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甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D蛋白在原核系统中的表达和抗原活性分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第1期21卷 50-52页

作者：宁尚勇伊瑶陈斯勇毕胜利中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室北京100052

目的研究甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D在原核系统中的表达，并探讨这些蛋白的抗原活性和作为诊断抗原的应用价值。方法采用PCR方法，从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAV16H1上扩增出目的基因，以M47作为表达载体，构... 详细信息

目的研究甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D在原核系统中的表达，并探讨这些蛋白的抗原活性和作为诊断抗原的应用价值。方法采用PCR方法，从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAV16H1上扩增出目的基因，以M47作为表达载体，构建N端带硫氧还蛋白的重组表达质粒。重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中经IPTG诱导表达。采用DEAE阴离子交换和镍离子柱螯和亲和层析纯化的方法对重组蛋白进行纯化。以Western Blot和间接ELISA的方法检测重组蛋白的抗原活性。结果四个重组质粒经测序证明构建正确无误，在大肠埃希菌中表达四个蛋白的相对分子质量也正确无误。Western Blot分析和间接ELISA方法证实四个蛋白中只有p2a有抗原活性。结论原核表达的P2a蛋白，具有较好的抗原活性，在间接ELISA方法中检测出了所有的24份阳性血清和24份阴性血清，非常有希望做成诊断抗原用于诊断急性甲肝患者和区分甲型肝炎自然感染与注射疫苗所产生的不同免疫。

关键词：肝炎病毒,甲型病毒非结构蛋白质类抗原

我国4城市成年人群甲型肝炎病毒血清抗体流行率调查

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中华肝脏病杂志 2009年第12期17卷 896-899页

作者：成元元聂晶晶李杰侯金林张欣欣宁琴高秀媛丁红芳刘学恩庄辉 100191北京大学医学部微生物系南方医科大学附属南方医院感染科上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科华中科技大学附属同济医院感染科北京宣武区疾病预防控制中心

目的了解我国大城市成年人群甲型肝炎抗体流行率。方法调查北京、上海、武汉、广州4个城市20～88岁当地常住居民2390人，采用微粒子酶免疫分析法检测血清甲型肝炎病毒抗体（抗-HAV IgG）。利用Excel建立数据库，采用SPSS13．0统计软件... 详细信息

目的了解我国大城市成年人群甲型肝炎抗体流行率。方法调查北京、上海、武汉、广州4个城市20～88岁当地常住居民2390人，采用微粒子酶免疫分析法检测血清甲型肝炎病毒抗体（抗-HAV IgG）。利用Excel建立数据库，采用SPSS13．0统计软件进行数据分析。结果北京30～39岁年龄组女性抗-HAV IgG阳性率为64．58％（62／96），男性45．57％（36／79），女性抗-HAV IgG阳性率高于男性，Х^2=6．358，P=0．012，差异有统计学意义。北京和广州成人抗-HAV IgG流行率随年龄增加而上升，北京20岁～、30岁～、40-49岁组分别为54．22％（90／166）、56．00％（98／175）和67．18％（88／131），Х^2=4．76，P=0．03，差异有统计学意义；广州20岁～、30岁～、40岁～、50岁～、60～88岁组分别为52．83％（56／106）、52．50％（63／120）、82．46％（94／114）、89．80％（88／98）和96．77％（60／62），Х^2=72．58，P〈0．01，差异有统计学意义。而上海和武汉则未见此趋势。北京、上海、广州和武汉20～39岁人群抗-HAV IgG阳性率分别为55．13％（188／341）、63．93％（429／671）、52．65％（119／226）和78．37％（308／393）。结论4个城市20～39岁年龄组人群抗-HAV IgG流行率较低。建议对城市20～39岁年龄组易感人群进行甲型肝炎疫苗接种。

关键词：肝炎,甲型肝炎病毒,甲型抗体,病毒流行率

甲型肝炎病毒IgM AlphaLISA检测方法的初步建立

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中华实验和临床病毒学杂志 2012年第2期26卷 139-141页

作者：甘星王颖宋娟崔雨孙鹏高晨李朝品韩俊皖南医学院病原微生物学教研室安徽241000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室

目的建立甲型肝炎病毒抗体IgM的AlphaLISA检测。方法浓缩甲型肝炎病毒抗原并生物素化，通过dot—Blot法摸索出生物素化的甲型肝炎病毒的最适量为6×10-8ng。优化供体珠、受体微珠、血清等实验反应条件，建立了甲型肝炎病毒的AlphaLISA的... 详细信息

目的建立甲型肝炎病毒抗体IgM的AlphaLISA检测。方法浓缩甲型肝炎病毒抗原并生物素化，通过dot—Blot法摸索出生物素化的甲型肝炎病毒的最适量为6×10-8ng。优化供体珠、受体微珠、血清等实验反应条件，建立了甲型肝炎病毒的AlphaLISA的IgM检测方法。并对23份感染甲型肝炎病毒的IgM阳性患者和70份健康人的血清进行检测。结果AlphaLISA甲型肝炎病毒的IgM方法检测：灵敏度（真阳性率）为78％；特异度（真阴性率）为98．5％；假阳性率为1％；假阴性率为22％；阳性预测值为95％；阴性预测值为93％；准确度为94％。结论建立了均相、快速检测AlphaLISA甲型肝炎病毒IgM检测方法并得到初步应用。

关键词：肝炎病毒,甲型免疫球蛋白M 监测,免疫学

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β-丙内酯对甲型肝炎病毒的灭活效应

中国生物制品学杂志 2012年第5期25卷 529-530页

作者：蒋建江戚凤春胡艳灵潘翔陈统球江苏全益生物科技股份有限公司江苏常州213022

目的观察β-丙内酯对甲型肝炎病毒(HAV)的灭活效应。方法采用1∶4 000的β-丙内酯和甲醛,分别对HAV进行灭活试验。通过病毒滴度检测及病毒灭活效果验证,确定最佳灭活时间;检测两种灭活剂对HAV抗原滴度和免疫原性的影响以及对小鼠和豚鼠... 详细信息

目的观察β-丙内酯对甲型肝炎病毒(HAV)的灭活效应。方法采用1∶4 000的β-丙内酯和甲醛,分别对HAV进行灭活试验。通过病毒滴度检测及病毒灭活效果验证,确定最佳灭活时间;检测两种灭活剂对HAV抗原滴度和免疫原性的影响以及对小鼠和豚鼠的毒性反应。结果β-丙内酯灭活10 h及甲醛灭活3 d后,检测不出病毒;β-丙内酯作用24 h可将病毒完全灭活,比甲醛灭活12 d效果更好;两种灭活剂灭活不同时间的HAV抗原滴度保持不变,均为1∶640 EU/0.1 ml;免疫小鼠28 d后,抗-HAV均呈阳性,阳转率达到100%,且对小鼠及豚鼠均无毒性。结论β-丙内酯直接作用于病毒核酸基因,使HAV失去活性而保持其免疫原性。

关键词：肝炎病毒,甲型病毒灭活丙内酯免疫原性安全性

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甲型肝炎病毒单克隆抗体的筛选与初步应用

中国生物制品学杂志 2011年第9期24卷 1081-1083页

作者：高加梅宋俐霏李军张立志于丹国泰中国食品药品检定研究院病毒二室北京100050 北京科兴生物制品有限公司北京100085

目的筛选甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)单克隆抗体(MAb),并初步建立HAV双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定MAb亚型;通过Western blot法鉴定MAb的特异性;SPA亲和层析法纯化MAb腹水,检测MAb的抗原识别表位... 详细信息

目的筛选甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)单克隆抗体(MAb),并初步建立HAV双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定MAb亚型;通过Western blot法鉴定MAb的特异性;SPA亲和层析法纯化MAb腹水,检测MAb的抗原识别表位;细胞培养法检测MAb的中和效价。确定双抗体夹心法包被物与酶标MAb的浓度,初步建立HAV双抗体夹心ELISA定量检测方法,并考察方法的线性范围。结果 12株HAV单抗中,1株为IgM型,3株为IgG3型,3株为IgG2a型,5株为IgG2b型;10株MAb可特异性结合HAV的VP2蛋白;7株MAb识别相同的抗原表位;7号MAb中和效价最高,可达1∶4 096。建立的HAV双抗体夹心ELISA定量检测方法的线性范围为15.625～250 u/ml,R2﹥0.97。结论筛选出1株特异性好、中和效价较高的IgG2b型MAb,可用于制备酶标抗体和ELISA检测试剂盒,应用于甲肝疫苗中抗原的检测。

关键词：抗体,单克隆肝炎病毒,甲型酶联免疫吸附测定

甲型肝炎病毒Js-4株经人二倍体细胞传代后的核苷酸序列分析

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1121-1124页

作者：胡艳灵陈统球黄明戚凤春崔燕萍潘翔江苏先声卫科生物制药有限公司江苏常州213022

目的分析甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)Js-4株经人二倍体细胞MRC-5传代后的核苷酸序列变异情况。方法将HAV Js-4株经Vero细胞适应14代获得的原始株Js-4-V14经人二倍体细胞MRC-5于35℃连续适应培养15代,取其中8个适应株(Js-4-M2、... 详细信息

目的分析甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)Js-4株经人二倍体细胞MRC-5传代后的核苷酸序列变异情况。方法将HAV Js-4株经Vero细胞适应14代获得的原始株Js-4-V14经人二倍体细胞MRC-5于35℃连续适应培养15代,取其中8个适应株(Js-4-M2、Js-4-M3、Js-4-M4、Js-4-M5、Js-4-M10、Js-4-M12、Js-4-M14、Js-4-M15)及原始株,提取病毒基因组RNA,通过RT-PCR扩增病毒全基因组,采用生物信息学软件DNAstar Lasergene 7进行序列分析。结果 8个适应株全基因组与Js-4-V14株的核苷酸序列同源性在99.8%～100.0%之间;第5代适应株在5′-NCR(101～200 bp)发生较大变异,表现为105～157 bp缺失,之后该突变稳定遗传;第10、12、14、15代适应株在2A(3 012～3 210 bp)区段3 122位点发生点突变;8个适应株和Js-4-V14毒株与野毒株HM175为同一基因亚型,均为IB型;9个毒株的主要抗原位点与野生株HM175完全一致。结论 HAV Js-4-V14株在MRC-5细胞传代适应过程中,主要抗原位点未发生突变,其与细胞适应性和病毒增殖有关的基因在传代早期已经变异,传代后期这些变异保持相对稳定。

关键词：肝炎病毒,甲型二倍体细胞系连续传代序列分析

甲型肝炎病毒与水痘病毒感染2BS细胞的超微结构变化

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中国生物制品学杂志 2012年第12期25卷 1644-1646页

作者：蔡岩赵晓青何巍姜崴周长军张金岩付博刘建华长春生物制品研究所有限责任公司长春130062

目的观察甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)、水痘带状孢疹病毒(Varicella zoster virus,VZV)分别感染与共同感染二倍体细胞2BS株时细胞超微结构的变化。方法电镜观察HAV单独感染21、23、25 d,VZV单独感染1、3、5 d及HAV感染21 d后再... 详细信息

目的观察甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)、水痘带状孢疹病毒(Varicella zoster virus,VZV)分别感染与共同感染二倍体细胞2BS株时细胞超微结构的变化。方法电镜观察HAV单独感染21、23、25 d,VZV单独感染1、3、5 d及HAV感染21 d后再以VZV感染1、3、5、7 d的2BS细胞的超微结构。结果与正常对照2BS细胞相比,单独感染HAV的2BS细胞超微结构无明显变化;单独感染VZV的2BS细胞的超微结构主要出现核膜破坏;HAV与VZV共同感染的2BS细胞核内出现VZV包涵体,核膜缺失,胞浆中可见HAV与VZV形态,且细胞粗面内质网和滑面内质网膨胀,内质网小池内有致密颗粒。结论HAV与VZV共同感染的2BS细胞的超微结构与两种病毒单独感染的细胞的超微结构存在不同的变化规律和形态特征,先感染HAV后感染VZV的2BS细胞比单独感染VZV的2BS细胞受到的破坏程度轻。

关键词：肝炎病毒,甲型水痘带状孢疹病毒二倍体细胞株超微结构

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抗甲型肝炎病毒卵黄免疫球蛋白的制备及应用

中国生物制品学杂志 2013年第12期26卷 1793-1796页

作者：夏青娟李树林孟凡东赵淑杰徐晓霞惠琪刘令九长春生物制品研究所有限责任公司疫苗二室吉林长春130062 中国生物技术股份有限公司营销中心预防制品部销售一部北京100029 长春祈健生物制品有限公司疫苗一室吉林长春130000

目的制备抗甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）卵黄免疫球蛋白（immunoglobulin of yolk,IgY）,并建立双抗体夹心ELISA法,用于测定甲肝疫苗中的HAV抗原含量。方法用纯化的HAV免疫健康产蛋母鸡,制备抗HAVIgY,采用多步骤分离纯化IgY... 详细信息

目的制备抗甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）卵黄免疫球蛋白（immunoglobulin of yolk,IgY）,并建立双抗体夹心ELISA法,用于测定甲肝疫苗中的HAV抗原含量。方法用纯化的HAV免疫健康产蛋母鸡,制备抗HAVIgY,采用多步骤分离纯化IgY,紫外分光光度法测定纯化IgY的蛋白含量,还原型SDS-PAGE分析IgY的相对分子质量及纯度,间接ELISA法检测IgY的效价、特异性及其热稳定性和酸碱稳定性。以纯化的IgY作为包被抗体,HRP标记的抗HAV单克隆抗体作为二抗,建立双抗体夹心ELISA法,对疫苗生产过程中的HAV抗原含量进行测定,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果亲和层析纯化后的抗HAV IgY浓度为3.67 mg/ml;重链和轻链的相对分子质量分别为66 000和27 000,纯度为96.78豫;效价最高为1：16 000;纯化的抗HAV IgY只与HAV呈阳性反应,与脊髓灰质炎病毒和肠道病毒71（enterovirus 71,EV71）均不反应;纯化的抗HAV IgY在25～70℃条件下处理15 min及经pH 3.0～10.0的Tris-HCL缓冲液处理2 h,其抗体效价基本无影响。建立的双抗体夹心ELISA法HAV浓度在15.62～2 000.00 ng/ml范围内,HAV浓度的对数值与A450值之间呈线性相关,R2=0.935,最低检测量为7.81 ng/ml,与市售试剂盒检测结果具有良好的相关性,相关系数为0.952 7。结论制备的抗HAV IgY浓度、纯度、效价均较高,特异性较强,稳定性良好,建立的双抗体夹心ELISA法可用于检测甲肝疫苗生产过程中HAV的抗原含量。

关键词：肝炎病毒,甲型免疫球蛋白Y 双抗体夹心酶联免疫吸附测定

临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体检测的比较

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广东医学 2006年第8期27卷 1171-1172页

作者：姚春斓彭晓谋凌小强马会慧中山大学附属第三医院传染病科广州510630

目的比较分析临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体(抗HAV-IgM和抗HEV-IgM)检测状况。方法收集非流行年份成人临床检验样本32600份。采用酶免疫法(EIA)捕捉抗体法检测抗-HAVIgM,EIA间接法检测抗-HEVIgM。结果32600份中送检抗-HAVIgM者为... 详细信息

目的比较分析临检样本中甲型和戊型肝炎病毒IgM抗体(抗HAV-IgM和抗HEV-IgM)检测状况。方法收集非流行年份成人临床检验样本32600份。采用酶免疫法(EIA)捕捉抗体法检测抗-HAVIgM,EIA间接法检测抗-HEVIgM。结果32600份中送检抗-HAVIgM者为1785份,阳性34例,阳性率为1.9%,送检抗-HEVIgM者1820份,阳性88例,阳性率为4.84%。比较分析显示,抗-HEVIgM阳性率相对较高(χ2=23.668,P甲型肝炎来说,戊型肝炎更值得广泛注意。

关键词：肝炎病毒,甲型肝炎病毒,戊型抗体 IgM