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陕西省发现绿臭蛙

动物学杂志 2010年第3期45卷 163-165页

作者：陈晓虹鲁有强乔梁河南师范大学生命科学学院新乡453007

在陕西省宁强县青木川国家级自然保护区采集了6只臭蛙类标本,经形态特征比较,鉴定为绿臭蛙(Odorrana margaretae),为陕西省首次发现。本文对其特征和分布进行了讨论。

关键词：蛙科绿臭蛙陕西省

基于线粒体基因组捕获测序法的绿臭蛙、黄岗臭蛙和大绿臭蛙线粒体基因组全序列测定与分析

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基于线粒体基因组捕获测序法的绿臭蛙、黄岗臭蛙和大绿臭蛙线粒体...

作者：王秋亚河南师范大学

学位级别：硕士

臭蛙Odorrana是一类生活在山涧溪流环境、体表有臭味的两栖动物,隶属于两栖纲Amphibia无尾目Anura蛙科Ranidae。到目前为止,臭蛙属全球已知有效种为60种,中国记录分布的与38种,是蛙科动物中已知物种数量最多的一个属。臭蛙主要分布在中... 详细信息

臭蛙Odorrana是一类生活在山涧溪流环境、体表有臭味的两栖动物,隶属于两栖纲Amphibia无尾目Anura蛙科Ranidae。到目前为止,臭蛙属全球已知有效种为60种,中国记录分布的与38种,是蛙科动物中已知物种数量最多的一个属。臭蛙主要分布在中国的秦岭以南、琉球群岛、东南亚和印度的东北地区,亚洲特有的一个类群。臭蛙属是蛙科动物从真蛙类向水蛙类过渡的重要类群,在进化和适应上具有重要和特殊意义,近年来,揭示臭蛙属的起源及扩散过程已成为进化生物学家关注的问题。然而,有关臭蛙属系统发育的研究,多集中于单个或少数的分子标记,由于分子标记间进化速率的差异以及多态性信息位点不足,臭蛙属物种间的系统发育关系、种组的划分及物种组成仍然存在争议。本研究通过线粒体基因组捕获测序的方法,测定了臭蛙属模式物种绿臭蛙Odorrana margaretae、花臭蛙种组代表物种黄岗臭蛙***和大绿臭蛙种组代表物种大绿臭蛙***的线粒体全基因组,并分析了三种臭蛙的线粒体基因组基因组成。通过与其它五种臭蛙属物种线粒体基因组基因排列顺序进行比较分析,探讨了臭蛙属线粒体基因组的排列变化。通过数据收集,获得了新蛙亚目主要代表物种的线粒体基因组序列,基于线粒体基因组构建了不同的数据集,运用贝叶斯法（Bayesian Inference）、最大似然法（Maximum Likeihood）构建了新蛙亚目的系统发育关系,探讨了臭蛙属的起源和系统发育关系。结果表明:（1）绿臭蛙和黄岗臭蛙线粒体基因组全长分别为17903和18671 bp,由37个基因组成,包含13个蛋白质编码基因、22个tRNA基因和2个rRNA基因。大绿臭蛙获得15228bp序列,12S rRNA上游的tRNA-Leu基因、tRNA-Thr基因、tRNA-Pro基因、tRNA-Phe基因以及控制区序列未获得。（2）臭蛙属线粒体基因组基因排列顺序发生了重排,臭蛙属8个物种tRNA-His都移到了控制区中,石川臭蛙、黄冈臭蛙和天目臭蛙tRNA-Asn和轻链起始复制区顺序发生了互换,石川臭蛙轻链起始复制区发生了复制。（3）新蛙亚目、蛙科、叉舌蛙科、姬蛙科、树蛙科和曼蛙科以及臭蛙属的单系性得到了强烈支持,曼蛙科和树蛙科互为姐妹群关系,然后与蛙科组成一支,再与叉舌蛙科构成姐妹群关系。臭蛙属中绿臭蛙和务川臭蛙组成一支,位于臭蛙属基部,石川臭蛙随后分化,与花臭蛙种组和大绿臭蛙种组组成的祖先支互为姐妹群关系,然而石川臭蛙的系统发育位置未得到强烈支持。

关键词：臭蛙属线粒体基因组捕获测序绿臭蛙基因重排

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绿臭蛙的繁殖生态

贵州教育学院学报 2007年第4期23卷 54-55页

作者：王延斌贵州毕节学院环境与生命科学系贵州毕节551700

采用野外定期定点观测与室内观测相结合的方法,对绿臭蛙(Odorranam argaretae)的繁殖生态进行了初步的研究,结果表明:绿臭蛙繁殖期在7月上旬-8月下旬;怀卵量为1269.8枚;产卵量为1169枚。

关键词：绿臭蛙繁殖生态

我国产绿臭蛙的皮肤中一个新的速激肽——绿臭蛙激肽的分离和结构

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中国科学:化学 1988年第9期 967-974页

作者：唐易全田盛海吴时祥华家柽邹冈吴贯夫赵尔宓陆一安朱应麒中国科学院成都生物研究所中国科学院上海药物研究所中国科学院上海生物工程中心

本文利用Sep—Pak C和HPLC,从我国产绿臭蛙的皮肤甲醇提取物中分离到一个新的14肽——绿臭蛙激肽。此肽结构经分析定为:Asp—Asp—Ala—Ser—Asp—Arg—Ala—Lys—Lys—Phe—Tyr—Gly—Leu—Met—NH,且为化学合成所证明。此肽是两栖动... 详细信息

本文利用Sep—Pak C和HPLC,从我国产绿臭蛙的皮肤甲醇提取物中分离到一个新的14肽——绿臭蛙激肽。此肽结构经分析定为:Asp—Asp—Ala—Ser—Asp—Arg—Ala—Lys—Lys—Phe—Tyr—Gly—Leu—Met—NH,且为化学合成所证明。此肽是两栖动物速激肽中最长的一个,其N-端氨基酸与速激肽类其它肽的相应部分有很大区别。此外,简要讨论了纯化过程中绿臭蛙激呔亚砜的形成及其色谱峰的分裂。

关键词：绿臭蛙激肽绿臭蛙两栖动物皮肤高效液相色谱

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贵州产绿臭蛙核型、C—带和银带研究

贵州科学 1993年第1期11卷 19-22页

作者：徐宁魏刚李德俊吴贯夫宋锡全遵义医学院生物学教研室中科院成都生物研究所遵义师专生物系

本文报道贵州仁怀产绿臭蛙的核型、C—带和银带。其染色体数目为2n=26,NF=52,大型染色体5对(相对长度大于9％),小型染色体8对(相对长度小于7％)。第3、4、6、9四对为亚中部着丝粒染色体,其余为中部着丝粒染色体。各号染色体均有着丝粒区... 详细信息

本文报道贵州仁怀产绿臭蛙的核型、C—带和银带。其染色体数目为2n=26,NF=52,大型染色体5对(相对长度大于9％),小型染色体8对(相对长度小于7％)。第3、4、6、9四对为亚中部着丝粒染色体,其余为中部着丝粒染色体。各号染色体均有着丝粒区C带,3q和4q上有一条居间区C带(4q异态),2p有一条弱居间区C带。9q有一对标准NORs(异态)。本文还讨论了贵州与四川产绿臭蛙染色体核型、带型的异同。

关键词：绿臭蛙染色体核型 C带银带

无尾目鼻腔骨的初步研究及蛙类三个物种骨骼系统的比较

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无尾目鼻腔骨的初步研究及蛙类三个物种骨骼系统的比较

作者：吴惠芳四川大学

学位级别：硕士

在进行绿臭蛙Hylarana(Odorrana)margaretae的骨骼系统解剖中，发现一块未知的骨骼，再观察大绿蛙***、沼蛙Rana guentheri等种类，均有此骨骼。查阅文献资料，吴贯夫在《粗皮蛙Rana rugosa的骨骼系统》一文中报道了该骨骼，并命名为鼻... 详细信息

在进行绿臭蛙Hylarana(Odorrana)margaretae的骨骼系统解剖中，发现一块未知的骨骼，再观察大绿蛙***、沼蛙Rana guentheri等种类，均有此骨骼。查阅文献资料，吴贯夫在《粗皮蛙Rana rugosa的骨骼系统》一文中报道了该骨骼，并命名为鼻腔骨os nasocavorum。继后，我们对中国境内无尾类Anura的铃蟾科Bombinidae，角蟾科Megophryidae，蟾蜍科Bufonidae，树蟾科Hylidae、姬蛙科Microhylidae、叉舌蛙科Dicroglossidae、蛙科Ranidae、树蛙科Rhacophoridae等8科中有代表性的58种80多号标本进行了系统研究，结果发现，这些标本都存在着鼻腔骨，而且它们的位置基本一致，因此可以认为这一骨骼应是无尾类动物骨骼系统的一项共有的同源结构。根据鼻腔骨所处的位置，可以分为三类：一，鼻腔骨位于鼻孔外侧缘，构成鼻孔外半侧孔口的框架(东方铃蟾Bombina orientalis boulenger);二，鼻腔骨位于鼻孔下前方，其基端分出两支伸向内方(中华大蟾蜍Bufo gargarizans Contor和岷山蟾蜍*** Boulenger);三，鼻腔骨位于鼻孔前侧下方与上颌骨之间，其基端以软骨片固结于上颌骨前端内侧边缘(其他种类)。根据鼻腔骨的形态结构，可以分为6种类型：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型和Ⅵ型。Ⅰ型—Ⅴ型的鼻腔骨形态间断，区别明显，易于识别，正好与铃蟾科Bombinidae、角蟾科Megophryidae、蟾蜍科Bufonidae、树蟾科Hylidae、姬蛙科Microhylidae等现行的无异议的5个科级分类阶元一一对应。Ⅵ型包括蛙科Ranidae、树蛙科Rhacophoridae以及叉舌蛙科Dicroglossidae等三科中的46个物种。这一类群中的大多数种类的鼻腔骨结构比较简单，唯有虎纹蛙Limnonectes rugulosa Fitginger，1843及棘腹蛙Paa boulengeri Günther，1889等两种比较复杂。对绿臭蛙***的骨骼系统进行比较解剖，并与泽蛙***、粗皮蛙***的骨骼系统进行了观察比较，结果表明：3种蛙的上下颌弓、舌器、喉头软骨、趾骨的构造没有明显的不同;第8枚椎体均为双凹型，属参差型脊柱;绿臭蛙、粗皮蛙肩带为固胸型，而泽蛙肩带为不完全固胸型;肩胸骨的基部在绿臭蛙中是完整的，粗皮蛙中其正中央有或深或浅的缺刻，泽蛙的肩胸骨是分叉的;剑胸骨的后缘，在泽蛙中是完整的，粗皮蛙中有浅的缺刻，而绿臭蛙的是分叉的;三个种的鼻骨、鼻腔骨彼此差别显著;蝶筛骨，绿臭蛙与粗皮蛙相似，而与泽蛙有较大的区别;关节下瘤的正下方，粗皮蛙在该位置没有明显的变化，在绿臭蛙中关节处明显膨大，故其关节下瘤显著，泽蛙在该位置有游离的小骨块。

关键词：无尾目骨骼系统鼻腔骨绿臭蛙泽蛙粗皮蛙

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臭蛙皮肤活性肽的结构与功能

臭蛙皮肤活性肽的结构与功能

作者：曹小青昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]臭蛙的皮肤承担着许多重要的生物学功能,包括防御、呼吸、排泄、体色调节等,其皮肤分泌物中含有许多重要多肽,这些多肽具有特定的生物学活性,如:促创伤修复、抗菌、抗氧化、免疫调节等。因此研究臭蛙皮肤分泌物中的这些多肽有助... 详细信息

[目的]臭蛙的皮肤承担着许多重要的生物学功能,包括防御、呼吸、排泄、体色调节等,其皮肤分泌物中含有许多重要多肽,这些多肽具有特定的生物学活性,如:促创伤修复、抗菌、抗氧化、免疫调节等。因此研究臭蛙皮肤分泌物中的这些多肽有助于新型药物的研发以及为我们理解两栖动物适应环境的分子基础提供依据。[方法]用Sephadex G-75层析柱和RP-HPLC对皮肤分泌物进行分离纯化,收集具有ABTS自由基清除活性的峰,然后进行一级结构测定;提取臭蛙皮肤RNA,合成cDNA,构建cDNA文库;合成多肽;检测样品的抗氧化活性、抗菌活性、促创伤修复活性、免疫调节活性(TNF-α和TGF-β1)、溶血活性及急性毒性作用;应用HE染色及免疫组化染色观察创伤组织变化情况。[结果](1)从云南臭蛙皮肤分泌物中分离纯化出的cathelicidin-OA1从N端到C端的成熟肽序列为’IGRDPTWSHLAASCLKCIFDDLPKTHN’,它的前体肽是由198个氨基酸组成,通过质谱检测其相对分子质量为3035.5 Da,而其理论分子量为3037.5 Da,相差2 Da,提示在第14位半胱氨酸和第17位半胱氨酸之间形成了一对二硫键。Cathelicidin-OA1的功能和其它已报道的cathelicidin不一样,它没有表现出抗菌性、溶血性及急性毒性作用,但表现出抗氧化活性,它具有清除ABTS和DPPH自由基的活性。更重要的是cathelicidin-OA1表现出促创伤修复活性:在细胞水平上,cathelicidin-OA1通过促进HaCaT细胞的增殖及HSF细胞的迁移从而达到促创伤修复作用;在小鼠动物模型上,cathelicidin-OA1与阴性对照组相比较同样表现出促创伤修复作用。我们通过HE染色,观察组织学变化,发现经cathelicidin-OA1处理的创伤处皮肤与阴性对照组相比,其上皮和肉芽组织增生活跃,从而达到快速愈合的效果。我们还进一步经过免疫组化分析得出cathelicidin-OA1通过促进炎症因子TNF-α的释放从而招募更多的巨噬细胞迁移到创伤处,进而引起炎症因子TGF-β1的释放,达到促进皮肤创伤修复的效果。(2)从云南臭蛙皮肤分泌物中分离纯化出的另一条抗氧化肽是OA-VI12。OA-VI12的前体肽由59个氨基酸组成,从N端到C端的成熟肽序列为’VIPFLACRPLGL’,经质谱检测它的相对分子质量为1298.65 Da,理论分子量为1297.76 Da,不存在翻译后修饰作用。经功能检测分析,同样具有清除ABTS、DPPH、Fe3+和NO自由基的活性,并且C7在ABTS+和Fe3+清除活性中起重要作用,F4,C7和P9在DPPH自由基清除活性中起重要作用,P9在NO自由基清除活性中起重要作用。(3)从绿臭蛙皮肤分泌物中分离纯化出的一条抗氧化肽OM-GF17。OM-GF17的前体肽由61个氨基酸组成,从N端到C端的成熟肽序列为’GFFKWHPRCGEEHSMWT’,相对分子质量为2135.7 Da,理论分子量为2135.40 Da,不存在翻译后修饰作用。功能分析得出OM-GF17具有清除ABTS、DPPH、Fe3+和NO自由基的活性,并且根据实验结果分析得出在多肽OM-GF17中F2/3,W5/16,P7,C9和M15在ABTS自由基清除活性中起协同作用;F2/3,M15和W16对DPPH清除活性起重要作用;C9在Fe3+清除活性中起重要作用;F2/3和M15对NO清除活性起重要作用。[结论](1)从云南臭蛙皮肤分泌物中分离纯化得到一个新型抗氧化肽cathelicidin-OA1,成熟肽氨基酸序列’IGRDPTWSHLAASCLKCIFDDLPKTHN’,在两个半胱氨酸之间有一对二硫键的形成。经过功能分析,cathelicidin-OA1不像其它cathelicidin,它没有表现出直接的抗菌活性、溶血性和急性毒性作用,但是具有抗氧化活性。更重要的是,cathelicidin-OA1在细胞水平和动物模型上都表现出促创伤修复活性。(2)从云南臭蛙皮肤分泌物中分离纯化得到的另外一个抗氧化肽OA-VI12(VIPFLACRPLGL),也表现出ABTS+、DPPH、NO、Fe3+清除活性,同样检测OA-VI12 结构突变后的抗氧化活性,结果显示C7在ABTS+和Fe3+清除活性中起重要作用,F4,C7和P9在DPPH自由基清除活性中起重要作用,P9在NO自由基清除活性中起重要作用。(3)从绿臭蛙皮肤分泌物中分离纯化出的抗氧化肽OM-GF17(GFFKWHPRCGEEHSMWT),表现出 ABTS+、DPPH、NO、Fe3+清除活性,同时检测OM-GF17结构突变后的抗氧化活性,结果显示F2/3,W5/16,P7,C9和M15在ABTS自由基清除活

关键词：臭蛙云南臭蛙 cathelicidin 促创伤修复绿臭蛙抗氧化肽

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臭蛙类骨骼结构的生态适应性研究

臭蛙类骨骼结构的生态适应性研究

作者：张美华河南师范大学

学位级别：硕士

绿臭蛙(Odorrana margaretae)、大绿臭蛙(***)和花臭蛙(***)同隶属于两栖纲(Amphiba)无尾目(Anura)蛙科(Ranidae)臭蛙属(Odorrana),分别代表臭蛙属3个种组,即绿臭蛙种组(Odorrana margaretae group)、大绿臭蛙种组(*** group)和花臭蛙种组(*** group),并且绿臭蛙是臭蛙属的模式物种。通过研究3种臭蛙的骨骼结构形态,比较它们的骨骼结构特征,可为臭蛙属分类鉴定提供骨骼学依据;探讨臭蛙类骨骼形态结构与功能的相关性;揭示臭蛙类骨骼形态的环境适应性特征。本文以3种臭蛙模式产地的性成熟雌雄个体为研究对象,运用常规剥制法制作骨骼标本,单反相机拍照、图片处理、观察比较。结果如下:(1)臭蛙属骨骼系统的主要鉴别特征鼻骨内缘相距远,后缘与额顶骨不相接。蝶筛骨前端未被鼻骨和额顶骨覆盖,背面裸露。前颌骨和上颌骨具齿。犁骨齿发达。椎体参差型。上胸软骨伞状,肩胸骨前端小于后端、后端扇形,中胸骨哑铃形、前端大于后端、较肩胸骨长,剑胸软骨近似“W”形,末端有较深缺刻。固胸型肩带。雄性个体前拇指完全骨化。胫腓骨较股骨长。末节指趾尖膨大呈锚状。(2)骨骼形态存在种间差异三种臭蛙鼻骨形态差异显著,绿臭蛙鼻骨前端扇形、外缘与水平线的夹角约37°,大绿臭蛙鼻骨前端三角形、外缘与水平线的夹角约53°,花臭蛙鼻骨前端呈四边形、外缘与水平线的夹角约54°。绿臭蛙蝶筛骨前端突出呈卵圆形,大绿臭蛙蝶筛骨前端中央向后微凹,花臭蛙蝶筛骨前端平直。绿臭蛙和大绿臭蛙犁骨前突较内鼻孔前突长,花臭蛙犁骨前突与内鼻孔前突几乎等长。绿臭蛙和大绿臭蛙的舌骨体长大于宽,花臭蛙的舌骨体宽大于长。绿臭蛙左右锁骨内缘平直,大绿臭蛙左右锁骨内缘略向前倾,花臭蛙左右锁骨内缘向后方弯曲。(3)臭蛙属前肢骨骼形态存在两性异型绿臭蛙雄性肱骨内侧嵴和腹嵴较雌性发达;花臭蛙雄性肱骨内侧嵴、外侧嵴和腹嵴均较雌性发达。此外,3种臭蛙雄性前拇指完全骨化,且较雌性的宽大。结论:(1)与溪流生活相适应,臭蛙类耳柱骨的结构能够更有效地传递声波、提高听觉敏锐性;(2)髂骨荐椎矢状铰链连接、较长的胫腓骨,增强臭蛙的跳跃和游泳能力;(3)末节指、趾骨远端膨大呈锚状,相应增大吸盘面积,吸附能力更强。(4)雄性肱骨上的嵴发达,表面积增加,从而为肌肉提供更大附着面积,适应于抱对繁殖。

关键词：绿臭蛙大绿臭蛙花臭蛙骨骼系统两性异型生态环境适应性

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广东省蛙科二新纪录

华南师范大学学报（自然科学版） 1995年第1期27卷 87-89页

作者：黎振昌谭小霞莫秀红华南师范大学生物系

本文记述了１９８７年在广东省新丰县云髻山和１９９３年在连县大东山采到的蛙种种类中，其中绿臭蛙Ｒａｎａｍａｒｇａｒｅｌａｅ和桑植蛙Ｒａｎａｓａｎｇｚｈｉｅｎｓｉｓ经鉴定，分别与绿臭蛙及桑植蛙所描述的形态特征核对基本一致... 详细信息

本文记述了１９８７年在广东省新丰县云髻山和１９９３年在连县大东山采到的蛙种种类中，其中绿臭蛙Ｒａｎａｍａｒｇａｒｅｌａｅ和桑植蛙Ｒａｎａｓａｎｇｚｈｉｅｎｓｉｓ经鉴定，分别与绿臭蛙及桑植蛙所描述的形态特征核对基本一致。为广东省无尾两栖类两新纪录。

关键词：广东蛙科绿臭蛙桑植蛙