),上皮型钙黏蛋白相对表达量分别为(0. 24±0. 03),(0. 84±0. 06),(0. 23±0. 03),(0. 18±0. 02)和(0. 34±0. 04),神经型钙黏蛋白相对表达量分别为(0. 52±0. 03),(0. 15±0. 05),(0. 51±0. 03),(0. 92±0. 05)和(0. 35±0. 03),波形蛋白相对表达量分别为(0. 45±0. 05),(0. 14±0. 02),(0. 43±0. 04),(0. 84±0. 05)和(0. 31±0. 03)。miR-22-3p mimics组与miR-NC组、pLV-Snail1组与pLV-NC组或miR-22-3p mimics组、pLV-Snail1组与miR-22-3p mimics+pLV-Snail1组的上述指标比较,差异均有统计学意义(P 肝癌smmc-7721细胞的迁移和侵袭。

关键词： miR-22-3p 肝癌细胞smmc-7721 蜗牛家族转录抑制因子1 上皮-间质转化迁移侵袭

Bach1克隆构建及其对肝癌细胞药物敏感性的影响

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中国老年学杂志 2014年第21期34卷 6130-6132页

作者：时英英杨靖时学秀单杰郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室河南郑州450052

目的构建真核表达载体p BI-EGFP-Bach1,并检测其表达及对血红素氧化物(HO-1)表达的影响。方法将Bach1基因与质粒p BIEGFP连接构成重组质粒,RT-PCR法检测重组载体及HO-1在smmc7721细胞中的表达情况,MTT检测细胞活性。结果 NheⅠ和MluⅠ... 详细信息

目的构建真核表达载体p BI-EGFP-Bach1,并检测其表达及对血红素氧化物(HO-1)表达的影响。方法将Bach1基因与质粒p BIEGFP连接构成重组质粒,RT-PCR法检测重组载体及HO-1在smmc7721细胞中的表达情况,MTT检测细胞活性。结果 NheⅠ和MluⅠ双酶切以及PCR表明重组质粒p BI-EGFP-Bach1构建成功;RT-PCR显示转染重组Bach1 mRNA表达显著升高,同时HO-1的表达降低;MTT检测未转染组的IC50为0.15μg/ml,转染组的IC50为0.21μg/ml。结论构建了真核表达载体p BI-EGFP-Bach1,转染后Bach1能够在smmc-7721细胞中表达并抑制了HO-1;MTT验证重组质粒能提高癌细胞对长春新碱(VCR)敏感性。

关键词： Bach-1 血红素氧化酶-1 肝癌细胞smmc-7721 长春新碱

基于PTEN/PI3K/AKT信号通路花蕊石抗肝癌细胞增殖作用机制研究

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时珍国医国药 2017年第1期28卷 63-67页

作者：李天娇包永睿王帅杨欣欣孟宪生辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 辽宁省现代中药研究工程实验室辽宁大连116600

目的探讨花蕊石对人肝癌smmc-7721细胞增殖抑制作用及其初步作用机制。方法采用CCK-8法检测花蕊石含药血清对肝癌细胞smmc-7721的增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting法检测PTEN/PI3K/AKT信号通路中第1... 详细信息

目的探讨花蕊石对人肝癌smmc-7721细胞增殖抑制作用及其初步作用机制。方法采用CCK-8法检测花蕊石含药血清对肝癌细胞smmc-7721的增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting法检测PTEN/PI3K/AKT信号通路中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸蛋白激酶B(p-Akt)相关蛋白的表达水平;RT-PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)相关基因mRNA的表达水平。结果花蕊石具有明显的抑制肝癌smmc-7721细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。花蕊石含药血清可明显上调PTEN/PI3K/AKT信号通路中PTEN蛋白的表达水平,降低PI3K及p-Akt蛋白的表达,同时下调NF-κB mRNA的表达。结论花蕊石能够抑制肝癌smmc-7721细胞增殖,并促进肝癌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PTEN表达水平从而抑制PI3K/AKT信号通路及其下游基因NF-κB的异常活化有关。

关键词：花蕊石肝癌细胞smmc-7721 增殖作用机制 PTEN/PI3K/AKT信号通路 NF-κB

^(12)C^(6+)重离子辐照对人肝细胞、肝癌细胞端粒酶活性表达的影响

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辐射研究与辐射工艺学报 2008年第3期26卷 166-170页

作者：胡凯骞党秉荣李文建魏巍荆西刚刘金婷高清祥郭红云张晓文中国科学院近代物理研究所兰州大学生命科学院兰州730000 甘肃省医学科学研究院兰州730050

为探索碳离子束辐照对细胞中端粒酶活性的变化,利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavy ion research facility in lanzhou,HIRFL)产生的碳离子(31MeV/μ12C6+),以人肝细胞HL-7702,肝癌细胞smmc-7721为实验对象,用不同剂量1Gy、2Gy... 详细信息

为探索碳离子束辐照对细胞中端粒酶活性的变化,利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavy ion research facility in lanzhou,HIRFL)产生的碳离子(31MeV/μ12C6+),以人肝细胞HL-7702,肝癌细胞smmc-7721为实验对象,用不同剂量1Gy、2Gy、3Gy、4Gy的重离子分别对两种细胞进行照射,用多聚酶链式反应-银染端粒重复序列扩增法(PCR-telomeric repeat amplification protocol,TRAP-PCR)银染端粒重复序列扩增法检测不同剂量下细胞端粒酶活性的变化。结果显示,人肝细胞HL-7702自身没有端粒酶活性,经1Gy辐照后也没有端粒酶活性,在2和3Gy处出现端粒酶活性,4Gy处端粒酶活性又消失。肝癌细胞smmc-7721在1～3Gy处随着剂量的增大端粒酶活性升高,在4Gy处又开始下降;在1～3Gy处随着时间的推移端粒酶活性随着时间而加强(p细胞产生端粒酶活性,也可以改变肝癌细胞的端粒酶活性。端粒酶参与细胞受辐照后DNA单链损伤的修复;辐照后DNA双链断裂导致端粒酶活性减弱。本实验使重离子在辐照治疗中的优势得以体现。

关键词：端粒酶重离子肝癌细胞smmc-7721 人肝细胞HL-7702 多聚酶链式反应-银染端粒重复序列扩增法

热休克蛋白70激发树突状细胞抗肝癌作用的实验研究

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中国实验诊断学 2010年第12期14卷 1969-1971页

作者：刘玉侠于鸿张振武齐红段北野吉林省肿瘤防治研究所吉林长春130012 吉林省妇幼保健院

肿瘤的治疗除了手术、放疗、化疗外,另一个不可忽视的疗法就是免疫治疗,近年来它在肿瘤治疗中的作用越来越受到重视.本实验通过在体外用脐带血诱导树突状细胞(DC),并用由肝癌细胞smmc-7721提取的热休克蛋白70-肿瘤肽复合物(HSP70-PC)负... 详细信息

肿瘤的治疗除了手术、放疗、化疗外,另一个不可忽视的疗法就是免疫治疗,近年来它在肿瘤治疗中的作用越来越受到重视.本实验通过在体外用脐带血诱导树突状细胞(DC),并用由肝癌细胞smmc-7721提取的热休克蛋白70-肿瘤肽复合物(HSP70-PC)负载DC,检测其对肝癌细胞的杀伤作用,证明此活化DC对肿瘤细胞的特异性杀伤活性,为临床应用提供实验依据.

关键词：热休克蛋白70 树突状细胞实验研究肝癌细胞smmc-7721 抗肝癌作用肿瘤细胞激发免疫治疗

Bach1克隆构建及其对肝癌细胞药物敏感性影响的研究

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Bach1克隆构建及其对肝癌细胞药物敏感性影响的研究

作者：杨婧郑州大学

学位级别：硕士

研究背景转录因子BTB-CNC同源异构体1（Bachl）属于CNC转录因子家族,对血红素氧化酶1（HO-1）有特异的抑制作用,而HO-1是细胞中重要的保护酶。肿瘤细胞内HO-1表达可以影响肿瘤的生长,并且可影响肿瘤细胞对化学疗法的敏感性。在对肿... 详细信息

研究背景转录因子BTB-CNC同源异构体1（Bachl）属于CNC转录因子家族,对血红素氧化酶1（HO-1）有特异的抑制作用,而HO-1是细胞中重要的保护酶。肿瘤细胞内HO-1表达可以影响肿瘤的生长,并且可影响肿瘤细胞对化学疗法的敏感性。在对肿瘤组织进行放疗,化疗等治疗后,HO-1表达会升高。鉴于HO-1在肿瘤治疗中对肿瘤细胞所起的保护作用,我们尝试通过提高Bach1的表达来达到抑制HO-1的表达的目的,然后通过药物敏感性试验检验当肿瘤细胞中HO-1表达降低时,肿瘤细胞对长春新碱（VCR）的敏感性是否有变化,会发生怎样的变化。目的构建真核表达载体pBI-EGFP-Bach1,使其转染进肝癌细胞smmc-7721后能降低其中HO-1的表达,通过MTT法检测转染重组质粒的肝癌细胞对长春新碱敏感性是否发生变化。方法 1、用PCR的方法从质粒pQE30-bach1扩增目的基因Bach1,用NheI和Mlul分别双酶切质粒pBI-EGFP及PCR扩增的Bachl,用T4连接酶连接,构成重组质粒;2、用RT-PCR鉴定Bachl基因插入成功后,将Tet-Off质粒和重组质粒pBI-EGFP-Bachl双转染人肝癌smmc-7721细胞48h后,Bachl以及HO-1在细胞内的表达情况;3、用MTT法检测转染重组质粒前后肝癌细胞smmc-7721对长春新碱的药物敏感性是否有变化,得出各自的IC50;4、RT-PCR检测转染组（VCR+Bachl）和未转染组（VCR）肝癌细胞smmc-7721加入长春新碱后Bachl和HO-1的表达;5、DNA Ladder检测转染组和未转染组肝癌细胞smmc-7721在低浓度长春新碱作用下细胞凋亡条带;6、细胞形态学观察转染组和未转染组smmc-7721细胞在低浓度长春新碱作用下的变化。结果 1、用NheI和MluI双酶切以及PCR鉴定表明重组质粒pBI-EGFP-Bach1构建成功;2、重组质粒转染入细胞内后提取细胞总RNA,经RT-PCR检测显示转染重组质粒pBI-EGFP-Bach1组Bachl的mRNA表达显著升高,同时HO-1的表达降低;3、相同剂量药物作用下,转染了重组质粒pBI-EGFP-Bach1的细胞,凋亡率比未加入重组质粒的细胞明显升高。且在VCR浓度为0.15,0.25μg/ml的时候,p值小于0.05;在药物浓度为0.2μg/mll时p值小于0.01;未转染组的IC50为0.15μg/ml,转染组的IC50为0.21μg/ml。二者相比,转染组的半数抑制浓度低于未转染组28.6%;4、加药后检测两组Bach1和HO-1的mRNA表达情况,转染组中Bachl表达增高,而未转染组的HO-1表达增高。且未转染组的HO-1的表达高于阴性对照组;5、加入15μg/ml的VCR 48h后提取各组DNA,电泳结果显示转染组出现凋亡条带,而此剂量下未转染组凋亡条带不明显;6、加入15μg/ml的VCR后未转染组的smmc-7721细胞形态上并未太大发生变化,但转染组可观察到大量细胞死亡,细胞体积变小变圆,细胞膜完整但有发泡情况。结论 1、本实验成功构建了转录因子Bachl的真核表达载体pBI-EGFP-Bach1,且证实转染该质粒后Bachl基因能够在人肝癌smmc-7721细胞中表达,并能抑制HO-1的表达;2、本实验通过MTT药敏试验,验证了重组质粒pBI-EGFP-Bach1能提高肝癌细胞smmc-7721对长春新碱的药物敏感性,IC50由0.21μg/ml降低到0.15μg/ml,降低了28.6%;3、经DNA Ladder验证可知,在低浓度药物作用下,转染了重组质粒的肝癌细胞smmc-7721即可发生凋亡,而同等浓度下的smmc-7721细胞并未产生明显的凋亡。细胞形态学观察亦可见。

关键词： BTB-CNC同源异构体1 血红素加氧酶1 肝癌细胞smmc-7721 药物敏感性肿瘤治疗

生长抑素类似物对肝癌细胞凋亡及c-myc蛋白表达的影响

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中国普外基础与临床杂志 2003年第1期10卷 25-27页

作者：张燕玲张正四川大学华西医院老年科成都610041

目的　探讨生长抑素类似物 8肽 (SS 8)对人原发性肝癌细胞凋亡和c myc蛋白表达的影响。方法　体外培养肝癌细胞smmc 772 1 ,用 1 0 μg/mlSS 8处理后 ,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率和c myc蛋白的表达。结果　与对照组相比 ,SS 8使实... 详细信息

目的　探讨生长抑素类似物 8肽 (SS 8)对人原发性肝癌细胞凋亡和c myc蛋白表达的影响。方法　体外培养肝癌细胞smmc 772 1 ,用 1 0 μg/mlSS 8处理后 ,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率和c myc蛋白的表达。结果　与对照组相比 ,SS 8使实验组S期和G2 /M期细胞数减少、G0 /G1 期细胞数增加 ,两组细胞的凋亡率分别为 6 .1 %和1 4 .2 % ,差异有显著性意义 (P0 .1 0 ) ,而在SS 8作用 48、72、96、1 2 0和 1 4 4h后 ,实验组c myc蛋白表达水平分别为 0 .81 8±0 .0 4、0 .72 1± 0 .0 2 9、0 .669± 0 .0 2 6、0 .648± 0 .0 4 5和 0 .642± 0 .0 2 8,较对照组显著降低 (P肝癌细胞smmc 772 1凋亡和降低c

关键词：肝癌细胞凋亡生长抑素类似物肝癌细胞smmc-7721 c-myc蛋白表达

白藜芦醇在人γδT细胞杀伤肝癌细胞中的作用研究

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肝脏 2017年第9期22卷 833-836,840页

作者：冯永波马俊杰赵富民李威孙营周林宁张所山江苏省沭阳县中医院消化科江苏223600 南京中医药大学基础医学院

目的探讨白藜芦醇对人外周血γδT细胞体外增殖及该细胞对肝癌细胞smmc-7721细胞活性的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),放入含有IL-2、帕米膦酸的RPMI 1640培养基进行培养并诱导γδT细胞,实验组给予白藜芦醇共同培养,对... 详细信息

目的探讨白藜芦醇对人外周血γδT细胞体外增殖及该细胞对肝癌细胞smmc-7721细胞活性的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),放入含有IL-2、帕米膦酸的RPMI 1640培养基进行培养并诱导γδT细胞,实验组给予白藜芦醇共同培养,对照组不加药物,在此基础上,两组均加入肝癌细胞smmc-7721作为靶细胞,继续培养。在培养第10天后,用台盼蓝染色计数细胞,采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及其颗粒酶B和CD107a、穿孔素的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对肝癌细胞smmc-7721的体外杀伤效应。结果两组γδT细胞纯度均达到70%以上,实验组γδT细胞较对照组纯度显著更高(P细胞扩增倍数,穿孔素、CD107a和颗粒酶B的表达及对肝癌细胞smmc-7721的杀伤效应均显著高于对照组(P细胞增殖,并可能通过上调颗粒酶B和穿孔素的表达增强其对肝癌细胞smmc-7721的杀伤效应。

关键词：白藜芦醇 γδT细胞肝癌细胞smmc-7721 杀伤效应