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人乳腺癌细胞MCF-7紫杉醇耐药株的建立及其生物学特性研究

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中国药理学通报 2008年第6期24卷 804-809页

作者：张小平陶永辉陈其亮张莲芬张熔熔金坚江南大学医药学院分子药理研究室江苏无锡214122 江苏省血吸虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏无锡214064 无锡市第二人民医院江苏无锡214002

目的建立紫杉醇(Taxol)的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Taxol,并初步研究其生物学特性。方法采用低浓度加量持续诱导法建立MCF-7/Taxol;细胞模型的多药耐药性以SRB法检测;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组化法检测细胞表型变化;高效液相... 详细信息

目的建立紫杉醇(Taxol)的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Taxol,并初步研究其生物学特性。方法采用低浓度加量持续诱导法建立MCF-7/Taxol;细胞模型的多药耐药性以SRB法检测;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组化法检测细胞表型变化;高效液相鉴定细胞中药物蓄积;光镜和电子扫描显微镜观察细胞形态。结果SRB法检测,MCF-7/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50)是亲代MCF-7细胞的525倍,撤药3mon后细胞的耐药指数保持在150倍以上,并对羟喜树碱、表柔比星、多柔比星、米托蒽醌、硫酸长春新碱、博来霉素和丝裂霉素等多种化疗药物产生交叉耐药性。MCF-7/Taxol细胞分化程度低于同步传代的MCF-7细胞,倍增时间明显高于亲本细胞,S期细胞明显增加,G1期细胞减少;随撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快。MCF-7/Taxol细胞P-gp、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有明显增加,ER、PR阳性表达丢失;光镜下MCF-7/Taxol细胞明显变大并且形态不规则;电镜下其表面纤绒毛成小球状隆起和絮状突起;在稳定生长的耐药细胞和撤药培养的细胞中都有Taxol蓄积。结论该MCF-7/Taxol模型具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于肿瘤多药耐药机制药的研究,推测耐药细胞株中含有天然MCF-7肿瘤干细胞。

关键词： MCF-7细胞人乳腺癌细胞生物学特性紫杉醇乳腺癌耐药细胞株免疫组化法检测耐药株 Taxol

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2008年北京市HIV-1耐药株传播调查

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 499-502页

作者：黑发欣李洋廖玲洁叶景荣陈强邢辉白立石北京市疾病预防控制中心 100013 中国疾病预防控制中心

目的了解2008年北京市未经抗病毒治疗HIV-1感染者中耐药株传播水平，为耐药监测和临床抗病毒治疗工作提供本底资料。方法参照WHO提出的HIV耐药警戒线调查方法（HIV drug resistance threshold survey，HIVDR－TS）指导方案，收集6个月... 详细信息

目的了解2008年北京市未经抗病毒治疗HIV-1感染者中耐药株传播水平，为耐药监测和临床抗病毒治疗工作提供本底资料。方法参照WHO提出的HIV耐药警戒线调查方法（HIV drug resistance threshold survey，HIVDR－TS）指导方案，收集6个月内检测发现的60～70名小于25岁的感染者血浆样本，检测HIV－1 pol区亚型及耐药基因型，并计算耐药株检出率、评价传播水平。结果61份符合要求的样本共获得50个有效pol区序列。感染途径以同性传播为主，占62％；亚型分布以B（42％）、CRF01_AE（28％）、CRF07_BC（26％）3种为主。出现1例针对PI类药物的耐药突变株，检出率为2％（1／50）；出现1例针对NRTI类药物的耐药突变株，检出率为2％（1／50）；未出现针对NNRTI类药物的耐药突变株，检出率为0。蛋白酶（PR）区和逆转录酶（RT）区的耐药突变株检出率均为2％，均属于低度传播范围（〈5％）。结论北京市未经抗病毒治疗HIV-1感染者中出现PR和RT区的耐药突变株，传播水平尚处于低流行状态，现有的抗病毒治疗方案是可行的，治疗前尚不需要进行大规模耐药性检测。

关键词： 2008年北京 HIV-1 耐药株传播调查

EZH2基因在人卵巢癌顺铂耐药株中的表达及其对细胞耐药性的影响

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肿瘤 2010年第9期30卷 748-752页

作者：胡沙王静李智敏郭剑锋于利利杨纯王泽华华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科武汉430022

目的:检测果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer ofzestehomolog 2,EZH2)基因在人卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨以EZH2基因为靶向的RNA干扰能否有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中的表达差异。人工构建4个靶向沉默EZH2基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,脂质体法瞬时转染至A2780/DDP细胞,RFQ-PCR检测EZH2基因的沉默水平并挑选沉默效果最佳的质粒载体,G418加压筛选得到转染稳定的细胞株。RFQ-PCR和Western印迹法检测稳定转染后A2780/DDP细胞中EZH2基因的表达,MTT法检测转染细胞对DDP的耐药性。结果:A2780/DDP细胞中EZH2 mRNA和蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(3.50±1.06)和(2.10±0.29)倍,差异有统计学意义(P耐药性。

关键词： EZH2基因人卵巢癌顺铂耐药株表达量细胞耐药性 cisplatin cell line DDP Western印迹法 inhibitory concentration 稳定转染统计学意义检测耐药细胞株 A2780细胞表达差异 PCR 质粒表达载体实时荧光定量

蛋白激酶C对大肠癌耐药株LoVo/Adr细胞多药耐药性的影响

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第一军医大学学报 2002年第7期22卷 626-628页

作者：马强张振书张亚历王群英赖卓胜第一军医大学南方医院消化研究所广东广州510515

目的　探讨蛋白激酶C（PKC）活性对大肠癌多药耐药性的影响以及可能涉及的调控机制。方法　（1）以放射性32P,掺入法检测了在十字孢碱（SP）和佛波脂（PMA）作用下大肠癌耐药细胞LoVo/Adr中PKC活性的变化;（2）以流式细胞术检测了PKC活... 详细信息

目的　探讨蛋白激酶C（PKC）活性对大肠癌多药耐药性的影响以及可能涉及的调控机制。方法　（1）以放射性32P,掺入法检测了在十字孢碱（SP）和佛波脂（PMA）作用下大肠癌耐药细胞LoVo/Adr中PKC活性的变化;（2）以流式细胞术检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞摄入阿霉素的影响;（3）以RT-PCR法检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞mdr1基因表达的影响。结果（1）PMA可双向调节LoVo/Adr细胞的PKC活性,SP对LoVo/Adr细胞胞浆和胞膜中的PKC活性均有显著的抑制效果;（2）在PMA作用30min时,LoVo/Adr细胞中阿霉素的摄入量显著减少,作用24h时,阿霉素摄入量显著增加;（3）PMA和SP均不影响mdr1基因的表达。结论　PKC可调控细胞的多药耐药性,但并非通过调节mdr1基因的mRNA水平而实现。

关键词：蛋白激酶C 大肠癌耐药株 LoVo/Adr细胞多药耐药作用机制

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药株中整合子基因研究

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中华检验医学杂志 2003年第7期26卷 436-438页

作者：杨立军朱立华徐国宾赵敏孙立颖薛荣芳蒋红严岩北京大学第一医院检验科

目的　探讨整合子介导的耐药机制在产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌多重耐药性中的作用。方法　设计整合子特异引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测耐药菌中的整合子基因 ,并应用PCR定位 (mapping)技术和DNA测序研究整合子内... 详细信息

目的　探讨整合子介导的耐药机制在产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌多重耐药性中的作用。方法　设计整合子特异引物 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测耐药菌中的整合子基因 ,并应用PCR定位 (mapping)技术和DNA测序研究整合子内携带的耐药基因。结果　 4 4 4 %的产ESBLs的大肠埃希菌整合子检测阳性 ,发现 5 5 0 ,130 0 ,180 0bp和 2 6 0 0bp等 4种不同大小的整合子结构 ,其中 6 6 6 %的整合子大于 5 5 0bp。整合子中分别携带二氢叶酸还原酶、核苷转移酶和β内酰胺酶等耐药基因。结论　产ESBLs的大肠埃希菌中的整合子机制参与了多重耐药的形成 ,因整合子可以携带多种耐药基因 ,容易引起多重耐药的水平传播 ,应引起高度的重视。

关键词：产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药株整合子酶聚合酶链反应 PCR定位 DNA测序基因研究抗生素

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乙型肝炎患者拉米夫定耐药株变异率快速检测

中华传染病杂志 2011年第1期39卷 53-55页

作者：石铭张勇祝祝英华徐永平大连市第六人民医院中心实验室大连市 116031 大连理工大学大连市 116031

HBV感染是导致肝硬化和肝癌的重要因素，拉米夫定是抑制HBV的有效药物之一。但是，长时间应用拉米夫定会导致HBV出现YMDD区段发生变异从而产生耐药[1-2]。HBV反转录酶的保守序列YMDD中蛋氨酸（M）被缬氨酸（V）或异亮氨酸（I）所取代，... 详细信息

HBV感染是导致肝硬化和肝癌的重要因素，拉米夫定是抑制HBV的有效药物之一。但是，长时间应用拉米夫定会导致HBV出现YMDD区段发生变异从而产生耐药[1-2]。HBV反转录酶的保守序列YMDD中蛋氨酸（M）被缬氨酸（V）或异亮氨酸（I）所取代，变异后成为YVDD（rtM204V）或YIDD（rtM204I），使患者体内病毒复制反弹[3-4]。

关键词：乙型肝炎患者拉米夫定变异率耐药株快速检测 HBV感染体内病毒复制抑制HBV

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慢性乙型肝炎的抗病毒治疗和耐药株监测

中华检验医学杂志 2003年第2期26卷 127-128页

作者：蒋栋魏来北京大学人民医院北京大学肝病研究所100044

目前乙型肝炎是冂乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的全球性疾病，严重危害人类健康和生活质量。目前慢性乙型肝炎的治疗主有α干扰素和拉米夫定（Lamivudine），α干扰素为非特异性抗病毒药物，且有免疫调节作用；闰米夫定为抗病毒药物，... 详细信息

目前乙型肝炎是冂乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的全球性疾病，严重危害人类健康和生活质量。目前慢性乙型肝炎的治疗主有α干扰素和拉米夫定（Lamivudine），α干扰素为非特异性抗病毒药物，且有免疫调节作用；闰米夫定为抗病毒药物，是一种双脱氧核苷类似物，吸收后在体内代谢成为拉米夫定三磷酸化物（3TC-TP）。HBV在复制过程中存在前基因组RNA的逆转录过程，3TC-TP在逆转录过程中可拔糖环，不具有3′羟基，不能形成磷酸二酯键，所以可以阻止下一个核苷酸的掺入，从而达到抑制HBV复制的目的。由于拉米夫定对已形成的cccDNA不起作用，所以需要长期治疗以期望已形成的cccDNA被清除。此外还有一些新的核苷类似物药物，如阿德福韦（Adefovir）和恩特卡韦（Entecavir）都正在进行临床试验，在不久的将来均有望进入临床应用。

关键词：慢性乙型肝炎抗病毒治疗耐药株监测

烧伤创面金黄色葡萄球菌耐药株的分离及其形态学研究

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中华创伤杂志 2011年第11期27卷 1021-1022页

作者：冯俊明夏培元肖光夏秦孝建熊丽蓉广州军区武汉总医院病理科 430070 第三军医大学附属西南医院药剂科第三军医大学附属西南医院药烧伤研究所

金黄色葡萄球菌是烧伤创面主要的优势菌群之一，随着抗生素的长期广泛应用，其耐药性逐渐增强，已经成为烧伤患者主要的耐药细菌。因此，及时了解烧伤患者创面金黄色葡萄球菌的耐药情况并对其机制进行分析，对于合理选择抗菌药物及控制... 详细信息

金黄色葡萄球菌是烧伤创面主要的优势菌群之一，随着抗生素的长期广泛应用，其耐药性逐渐增强，已经成为烧伤患者主要的耐药细菌。因此，及时了解烧伤患者创面金黄色葡萄球菌的耐药情况并对其机制进行分析，对于合理选择抗菌药物及控制耐药性的蔓延十分重要。笔者在分离鉴定烧伤患者创面耐药金黄色葡萄球菌的基础上，观察其形态学的变化，并探讨这些改变与其耐药性的关系。

关键词：耐药金黄色葡萄球菌烧伤创面分离鉴定形态学耐药株烧伤患者耐药性优势菌群

临床分离铜绿假单胞菌喹诺酮耐药株gyrA基因突变及其对β-内酰胺类药物敏感性研究

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中国抗生素杂志 2002年第12期27卷 726-729,762页

作者：李学如朱雯贾文祥刘莉张再容马巨辉四川大学华西医学中心微生物学教研室成都610041

利用 PCR、限制性片段多态性分析 (RFL P)、DNA单链构像多态性分析 (SSCP)和 DNA测序等方法 ,对 10株成都地区临床分离耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌 gyr A基因进行研究。结果表明 ,成都地区耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌 gyr A的喹诺酮耐... 详细信息

利用 PCR、限制性片段多态性分析 (RFL P)、DNA单链构像多态性分析 (SSCP)和 DNA测序等方法 ,对 10株成都地区临床分离耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌 gyr A基因进行研究。结果表明 ,成都地区耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌 gyr A的喹诺酮耐药决定区编码第 83位氨基酸密码子表现出高频单点突变 (10株中有 8株 ) ,其突变方式为 ACC→ATC。gyr A的 PCR扩增产物 Sac II酶切片段与测序结果一致。SSCP的带谱与测序结果比较 ,除 1株 (PSA2 )的 SSCP带谱与标准株相同 ,但测序结果有点突变外 ,其余菌株与测序结果一致。因此 ,利用 PCR- SSCP- RFL P系统 ,可快速、准确的检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌 gyr A中至少一个碱基的差异。用二倍稀释法测定喹诺酮和 β-内酰胺类药物对耐药突变株体外抗菌活性 ,结果表明 ,铜绿假单胞菌 gyr A基因突变株对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、亚胺培南和哌拉西林表现出不同的敏感性。试验所用 8株突变株对诺氟沙星和环丙沙星表现出高水平抗性 ;3株对左氧氟沙星敏感 ;3株对头孢他啶和哌拉西林表现出耐药 ,2株对亚胺培南耐药。

关键词：铜绿假单胞菌喹诺酮耐药株 gyrA 基因突变 β-内酰胺类药物敏感性